LC-MS_MS自身内标法测定人血浆中阿戈美拉汀浓度.pdf

一般达不到彻底治愈,只能通过相关治疗缓解骨质疏松症状,延缓病情的发展。根据本实验探究报告可发现,健康组血清N-M I D水平(3 7.1 26.2 7)n g/m L高于中轻度组(2 8.3 15.1 3)n g/m L,中轻度组又高于重度组(1 7.3 84.4 6)n g/m L;重 度 组B A L P(1 7 7.6 52 5.7 6)U/L与T R A C P-5 b(4.3 41.7 6)U/L水平 高于中轻度 组(1 3 6.7 91 9.5 5)U/L、(3.1 31.0 2)U/L,中轻度组又高于健康组(8 1.2 41 1.3 4)U/L、(2.1 10.7 1)U/L。综上所述,中老年骨质疏松患者症状越严重,血清N-M I D水平越低,B A L P与T R A C P-5 b水平则越高。在进行疾病早期诊断、制订治疗方案时应详细参考骨代谢生化相关指标,以提升早期诊断与治疗效率。这也符合其他专家对这一研究的结果,有望积极应用于临床诊断与治疗之中。参考文献1 陆新颜,谭利群,刘群铧.中老年女性骨代谢生化指标对早期骨质疏松症的诊断 价值 及 与 骨 密 度 的 相 关 性 J.中 国 妇 幼 保 健,2 0 2 1,3 6(1 7):3 9 6 7-3 9 6 9.2 李敏.骨代谢生化指标和绝经后骨质疏松性腰椎骨折之间的相关性研究J.中国药物与临床,2 0 1 9,1 9(2 0):3 5 3 8-3 5 4 0.3 付晓宁,胡朝晖.骨代谢生化指标对于骨质疏松症诊断与治疗的临床意义J.中国骨与关节损伤杂志,2 0 1 8,3 3(9):1 0 0 3-1 0 0 5.4 彭俊洋.中老年女性骨代谢生化指标对早期骨质疏松症的临床诊断价值研究J.中国妇幼保健,2 0 1 7,3 2(2 4):6 1 1 8-6 1 2 0.5 黄松,陈敬有,高皓.补肾活血方对老年骨质疏松症患者骨密度及相关骨代谢生化指标的影响J.临床骨科杂志,2 0 1 7,2 0(5):6 2 9-6 3 2.短篇论著L C-M S/M S自身内标法测定人血浆中阿戈美拉汀浓度田玉玲,许宝华,李凤芹,梅玲华,王成竹湖北省宜昌市优抚医院,湖北宜昌 4 4 3 0 0 0 摘 要:目的 建立一种新型、快速、高效的液相色谱串联质谱法(L C-M S/M S),测定人血浆中阿戈美拉汀浓度。方法 以待测物阿戈美拉汀自身标准溶液为内标,色谱柱为A s t o n M S C B R苯溴柱,流动相采用甲醇-甲酸和氨水浓度分别为4 mm o l/L的水溶液(3 5/6 5,v/v)进行等度洗脱。流速0.6 m L/m i n,柱温4 5,进样量4 L。基于全自动二维液相色谱串联质谱耦合仪和本研究组开发的阀切换技术,待测样品和内标依次进样,进样间隔0.3 5 m i n。在电喷雾离子化源(E S I)正离子条件和多反应监测模式(MRM)下扫描,检测离子对为m/z 2 4 4.1 3。结果 本研究测定阿戈美他汀在5.1 18 0 6.4 n g/m L范围内线性关系良好,定量下限为5.1 1 n g/m L。阿戈美他汀待测物和内标的保留时间分别为1.5 6 m i n和1.8 6 m i n,每份样品分析时长为3.0 m i n。质控样品日内、日间精密度 1 0)。1.4.3 精密度与准确度 取“1.3.1”项下高、中、低浓度质控样品和5.1 1 n g/m L的标准血浆样品(定量下限浓度样品),按“1.3.2”项方法处理,每个浓度制备5份样品,连续测定3 d,根据当日标准曲线计算质控样品的测定浓度,计算得质控样品和定量下限浓度样品日内、日间精密度R S D分别为1.5 0%5.8 0%和1.6 0%7.1 0%,准确度分别为9 0.0 2%1 0 1.2 0%和9 2.1 1%1 0 3.9 7%。符合方法学要求。1.4.4 提取回收率 按“1.3.2”项方法处理高、中、低浓度质控样品,每个浓度平行测定5份,测得待测物峰面积为A;另取空白血浆处理后取上清液,加入与高、中、低浓度质控样品相对应的对照品溶液,每个浓度制备5份样品,测得待测物峰面积为B,分别进样3针,计算两者的峰面积之比。提取回收率=A/B1 0 0%。结果显示,阿戈美拉汀低、中和高质量浓度溶液的提 取 回 收 率 分 别 为8 8.5 0%、8 6.9 0%和 8 6.0 0%,符合方法学要求。1.4.5 基质效应考察 取六份不同来源的人血浆样本,按“1.3.1”项方法配制高、中、低相应浓度的样品,按“1.3.2”项方法处理,测得待测物峰面积为C;用流动相配制,按“1.3.1”项方法配制高、中、低相应浓度的纯溶液质控样品,作为对照样品,按“1.3.2”项方法处理高、中、低浓度纯溶液质控样品,测得待测物峰面积为D,基质效应因子=C/D1 0 0%。结果显示,低、中、高 3 个质量浓度的阿戈美拉汀的基质效应因子均在9 0%以上,符合方法学要求,可视为无基质效应影响。2 结 果将本测定法应用于5 0例(男1 5例,女3 5例)平均年龄(6 6.0 59.3 2)岁、服用阿戈美拉汀胶囊患者的血药浓度测定。所有患者以“2 55 0 m g q 2 4 h”方案用药,在末次给药后2 h空腹采血并立即分离血浆,481国际检验医学杂志2 0 2 3年第4 4卷Z按“1.3.2”项方法处理并分析。从检测结果可以看出,平均值为(2 8.3 62 7.3 5)n g/m L剂量比范围在0.0 45.0 5,其中低于最低定量限5.1 1 n g/m L的患者大概有1 2 例。从检测结果来看,部分患者存在吸收不好,浓度存在较大个体差异。提示阿戈美拉汀血药浓度监测对进一步揭示药效学差异,促进临床合理用药具有重要的意义。注:A为空白人血浆;B为阿戈美拉汀标准品(8 0 n g/mL),在无内标时单独进样;C为内标阿戈美拉汀标准品(5 5 n g/m L);D为人血浆+阿戈美他汀标准品(4 0 3.6 0 n g/m L),与内标共同进样 E为患者给药后血浆样品(6 5 2.3 0 n g/m L),与内标共同进样;1.待测物阿戈美拉汀;2.内标。图1 典型色谱图3 讨 论内标法是L C-M S/M S对生物样本进行定量分析时常采用的方法6,通过引入内标校正样品预处理造成的损失、进样体积差异、基质效应对离子化过程的影响等因素造成的误差。按照理想内标应与待测物具备相似物理化学性质这一原则,内标可分为同位素内标、待测物的结构类似物以及与待测物质谱行为相近的物质质7。其中,同位素内标与待测物在色谱保留、质谱裂解等方面几乎一致,因而应用最为广泛,已发表的L C-M S/M S测定法,以 d 5-阿戈美拉汀、托莫西汀为内标者5-6。但同位素内标往往价格高昂、获取难度大,测定成本较高,不利于实现常规化监测。本研究参考“多维”概念,借助二维液相色谱串联质谱耦合仪,引入阀切换技术,首次建立了一种以待测物阿戈美拉汀自身为内标的人血浆中阿戈美拉汀浓度L C-M S/M S测定法,以固定浓度的阿戈美拉汀标准溶液为内标,实现待测样品和内标的“二维”进样和“一维”色谱分离。同时本法采用等度洗脱,简化了色谱条件,待测物和内标保留时间分别为1.5 6 m i n和1.8 1 m i n,每份样品从样品进样、内标进样和分析时长仅为3.0 m i n,与文献方法相比缩短了分析时间,提升了分析效率,较好地实现了经济、快速、高效测定的目的,有利于临床常规化开展阿戈美拉汀血药浓度监测的推广。本研究首次以阿戈美拉汀自身为内标,以L C-M S/M S方法测定阿戈美拉汀血药浓度并初步应用于临床,方法新颖,样品处理简单,分析过程快速、高效,测定结果准确,适用于阿戈美拉汀血药浓度的测定。该方法的初步临床应用结果显示,有较好的临床应用前景并更好地促进阿戈美拉汀的个体化用药。参考文献1 张妍,费思洋,唐星,等.阿戈美拉汀混悬型长效注射剂的制备与体外评价J.沈阳药科大学学报,2 0 2 0,3 7(3):2 1 6-2 2 2.2 王静,马晓静.液相色谱-串联质谱内标法测定全麦粉中呕吐毒素含量的不确定度评定J.食品安全导刊,2 0 2 1(7):6 0-6 4.581国际检验医学杂志2 0 2 3年第4 4卷Z3 唐玉红,胡秀红,魏小春.G C-M S内标法同时测定鞋材中邻苯基苯酚和含氯苯酚残留量J.中国皮革,2 0 2 2,5 1(4):7 4-8 1.4 唐正伟,梁汉东,徐林.凝胶渗透色谱内标法测定聚合物的相对分子质量及其分布J.石油化工,2 0 1 8,4 7(3):2 9 1-2 9 4.5 汪晓安.含内 标的贵金属核 壳纳米单元设计 与构筑及其用 于S E R S定量分析研究D.安徽:安徽大学,2 0 2 1.6 黄燕飞,张强,张雪,程泽能.阿戈美拉汀自微乳给药系统的制备和体外质量评价J.中南药学,2 0 2 2,2 0(4):7 1 9-7 2 6.7 明从梅,李玲玲.用粉末直接压片法制备阿戈美拉汀舌下片的效果评价J.当代医药论丛,2 0 2 0,1 8(5):1 3 5-1 3 6.8 胡天骄,刘雪赟.阿戈美拉汀片溶出度测定的方法研究J.中南药学,2 0 2 0,1 8(2):2 1 8-2 2 1.短篇论著血培养分离病原菌分布特点以及耐药性分析胡艳军南京明基医院,江苏南京 2 1 0 0 1 9 摘 要:目的 血培养分离病原菌分布特点以及耐药性分析。方法 选择在该院2 0 2 2年1-1 2月期间应用B D全自动血培养仪采集血液进行培养,阳性标本7 5 2份,比较阳性标本病原菌分布特点以及耐药性。结果 7 5 2份阳性标 本血培养分 离病原菌分 布,占比最高 的是革兰阴 性菌5 5.1 9%,次之是革 兰阳性菌占比4 2.5 5%,占比最少的是真菌2.2 6%。其中革兰阳性菌菌株中占比较高的是表皮葡萄球菌2 3.4 3%、金黄色葡萄球菌2 0.6 3%、人葡萄球菌1 3.1 2%,有超过4 2.8 2%的其他阳性菌,革兰阴性菌菌株中占比最高的是大肠埃希菌3 6.8 6%,其他肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、黏质沙雷菌,其他阴性菌真菌占比程度差异性不大,1 7株真菌中主要的热带假丝酵母菌占比4 1.1 8%,光滑假丝酵母菌占比3 5.2 9%。革兰阳性菌对于常见抗菌药物耐药性分析,革兰阳性菌对于青霉素、苯唑西林、克林霉素、红霉素抗菌药物耐药性比较高,对于庆大霉素、莫西沙星、喹奴普汀/达福普汀、利奈唑胺、万古霉素、替加环素、利福平耐药程度低,革兰阴性菌对于E S B L和氨苄西林抗菌药物耐药率比较高,革兰阴性菌对于哌拉西林/他唑巴坦、头孢替坦、厄他培南、亚胺培南抗菌药物耐药性比较低。结论 临床应该重视血培养分离病原菌分布鉴别,分析病原菌耐药性,作为临床合理使用抗菌药物的指导依据,减少耐药菌株的出现,及时地控制感染恶化趋势。关键词:血培养;病原菌;分布特点;耐药性 临床感染是一种比较严重的病症,具有发病率较高,病情状况较为急促,死亡率较高的特点,尤其是针对血液感染患者,致死率达到了3 5.0 0%以上1。近年来随着人口老龄化趋势的发展,免疫缺陷人群的出现,以及在临床诊疗阶段广谱抗生素的滥用,导致病原菌对于抗生素产生了较高的耐药程度,不能够优化针对病原菌实施对症治疗2。为了确保临床针对血液感染患者及时进行诊断、实施指导抗菌药物的应用,提高预后效果3。需要对导致患者的出现感染的病原菌进行分离,实施耐药性分析,更好的临床实施用药选择,合理的抗菌药物是控制和预防耐药菌株有比较重要的意义4。1 资料与方法1.1 一般资料 在本院2 0 2 2年1-1 2月期间应用全自动血培养仪采集血液进行培养,阳性标本7 5 2份,应用全自动微生物分析系统进行鉴定病原菌分布特点,应用纸片扩散法进行病原菌耐药性探究。要排除同一患者连续检出重复菌株,以及排除确认是污染菌。1.2 方法 血培养分离病原菌分析评估,应用本院B D全自动血培养仪进行血培养分离病原菌分析,还有分离血培养使用的血培养瓶,应用全自动细菌分析仪及配套的细菌鉴定卡进行分析,还要进行病原菌耐药性分析,使用配套试剂鉴定5。质控菌株包括大肠埃希菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌作质量控制6。需要优化标本采集,在抽取静脉血的时候,一定要严格遵循无菌操作原则,成年人需要抽取静脉血81 0 m L,儿童采集静脉血的剂量是35 m L,抽 取 静 脉 血 的 时 候,置 于 抗 菌 药 物 的 血 培 养瓶7。需要进行细菌鉴定与药敏分析,将采集的静脉血应用B D全自动血培养仪进行病原菌分析,如果患者的静脉血样本警报显示是阳性之后,需要将血液样本取出,分别接种于血平板、麦康凯平板,菌株恒温3 5 培养2 4 h,根据病原菌评估结果根据革兰染色结果,进行鉴定板条细菌鉴定,药敏实验使用M I C最小抑菌浓度药敏法8。1.3 观察指标(1)血培养分离病原菌分析,7 5 2份阳性标本进行革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌分布占比情况评估。(2)革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌的分布情况。(3)革兰阳性菌对于抗菌药物耐药性。(4)681国际检验医学杂志2 0 2 3年第4 4卷Z