初始含水率和菌群演替在雪茄烟叶发酵产香中的作用.pdf

湖南农业科学（HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES）2023 年 7 月82-加工贮藏 检测分析湖南农业科学（HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES）引用格式：宋雯，陈曦，余君，等.初始含水率和菌群演替在雪茄烟叶发酵产香中的作用 J.湖南农业科学，2023（7）：82-88.DOI:DOI:10.16498/ki.hnnykx.2023.007.0162023（7）：82-88雪茄烟叶发酵是微生物利用烟叶本身的营养物质在适宜条件下进行生长、代谢、转化的过程1-2。烟叶含水率是发酵过程内在的生理基础3。雪茄烟叶晾制完成后含水率较低（10%16%）4，不能有效满足微生物发酵对水分的要求5，从而导致烟叶发酵过程缓慢、发酵周期延长。孙建锋6的研究显示，烟叶工业醇化过程中含水率为 13%，其醇化周期长达 13 a。但是，烟叶水分含量过高也会使雪茄初始含水率和菌群演替在雪茄烟叶发酵产香中的作用宋雯1，陈曦1，余君2，胡路路1，陈雄1，王志1（1.湖北工业大学 生物工程与食品学院，发酵工程教育部重点实验室，湖北 武汉 430068；2.湖北省烟草科学研究院，湖北 武汉 430030）摘要：以雪茄 CX-14 烟叶为材料，研究了初始含水率（30%、34%、38%）对雪茄烟叶发酵产香的影响，并通过宏基因组测序技术明确了雪茄烟叶的菌群结构及功能基因变化，分析了优势菌属在发酵过程中的贡献度，探明了菌群演替与雪茄烟叶香气产量变化的相关规律。结果表明：当雪茄烟叶含水率回潮至 34%时，发酵后的苯丙氨酸转化产物、类胡萝卜素降解产物、西柏烷类降解产物、棕色化反应产物含量和香气总量分别比发酵前提高了 77.2%、167.1%、28.6%、51.5%和 169.3%，香气总量分别比 30%和 38%含水率组提高了 26.6%和 21.7%；通过宏基因组学分析，发酵后葡萄球菌属（Staphylococcus）丰度占比高达87.8%，是绝对优势菌属，而且其对发酵过程中的次生代谢物生物合成、ABC 转运蛋白、氨基酸生物合成等代谢过程的贡献度超过了 85%；经发酵菌属与烟叶香型相关性分析，发现类胡萝卜素转化产物是香型的主要呈现者，而且葡萄球菌菌属在香型节点最突出，是呈现香型的最大贡献者。综上所述，雪茄烟叶发酵前的最适含水率为 34%，发酵过程中葡萄球菌属对雪茄烟叶发酵的香气产量有显著促进作用。关键词：雪茄烟叶；初始含水率；香气成分；宏基因组分析中图分类号：S482.4文献标识码：A文章编号：1006-060X（2023）07-0082-07The Roles of Initial Moisture Content and Microbial Succession in Aroma Production During the Cigar Tobacco Leaf Fermentation SONG Wen1,CHEN Xi1,YU Jun2,HU Lu-lu1,CHEN Xiong1,WANG Zhi1（1.College of Bioengineering and Food Science,Hubei University of Technology;Key Laboratory of Fermentation Engineering,Ministry of Education,Wuhan 430068,PRC;2.Tobacco Research Institute of Hubei Province,Wuhan 430030,PRC）Abstract：The effects of initial moisture content(30%,34%and 38%)on the fermentation aroma production of cigar tobacco leaves were investigated using cigar CX-14 leaves as materials.The changes in the bacterial colony structure and functional genes of cigar tobacco leaves were clarified by macro-genome sequencing technology,and the contribution of dominant genera in the fermentation process was analyzed to investigate the correlation law between the bacterial colony succession and the changes in the aroma production of cigar tobacco leaves.The results showed that when the moisture content of cigar leaves regain to 34%,the contents of phenylalanine conversion products,carotenoid degradation products,cembratriendid degradation products,browning reaction products and total aroma of the fermented cigar tobacco leaves were increased by 77.2%,167.1%,28.6%,51.5%and 169.3%compared with those of the pre-fermentation group,and the total aroma of the fermented cigar tobacco leaves was increased by 26.6%and 21.7%compared with that of the 30%and 38%moisture groups respectively;through macro-genomics analysis,the abundance of Staphylococcus accounted for 87.8%after fermentation,which was the absolute dominant genus,and its contribution to the metabolic processes such as secondary metabolite biosynthesis,ABC transporter protein,amino acid biosynthesis,and other metabolism processes in the process of fermentation was more than 85%.Through the correlation analysis between fermentation bacteria and aroma types of tobacco leaves,it was found that carotenoid conversion products were the main presenters of aroma types,and Staphylococcus was the most prominent in the aroma type node and the biggest contributor to aroma types.To sum up,the optimum moisture content of cigar tobacco leaves before fermentation is 34%,and Staphylococcus can significantly promote the aroma yield of cigar tobacco leaves during fermentation.Key words：cigar tobacco leaves;initial moisture content;aroma components;metagenomic analysis收稿日期：20230412基金项目：国家其他部委项目（110202001039）作者简介：宋雯（1999），女，湖北孝感市人，硕士研究生，主要从事风味产品发酵技术研究。通信作者：王志宋雯等：初始含水率和菌群演替在雪茄烟叶发酵产香中的作用83-加工贮藏 检测分析烟叶颜色变深7，甚至霉变8。雪茄发酵温度的变化与其含水率也密切相关9，含水率过高会使烟叶快速升温，发酵不均；含水率过低，烟叶升温缓慢，发酵时间增加10。因此，适宜的含水率是雪茄烟叶发酵香气产量的前提条件。目前，国内对于雪茄烟发酵的研究主要集中在烟叶发酵过程中成分的变化11-12、添加不同物料和微生物13-15对烟叶品质的影响等方面。郭文龙等16通过烟叶颜色变化来判断品质的优劣，发现多酚物质转化对烟叶颜色变化有直接影响；郑霖霖等17通过添加植酸酶、纤维素酶、果胶酶和中性蛋白酶提高了烟叶的总糖和氨基酸含量，降低了烟叶的蛋白质含量，提高了烟叶感官品质；张晓瑞等18在烟叶发酵过程中添加淀粉降解菌，有效降低了烟叶的淀粉含量，增加了香气。宏基因组（Metagenomics）测序技术是利用新一代高通量测序技术（NGS）以特定环境下微生物群体基因组为研究对象，在分析微生物多样性、种群结构、进化关系的基础上，进一步探究微生物群体功能活性、相互协作关系及与环境之间的关系，发掘潜在生物学意义的一种新方法。与传统微生物研究方法相比，宏基因组测序技术规避了绝大部分微生物不能培养、痕量菌无法检测的缺点，因此近年来在环境微生物学研究中得到了广泛应用19-23。在烟草发酵方面，王文婷等24利用宏基因组学技术分析了霍氏肠杆菌 F8-1（Enterobacter hormaechei F8-1）发酵烟叶期间表面微生物的动态变化。然而该技术在雪茄烟发酵过程中的应用研究尚未见报道。试验以雪茄 CX-14 烟叶为材料，研究了初始含水率对雪茄烟叶发酵产香的影响，并通过宏基因组测序技术明确了雪茄烟叶发酵过程中菌群结构及功能基因的变化，分析了优势菌属在发酵过程中的贡献度，探明了菌群演替与雪茄烟叶香气产量变化的相关规律。该研究结果可为雪茄发酵过程中的精准化操作提供参考。1材料与方法1.1试验材料供试烟叶为雪茄 CX-14 烟叶，由湖北省烟草科学研究院提供。主要试剂为洗涤缓冲液，配方为：Tris-HCl 15.8 g/L，EDTA-Na2 18.6 g/L，聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrrolidone，PVP）20.0 g/L，NaCl 81.9 g/L，Tween-20 1.0 g/L，pH 值 8.0。1.2试验方法1.2.1雪茄烟叶发酵方法雪茄烟叶采用箱式发酵，每箱烟叶 40 kg，使用称重加湿回潮法对烟叶进行回潮，烟叶含水率分别回潮至 30%、34%、38%，分别记为 T1、T2、T3 处理。将发酵箱置于发酵房内，室内温度控制在 2830，相对湿度控制在75%80%，发酵周期为 30 d。1.2.2烟叶中挥发性香气成分的测定发酵结束后的烟叶去除主脉烘干粉碎后过 60 目筛，称取 10 g 烟末，使用同时蒸馏萃取装置提取烟叶中的香气成分。干燥过滤后进行 GC-MS 分析。GC-MS 检测条件如下。色谱柱：HP-5MS 毛细管柱（30 m0.25 mm，0.25 m）；升温程序：40保持 2 min，以 2/min 升至200，保持 5 min，然后 10/min 升至 280；载气（He）流速：1 mL/min；进样量：1 L；分流比：10 1；采用电子轰击离子源；电子能量：70 eV；传输线温度：250；离子源温度：230；质量扫描范围：35550 m/z。目标化合物的峰识别以美国国家标准技术研究所（NIST）数据库为准。1.2.3宏基因组样品预处理取 10 g 烟叶剪碎，置入 100 mL 洗涤缓冲液中超声 30 min，过滤，将滤液以 10 000 r/min 的速度离心 10 min，弃上清液保留沉淀，重复操作至上清液几乎无色。放入液氮罐中冷冻 30 s 后迅速转入 80保存。取 34%含水率组发酵前后的雪茄烟叶作样品，发酵前记为 HEQ，发酵后记为 HE。1.2.4烟叶宏基因提取采用 NEXTFLEX Rapid DNA-Seq Kit 试剂盒提取烟叶宏基因，操作按说明书进行。1.2.5宏基因测序结果分析PE 文库构建、基因组测序、序列质控与组装、基因预测与非冗余基因集构建等由上海美吉生物医药科技有限公司完成25-26。使用美吉云平台的在线工具进行物种与功能注释及物种贡献度分析27-28。1.3数据处理试验数据为 3 组平行试验的均值，采用 SPSS 26 软件进行数据分析，采用 Origin 2019b 软件绘图。2结果与分析2.1不同含水率组发酵前后香气含量变化烟叶内的香气物质含量是烟型、吃味形成的重要影响因素29。对比 T1（含水率 30%）、T2（含水率 34%）、T3（含水率 38%）处理雪茄烟叶发酵前后的香气含量，结果如图 1 所示。苯丙氨酸转化产物是烟叶香气成分的重要组成部分，其作用主要是突出烟叶中的花香，协调烟叶香气，使雪茄更具自然风格30。T1、T2 及 T3 处湖南农业科学（HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES）2023 年 7 月84-加工贮藏 检测分析含 量图 1不同含水率组发酵前后香气含量理的雪茄烟叶发酵后苯丙氨酸转化产物含量分别为11.9、16.3 和 12.0 g/g，较发酵前（9.2 g/g）分别提高了 29.3%、77.2%与 30.4%，T2 处理的雪茄烟叶发酵后苯丙氨酸转化产物含量分别较 T1、T3 处理提高了 37.0%、35.8%。类胡萝卜素转化产物如-大马酮、二氢猕猴桃内酯、巨豆三烯酮等可以消除烟叶刺激性，增加果香、花香、木香等，是反映烟叶香气品质的关键成分31-32。T1、T2 及 T3 处理雪茄烟叶发酵后类胡萝卜素转化产物含量分别为 55.4、126.1 和 58.6 g/g，较发酵前（47.4 g/g）分别提高了 16.9%、167.1%和 23.6%，T2 处理雪茄烟叶发酵后类胡萝卜素转化产物含量分别较 T1、T3 处理提高了 127.6%、115.2%。西柏烷类转化产物可使烟气更加柔和，余味更加醇和32。T1、T2 及 T3 处理雪茄烟叶发酵后西柏烷类降解产物含量分别为 25.4、28.3 和 27.2 g/g，较发酵前（22.0 g/g）分别提高了 15.5%、28.6%和23.6%，T2 处理雪茄烟叶发酵后西柏烷类降解产物含量分别较 T1、T3 处理提高了 11.4%、4.0%。棕色化反应产物可增加烟草香气，改善烟叶品质33。T1、T2 及 T3 处理雪茄烟叶发酵后棕色化反应产物含量分别为 11.7、14.7 和 18.2 g/g，较发酵前（9.7 g/g）分别提高了 20.6%、51.5%和 87.6%，T3 处理雪茄烟叶发酵后棕色化反应产物含量分别较T1、T2 处理提高了 55.6%、23.8%。从香气总量来看，T1、T2 和 T3 处理雪茄烟叶发酵后的香气总量均有较大幅度地升高，分别达847.8、1 073.7 和 882.0 g/g，比发酵前（398.7 g/g）分别提高了 112.6%、169.3%和 121.2%，T2 处理雪茄烟叶发酵后的香气总量分别较 T1、T3 处理提高了 26.6%、21.7%。这表明发酵前将雪茄烟叶含水率回潮至 34%，发酵效果较好，烟叶内整体香气物质含量明显提升。2.234%含水率组雪茄烟叶发酵前后的 NR物种注释NR 数据库（非冗余蛋白质氨基酸序列库）比对结果（图 2）显示，在域水平上，34%含水率组雪茄烟叶发酵前细菌的相对丰度为 84.25%，发酵后升至 99.09%，而真菌的相对丰度从发酵前的 15.68%降至发酵后的 0.76%，表明雪茄烟叶发酵过程中承担烟草香气风味及香味物质生成的主要是细菌。由 图 3 可 知，在 属 水 平 上，葡 萄 球 菌 属（Staphylococcus）是雪茄烟叶表面的优势属，发酵前后均具有优势地位，发酵后丰度占比高达 87.80%；曲霉（Aspergillus）、假单胞菌属（Pseudomonas）、鞘 氨 醇 单 胞 菌 属（Sphingomonas）、甲 基 杆 菌 属（Methylobacterium）、烟草属菌（Nicotiana）在发酵前期的相对丰度占比总和达 22.13%，其丰度占比总和在发酵后期降至 3.18%。这表明葡萄球菌属对烟草表面大多数菌属存在竞争行为。由图 4 可知，在种水平上，34%含水率组雪茄烟叶发酵前期微生物多达 11 573 种，发酵后期降至6 754 种，其中发酵前有 5 571 个独有种，发酵后只有 752 个独有种，表明 34%含水率组雪茄烟叶在发酵过程中存在菌种多样性降低的现象。由图 5 可知，图 234%含水率组雪茄烟叶发酵前后域水平的物种分布（HEQ：发酵前；HE：发酵后；下同）宋雯等：初始含水率和菌群演替在雪茄烟叶发酵产香中的作用85-加工贮藏 检测分析图 434%含水率组雪茄烟叶发酵前后种水平的 Venn 图发酵前后烟叶表面主要优势菌种为尼泊尔葡萄球 菌（Staphylococcus nepalensis）、木 糖 葡 萄球 菌（Staphylococcus xylosus）、腐 生 葡 萄 球 菌（Staphylococcus saprophyticus）、冠突曲霉（Aspergillus cristatus），其中尼泊尔葡萄球菌、木糖葡萄球菌和腐生葡萄球菌均属于葡萄球菌属，且尼泊尔葡萄球菌在发酵后丰度占比高达 66.28%，为烟叶中的绝对优势种，与属水平结果一致。2.334%含水率组雪茄烟叶发酵前后的菌属及功能差异分析对 34%含水率组发酵前后相对丰度前 15 的菌群及功能进行差异分析，结果如图 6 所示，鞘氨醇单胞菌属、甲基杆菌属的丰度占比从 3.9%、3.1%均下降到 0.1%；而罗尔斯顿氏菌属（Ralstonia）和拟分枝杆菌属（Mycobacteroides）的丰度占比从不足0.3%分别增加到 2.0%和 0.5%，其中葡萄球菌属丰度占比从 57.7%增长到 87.8%，远高于其他菌属。另外，相对丰度排前 15 位的功能通路在发酵后均有不同程度地提升，其中糖酵解/糖异生途径提升明显，氨基酸生物合成、丙酮酸代谢及肽聚糖生物合成也有较大增幅，说明 34%的含水率有利于烟叶表面菌群的生长发育繁殖。菌种数量大幅提升的同时，由于葡萄球菌属在烟叶表面具有绝对优势，且对大多菌群存在竞争行为，导致发酵后期菌群多样性降低。图 334%含水率组雪茄烟叶发酵前后属水平的物种分布图 534%含水率组雪茄烟叶发酵前后种水平的物种分布湖南农业科学（HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES）2023 年 7 月86-加工贮藏 检测分析2.434%含水率组雪茄烟叶发酵前后的菌属与 KEGG 功能贡献度变化将 34%含水率组发酵前后体系中相对丰度排前15 的菌属与发酵代谢功能贡献度进行关联分析，结果如图 7 所示，发酵前葡萄球菌属、假单胞菌、鞘氨醇单胞菌、曲霉及甲基杆菌属对代谢功能均有不同程度的贡献，而葡萄球菌属的功能贡献度最高。发酵后由于物种多样性降低，葡萄球菌属功能贡献度进一步提升，均超过了 85%。其中，假单胞菌属对双组分系统也有明显的功能贡献度，发酵前、后的贡献度分别为 5.96%、3.24%，说明假单胞菌属也能较好地适应发酵过程中雪茄烟叶内部环境变化，充分利用各种物质来维持自身生存。2.534%含水率组雪茄烟叶发酵前后的菌群与烟叶香型相关性分析为了明确微生物物种与雪茄烟叶中挥发性香气之间的相关关系，分析了菌属与烟叶香型的相关性，将雪茄烟叶中挥发性香气成分苯丙氨酸转化产物、类胡萝卜素转化产物、西柏烷类转化产物及棕色化反应产物分别记为 B、L、X 和 Z（图 8），在相对丰度占比前 20 的物种中，葡萄球菌属、罗尔斯顿氏菌属和分枝杆菌属均与 B、L、X 及 Z 呈现正相关，对雪茄烟叶呈香有重要影响；其中，L 节点在 4 种挥发性香气中最大，表明类胡萝卜素转化产物是烟叶香型的主要呈现者；而且葡萄球菌菌属在香型节点最突出，表明其对雪茄烟叶香型呈现贡献最大。图 634%含水率组雪茄烟叶发酵前后物种（A）及功能（B）的差异检验AB宋雯等：初始含水率和菌群演替在雪茄烟叶发酵产香中的作用87-加工贮藏 检测分析3结论雪茄烟叶在最适含水率（34%）条件下发酵，发酵后的苯丙氨酸转化产物、类胡萝卜素降解产物、西柏烷类降解产物、棕色化反应产物含量和香气总量分别比发酵前提高了 77.2%、167.1%、28.6%、51.5%和 169.3%。香气总量分别比 30%和 38%含水率组提高 26.6%和 21.7%。通过宏基因组学分析，发酵后葡萄球菌属（Staphylococcus）丰度占比高达87.80%，是绝对优势菌属。而且其对发酵过程中的次生代谢物生物合成、ABC 转运蛋白、氨基酸生物合成等代谢过程的贡献度超过了 85%。经发酵菌属与烟叶香型相关性分析，发现类胡萝卜素转化产物是香型的主要呈现者，而且葡萄球菌菌属在香型节点最突出，是呈现香型的最大贡献者。研究结果表明：34%的烟叶初始含水率和葡萄球菌属对雪茄烟叶发酵产香有显著促进作用，为中式雪茄发酵技术提供了重要参考。参考文献：1 时向东，文志强，刘艳芳，等.遮荫对雪茄外包皮烟生长和光合特性的影响 J.西北植物学报，2006，26（8）：1718-1721.2 于建军，宫长荣.烟草原料初加工 M.北京：中国农业出版社，2009.3 武圣江，宋朝鹏，贺帆，等.密集烘烤过程中烟叶生理指标和物理特性及细胞超微结构变化 J.中国农业科学，2011，44（1）：125-132.4 刘博远，赵松超，李一凡，等.不同成熟度雪茄烟晾制过程碳水化合物及相关酶活性变化规律研究 J.中国农业科技导报，2021，23（4）：192-201.5 田煜利，乔保明，刘学兵，等.雪茄烟叶发酵前加湿方式初探 J.科技资讯，2018，16（9）：252-254.图 734%含水率组雪茄烟叶发酵前后细菌功能的贡献度图 834%含水率组雪茄烟叶发酵前后物种与香型的相关性分析湖南农业科学（HUNAN AGRICULTURAL SCIENCES）2023 年 7 月88-加工贮藏 检测分析6 孙建锋.仓储温湿度条件对烤烟醇化品质的影响 D.北京：中国农业科学院，2012.7 訾莹莹，韩志忠，孙福山，等.烤烟烘烤过程中品种间的生理生化反应差异研究 J.中国烟草科学，2011，32（1）：61-65.8 潘飞龙，苏家恩，宋朝鹏，等.密集烘烤烤烟不同品种烟叶霉烂特性研究 J.西南农业学报，2019，32（4）：823-828.9 荣仕宾，李晶晶，赵园园，等.雪茄芯叶人工发酵温湿度控制对化学成分和香味品质的影响 J.中国烟草学报，2021，27（2）：109-116.10 乔保明，田煜利，刘学兵，等.发酵温度对雪茄烟茄芯烟叶质量影响分析 J.中国科技信息，2018（8）：39-40.11 李晶晶，史宏志，杨兴有，等.发酵条件对雪茄芯叶 TSNAs 及其前体物含量变化的影响 J.中国烟草学报，2019，25（6）：120-125.12 刘路路，郭文龙，胡希，等.雪茄烟叶发酵过程中颜色变化与主要含氮化合物及评吸质量的关系 J.南方农业学报，2022，53（2）：497-504.13 李凌，章存勇.不同物料处理对雪茄烟叶发酵后香气成分和抽吸质量的影响 J.南方农业，2016，10（3）：254-256.14 李宁，汪长国，曾代龙，等.蜡样芽孢杆菌（Bacillus cereus）筛选鉴定及在雪茄烟叶发酵中的应用研究 J.中国烟草学报，2012，18（2）：65-69.15 李志豪，张鸽，貊志杰，等.一株产木聚糖酶的蜡样芽孢杆菌对雪茄烟叶成分及发酵产物的影响 J.生物技术通报，2022，38（2）：105-112.16 郭文龙，琚绍煊，丁松爽，等.雪茄烟叶发酵过程中颜色参数与发酵品质的关系 J.西北农林科技大学学报（自然科学版），2022，50（4）：50-57，65.17 郑霖霖，赵亮，蔡兴华，等.外源酶制剂对雪茄茄芯烟叶化学成分和感官品质的影响 J.烟草科技，2022，55（10）：26-33.18 张晓瑞，刘晓晖，付博，等.烟草中淀粉降解菌的筛选、鉴定及发酵工艺优化 J.食品与机械，2021，37（2）：34-41.19 赵勇，黄劲松，宋新蕊，等.宏基因组的生物信息分析 J.生物信息学，2013，11（4）：282-286.20 LI Z Y，FENG C X，LUO X G，et al.Revealing the influence of microbiota on the quality of Pu-erh tea during fermentation process by shotgun metagenomic and metabolomic analysisJ.Food Microbiology，2018，76：405-415.21 胡敏，曲丽娜，卞立红，等.宏基因组技术在生物医药领域的应用探讨 J.绿色科技，2020（18）：184-186.22 汪盼盼，杨野，刘迪秋，等.宏基因组学在植物病害研究中的应用 J.生物技术通报，2020，36（12）：146-154.23 胡敏，李雪，支红欣，等.海洋微生物宏基因组学研究进展J.绿色科技，2020（16）：238-240.24 王文婷，宋凯，杨晨，等.基于宏基因组学的霍氏肠杆菌发酵解析及其烟叶品质提升机制研究 J.轻工学报，2023，38（1）：79-89.25 PENG Y，LEUNG H C M，YIU S M，et al.IDBA-UD：a de novo assembler for single-cell and metagenomic sequencing data with highly uneven depthJ.Bioinformatics，2012，28（11）：1420-1428.26 LI D H，LIU C M，LUO R B，et al.MEGAHIT：an ultra-fast single-node solution for large and complex metagenomics assembly via succinct De Bruijn graphJ.Bioinformatics，2015，31（10）：1674-1676.27 BUCHFINK B，XIE C，HUSON D H.Fast and sensitive protein alignment using DIAMONDJ.Nature Methods，2015，12（1）：59-60.28 BUCHFINK B，REUTER K，DROST H G.Sensitive protein alignments at tree-of-life scale using DIAMONDJ.Nature Methods，2021，18（4）：366-368.29 马挺军，曾会明.烟草香味物质的研究进展 J.农产品加工（创新版），2010（6）：55-57.30 叶协锋，李佳颖，张腾，等.烤烟苯丙氨酸类致香物质与土壤理化性状的典型相关分析 J.土壤，2013，45（2）：1277-1284.31 莫娇.马杜罗茄衣发酵过程中常规化学成分和中性气物质变化规律研究 D.郑州：河南农业大学，2017.32 朱咸鑫.不同香型产区烟叶常规化学成分和致香物质差异 D.长沙：湖南农业大学，2017.33 FU Y，ZHANG Y H，SOLADOYE O P，et al.Maillard reaction products derived from food protein-derived peptides：insights into flavor and bioactivityJ.Critical Reviews in Food Science and Nutrition，2020，60（20）：3429-3442.（责任编辑：成平）