弧菌和弯曲菌.ppt

弧菌和弯曲菌医学检验系临床微生物及免疫学教研室井申荣第一部分 弧 菌概 述n n弧弧菌菌科科（VibrionaseaeVibrionaseae）包包括括一一群群氧氧化化酶酶阳阳性性、具具有有端端极极鞭鞭毛毛、动动力力阳阳性性的的细细菌菌，有有4 4个个菌菌属属，其其中中，弧弧菌菌属属是是一一群群氧氧化化酶酶阳阳性性，发发酵酵葡葡萄萄糖糖，对对弧弧菌菌抑抑制制剂剂O/129O/129（二氨基二异丙基喋啶）敏感的细菌。（二氨基二异丙基喋啶）敏感的细菌。n n弧弧菌菌属属(Vibrio)(Vibrio)广广泛泛分分布布于于自自然然界界，尤尤以以水水中中为为多多，有有100100多多种种。主主要要致致病病菌菌为为霍霍乱乱弧弧菌菌和和副副溶溶血血弧弧菌菌（致致病病性嗜盐菌）。前者引起霍乱；后者引起食物中毒。性嗜盐菌）。前者引起霍乱；后者引起食物中毒。霍 乱 弧 菌霍乱弧菌（V.cholera）是人类霍乱的病原体，霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，死亡率甚高。属于国际检疫的烈性传染病。n n霍霍乱乱弧弧菌菌包包括括两两个个生生物物型型：古古典典生生物物型型（Classical Classical biotypebiotype）和和埃埃尔尔托托生生物物型型（EL-Tor EL-Tor bio-typebio-type）。这这两两种种型型别别除除个个别别生生物物学学性性状状稍稍有有不不同同外外，形形态态和和免免疫疫学学性性基基本本相相同同，在在临临床床病病理理及及流流行行病病学学特特征征上上没没有有本本质质的的差差别别。自自18171817年年以以来来，全全球球共共发发生生了了七七次次世世界界性性大大流流行行，前前六六次次病病原原是是古古典典型型霍霍乱乱弧弧菌菌，第七次病原是埃尔托型所致。第七次病原是埃尔托型所致。1992年10月在印度东南部又发现了一个引起霍乱流行的霍乱流行的新血清型菌株（新血清型菌株（0139），它引起的霍乱在临床表现及传播方式上与古典型霍乱完全相同，但不能被01群霍乱弧菌诊断血清所凝集。该菌株在水中的存活时间较01群霍乱弧菌长，因而有可能成为引起世界性霍乱流行的新菌株。一、生物学性状（一）形态染色n n霍霍 乱乱 弧弧 菌菌 呈呈 弧弧弧弧 形形形形 或或或或 逗逗逗逗 点点点点 形形形形 态态态态，大大 小小 为为1.42.60.50.8m1.42.60.50.8m。革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏阴阴阴阴性性性性菌菌菌菌，菌菌菌菌体体体体一一一一端端端端有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。有单根鞭毛和菌毛，无荚膜与芽胞。n n取取霍霍乱乱病病人人米米泔泔水水样样粪粪便便作作活活菌菌悬悬滴滴观观察察，可可见细菌见细菌运动极为活泼，呈流星穿梭运动运动极为活泼，呈流星穿梭运动运动极为活泼，呈流星穿梭运动运动极为活泼，呈流星穿梭运动。图注：霍乱弧菌的鞭图注：霍乱弧菌的鞭毛（毛（）和它可溶解）和它可溶解的鞘膜（的鞘膜（）负染，负染，3100图注：分裂中的图注：分裂中的霍乱弧菌霍乱弧菌冰冻蚀冰冻蚀刻，刻，70000（二）培养特性n n霍乱弧菌为霍乱弧菌为需氧或兼性厌氧菌需氧或兼性厌氧菌需氧或兼性厌氧菌需氧或兼性厌氧菌;n n营营营营养养养养要要要要求求求求不不不不高高高高，耐耐耐耐碱碱碱碱不不不不耐耐耐耐酸酸酸酸，在在pH8.8pH8.89.09.0的的碱碱性性蛋蛋白白胨胨水水或或平平板板中中生生长长良良好好。因因其其他他细细菌菌在在这这一一pHpH不不易易生生长长，故故碱碱碱碱性性性性蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨水水水水可可可可作作作作为为为为选选选选择择择择性性性性增殖霍乱弧菌的培养基增殖霍乱弧菌的培养基增殖霍乱弧菌的培养基增殖霍乱弧菌的培养基;n n在在碱碱性性平平板板上上菌菌落落直直径径为为2mm2mm，圆圆圆圆形形形形，光光光光滑滑滑滑，透透透透明明明明。n n常用的常用的选择培养基选择培养基选择培养基选择培养基为硫代硫酸盐为硫代硫酸盐-枸橼酸盐枸橼酸盐-胆盐胆盐-蔗糖蔗糖琼脂平板（琼脂平板（TCBSTCBS），霍乱弧菌在其中可形成较大的菌，霍乱弧菌在其中可形成较大的菌落，因发酵蔗糖产酸而使落，因发酵蔗糖产酸而使菌落呈黄色菌落呈黄色菌落呈黄色菌落呈黄色。（三）生化反应n n两个生物型的霍乱弧菌都能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、两个生物型的霍乱弧菌都能分解甘露醇、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖，产酸不产气。迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。麦芽糖，产酸不产气。迟缓发酵乳糖，不分解阿拉伯糖。n n氧化酶、明胶酶试验均阳性。氧化酶、明胶酶试验均阳性。n n能产生靛基质，霍乱红反应阳性能产生靛基质，霍乱红反应阳性El Tor型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同n nEl TorEl Tor型型V VP P试验试验为阳性，能产生强烈的溶血素，为阳性，能产生强烈的溶血素，溶解羊红细胞，在血平板上生长的菌落周围出现溶解羊红细胞，在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环，明显的透明溶血环，n n古典型古典型试验试验V VP P试验试验为阴性，不溶解羊红细胞。为阴性，不溶解羊红细胞。n n个别个别EL TorEL Tor型霍乱弧菌株亦不溶血型霍乱弧菌株亦不溶血。霍乱弧菌的抗原结构霍乱弧菌的抗原结构特性特性O抗原抗原H抗原抗原属共同抗原属共同抗原群特异性群特异性型特异性型特异性耐热性耐热性（100 2h 2h）（四）抗原性（四）抗原性1抗原结构：抗原结构：2分群和分型：n n根据根据O O抗原的特异性，可将霍乱弧菌分成抗原的特异性，可将霍乱弧菌分成139139个血清群个血清群个血清群个血清群。n n根据是否与根据是否与O1O1抗血清凝集分两大群，抗血清凝集分两大群，凡能与凡能与O1O1群抗血清发生凝集的称为群抗血清发生凝集的称为O1O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌群霍乱弧菌群霍乱弧菌；凡凡不不被被O1O1群群抗抗血血清清凝凝集集的的其其它它血血清清群群统统称称为为非非非非O1O1群群群群霍霍霍霍乱弧菌乱弧菌乱弧菌乱弧菌。O1群霍乱弧菌的血清分型群霍乱弧菌的血清分型型别型别别名别名O抗原成份抗原成份原型原型稻稻叶叶型型（Inaba）A、C异型异型小小川川型型（Ogawa）A、B中间型中间型彦岛型彦岛型（Hikojima）A、B、C血清型血清型：O1群霍乱弧菌的菌体抗原由群霍乱弧菌的菌体抗原由A、B、C三个抗原成份组成三个抗原成份组成n n生生物物型型：O1群霍乱弧菌有古古典典生生物物型型和和E1Tor生生物物型型之分，两个生物型具有相同的血清型。我国流行以El Tor、小川型霍乱弧菌为主。n n噬噬菌菌体体分分型型：对噬菌体的敏感性进行分型，其中较为实用的是第组和第组噬菌体。霍乱弧菌两个生物型的鉴别霍乱弧菌两个生物型的鉴别性性状状古古典典型型E1Tor型型溶血（溶血（1%绵羊红细胞）绵羊红细胞）d血凝（血凝（2.5%鸡红细胞）鸡红细胞）V-P试验试验多多 粘粘 菌菌 素素 B敏敏 感感 试试 验验（50U/片）片）噬噬 菌菌 体体 组组 裂裂 解解（106/ml）噬噬 菌菌 体体 组组 裂裂 解解（106/ml）以上为阳性；以上为阴性；阳性以上为阳性；以上为阴性；阳性霍乱弧菌的变异性形态变异弧型直杆状 多形 菌落变异S RL 溶血性变异（El Tor型）溶血性 非溶血性 传代 毒力变异强毒株 弱毒株 无毒株 血清型别变异小川型 稻叶型（五）变异性：（六）抵抗力n n霍霍乱乱弧弧菌菌古古古古典典典典生生生生物物物物型型型型对对对对外外外外环环环环境境境境抵抵抵抵抗抗抗抗力力力力较较较较弱弱弱弱，EL-TorEL-Tor生物型抵抗力较强。生物型抵抗力较强。生物型抵抗力较强。生物型抵抗力较强。n n霍霍霍霍乱乱乱乱弧弧弧弧菌菌菌菌对对对对热热热热、干干干干燥燥燥燥、日日日日光光光光、化化化化学学学学消消消消毒毒毒毒剂剂剂剂和和和和酸酸酸酸均很敏感，耐低温，耐碱而不耐酸均很敏感，耐低温，耐碱而不耐酸均很敏感，耐低温，耐碱而不耐酸均很敏感，耐低温，耐碱而不耐酸。n n霍霍乱乱弧弧菌菌对对链链霉霉素素、氯氯霉霉素素和和四四环环素素敏敏感感，但但El El TorTor生生物物型型对对一一定定浓浓度度的的多多粘粘菌菌素素B B及及庆庆大大霉霉素有耐药性。素有耐药性。二、致病性和免疫性1 1致病物质致病物质（1 1）鞭毛、菌毛、粘液素酶鞭毛、菌毛、粘液素酶鞭毛、菌毛、粘液素酶鞭毛、菌毛、粘液素酶（2 2）霍乱肠毒素霍乱肠毒素霍乱肠毒素霍乱肠毒素（cholera enterotoxincholera enterotoxin）霍霍乱乱肠肠毒毒素素本本质质是是蛋蛋白白质质，不不耐耐热热。对对蛋蛋白酶敏感而对胰蛋白酶抵抗。白酶敏感而对胰蛋白酶抵抗。该毒素属外毒素，具有很强的抗原性。该毒素属外毒素，具有很强的抗原性。霍霍乱乱肠肠毒毒素素1个A亚单位毒性单位A1肽链具有激活腺苷酸环化酶的酶活性A2肽链结合B亚单位；参与转位5个B亚单位（46）结合单位特异地识别肠上皮细胞膜上的神经节苷脂受体致病机理霍乱弧菌霍乱弧菌胃胃对酸敏感，很快被杀死对酸敏感，很快被杀死肠肠胃酸降低或缺乏，菌体增多胃酸降低或缺乏，菌体增多鞭毛、菌毛、粘液素酶鞭毛、菌毛、粘液素酶绒毛上大量繁殖绒毛上大量繁殖CT的的B亚单位结合神经节苷脂受体亚单位结合神经节苷脂受体形成膜通道形成膜通道A1肽链进入细胞肽链进入细胞ATP cAMP肠粘膜上皮细胞分泌亢进肠粘膜上皮细胞分泌亢进肠液大量分泌肠液大量分泌大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻大量体液和电解质进入肠腔而发生剧烈吐泻大量脱水和失盐大量脱水和失盐发生代谢性酸中毒，血循环衰竭，甚至休克或死亡发生代谢性酸中毒，血循环衰竭，甚至休克或死亡激活腺苷酸环化酶系统激活腺苷酸环化酶系统2所致疾病n n引引起起烈烈性性肠肠道道传传染染病病的的霍霍乱乱，为为我我国国的的法法定定传传染染病病（甲甲类类），表表表表现现现现为为为为剧剧剧剧烈烈烈烈的的的的上上上上吐吐吐吐下下下下泻泻泻泻，导导导导致致致致严严严严重重重重的的的的脱脱脱脱水水水水、酸酸酸酸中中中中毒毒毒毒、痉痉痉痉挛挛挛挛、尿尿尿尿闭闭闭闭、休克和死亡。休克和死亡。休克和死亡。休克和死亡。n n人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者，主要通过污染的水人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者，主要通过污染的水源或饮食物经口传染（源或饮食物经口传染（粪口途径粪口途径粪口途径粪口途径）。患者）。患者出现上吐下泻，泻出物出现上吐下泻，泻出物出现上吐下泻，泻出物出现上吐下泻，泻出物呈呈呈呈“米泔水样米泔水样米泔水样米泔水样”，并含大量弧菌，此为本病典型的特征，并含大量弧菌，此为本病典型的特征，并含大量弧菌，此为本病典型的特征，并含大量弧菌，此为本病典型的特征。3免疫性n n患过霍乱的人可患过霍乱的人可获得获得获得获得牢固的免疫力牢固的免疫力牢固的免疫力牢固的免疫力，再感染者，再感染者少见。少见。n n病后小肠内可病后小肠内可出现出现分泌型分泌型分泌型分泌型lgAlgA。三、微生物学诊断n n由由于于霍霍乱乱流流行行迅迅速速，且且在在流流行行期期间间发发病病率率及及死死亡亡率率均均高高，危危害害极极大大，因因此此早早期期迅迅速速和和正正确确的的诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。诊断，对治疗和预防本病的蔓延有重大意义。（一）标本采集：（一）标本采集：标本以粪便为主标本以粪便为主标本以粪便为主标本以粪便为主，n n一般一般米泔水样便米泔水样便米泔水样便米泔水样便采取采取1 13ml3ml，成形便采取蚕豆，成形便采取蚕豆大小。大小。n n在某些情况下，亦可采取在某些情况下，亦可采取呕吐物和尸体肠内容呕吐物和尸体肠内容呕吐物和尸体肠内容呕吐物和尸体肠内容物物物物作检材。作检材。检验程序（三）检验方法及鉴定1直接镜检：1 1）动动动动力力力力观观观观察察察察：采采取取病病人人“米米泔泔水水样样”大大便便或或呕呕吐吐物物制制成成悬滴片，悬滴片，观察细菌动力观察细菌动力观察细菌动力观察细菌动力，可见可见可见可见流星或穿梭状动力的细菌流星或穿梭状动力的细菌流星或穿梭状动力的细菌流星或穿梭状动力的细菌。2 2）制动试验：制动试验：制动试验：制动试验：n n 标标标标本本本本，霍霍霍霍乱乱乱乱多多多多价价价价诊诊诊诊断断断断血血血血清清清清（效效价价1 1：6464），用用暗暗视视野野镜观察，镜观察，3 3分钟内分钟内分钟内分钟内运动被抑制运动被抑制运动被抑制运动被抑制的即为阳性的即为阳性的即为阳性的即为阳性，n n 此此法法优优点点是是快快快快速速速速而而而而特特特特异异异异操操操操作作作作简简简简便便便便，但但必必须须有有数数量量较较多多的弧菌才检出。的弧菌才检出。3 3）涂片染色涂片染色涂片染色涂片染色：革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性革兰氏染色阴性并成鱼群状排列的弧菌并成鱼群状排列的弧菌并成鱼群状排列的弧菌并成鱼群状排列的弧菌。2快速诊断：1）免免免免疫疫疫疫荧荧荧荧光光光光菌菌菌菌球球球球法法法法：将将标标本本接接种种于于含含有有霍霍乱乱弧弧菌菌荧荧荧荧光光光光抗抗抗抗体体体体的的碱碱性性蛋蛋白白胨胨水水中中，经经3737446h6h，如如有有霍霍乱乱弧弧菌菌，在在荧荧光光显显微微镜镜下下可可可可见见见见发发发发荧荧荧荧光光光光的的的的菌菌菌菌球球球球。本本法法适适用于做用于做大量标本的初筛大量标本的初筛大量标本的初筛大量标本的初筛。2 2）SPASPA协同凝集试验：协同凝集试验：协同凝集试验：协同凝集试验：以霍乱弧菌以霍乱弧菌IgGIgG型抗体型抗体型抗体型抗体与与SPASPA阳性葡萄球菌结合作为试剂，与米泔水样便或增菌阳性葡萄球菌结合作为试剂，与米泔水样便或增菌液作玻片凝集，液作玻片凝集，立即出现明显凝集者（）为立即出现明显凝集者（）为立即出现明显凝集者（）为立即出现明显凝集者（）为阳性。阳性。阳性。阳性。3细菌分离培养1 1）直接分离培养：直接分离培养：n n分离用的培养基有强、弱分离用的培养基有强、弱2 2种选择培养基。种选择培养基。n n弱选择培养基弱选择培养基弱选择培养基弱选择培养基：碱性琼脂和碱性胆盐琼脂。：碱性琼脂和碱性胆盐琼脂。n n强选择培养基：强选择培养基：强选择培养基：强选择培养基：常用的有庆大霉素琼脂、常用的有庆大霉素琼脂、4 4号琼脂和号琼脂和TCBSTCBS琼脂等。琼脂等。n n现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行现多采用碱性蛋白胨水增菌，再用强选择培养基进行分离。分离。分离。分离。4 鉴定：根根据据霍霍乱乱弧弧菌菌在在各各种种选选择择培培养养基基上上的的特特点点，挑挑选选可可疑疑菌菌落落进进行行鉴鉴定定。鉴鉴鉴鉴定定定定以以以以血血血血清清清清学学学学（玻玻玻玻片片片片凝凝凝凝集集集集）为为为为主主主主，结合形态学、生化反应作出判断结合形态学、生化反应作出判断结合形态学、生化反应作出判断结合形态学、生化反应作出判断。1 1）玻玻玻玻片片片片凝凝凝凝集集集集试试试试验验验验：从从分分离离培培养养基基上上挑挑取取可可疑疑菌菌落落于于霍霍乱乱弧弧菌菌多多多多价价价价诊诊诊诊断断断断血血血血清清清清作作玻玻片片凝凝集集试试验验。诊诊断断血血清清应应稀稀释释成成1:32-1:641:32-1:64的的效效价价使使用用，立立立立即即即即出出出出现现现现凝凝凝凝集集集集者者者者为为为为阳阳阳阳性性性性，同时设生理盐水和阳性细菌株对照。同时设生理盐水和阳性细菌株对照。2）形形态态学学检检查查：取取纯纯培培养养物物涂涂片片革革兰兰氏氏染染色色，观观观观察察察察菌菌菌菌体体体体形形形形态态态态及及及及染染染染色色色色性性性性。用用悬悬滴滴法法或或半半固固体体穿穿刺刺法法检检检检测测测测动力动力动力动力。3）生生化化反反应应：霍霍乱乱弧弧菌菌氧氧化化酶酶试试验验、靛靛基基质质试试验验、粘丝试验和霍乱红试验均阳性粘丝试验和霍乱红试验均阳性。粘丝试验：粘丝试验：用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特用于测定霍乱弧菌形成粘丝的特性。将性。将0.50.5去氧胆酸钠去氧胆酸钠去氧胆酸钠去氧胆酸钠水溶液水溶液于霍乱弧菌混匀制成浓于霍乱弧菌混匀制成浓厚菌液，厚菌液，1min1min内悬液由混变清，并变得粘稠，内悬液由混变清，并变得粘稠，以接种以接种以接种以接种环挑取时可以拉出丝环挑取时可以拉出丝环挑取时可以拉出丝环挑取时可以拉出丝来来来来。霍乱弧菌古典生物型和。霍乱弧菌古典生物型和El TorEl Tor生物型均呈阳性。生物型均呈阳性。霍霍霍霍乱乱乱乱红红红红试试试试验验验验：出出出出现现现现蔷蔷蔷蔷薇薇薇薇色色色色，为为霍霍乱乱红红试试验验阳阳性性。由由于于霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，故无特异性。霍乱弧菌和其他弧菌均有此种反应，故无特异性。（霍霍乱乱弧弧菌菌含含有有色色氨氨酸酸酶酶，能能分分解解色色氨氨酸酸产产生生吲吲哚哚，霍霍乱乱弧弧菌菌液液能能还还原原硝硝酸酸盐盐为为亚亚硝硝酸酸盐盐，因因此此当当霍霍乱乱弧弧菌菌培培养养在在含含有有硝硝酸酸盐盐成成分分的的蛋蛋白白胨胨水水中中，所所产产生生的的亚亚硝硝酸酸盐盐可可与与吲吲哚哚结结合合成成亚亚硝硝酸酸吲吲哚哚，滴滴加加浓浓硫硫酸酸即即可可出出现蔷薇色，称为霍乱红试验阳性现蔷薇色，称为霍乱红试验阳性）O/129O/129敏感试验：敏感试验：敏感试验：敏感试验：将将O/129O/129（2 2，4 4二氨基二氨基6 6，7 7二异二异丙基喋啶）药敏纸片（丙基喋啶）药敏纸片（1010150150g g）贴在接种有待测菌）贴在接种有待测菌的琼脂平板上作纸片扩散试验，的琼脂平板上作纸片扩散试验，凡药物纸片周围出现凡药物纸片周围出现凡药物纸片周围出现凡药物纸片周围出现抑菌环者为敏感抑菌环者为敏感抑菌环者为敏感抑菌环者为敏感。4）霍乱弧菌的分型鉴别试验：血血清清分分型型：用用小小川川型型和和稻稻叶叶型型单单单单价价价价诊诊诊诊断断断断血血血血清清清清作作玻玻片片凝凝集集。与与小小川川型型血血清清凝凝集集而而与与稻稻叶叶型型血血清清不不凝凝集集者者为为小小川川型型，反反之之为为稻稻叶叶型型。在在两两个个单单价价血血清清中中均均有有明明显凝集者为彦岛型。显凝集者为彦岛型。生物型别的鉴定：生物型别的鉴定：目前，两型主要依靠第目前，两型主要依靠第组组霍乱噬菌体裂解试验进行鉴别，并辅以多粘菌素敏感霍乱噬菌体裂解试验进行鉴别，并辅以多粘菌素敏感试验、鸡红细胞凝集试验、试验、鸡红细胞凝集试验、V VP P试验和溶血试验。试验和溶血试验。第第第第组霍乱噬菌体裂解试验：组霍乱噬菌体裂解试验：组霍乱噬菌体裂解试验：组霍乱噬菌体裂解试验：第第组组霍霍乱乱噬噬菌菌体体常常规规稀稀释释液液（10106 6/ml/ml）一一般般仅仅裂裂 解古典型，而不裂解解古典型，而不裂解El TorEl Tor型。型。多粘菌素多粘菌素多粘菌素多粘菌素B B B B敏感试验：敏感试验：敏感试验：敏感试验：取被检菌取被检菌2-3h2-3h肉汤培养物点种到含药营养琼脂平板肉汤培养物点种到含药营养琼脂平板上（多粘菌素上（多粘菌素B50UB50Umlml）,37,37培养培养24h24h，El TorEl TorEl TorEl Tor生物型生物型生物型生物型生长，而古典型敏感。生长，而古典型敏感。生长，而古典型敏感。生长，而古典型敏感。n n 鸡鸡红红细细胞胞凝凝集集试试验验：在在玻玻片片上上滴滴加加生生理理盐盐水水一一滴滴，取取被被检检菌菌18-24h18-24h培培养养物物少少许许在在盐盐水水中中制制成成浓浓厚厚菌菌悬液，然后加一滴悬液，然后加一滴2.52.5鸡红细胞悬液，充分混匀，鸡红细胞悬液，充分混匀，1min1min内出现内出现凝集者为阳凝集者为阳性，红细胞性，红细胞呈均匀分散呈均匀分散者为阴性。者为阴性。El TorEl Tor生物生物型为阳性，型为阳性，古典型为阴古典型为阴性性。鉴定要点：确诊O1群霍乱弧菌必须具备的条件：1、涂片为革兰氏阴性弧菌或杆菌；2、TCBS等选择培养基上典型的菌落特征；3、动力阳性；4、O1群霍乱弧菌诊断血清凝集试验阳性。四、防治原则n n必须贯彻必须贯彻预防为主预防为主预防为主预防为主。n n人群的人群的菌苗预防接种菌苗预防接种菌苗预防接种菌苗预防接种，可获良好效果，可获良好效果，n n治治治治疗疗疗疗主主主主要要要要为为为为及及及及时时时时补补补补充充充充液液液液体体体体和和和和电电电电解解解解质质质质及及及及应应应应用用用用抗抗抗抗菌菌菌菌药药药药物物物物如如四四环环素素、链链霉霉素素、氯氯霉霉素素、强强力力霉霉素素及及氟哌酸类抗生素药物。氟哌酸类抗生素药物。第二部分 弯曲菌属n n弯弯弯弯曲曲曲曲菌菌菌菌属属属属(Campylobacter)(Campylobacter)细细菌菌是是一一类类微微需需氧氧、不不分分解解糖糖类类、氧氧化化酶酶阳阳性性、菌菌体体弯弯曲曲呈呈逗逗点点状状、S S型或螺旋状、有动力的革兰氏阴性菌。型或螺旋状、有动力的革兰氏阴性菌。n n对对人人类类致致病病的的主主要要是是空空空空肠肠肠肠弯弯弯弯曲曲曲曲菌菌菌菌和和和和胎胎胎胎儿儿儿儿弯弯弯弯曲曲曲曲菌菌菌菌胎胎胎胎儿儿儿儿亚亚亚亚种种种种，前前者者是是人人类类腹腹腹腹泻泻泻泻最最常常见见的的病病原原菌菌之之一一，后后者者在在免免疫疫功功能能低低下下时时可可引引起起败败败败血血血血症症症症、脑脑脑脑膜炎等膜炎等膜炎等膜炎等。n n本本节节主主要要以以空空肠肠弯弯曲曲菌菌介介绍绍本本属属的的生生物物学学特特性性和检验方法和检验方法一、生物学性状（一）形态与染色（一）形态与染色 空空肠肠弯弯曲曲菌菌 （C.jejuniC.jejuni）菌菌体体轻轻度度弯弯曲曲似似逗逗点点状状，长长1.51.55 5 mm，宽宽0.20.20.8 0.8 mm。菌菌体体一一端端或或两两端端有有鞭鞭毛毛，运运动动活活泼泼，在在暗暗视视野野镜镜下下观观察察似似飞飞蝇蝇。有有荚荚膜膜，不不形形成芽胞。革兰氏阴性。成芽胞。革兰氏阴性。图注：空肠弯曲菌的图注：空肠弯曲菌的两端单鞭毛（两端单鞭毛（）负染，负染，21000（二）培养特性（二）培养特性n n为为为为微微微微需需需需氧氧氧氧菌菌菌菌，在在含含2.52.55%5%氧氧和和10%CO10%CO2 2的的环环境境中中生生长长最最好好。最最适适温温度度为为37374242。在在正正常常大大气或无氧环境中均不能生长。气或无氧环境中均不能生长。n n本菌本菌营养要求高营养要求高营养要求高营养要求高，需加入血液、血清才能生长需加入血液、血清才能生长需加入血液、血清才能生长需加入血液、血清才能生长。n n在在凝凝固固血血清清和和血血琼琼脂脂培培养养基基上上培培养养3636小小时时可可见见无无无无色色色色半半半半透透透透明明明明毛毛毛毛玻玻玻玻璃璃璃璃样样样样小小小小菌菌菌菌落落落落，单单单单个个个个菌菌菌菌落落落落呈呈呈呈中中中中心心心心凸起，周边不规则，无溶血现象凸起，周边不规则，无溶血现象凸起，周边不规则，无溶血现象凸起，周边不规则，无溶血现象。（三）生化反应n n空肠弯曲生化反应不活泼，不发酵糖类，不分解尿素，不液化明胶，靛基质阴性。n n可还原硝酸盐，氧化酶和过氧化氢酶为阳性。n n甲基红和VP试验阴性；n n枸椽酸盐培养基中不生长。（四）抵抗力（四）抵抗力n n抵抵抵抵抗抗抗抗力力力力不不不不强强强强，易易被被干干燥燥、直直射射日日光光及及弱弱消消毒毒剂所杀灭，剂所杀灭，565565分钟可被杀死。分钟可被杀死。n n对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯对红霉素、新霉素、庆大霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等霉素、卡那霉素等抗生素敏感抗生素敏感抗生素敏感抗生素敏感。但近年发现。但近年发现了不少耐药菌株。了不少耐药菌株。（五）抗原构造n n本菌抗原构造与肠道杆菌一样具有具有O、H和和K抗原抗原。n n根据O抗原，可把空肠弯曲菌分成45个以上血清型。二、致病性与免疫性n n空空肠肠弯弯曲曲菌菌是是多多种种动动物物如如牛牛、羊羊、狗狗及及禽禽类类的的正常寄居菌正常寄居菌正常寄居菌正常寄居菌。n n污污污污染染染染食食食食物物物物和和和和饮饮饮饮水水水水，可可引引起起人人类类急急急急性性性性肠肠肠肠炎炎炎炎和和和和食食食食物物物物中毒中毒中毒中毒，n n其其其其致致致致病病病病因因因因素素素素与与与与肠肠肠肠毒毒毒毒素素素素、内内内内毒毒毒毒素素素素、细细细细胞胞胞胞毒毒毒毒素素素素、侵侵侵侵袭力有关。袭力有关。袭力有关。袭力有关。n n感染后能产生特异性血清抗体感染后能产生特异性血清抗体感染后能产生特异性血清抗体感染后能产生特异性血清抗体，三、微生物学诊断（一）标本采集：n n 取腹泻病人新鲜粪便或肛拭子新鲜粪便或肛拭子立即送检。n n如不能及时送检，应将标本接种于卡布运送培养基。（二）检验程序：（三）检验方法及鉴定1直接涂片 （1）悬滴标本检查：显显显显微微微微镜镜镜镜下下下下观观观观察察察察有有有有无无无无投投投投镖镖镖镖式式式式或或或或螺螺螺螺旋旋旋旋状状状状运运运运动动动动的的的的细菌细菌细菌细菌。脑脊液制成涂片作悬滴检查。脑脊液制成涂片作悬滴检查。（2）革兰氏染色检查：为为革革革革兰兰兰兰氏氏氏氏阴阴阴阴性性性性，逗逗逗逗点点点点状状状状、S S形形形形或或或或螺螺螺螺旋旋旋旋状状状状小小小小杆菌杆菌杆菌杆菌。2分离培养：n n选择培养基分离 接种于具有高度选择性的平板培养接种于具有高度选择性的平板培养接种于具有高度选择性的平板培养接种于具有高度选择性的平板培养（布氏布氏布氏布氏菌血琼脂抗性分离培养基菌血琼脂抗性分离培养基菌血琼脂抗性分离培养基菌血琼脂抗性分离培养基），然后放玻璃缸内），然后放玻璃缸内（内含（内含85%N85%N2 2，10%CO10%CO2 2，5%O5%O2 2），置），置4242孵孵箱内培养箱内培养4848小时。小时。n n挑选可疑菌落，菌落为灰色、平坦、规菌落为灰色、平坦、规则，在血平板上不溶血则，在血平板上不溶血，再用生化反应和血清凝集试验作出最后鉴定。鉴定要点:氧化酶阳性，革兰氏阴性，菌体弯曲或称S形，微需氧，触酶试验阳性，不利用糖类，42时生长。空肠弯曲菌和胎儿弯曲菌的生化反应鉴定试验种类空肠弯曲菌胎儿弯曲菌萘啶酸敏感试验敏感耐药头孢噻吩敏感试验耐药敏感马尿酸盐水解试验醋酸吲哚水解试验四、防治原则n n本病的预防在及时诊断和治疗病人，以免传播。加强卫生防疫及人畜粪便管理，注意饮食和饮水卫生注意饮食和饮水卫生。n n本菌对多多种种抗抗生生素素敏敏感感，常用红霉素、四环素、庆大霉素治疗。谢谢