分析样品的制备专家讲座.pptx

第 三 章分 析 样 品 制 备分析样品的制备第1页第一节第一节 化学原料药分析样品制备化学原料药分析样品制备 化学原料药分析样品制备方法通化学原料药分析样品制备方法通常可分为三大类：常可分为三大类：直接溶解法直接溶解法 化学分解法化学分解法 有机破坏法有机破坏法分析样品的制备第2页 药典中收载一些含卤素与金药典中收载一些含卤素与金属有机药品，随其在分子结构中属有机药品，随其在分子结构中结合状态不一样，分析前要经过不结合状态不一样，分析前要经过不同前处理过程，方可测定。同前处理过程，方可测定。分析样品的制备第3页有机卤素药品：有机卤素药品：含卤素有机药品系指药品分子结构含卤素有机药品系指药品分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者，而不包含一些有机药品卤酸盐或氢卤酸而不包含一些有机药品卤酸盐或氢卤酸盐。盐。结构特点：结构特点：CX分析样品的制备第4页（一）卤原子活泼性（一）卤原子活泼性1.卤原子与碳原子直接相连，卤原子卤原子与碳原子直接相连，卤原子 活泼性和它直接相连烃基结构有很活泼性和它直接相连烃基结构有很大关系。大关系。乙烯型卤和芳卤乙烯型卤和芳卤 不活泼不活泼 烯丙型卤和苄卤烯丙型卤和苄卤 活泼活泼 卤代烷型卤代烷型 介于二者之间介于二者之间分析样品的制备第5页2.分子中所含卤原子个数分子中所含卤原子个数3.卤素种类卤素种类IBrClF 分子中所含卤原子个数越多，活泼分子中所含卤原子个数越多，活泼性越强。性越强。分析样品的制备第6页三氯叔丁醇三氯叔丁醇分析样品的制备第7页六氯对二甲苯六氯对二甲苯分析样品的制备第8页泛影酸泛影酸分析样品的制备第9页碘番酸碘番酸分析样品的制备第10页碘苯酯碘苯酯分析样品的制备第11页磺溴酞钠磺溴酞钠分析样品的制备第12页（二）定量分析前处理方法（二）定量分析前处理方法 直接回流后测定法直接回流后测定法 酸性或碱性还原后测定法酸性或碱性还原后测定法 氧瓶燃烧分解后测定法氧瓶燃烧分解后测定法分析样品的制备第13页含金属有机药品：含金属有机药品：含金属有机药品：含金属有机药品：金属原子不与碳原子直接相连，通常金属原子不与碳原子直接相连，通常为有机酸及酚金属配位化合物。为有机酸及酚金属配位化合物。如：如：酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸 亚铁。亚铁。分析样品的制备第14页葡萄糖酸锑钠葡萄糖酸锑钠酒石酸锑钾酒石酸锑钾富马酸亚铁富马酸亚铁分析样品的制备第15页有机金属药品：有机金属药品：金属原子直接与金属原子直接与 碳原子以共价键相碳原子以共价键相连，结合比较牢靠。连，结合比较牢靠。如：如：卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利分析样品的制备第16页卡巴胂卡巴胂醋酸苯汞醋酸苯汞汞撒利汞撒利分析样品的制备第17页一、直接溶解法一、直接溶解法 当药品结构中含有可检测官能团时，当药品结构中含有可检测官能团时，可直接使用适当溶剂溶解后采取适当可直接使用适当溶剂溶解后采取适当方法测定。如一些药品难溶于常规有机方法测定。如一些药品难溶于常规有机溶剂，可加热简单方法释放官能团。溶剂，可加热简单方法释放官能团。分析样品的制备第18页葡萄糖酸葡萄糖酸钙钙 配位滴定法配位滴定法 取本品取本品0.5g，精密称定，加水，精密称定，加水100ml，微温使溶解，加微温使溶解，加氢氢氧化氧化钠试钠试液液15ml与与钙钙紫紫红红素指示素指示剂剂0.1g，用乙二胺四乙醋酸二，用乙二胺四乙醋酸二钠钠滴定液（滴定液（0.05mol/L）滴定至溶液自紫色）滴定至溶液自紫色转转变为纯蓝变为纯蓝色。每色。每1ml乙二胺四乙醋酸二乙二胺四乙醋酸二钠钠滴滴定液（定液（0.05mol/L）相当于）相当于22.42mgC12H22CaO14H2O。分析样品的制备第19页富富马马酸酸亚铁亚铁 氧化氧化还还原滴定法原滴定法 取本品取本品约约0.3g，精密称定，精密称定，加稀硫酸加稀硫酸 15ml，加，加热热溶解后溶解后，放冷，加新沸，放冷，加新沸过过冷冷水水50ml与与邻邻二氮菲指示液二氮菲指示液2 滴，滴，马马上用硫上用硫酸酸铈铈滴定液（滴定液（0.1mol/L）滴定，并将滴定）滴定，并将滴定结结果用空白果用空白试验试验校正。每校正。每1ml硫酸硫酸铈铈滴定滴定液（液（0.1mol/L）相当于）相当于16.99mgC4H2FeO4。分析样品的制备第20页葡萄糖酸锑钠测定葡萄糖酸锑钠测定 取取本本品品约约0.3g，精精密密称称定定，置置具具塞塞锥锥形形瓶瓶中中，加加水水100ml、盐盐酸酸15ml与与碘碘化化钾钾试试液液10ml，密密塞塞、振振摇摇后后，在在暗暗处处静静置置10min，用用硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液(0.1mol/L)滴滴定定，至至近近终终点点时时，加加淀淀粉粉指指示示液液，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每lml硫硫代代硫硫酸酸钠钠滴滴定定液液(0.1mol/L)相当于相当于6.088mgSb。分析样品的制备第21页二、化学分解法二、化学分解法 药药品品结结构构中中存存在在潜潜在在活活性性基基团团，可可将药品结构部分分解后测定。将药品结构部分分解后测定。分析样品的制备第22页1.碱水解法碱水解法（一）水解法（一）水解法 三氯叔丁醇测定三氯叔丁醇测定 Ch.P.（）取本品约取本品约0.1g，精密称定，加乙醇，精密称定，加乙醇5mL溶解后，溶解后，加加20%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液5mL，加热回流，加热回流15min，放冷至室温，加水放冷至室温，加水20mL与硝酸与硝酸5mL，精密加硝酸银滴定液精密加硝酸银滴定液分析样品的制备第23页（0.1mol/L）30mL，再加邻苯二甲酸，再加邻苯二甲酸二丁酯二丁酯5mL，密塞，强力振摇后，加，密塞，强力振摇后，加硫酸铁胺指示液硫酸铁胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴用硫氰酸胺滴定液（定液（0.1mol/L）滴定，）滴定，并将滴定并将滴定结果用空白试验校正。每结果用空白试验校正。每1mL硝酸银硝酸银滴定液（滴定液（0.1mol/L）相当于）相当于6.216mgC4H7Cl3O1/2H2O。分析样品的制备第24页2.酸水解后酸水解后测测定法定法醋氨苯醋氨苯砜砜含量含量测测定：定：在酸性溶液中水解，芳在酸性溶液中水解，芳酰酰胺基水解胺基水解为为芳伯氨基，芳伯氨基，亚亚硝酸硝酸钠钠滴定法滴定法测测定含量定含量分析样品的制备第25页（二）碱性还原法（二）碱性还原法 在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）回流，使卤素与碳结合键断裂，形成无回流，使卤素与碳结合键断裂，形成无机卤后测定。机卤后测定。本法适合用于测定结构中碘与苯环本法适合用于测定结构中碘与苯环直接相连，且一个苯环上含多个碘原子直接相连，且一个苯环上含多个碘原子含卤素有机药品。含卤素有机药品。分析样品的制备第26页泛影酸测定泛影酸测定 Ch.P.（）取本品约取本品约0.4g，精密称定，精密称定，加氢氧加氢氧化钠溶液化钠溶液30mL与锌粉与锌粉1.0g，加热回流，加热回流30min，放冷，冷凝管用少许水洗涤，放冷，冷凝管用少许水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次次，每次15mL，洗液与滤液合并，加冰醋酸，洗液与滤液合并，加冰醋酸5mL与曙红钠指示液与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴滴，用硝酸银滴分析样品的制备第27页定液（定液（0.1mol/L）滴定。每）滴定。每1mL硝酸银硝酸银滴定液（滴定液（0.1mol/L）相当于）相当于20.46mg C11H9 I 3N2O4。Ch.P.（）收收载载胆胆影影酸酸、碘碘番番酸酸、胆胆影影葡葡胺胺、泛泛影影葡葡胺胺、碘碘他他拉拉酸酸等等均均采采取同法取同法测测定。定。分析样品的制备第28页碘番酸测定碘番酸测定 JP 取本品干燥品约取本品干燥品约0.4g，精密称定，精密称定，加锌粉加锌粉1g及冰醋酸及冰醋酸10mL，加热回流，加热回流30 min，放冷，冷凝管用水放冷，冷凝管用水30mL洗涤，用洗涤，用脱脂棉过滤，烧瓶与脱脂棉用水洗涤脱脂棉过滤，烧瓶与脱脂棉用水洗涤2次，每次次，每次20mL，洗液与滤液合并，加四，洗液与滤液合并，加四溴酚酞乙酯指示液溴酚酞乙酯指示液1mL，用硝酸银滴定，用硝酸银滴定分析样品的制备第29页液（液（0.1mol/L）滴定。终点时黄色沉淀变）滴定。终点时黄色沉淀变为绿色。每为绿色。每1mL硝酸银滴定液硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于相当于19.031mgC11H12 I 3NO2。分析样品的制备第30页三、有机破坏法三、有机破坏法 含金属、含金属、卤卤素、氮、硫、磷等有机素、氮、硫、磷等有机药药品品结结构中待构中待测测原子与碳原子原子与碳原子结结合牢靠合牢靠者，用水解或氧化者，用水解或氧化还还原法也原法也难难以将待以将待测测原子原子转为转为无机形式，必无机形式，必须须用有机破坏方用有机破坏方法将法将药药品品结结构破坏完全，方能构破坏完全，方能选选取适当取适当分析方法分析方法进进行行测测定。定。分析样品的制备第31页（一）（一）湿法破坏湿法破坏 酸消解法酸消解法 本法适合用于含氮有机合成本法适合用于含氮有机合成药药品分析品分析前前处处理，在生物制品分析中用于氮（包含理，在生物制品分析中用于氮（包含蛋白蛋白质质）、磷、硫柳汞及）、磷、硫柳汞及氯氯化化钠测钠测定法前定法前处处理。另外，本法亦用于生物理。另外，本法亦用于生物样样品中金属品中金属元素元素测测定定时时生物基生物基质质去除。去除。本法主要使用硫酸作为分解剂本法主要使用硫酸作为分解剂(消解消解剂或消化剂剂或消化剂)，常加入氧化剂，常加入氧化剂(如硝酸、高如硝酸、高氯酸、过氧化氢等氯酸、过氧化氢等)作为辅助分解剂。作为辅助分解剂。分析样品的制备第32页1.硝酸硝酸-高高氯氯酸法酸法 本法适合用于血、尿、本法适合用于血、尿、组织组织等生物等生物样样品破坏，有机金属品破坏，有机金属药药品品经经破坏后，得到无破坏后，得到无机金属离子普通呈高价机金属离子普通呈高价态态。本法不能用于本法不能用于含氮含氮杂环药杂环药品破坏。品破坏。2.硝酸硝酸-硫酸法硫酸法 本法适合用于大多数有机物本法适合用于大多数有机物质质破坏，破坏，破坏得到无机金属离子均破坏得到无机金属离子均为为高价高价态态。本法本法不能用于含碱土金属有机不能用于含碱土金属有机药药品破坏。品破坏。分析样品的制备第33页 3.硫酸硫酸-硫酸硫酸盐盐法法 本法是往本法是往样样品中加入品中加入浓浓硫酸作氧化硫酸作氧化剂剂，加入硫酸加入硫酸盐盐提升硫酸沸点，增提升硫酸沸点，增强强硫酸氧化硫酸氧化破坏能力，且破坏能力，且预预防硫酸分解防硫酸分解损损失。失。本法本法惯惯用于含砷或用于含砷或锑锑有机有机药药品破坏，品破坏，破坏得到无机金属离子多破坏得到无机金属离子多为为低价低价态态。分析样品的制备第34页 4.其它湿法其它湿法 硝酸硝酸硫酸硫酸高高氯氯酸法；酸法；硫酸硫酸氧氧化化剂剂法（法（过过氧化氧化氢氢法、高法、高锰锰酸酸钾钾）。）。破坏后，金属呈高价破坏后，金属呈高价态态。分析样品的制备第35页5.凯凯氏定氮法氏定氮法 氮氮测测定法定法 应用于测定含有氨基或酰胺结构药应用于测定含有氨基或酰胺结构药品含量。品含量。分析样品的制备第36页原理原理:有机含氮化合物与硫酸共有机含氮化合物与硫酸共热热，药药品分子中有品分子中有机机结结构被氧化分解，有机构被氧化分解，有机结结合合氮氮转变转变成氨成氨，并与，并与硫酸硫酸结结合成合成为为硫酸硫酸氢铵氢铵及硫酸及硫酸铵铵，用，用氢氢氧化氧化钠钠碱碱化后，化后，释释放出氨气放出氨气，随水蒸气，随水蒸气馏馏出，出，用硼酸溶液用硼酸溶液或定量酸吸收或定量酸吸收后，用酸滴定液或碱滴定液后，用酸滴定液或碱滴定液滴定滴定，并将滴定并将滴定结结果用空白果用空白试验试验校正。依据与氨作用酸校正。依据与氨作用酸量量计计算供算供试试品中氮含量或品中氮含量或换换算算为为被被测药测药品含量。品含量。分析样品的制备第37页（二）干法破坏（二）干法破坏1.高温高温炽炽灼法灼法 本法系将含待本法系将含待测测元素有机元素有机药药品品经经高高温灼温灼烧烧灰化，使有机灰化，使有机结结构分解而待构分解而待测测元元素素转转化化为为无机元素或可溶性无机无机元素或可溶性无机盐盐，以，以供分析。供分析。分析样品的制备第38页样品样品无水碳酸钠或轻质氧化镁无水碳酸钠或轻质氧化镁坩埚坩埚混合均匀混合均匀小火小火加热加热炭化炭化高温灼烧高温灼烧灰化灰化分析样品的制备第39页注意事注意事项项：（1）加）加热热或灼或灼烧时烧时，应应控制温度在控制温度在420以下；以下；（2）一定要灰化完全；）一定要灰化完全；（3）经经本法破坏后，所得灰分往往不易本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，可溶解，可经经加加热热煮沸使溶解煮沸使溶解分析样品的制备第40页2.氧瓶燃氧瓶燃烧烧分解后分解后测测定定氧瓶燃烧法：氧瓶燃烧法：本法是将分子中本法是将分子中含有卤素或硫含有卤素或硫等元等元素素有机药品在有机药品在充满氧气密闭充满氧气密闭燃烧瓶中进燃烧瓶中进行行燃烧燃烧，并将燃烧产物，并将燃烧产物吸收吸收于适当吸收于适当吸收液中，再采取适宜分析方法来检验或测液中，再采取适宜分析方法来检验或测定定卤素或硫等元素卤素或硫等元素含量。含量。分析样品的制备第41页 适合用于含卤素、硫、氮、硒适合用于含卤素、硫、氮、硒等有机药品分析。等有机药品分析。分析样品的制备第42页燃烧氧瓶：燃烧氧瓶：由硬质玻璃由硬质玻璃制成无色、磨口、厚壁制成无色、磨口、厚壁锥形瓶。锥形瓶。瓶塞空心，底瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，下端部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状。呈螺旋状或网状。（1）仪器装置仪器装置铂丝燃烧时起催化作用。铂丝燃烧时起催化作用。分析样品的制备第43页燃烧瓶大小选择燃烧瓶大小选择 待分解样品量待分解样品量 燃烧瓶体积 2030mg 500mL 5060mg 1000mL 0.60.7g mL或特殊结构分析样品的制备第44页正确选取燃烧瓶目标在于：正确选取燃烧瓶目标在于：样品能在足够氧气中燃烧分解完样品能在足够氧气中燃烧分解完全；有利于将燃烧分解产物较快地吸全；有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中；预防爆炸可能。收到吸收液中；预防爆炸可能。测定含氟有机药品时，用测定含氟有机药品时，用石英石英制制燃烧瓶。燃烧瓶。分析样品的制备第45页（2）燃烧分解操作）燃烧分解操作 用洗液洗净后，按各药品项下规用洗液洗净后，按各药品项下规定加入定加入吸收液吸收液，并将瓶口用水湿润小心，并将瓶口用水湿润小心急速地通入氧气急速地通入氧气1min，马上用表面皿覆，马上用表面皿覆盖瓶口。盖瓶口。a.燃烧瓶燃烧前准备燃烧瓶燃烧前准备分析样品的制备第46页吸收液：吸收液：吸收液作用是将样品经燃烧分解所吸收液作用是将样品经燃烧分解所产生各种价态卤素、硫、氮、硒等，定产生各种价态卤素、硫、氮、硒等，定量地吸收并转变为一定便于测定价态。量地吸收并转变为一定便于测定价态。分析样品的制备第47页吸收液选择：吸收液选择：氟：氟：水水 氯：氯：NaOH溶液溶液溴：溴：H2O2-NaOH或或NaOH-硫酸肼饱硫酸肼饱 和溶液和溶液碘：碘：NaOH硫酸肼饱和溶液硫酸肼饱和溶液硫：硫：NaOH或或H2O2 硒：硒：硝酸溶液硝酸溶液分析样品的制备第48页b.样品准备样品准备 取样品适量，精密称定后按要求取样品适量，精密称定后按要求方法包裹，固定于铂丝下端网内或方法包裹，固定于铂丝下端网内或螺旋处。螺旋处。分析样品的制备第49页软膏类：软膏类：包裹在不含被测成份蜡包裹在不含被测成份蜡 油纸中，再用无灰滤纸将油纸中，再用无灰滤纸将 蜡油纸包包裹在里边蜡油纸包包裹在里边液体样品：液体样品：装于用透明胶纸和无灰滤装于用透明胶纸和无灰滤 纸做成纸袋纸做成纸袋固体样品：固体样品：用剪裁成一定形状无灰用剪裁成一定形状无灰 滤纸包裹滤纸包裹分析样品的制备第50页分析样品的制备第51页c.样品燃烧样品燃烧 点燃滤纸包尾部，快速放入燃烧瓶点燃滤纸包尾部，快速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少许封闭瓶口，燃中，按紧瓶塞，加水少许封闭瓶口，燃烧完成（应无黑色碎片），充分振摇，烧完成（应无黑色碎片），充分振摇，使生成烟雾完全吸入吸收液，放置使生成烟雾完全吸入吸收液，放置15min，用水少许冲洗瓶塞及铂丝，合并，用水少许冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。按洗液及吸收液，同法另做空白试验。按各药品项下要求方法进行检验或测定。各药品项下要求方法进行检验或测定。分析样品的制备第52页（3）注意事项）注意事项v 燃烧瓶要洗净燃烧瓶要洗净,不得残留有机溶剂；不得残留有机溶剂；应选择气密性好及与样品量相适宜应选择气密性好及与样品量相适宜燃烧瓶。燃烧瓶。v 燃烧完全应注意：氧气要充分；样燃烧完全应注意：氧气要充分；样品要干燥。品要干燥。v 燃烧烟雾应完全吸收。燃烧烟雾应完全吸收。v 应同时做空白试验。应同时做空白试验。分析样品的制备第53页 取取本本品品约约20mg，精精密密称称定定，照照氧氧瓶瓶燃燃烧烧法法进进行行有有机机破破坏坏，用用氢氢氧氧化化钠钠试试液液2ml与与水水10ml为为吸吸收收液液，待待吸吸收收完完全全后后，加加溴溴醋醋酸酸溶溶液液(取取醋醋酸酸钾钾10g，加加冰冰醋醋酸酸适适量量使使溶溶解解，加加溴溴0.4ml，再再加加冰冰醋醋酸酸使使成成100m1)l0ml，密密塞塞，振振摇摇，放放置置数数分分钟钟，加加甲甲酸酸约约l ml，用用水水洗洗涤涤瓶瓶口口，并并通通入入空空气气流流约约35min以以除除去去剩剩下下溴溴蒸蒸气气，加加碘碘化化 钾钾 2g，密密 塞塞，摇摇 匀匀，用用 硫硫 代代 硫硫 酸酸 钠钠 滴滴 定定 液液(0.02mol/L)滴滴定定，至至近近终终点点时时，加加淀淀粉粉指指示示液液，继继续续滴滴定定至至蓝蓝色色消消失失，并并将将滴滴定定结结果果用用空空白白试试验验校校正正。每每lml硫硫 代代 硫硫 酸酸 钠钠 滴滴 定定 液液(0.02mol/L)相相 当当 于于1.388mgC19H29IO2。碘苯酯含量测定碘苯酯含量测定 Ch.P.（）分析样品的制备第54页 选择氧瓶燃烧法所必备试验物品选择氧瓶燃烧法所必备试验物品A.磨口硬质玻璃锥形瓶磨口硬质玻璃锥形瓶B.铂丝铂丝C.普通滤纸普通滤纸D.氢气氢气 E.无灰滤纸无灰滤纸分析样品的制备第55页 氧氧瓶瓶燃燃烧烧法法测测定定含含氯氯有有机机药药品品时时所用吸收液多数为所用吸收液多数为A.H2O2溶液溶液B.H2O2NaOH溶液溶液C.NaOH溶液溶液D硫酸肼饱和液硫酸肼饱和液E.NaOH硫酸肼饱和液硫酸肼饱和液分析样品的制备第56页 氧瓶燃烧法可用于氧瓶燃烧法可用于A.含卤素有机药品含量测定含卤素有机药品含量测定B.醚类药品含量测定醚类药品含量测定C.检验甾体激素类药品中氟检验甾体激素类药品中氟D.检验甾体激素类药品中硒检验甾体激素类药品中硒E.芳酸类药品含量测定芳酸类药品含量测定分析样品的制备第57页第二节第二节 生物分析样品制备生物分析样品制备 生物样品分析（体内药品分析）：生物样品分析（体内药品分析）：是经过分析伎俩研究药品在体内数量与是经过分析伎俩研究药品在体内数量与质量改变，以取得各种药品动力学参数及其质量改变，以取得各种药品动力学参数及其转化、代谢方式与路径等信息。从而有利于转化、代谢方式与路径等信息。从而有利于药品生产、试验研究、临床等步骤对所研究药品生产、试验研究、临床等步骤对所研究药品作出预计与评价，以及对药品改进与发药品作出预计与评价，以及对药品改进与发展作出贡献。展作出贡献。分析样品的制备第58页生物样品分析特点：生物样品分析特点：1.样品成份复杂，干扰物质多，存在形样品成份复杂，干扰物质多，存在形式多样，大多需经过分离、纯化后才能式多样，大多需经过分离、纯化后才能进行测定进行测定 预处理。预处理。分析样品的制备第59页 生物样品介质组成比较复杂，包含有生物样品介质组成比较复杂，包含有高分子蛋白质和低分子糖、脂肪、尿素等高分子蛋白质和低分子糖、脂肪、尿素等有机物，有机物，Na+、K+、X-等无机物等。等无机物等。体内药品存在形式：体内药品存在形式：游离型游离型（原型药原型药品、代谢物）品、代谢物）;药品与蛋白质结合物药品与蛋白质结合物；缀合缀合物物（药品经代谢后，极性增强，与内源性药品经代谢后，极性增强，与内源性物质结合生成缀合物）。物质结合生成缀合物）。分析样品的制备第60页2.样品量少，且多数需在特定条件下采样品量少，且多数需在特定条件下采 集，不易重新取得集，不易重新取得 细心操作。细心操作。3.被测药品及其代谢物浓度或活性较被测药品及其代谢物浓度或活性较低，对分析方法灵敏度有较高要求低，对分析方法灵敏度有较高要求 灵敏度高。灵敏度高。4.数据重现性较差数据重现性较差 误差大。误差大。5.方法在不停发展与完善中方法在不停发展与完善中 创新。创新。分析样品的制备第61页一、生物样品种类与制备一、生物样品种类与制备1.应依据不一样分析目标与要求进行应依据不一样分析目标与要求进行选选取；取；2.所取样品应能够正确反应药品浓度与所取样品应能够正确反应药品浓度与效应之间关系；效应之间关系；3.样品应易于取得，便于处理、分析。样品应易于取得，便于处理、分析。选取样品标准：选取样品标准：分析样品的制备第62页（一）血样（一）血样 包含血浆、血清与全血，包含血浆、血清与全血，惯用惯用为血浆和血清。为血浆和血清。1.取血方式取血方式 分布均匀后取样分布均匀后取样动脉血、心脏取血（动物）动脉血、心脏取血（动物）静脉采血静脉采血毛细管采血毛细管采血分析样品的制备第63页离心离心全血全血离心离心上层：上层：血清血清下层：血细胞（凝块）下层：血细胞（凝块）上层：上层：血浆血浆下层：血细胞下层：血细胞血血液液自然凝结自然凝结加抗凝剂加抗凝剂2.血样制备血样制备分析样品的制备第64页3.血样主要成份区分血样主要成份区分 成份血血 浆浆血血 清清全全 血血纤维纤维蛋白原蛋白原有有无无有有血细胞血细胞无无无无有有分析样品的制备第65页 血浆比血清分离快，制取量多，血浆比血清分离快，制取量多，样品纯化较轻易；而且大多数药品在体样品纯化较轻易；而且大多数药品在体内到达稳定状态时，其在血浆中浓度内到达稳定状态时，其在血浆中浓度与作用点浓度亲密相关，能够作为在与作用点浓度亲密相关，能够作为在作用部位药品浓度可靠指标。为最常作用部位药品浓度可靠指标。为最常用血样。用血样。分析样品的制备第66页 血清成份最靠近组织液化学成份，血清成份最靠近组织液化学成份，最能反应机体详细情况；但获取量小。最能反应机体详细情况；但获取量小。全血净化较麻烦，尤其是溶血全血净化较麻烦，尤其是溶血后，血色素会给测定带来干扰，只在个后，血色素会给测定带来干扰，只在个别情况使用。别情况使用。分析样品的制备第67页4.血样保留血样保留l 血样采集后应及时分离血浆或血清，血样采集后应及时分离血浆或血清，最好马上分析；最好马上分析；l 短期保留时应置于冰箱冷藏室短期保留时应置于冰箱冷藏室（4）中）中;l 长久保留时应置于冰箱冷冻室长久保留时应置于冰箱冷冻室 （-20）中。）中。分析样品的制备第68页（二）尿液（二）尿液 测定尿中药品浓度时应采取时间测定尿中药品浓度时应采取时间尿，即将一定时间内（如尿，即将一定时间内（如8h、12h或或24h等）排泄尿液全部储存起来，等）排泄尿液全部储存起来，并统计其体积，取一部分测定药品浓并统计其体积，取一部分测定药品浓度，然后乘以尿量求得排泄总量。度，然后乘以尿量求得排泄总量。1.采集采集分析样品的制备第69页2.保留保留l 采集后应马上测定采集后应马上测定l 不能马上测定时，加入防腐剂（如甲不能马上测定时，加入防腐剂（如甲苯、氯仿、浓盐酸等）置冰箱中保留苯、氯仿、浓盐酸等）置冰箱中保留l 保留时间为保留时间为2436h，可置冰箱冷藏室，可置冰箱冷藏室（4）中，长时间保留时，应冷冻）中，长时间保留时，应冷冻 （-20）分析样品的制备第70页3.特点特点 体内药品去除主要是经过尿液体内药品去除主要是经过尿液排出，药品能够原型（母体药品）或排出，药品能够原型（母体药品）或代谢物及其缀合物等形式排出。代谢物及其缀合物等形式排出。尿药测定主要用于药品剂量回收尿药测定主要用于药品剂量回收研究，尿去除率、生物利用度研究，研究，尿去除率、生物利用度研究，或药品代谢类型确实定。或药品代谢类型确实定。分析样品的制备第71页优：药品浓度高，搜集方便优：药品浓度高，搜集方便缺：浓度随时间改变大；与血药浓度缺：浓度随时间改变大；与血药浓度 相关性差；受患者肾功效影响大；相关性差；受患者肾功效影响大；尿液不易采集完全且不易保留尿液不易采集完全且不易保留分析样品的制备第72页（三）组织样品（三）组织样品 测定之前首先进行匀浆化，取采集组测定之前首先进行匀浆化，取采集组织样品，加入一定量水或缓冲液，于匀浆织样品，加入一定量水或缓冲液，于匀浆机中匀浆化处理，制成一定浓度水基质匀机中匀浆化处理，制成一定浓度水基质匀浆液，制备或低温贮藏。浆液，制备或低温贮藏。1.采集采集 2.制备制备分析样品的制备第73页（四）毛发样品（四）毛发样品 取枕后部，采集距头皮取枕后部，采集距头皮1cm以上以上头发约头发约0.51g。1.采集采集 充分洗净后，有机破坏。充分洗净后，有机破坏。2.制备制备分析样品的制备第74页二二、生物样品分析前处理技术、生物样品分析前处理技术 应依据生物样品种类、被测药品应依据生物样品种类、被测药品理化性质、浓度范围、存在形式、测定理化性质、浓度范围、存在形式、测定方法采取对应分析方法，从而确定合方法采取对应分析方法，从而确定合适前处理方法。适前处理方法。分析样品的制备第75页（一）蛋白质去除（一）蛋白质去除1.目标目标 使结合型药品释放出来使结合型药品释放出来 预防提取过程中蛋白质干扰预防提取过程中蛋白质干扰 保护仪器性能，延长使用期限保护仪器性能，延长使用期限分析样品的制备第76页2.方法方法（1）加入与水相混溶有机溶剂）加入与水相混溶有机溶剂 水溶性有机溶剂可使蛋白质分子内水溶性有机溶剂可使蛋白质分子内及分子间氢键发生改变而使蛋白质凝聚，及分子间氢键发生改变而使蛋白质凝聚，释放出与蛋白结合药品。释放出与蛋白结合药品。惯用有机溶剂：惯用有机溶剂：乙腈、甲醇、乙醇、丙乙腈、甲醇、乙醇、丙 酮、丙醇、四氢呋喃。酮、丙醇、四氢呋喃。分析样品的制备第77页（2）加入中性盐）加入中性盐 中性盐加入将与蛋白质水合中性盐加入将与蛋白质水合水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。惯用中性盐：惯用中性盐：饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、磷酸盐及枸橼酸盐。酸盐及枸橼酸盐。分析样品的制备第78页（3）加入强酸）加入强酸 当当pH低于蛋白质等当点时，蛋低于蛋白质等当点时，蛋白质以阳离子形式存在，加入强酸后，白质以阳离子形式存在，加入强酸后，可与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉可与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀。淀。惯用强酸：惯用强酸：10%三氯醋酸、三氯醋酸、6%高氯酸、硫酸高氯酸、硫酸-钨酸混合液及钨酸混合液及5%偏磷酸。偏磷酸。分析样品的制备第79页注意：注意：1.经过强酸处理后上清液经过强酸处理后上清液pH为为04，不适于在酸性条件下分解药品。不适于在酸性条件下分解药品。2.为防止对下一步测定干扰，过量为防止对下一步测定干扰，过量强酸要除去。强酸要除去。分析样品的制备第80页（4）加入含锌盐及铜盐沉淀剂）加入含锌盐及铜盐沉淀剂 当当pH高于蛋白质等当点时，高于蛋白质等当点时，金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷金属阳离子与蛋白质分子中带阴电荷羧基形成不溶性盐而沉淀。羧基形成不溶性盐而沉淀。惯用沉淀剂：惯用沉淀剂：CuSO4-NaWO4、ZnSO4-NaOH 分析样品的制备第81页 将有机溶剂（强酸、中性盐、金将有机溶剂（强酸、中性盐、金属阳离子沉淀剂）与血样按一定百分比属阳离子沉淀剂）与血样按一定百分比混合后置具塞塑料尖底管中，用超速混合后置具塞塑料尖底管中，用超速离心机（离心机（10000rpm）离心）离心12min，取，取上清液即可。上清液即可。操作：操作：分析样品的制备第82页（5）酶解法）酶解法 蛋白水解酶在碱性条件下降解蛋蛋白水解酶在碱性条件下降解蛋白质肽键，使药品析出。适合用于测白质肽键，使药品析出。适合用于测定蛋白结合牢靠药品，不适合用于在定蛋白结合牢靠药品，不适合用于在碱性下易水解药品。碱性下易水解药品。惯用蛋白水解酶：惯用蛋白水解酶：枯草菌溶素枯草菌溶素分析样品的制备第83页（6）加热法）加热法 待测药品对热稳定时，可采取加待测药品对热稳定时，可采取加热方法使蛋白质凝固沉淀，并释放热方法使蛋白质凝固沉淀，并释放出与之结合药品。本法只能除去热出与之结合药品。本法只能除去热变性蛋白质。变性蛋白质。分析样品的制备第84页（二）缀合物水解（二）缀合物水解 尿中药品多为缀合物，极性较尿中药品多为缀合物，极性较大，不易被有机溶剂提取，在测定分大，不易被有机溶剂提取，在测定分离前需将缀合物中药品水解出来。离前需将缀合物中药品水解出来。1.酸水解法：普通需辅助加热酸水解法：普通需辅助加热2.溶剂解法：溶剂萃取过程中分解溶剂解法：溶剂萃取过程中分解2.酶水解法：适合用于遇酸及受热不酶水解法：适合用于遇酸及受热不稳稳 定药品定药品 分析样品的制备第85页（三）萃取法（三）萃取法 除去大量内源性物质等杂质，提除去大量内源性物质等杂质，提取出低浓度被测药品；浓集药品与取出低浓度被测药品；浓集药品与代谢物浓度。代谢物浓度。液液-液萃取法液萃取法 液液-固萃取法固萃取法分析样品的制备第86页1.液液-液萃取（液萃取（LLE）原理：原理：多数药品为亲脂性化合物，而大多多数药品为亲脂性化合物，而大多数内源性杂质是强极性水溶性物质，所数内源性杂质是强极性水溶性物质，所以用有机溶剂提取一次即可除去大部分以用有机溶剂提取一次即可除去大部分杂质。杂质。分析样品的制备第87页主要影响原因：主要影响原因：（1）溶剂选择）溶剂选择 最惯用乙醚和三氯甲烷最惯用乙醚和三氯甲烷（2）溶剂用量）溶剂用量 有机相：水相有机相：水相=11 或或21分析样品的制备第88页（3）提取）提取pH 多数生物样品在碱性下提取；当一些多数生物样品在碱性下提取；当一些碱性药品在碱性条件下不稳定时，则在近碱性药品在碱性条件下不稳定时，则在近中性中性pH用氯仿和异丙醇提取；中性药品用氯仿和异丙醇提取；中性药品在在pH7附近提取。附近提取。（4）提取次数）提取次数 普通只提取一次。普通只提取一次。分析样品的制备第89页特点：特点：l优：优：选择性好选择性好l缺：缺：易出现乳化现象，药品损失较易出现乳化现象，药品损失较 大，回收率低。不能用于极性大，回收率低。不能用于极性 大药品提取。大药品提取。分析样品的制备第90页2.液液-固萃取（固萃取（LSE）将含有吸附、分配及离子交换性将含有吸附、分配及离子交换性质、表面积大担体作为萃取剂填质、表面积大担体作为萃取剂填入小柱，以溶剂淋洗后，将生物样品入小柱，以溶剂淋洗后，将生物样品经过，使药品保留在担体上，用适当经过，使药品保留在担体上，用适当溶剂除去杂质，再用适当溶剂将药品溶剂除去杂质，再用适当溶剂将药品洗脱下来。洗脱下来。原理：原理：分析样品的制备第91页特点：特点：1.提取效率高，引入杂质少；提取效率高，引入杂质少；2.无乳化现象出现；无乳化现象出现；3.处理样品速度快；处理样品速度快；4.安全、方便；安全、方便；分析样品的制备第92页（四）衍生化（四）衍生化 用特殊化学试剂（衍生试剂），用特殊化学试剂（衍生试剂），借助于化学反应给样品化合物接上某借助于化学反应给样品化合物接上某个特殊基团，使其转变成对应衍生个特殊基团，使其转变成对应衍生物之后进行分离检测或直接检测。物之后进行分离检测或直接检测。分析样品的制备第93页HPLC：（1）紫外衍生化）紫外衍生化（2）荧光衍生化）荧光衍生化GC：（1）硅烷化）硅烷化（2）酰化）酰化（3）烷基化）烷基化分析样品的制备第94页（五）新兴制备技术与方法（五）新兴制备技术与方法 微萃取微萃取 微透析微透析 分子印迹固相萃取分子印迹固相萃取分析样品的制备第95页