T∕GDBK 006-2023 焙烤食品中γ-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的测定 高效液相色谱∕质谱法.pdf

ICS 67.050CCS X 28团体标准T/GDBK 006-20232023-10-20 发布2023-10-20 实施广东省焙烤食品糖制品产业协会发布焙烤食品中-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的测定高效液相色谱/质谱法Detection method of-aminobutyric acid-glyoxal-formaldehyde adduct in bakedfoodHigh performance liquid chromatography/mass spectrometryT/GDBK 0062023I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省焙烤食品糖制品产业协会和中山市食品学会共同提出。本文件由广东省焙烤食品糖制品产业协会归口。本文件起草单位：中山市食品学会、咀香园健康食品（中山）有限公司、中山洪力健康食品产业研究院有限公司、广东省焙烤食品糖制品产业协会、暨南大学、中山市日威食品有限公司、利诚检测认证集团股份有限公司、中山市强晟水产养殖有限公司、中山海关技术中心、广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、华南农业大学、廉江市检验检测中心、广东药科大学、广东省中山市坦洲镇农业服务中心、广州广电计量检测股份有限公司、中山市技师学院、中山市第一职业技术学校、中山市食品药品检验所、中山联测检测技术有限公司、达能（中国）食品饮料有限公司、中山市神湾镇大石头盘菠萝专业合作社、中山永恒检测科技有限公司、创味舌尖冻干食品科技（中山）有限公司、中山市火炬高技术产业开发区食品药品监督所、中山火炬职业技术学院、广东省焙烤食品产业技术创新联盟。本文件起草人：胡志高、林国强、郑萍、吕品、欧隽滢、罗紫明、孙宝林、唐丽、唐光华、唐雪娟、欧仕益、陈伦韬、黄思韵、陈琼华、谭应职、张发妙、黄焯枝、陈晓丽、叶文杰、陈丽红、莫康扬、李蓉、陈月玲、吴小勇、朱华兴、叶文杰、李向丽、张延杰、刘金川、董二飞、范雪琳、张瑶、谈欣乐、普昕瑞、吴洁伊、黄乐炫。本文件为首次发布。T/GDBK 006-20231焙烤食品中-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的测定高效液相色谱/质谱法1 1范围本文件描述了食品中-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的高效液相色谱/质谱测定方法的的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度和试验报告。本文件适用于焙烤食品中-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的定性定量测定。对含有-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物产品的含量检测可参照使用。本文件检出限为4.2 g/kg，定量限为13.9 g/kg。2 2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法3 3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 4原理试样用正己烷脱脂后，用20%甲醇/水溶液提取，提取液经减压蒸干后复溶，试样溶液用高效液相色谱/质谱联用仪的多反应监测（MRM）模式测定，外标法定量。5 5试剂和材料5.1试剂除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。5.1.1甲醇（色谱纯）。5.1.2正己烷（分析纯）。5.1.3甲酸（色谱纯）。5.1.4甲醛（分析纯）。5.1.5乙二醛(glyoxal,GO，分析纯)。5.1.6-氨基丁酸（分析纯）。T/GDBK 006-202325.2试剂配制5.2.1甲醇/水溶液（20%）：移取 50 mL 甲醇（5.1.1）于 250 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。5.2.2甲酸/水溶液（0.1%）：移取 0.25 mL 甲酸（5.1.3）于 250 mL 容量瓶中，用水定容至刻度。5.3标准品-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物标准品（C11H16N2O4,CAS 号：805228-41-5）：纯度大于 98.0%。5.4标准溶液的配置根据需要，用水配置-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的浓度为 10 mg/L 的溶液，用水稀释得到一系列浓度的标准溶液（100 g/L、500 g/L、1000 g/L、2000 g/L、3000 g/L、4000 g/L）。6 6仪器设备6.1液相色谱仪/三重四极杆质谱联用仪，配有电喷雾离子源（ESI）。6.2粉碎机(细度 30100 目）。6.3分析天平，感量为 0.0 001 克。6.4分析天平，感量为 0.00 001 克。6.5高速离心机（12 000 转/分，14 000g)。6.6涡旋器（300 rpm3 000 rpm）。6.7常规实验室玻璃器皿。7 7试验步骤7.1样品的制备称取 3 g 粉碎后的样品（过 60 目筛）于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 正己烷没过样品，涡旋 5 min后于 10000 rpm 下离心 10 min，重复 3 次以完全去除油脂，置于通风橱中将残余的正己烷挥干。向离心管中加入 15 mL 20%甲醇/水溶液，涡旋 5 min 后于 10000 rpm 下离心 10 min，收集上清液，该过程重复 2 次。将上清液减压蒸干，加 20%甲醇/水溶解，定容至 5 mL。用 0.22 m 尼龙滤膜过滤，用HPLC-MS/MS 的多反应监测模式(MRM)测定样品中-氨基丁酸-乙二醛-甲醛含量。7.2色谱测定7.2.1高效液相色谱参考条件a）色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（C18）Aq柱，填料粒径 5.0 m，柱长250 mm，内径 4.6 m，或其他等效色谱柱；b）流动相：A相为含 0.1%甲酸/水溶液，B相为甲醇，梯度洗脱程度：02 min，5%B95%B；28 min，95%B95%B；8 min10 min，95%B5%B；10 min18 min，5%B。c）流量：0.4 mL/min；d）柱温：40。e）进样量：0.5 L。7.2.2质谱参考条件a）电离方式：阳离子电喷雾电离（ESI+）；T/GDBK 006-20233b）离子扫描模式：多反应监测模式（MRM）；c）毛细管电压：4000 Vd）解簇电压：50 Ve）干燥气温度：300 f）干燥气流量：10 L/ming）雾化气压力：50 Psih）监测离子范围：m/z 50800。i）定性、定量离子见表1：表 1-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的优化电压参数加合物种类离子对碰撞电压（eV）-氨基丁酸-乙二醛-甲醛241/155a241/69241/87-16-22-22a为定量离子7.2.3标准曲线的绘制取 5.4 中的-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物标准溶液（100 g/L、500 g/L、1000 g/L、2000 g/L、3000 g/L、4000 g/L），按照色谱参考条件（7.2.1）进行测定，以标准系列中加合物的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。7.2.4样品的测定取样品溶液和标准溶液各 0.5 L注入液相色谱进行分析，以其标准溶液目标峰的保留时间进行定性，根据峰面积计算样品中待测物质的含量。加合物的总离子流图和质谱图见附录A。7.2.5空白实验除不称取样品外，均按照上述测定条件和步骤进行。8 8试验数据处理样品中-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的含量，按照公式（1）计算：（1）式中：样品中-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的含量，微克/千克（g/kg）；C 样品中加合物的浓度，微克/升（g/L）；V 被测样品的总体积，毫升（mL）；D 样品稀释倍数；M 称取样品的质量，克（g）。计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9 9精密度T/GDBK 006-202349.1一般规定本文件的精密度按照GB/T 6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以 95%的可信度来计算。9.2重复性在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。9.3再现性在再现性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10%。1010试验报告试验报告至少应给出以下几个方面的内容：试验对象；所使用的标准；所使用的方法；结果；观察到的异常现象；试验日期。T/GDBK 006-20235附录A（资料性附录）-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物总离子流图及质谱图-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物液相色谱质谱总离子流图见图A.1，-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的质谱图见图A.2。0.02.55.07.510.012.515.017.520.022.525.027.530.032.535.037.540.042.545.047.5min0250000500000750000100000012500002:TIC(+)图A.1-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物液相色谱/质谱总离子流图2.55.07.510.012.515.017.5050000100000150000200000250000300000350000400000 2:241.0087.00(+)2:241.0069.00(+)2:241.00155.00(+)图A.2-氨基丁酸-乙二醛-甲醛加合物的质谱图