DB50_T 1461-2023地方猪遗传材料冷冻保存技术规范.docx

ICS 65.020.30CCS B 43DB50重庆市地方标准DB50/T 14612023地方猪遗传材料冷冻保存技术规范2023 - 09 - 15 发布2023 - 12 - 15 实施重庆市市场监督管理局发 布DB50/T 14612023前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由重庆市农业农村委员会提出、归口并组织实施。本文件起草单位：重庆市畜牧科学院、重庆市畜牧技术推广总站、上海市农业科学院、四川省内江 市农业科学院。本文件主要起草人：潘红梅、朱燕、戴建军、吴彩凤、何孟纤、张亮、龙熙、陈力、郭宗义、高小 平、周旗、任素碧、涂志、柴捷、查琳。IDB50/T 14612023地方猪遗传材料冷冻保存技术规范1 范围本文件规定了地方猪种遗传材料冷冻保存的基本要求、冷冻精液、冷冻成纤维细胞、冷冻胚胎、入 库保存及档案管理的要求。本文件适用于地方猪精液、成纤维细胞和胚胎的冷冻保存。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 24862畜禽体细胞库检测技术规程GB/T 25172猪常温精液生产与保存技术规范NY/T 1674牛羊胚胎质量检测技术规程NY/T 1900畜禽细胞与胚胎冷冻保种技术规范3 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1遗传材料 genetic material含有畜禽基因组、基因等遗传物质的器官、组织、细胞、精子、卵母细胞和胚胎等的生物样本。4 基本要求4.1 供体应健康，符合品种特征特性。4.2 可利用后备或淘汰母猪进行胚胎回收。5 冷冻精液5.1 供体数量5.1.1 系谱清晰的保种群，每个家系宜保存 3 头及以上公猪，不足 3 头全部保存。保存的公猪精液应覆盖所有家系。5.1.2 系谱不清的保种群，宜保存 10 头以上公猪，不足 10 头全部保存。5.2 质量要求5.2.1 有效精子数每支不低于 5 000 万个。15.2.2 冻精解冻后活力不低于 30 %。5.2.3 精子畸形率不高于 40 %。5.2.4 细菌菌落数不高于 1 000 CFU/mL。5.2.5 每个个体保存 0.5 mL 细管冻精不低于 300 支。5.3 标识与记录5.3.1 在细管上标明供体单位、品种、编号、家系和生产日期。5.3.2 记录公猪精液冷冻信息，公猪精液冷冻记录表见附录 A.1。5.4 品质检测应按照 GB/T 25172 的规定执行。6 冷冻成纤维细胞6.1 供体数量6.1.1 系谱清晰的保种群，保存的成纤维细胞应覆盖所有家系。每个家系公猪成纤维细胞宜保存 3 头及以上，不足 3 头全部保存。每个家系母猪成纤维细胞宜保存 6 头及以上，不足 6 头全部保存。6.1.2 系谱不清的保种群，宜保存 10 头以上公猪和 30 头以上母猪的成纤维细胞，公猪不足 10 头、母猪不足 30 头全部保存。6.2 质量要求6.2.1 制作和质量应符合 NY/T 1900 要求。6.2.2 每个个体细胞体外培养至 34 代，冷冻 6 管细胞，细胞密度为 1105 个/mL5105 个/mL。6.2.3 冻后台盼蓝染色检查细胞活力 80% 以上，生长曲线与冷冻前生长曲线相近，核型正常，无病原菌和支原体污染。6.3 标识与记录6.3.1 在冻存管上标明供体单位、品种、样品编号、家系、性别、培养代数和冷冻日期等。6.3.2 记录成纤维细胞冷冻信息，成纤维细胞冷冻记录表见附录 A.2。6.4 品质检测应按照 GB/T 24862 的规定执行。7 冷冻胚胎7.1 供体数量7.1.1 系谱清晰的保种群，用于胚胎收集的母猪和相应的配种公猪应覆盖所有家系，每个家系的配种 公猪不少于 3 头，不足 3 头全部参加配种；母猪不少于 6 头，不足 6 头不宜制作冷冻胚胎。7.1.2 系谱不清的保种群，宜保存 25 头母猪的胚胎，其中配种公猪数宜不少于 10 头。群体母猪数低于 50 头，宜保存淘汰母猪胚胎。7.2 质量要求27.2.1 回收的胚胎为首次配种后第 6 d 和第 7 d 的桑椹胚和囊胚。7.2.2 胚胎冷冻前的质量要求为 A 级，检测方法参照 NY/T 1674 的规定执行。7.3 标识与记录7.3.1 在胚胎冻存细管上标明供体单位、品种、供体母猪号、与配公猪号、胚胎发育期、胚胎等级、 冷冻方法、数量和冷冻日期等。7.3.2 记录胚胎冷冻信息，胚胎冷冻记录表见附录 A.3。8 入库保存冷冻精液、成纤维细胞和胚胎应符合本文件规定的质量要求，浸没于液氮中保存。9 档案管理档案记录应长期保存。3附 录 A（规范性）遗传材料冷冻保存的技术资料A.1 公猪精液冷冻记录表。表 A.1 公猪精液冷冻记录表品种：制作地点：制作日期：公猪原精原精稀释离心后稀释平衡冻精制作人备注耳号品种采精量/mL活力（%）密度亿/mL稀释倍数活力%密度亿/mL预 设密 度亿/mL稀 释量mL平衡时间h平衡后活力%解冻后活力%支数袋数记录人：4A.2 成纤维细胞冷冻记录表。表 A.2 成纤维细胞冷冻记录表品种：制作地点：制作日期：耳号来源家系性别父号母号冷冻代次冷冻时间细胞密度个/ml冷冻管数支保存位置活力%细菌污染支原体污染制作人检测人记录人：5A.3 胚胎冷冻记录表。表 A.3 胚胎冷冻记录表品种：制作地点：制作日期：供体母猪处理信息母猪供体号品种胎次上次分娩日期处理前发情日期超排与否超排方法发情与配种发情日期初配日期配种公猪号配种方式胚胎回收回收日期回收方式冲胚液名称冲胚人员黄体数左侧：右侧：卵泡数左侧：右侧：其他：鲜胚数质量评定可用胚胎数：不可用胚胎数：未受精总数等级EMMCMEBBLEXB总数28细胞退化ABC合计胚胎冷冻保存情况细管号冷冻方法冷冻载体冷冻液数量枚阶段级别存放位置冷冻人备注注：EM：早期桑椹胚；M：桑椹胚；CM:致密桑椹胚；EB:早期囊胚；BL：囊胚；EXB：扩张囊胚。记录人：6