微生物实验室常见20种培养基配方大全.docx

一、糖发酵管成分：牛肉膏5g蛋白胨10g氯化钠3g磷酸氢二钠 2g0.2滇麝香草酚蓝溶液12mL蒸馏水1000mLPH 7.4制法1.葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内，121高压灭菌15min。2.其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶1000 mL，121高压灭菌15min。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5mL糖溶液加入于100 mL培养基内，以无菌操作分装小试管。注：蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。试验方法：从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于361培养，一般观察23d。迟缓反应需观察1430d。二、乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨20g猪胆盐（或牛、羊胆盐）5g乳糖10g0.04%滇甲酚紫水溶液25mL蒸馏水1000mL制法：将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 mL，并放入一个小倒管，115高压灭菌15min。注：双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。三、5乳糖发酵管成分：蛋白胨0.2g氯化钠0.5g乳糖5g2%溴麝香草酚蓝水溶液1.2mL蒸馏水100mLpH 7.4制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50mL蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50mL蒸馏水内，分别灭菌12115min，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。注：在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。四、缓冲葡萄糖蛋白胨水（MR和VP试验用）成分：磷酸氢二钾5g多胨7g葡萄糖5g蒸馏水1000mL制法：溶化后校正pH，分装试管，每管1mL，121高压灭菌15min。甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于361培养25d，哈夫尼亚菌则应在2225培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性，甲基红试剂配法：10mg甲基红溶于30mL95乙醇中，然后加入20 mL蒸馏水。V-P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，于361培养24d。哈夫尼亚菌则应在2225培养。加入6-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40氢氧化钾溶液0.2mL充分振摇试管，观察结果阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在361下培养4h再进行观察。五、营养明胶成分：蛋白胨5g牛肉膏3g明胶120g蒸馏水1000mLpH 6.87.0制法：加热溶解，校正至pH7.47.6，分装小管，121高压灭菌10min，取出后迅速冷却，使其凝固，复查最终pH应为6.87.0。试验方法：用琼脂培养物穿刺接种，放在2225培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1培养，每天取出，放冰箱内30min后再观察结果。六、苯丙氨酸培养基成分：酵母浸膏3gDI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1g）2g磷酸氢二钠1g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000mL制法：加热溶解后分装试管，121高压灭菌15min，使成斜面。试验方法：自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36士1培养4h或1824h，滴加10三氯化铁溶液23滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。七、蛋白胨水（靛基质试验用）成分：蛋白胨（或胰蛋白胨）20g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH7.4制法：按上述成分配制，分装小试管，121高压灭菌15min。靛基质试剂柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25ml。欧-波试剂：将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内，然后缓慢加入浓盐酸20 ml。试验方法：挑取小量培养物接种，在36士1培养12d，必要时可培养45d。加入柯凡克试剂约0.5mL，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0.5 mL，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。注：蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。八、硫酸亚铁琼脂（硫化氢试验用）成分：牛肉膏3g酵母浸膏3g蛋白胨10g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g氯化钠5g琼脂12g蒸馏水1000 mL制法：加热溶解，校正pH，分装试管，115高压灭菌15min，取出直立候其凝固。试验方法：挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36士1培养12d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。注：肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。九、尿素琼脂成分：蛋白胨1g氯化钠5g葡萄糖1g磷酸二氢钾2g4%酚红溶液3 mL琼脂20g蒸馏水1000 mL20%尿素溶液100mL制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121高压灭菌15min。冷至5055，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2，最终pH应为7.20.1.分装于灭菌试管内，放成斜面备用。试验方法：挑取琼脂培养物接种，在36士1培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。十、氰化钾（KCN）培养基成分：蛋白胨10g氯化钠5g磷酸二氢钾0.225g磷酸氢二钠5.64g蒸馏水1000 mL0.5%氰化钾溶液20 mLpH 7.6制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121高压灭菌15min。放在冰箱内使其充分冷却。每100 mL培养基加入0.5氰化钾溶液2.0mL（最后浓度为1：10000），分装于12mm*100mm灭菌试管，每管约4mL，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。十一、营养琼脂成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂1520g蒸馏水1000mL制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.27.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化分装烧瓶，121高压灭菌15min。注：此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。十二、营养肉汤成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化钠5g蒸馏水1000mLpH7.4制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225 mL，121高压灭菌15min。十三、缓冲蛋白胨水（BP）成分：蛋白胨10g氯化钠5g磷酸氢二钠9g磷酸二氢钾1.5g蒸馏水1000mLpH 7.2制法：按上述成分配好后以大烧瓶装，121高压灭菌15min。临用时无菌分装每瓶225mL。注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。十四、EC肉汤成分：胰蛋白胨20g3号胆盐（或混合胆盐）1.5g乳糖5g磷酸氢二钾4g磷酸二氢钾1.5g氯化钠5g蒸馏水1000mL制法：将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121高压灭菌15min。最终pH为6.90.2。十五、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）基础培养基多胨或眎胨5g胆盐1g碳酸钙10g硫代硫酸钠3g蒸馏水1000mL碘溶液碘6g碘化钾5g蒸馏水20 mL制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100mL。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀，121高压灭菌15min备用。临用时每100mL基础培养基中加入碘溶液2mL，,0.1%煌绿溶液1mL。十六、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）成分：蛋白胨5g乳糖4g亚硒酸氢钠4g磷酸氢二钠5.5g磷酸二氢钾4.5gL-胱氨酸0.01g蒸馏水1000mL1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法：称取L-胱氨酸0.1g或（DL-胱氨酸0.2g），加1mol/L氢氧化钠1.5mL，使溶解，再加入蒸馏水8.5mL即成。制法：将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100mL蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1mL。分装于灭菌瓶中每瓶100mL，pH应为7.00.1。十七、亚硫酸铋琼脂（BS）成分：蛋白胨10g牛肉膏5g葡萄糖5g硫酸亚铁0.3g磷酸氢二钠4g煌绿0.025g柠檬酸铋铵2g亚硫酸钠6g琼脂1820g蒸馏水1000mLpH 7.5制法：1.将前面5种成分溶解于300mL蒸馏水中。2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50mL蒸馏水溶解。3将琼脂于600mL蒸馏水中煮沸溶解，冷至80。4将以上三液合并，补充蒸馏水至1000mL，校正pH，加0.5%煌绿水溶液5mL，摇匀，冷至5055，倾注平皿。注：此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处，超过48h不宜使用。十八、三糖铁琼脂（TSI）成分：蛋白胨20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁铵0.2g硫代硫酸钠0.2g琼脂12g酚红0.025g蒸馏水1000 mLpH 7.4制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 mL，摇匀，分装试管。装量宜多些，以便得到较高的底层。121高压灭菌15min，放置高层斜面备用。十九、三糖铁琼脂换用方法成分：蛋白胨15g眎胨5g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化钠5g硫酸亚铁0.2g硫代硫酸钠0.3g琼脂12g酚红0.025g蒸馏水1000 mLpH7.4制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 mL，摇匀，分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121高压灭菌15min，放置高层斜面备用。二十、嗜盐性试验培养基成分：蛋白胨2g氯化钠按不同量加蒸馏水100 mLpH7.7制法：配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100mL。每瓶分别加入不同量的氯化钠：（1）不加；（2）3g；（3）7g；（4）9g；（5）11g。待溶解后分装试管，121高压灭菌15min。