HPV感染与宫颈病变患者免疫调节失衡及细胞异常增殖状态的相关性.pdf

by activating Nrf2/GPX4 defense pathwayJ.CNS Neurosci Ther,2021,27(9):1023-1040.7 Rowell SE,Meier EN,McKnight B,et al.Effect of out-of-hospital tranexamic acid vs placebo on 6-month functional neurologic outcomes in patients with moderate or severe trau-matic brain injuryJ.JAMA,2020,324(10):961-974.8 Qin HZ,Chu AQ,Sun J,et al.Analysis of risk factors for stress ulcer after acute cerebral hemorrhage surgery and con-struction of a nomograph prediction model J Chinese Journal of Modern Neurology,2022,22(5):414-421.9Wang F.Analysis of the effect of traditional Chinese medi-cine characteristic nursing on the prevention of stress ulcer in patients with acute cerebral hemorrhage of qi deficiency and blood stasis type J.Abstract of the Worlds Latest Medical Information(Continuous Electronic Journal),2019,19(52):338-339.10 Li MY,Wang Cj,Sun N.Hemodynamic changes in cerebral hemorrhage stress ulcer J Medical Aesthetic Beauty,2019,28(1):17-1811 Sun Y,Zheng J,Yi J,et al.Investigation on the 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A(IgA)明显低于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV 组 CD4+细胞、IgG 和 IgA 明显低于低危 HPV 组(P0.05)。高危 HPV 组、低危 HPV 组白细胞介素-2(IL-2)明显低于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV 组 IL-2 明显低于低危 HPV 组(P0.05);高危 HPV组、低危 HPV 组白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-17(IL-17)和转化生长因子-(TGF-)明显高于HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV 组 IL-4、IL-17 和 TGF-b 明显高于低危 HPV 组(P0.05)。高危 HPV 组、低危 HPV 组 p16、Ki67 蛋白阳性表达率明显高于 HPV 阴性组和正常组(P0.05)。高危 HPV 组、低危 HPV 组 Prdx4 和 STAT3 mRNA 相对表达量明显高于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV 组 Prdx4 和 STAT3 mRNA 相对表达量明显高于低危 HPV 组(P0.05)。结论:HPV 感染加重宫颈病变患者免疫调节失衡,促进宫颈细胞异常增殖,尤其在高危型 HPV 感染中,上述作用更加明显。【关键词】人乳头瘤病毒;宫颈病变;免疫调节;细胞增殖【文献标识码】A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2023.08.08Correlation of HPV Infection with Immunoregulatory Imbalance and Abnormal Cell Proliferation in Patients with Cervical Lesions4721 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 【基金项目】中国中医科学院科研创新工程项目,(编号:C12021A02102)【通讯作者】刘 青HOU Ying,LI Yanmei,LI Xiulan,et al(Beijing Youan Hospital,Capital Medical University,Beijing 100069,China)【Abstract】Objective:To investigate the relationship between human papillomavirus(HPV)infection and immune dysregulation and abnormal cell proliferation in cervical lesions.Methods:In order to investigate this relationship,a study was conducted from January 2020 to April 2022,in which 56 cases of high-risk HPV-infected cervical lesion patients(high-risk HPV group),51 cases of low-risk HPV-infected cervical lesion patients(low-risk HPV group),57 cases of HPV-negative cervical lesion patients(HPV-negative group),and 60 healthy women(normal group)were selected.The cellular and humoral immune indicators,cytokines,p16 protein,Ki67 protein,Prdx4 mRNA,and STAT3 mRNA were compared among the groups.Results:The CD4+cells,immunoglobulin G(IgG),and immunoglobulin A(IgA)levels were significantly lower in the high-risk HPV group and low-risk HPV group than in the HPV-negative group and normal group(P0.05).Furthermore,the levels of CD4+cells,IgG and IgA were significantly lower in the high-risk HPV group than in the low-risk HPV group(P0.05).The levels of interleukin-2(IL-2)were significant-ly lower in the high-risk HPV group and low-risk HPV group than in the HPV-negative group and normal group(P0.05),with the high-risk HPV group showing significantly lower IL-2 levels than the low-risk HPV group(P0.05).The levels of interleukin-4(IL-4),interleukin-17(IL-17),and transforming growth factor-(TGF-)were significantly higher in the high-risk HPV group and low-risk HPV group than in the HPV-negative group and normal group(P0.05),with the high-risk HPV group showing signifi-cantly higher levels of IL-4,IL-17,and TGF-than the low-risk HPV group(P0.05).The positive ex-pression rates of p16 and Ki67 proteins were significantly higher in the high-risk HPV group and low-risk HPV group than in the HPV-negative group and normal group(P0.05).The relative expression levels of Prdx4 and STAT3 mRNA were significantly higher in the high-risk HPV group and low-risk HPV group than in the HPV-negative group and normal group(P0.05),with the high-risk HPV group showing significantly higher levels of Prdx4 and STAT3 mRNA than the low-risk HPV group(P0.05).Conclusion:HPV infec-tion exacerbates immune dysregulation and promotes abnormal cell proliferation in cervical lesion patients,par-ticularly in high-risk HPV infections.【Key words】Human papillomavirus;Cervical lesions;Immune regulation;Cell proliferation 人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)是一种引起皮肤和黏膜上皮增生的病毒,其主要症状包括寻常疣和生殖器疣1。宫颈病变是宫颈区域出现的炎症、损伤和肿瘤等病变2。HPV 持续感染与宫颈病变的发生和发展密切相关,因为相关基因产物会干扰细胞周期的正常调节,导致细胞不断增殖,可能导致病情恶化。此外,不同类型的 HPV 具有不同的危险程度和危害程度。目前研究发现宫颈病变发生的直接原因是 HPV 导致机体免疫调节紊乱及细胞异常增殖3,通过改变宫颈组织的免疫环境,刺激细胞无限增殖,但具体机制尚未明确。故本研究探讨 HPV 感染与宫颈病变患者免疫调节失衡及细胞异常增殖状态的关系,旨在了解该病患者机体免疫调节及细胞功能变化,为宫颈病变的临床治疗提供有效的理论依据。1 资料与方法1.1 一般资料:选取 2020 年 1 月至 2022 年 4 月在我院治疗的高危 HPV 感染宫颈病变患者 56 例(高危HPV 组,高危 HPV 指 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68 型等),低危 HPV 感染宫颈病变患者 51 例(低危 HPV 组,低危 HPV 指 HPV6、11、40、42、43、44、54、61、72、81、89 型等),HPV 阴性宫颈病变患者 57 例(HPV 阴性组),纳入标准:宫颈病变均经病理学确诊 CIN级病变及以上;既往无宫颈治疗史;初次就诊者;患者及家属知情同意。排除标准:合并有其他系统恶性肿瘤者、肝肾功能障碍、自身免疫系统疾病等其他严重疾病;近 3 个月有全身感染性疾病者。同时选取健康体检女性 60 例(正常组),纳入标准:无宫颈病变及宫颈治疗史;受试者知情同意。排除标准:合并有其他系统恶性肿瘤者、肝肾功能障碍、自身免疫系统疾病等其他严重疾病;近 3 个月有全身感染性疾病者。各组受试者临床一般资料比较见表 1,具有可比性。5721 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 表 1 各组临床一般资料比较xs,n(%)组别例数年龄(岁)体质量指数(kg/m2)病变分级CIN级 CIN级 CIN级 宫颈癌高危 HPV 组5657.799.9222.162.1115(26.79)22(39.29)11(19.64)8(14.29)低危 HPV 组5158.939.1522.022.0514(27.45)20(39.22)10(19.61)7(13.73)HPV 阴性组5760.028.8922.611.9616(28.07)21(36.84)12(21.05)8(14.04)正常组6059.119.6022.172.16-F/c20.5350.8470.117P0.6590.471.0001.2 检查方法1.2.1 外周血免疫指标检测:入院后采集患者外周空腹静脉血 10mL 2 管,1 管 1000g 离心 10min,取上层血清,-20冰箱保存,采用免疫浊度法检测 IgA、IgG、IgM 水平(试剂盒购自武汉塞维尔生物科技公司)。另1 管采用 BD FACSCelestaTM 流式细胞仪检测外周血CD3+、CD4+、CD8+百分比。1.2.2 细胞因子检测:入组即刻,获取患者宫颈组织标本,碾磨后加入 PBS 液、1000g 离心 10min,取上清液,酶联免疫法检测外周血细胞因子 IL-2、IL-4、IL-17、TGF-水平(试剂盒选自上海森雄科技实业有限公司)。1.2.3 免疫组织化学法检测:检查或术后,采集病变组织标本,甲醛固定,石蜡包埋后制作切片,进行 p16、Ki67 染色,免疫组织化学染色采用 SP 法处理。1.2.4 增殖基因表达量检测:检查中采取可疑病灶区域宫颈组织标本,应用荧光定量 PCR 法检测并计算增殖相关基因 Prdx4 和 STAT3mRNA 表达量。(选自美国 Sigma 公司试剂盒)。1.3 统计学处理:数据统计分析采用 SPSS22.0 软件,计量资料包括:年龄、体质量指数、免疫功能指标等,数据以(xs)表示,单因素方差分析组间指标差异,两两比较采用 LSD-t 检验;疾病类型采用 n(%)表示,2检验分析组间指标差异。组间比较 P0.05 可认为指标差异有统计学意义,2检验两两比较校正 P 为 0.008。2 结 果2.1 各组细胞和体液免疫指标比较:高危 HPV 组、低危 HPV 组 CD4+细胞、IgG 和 IgA 明显低于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV 组 CD4+细胞、IgG和 IgA 明显低于低危 HPV 组(P 0.05)。见表 2。表 2 各组细胞和体液免疫指标比较(xs)组别例数CD3+(%)CD4+(%)CD8+(%)lgG(g/L)lgA(g/L)lgM(g/L)高危 HPV 组5662.544.8318.282.38abc31.674.177.191.01abc1.780.65abc1.530.29低危 HPV 组5161.025.0422.122.19ab31.194.609.230.98ab2.010.80ab1.500.32HPV 阴性组5763.115.1926.682.40a31.804.8211.161.04a2.710.63a1.550.34正常组6062.935.4030.203.1530.924.0513.131.223.210.791.520.30F1.819234.9580.501325.95947.1750.24P0.1450.0010.6820.0010.0010.869 注:a 与正常组比较 P0.05;b 与 HPV 阴性组比较 P0.05;c 与低危 HPV 组比较 P0.056721 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 2.2各组细胞因子比较:高危 HPV 组、低危 HPV 组IL-2 明显低于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV 组 IL-2 明显低于低危 HPV 组(P0.05);高危 HPV 组、低危 HPV 组 IL-4、IL-17 和 TGF-明显高于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV 组IL-4、IL-17 和 TGF-明显高于低危 HPV 组(P0.05)。见表 3。表 3 各组细胞因子比较(xs)组别例数IL-2(pg/mL)IL-4(pg/mL)IL-17(pg/mL)TGF-(pg/mL)高危 HPV 组5610.203.12abc22.325.54abc140.3024.43abc40.435.54abc低危 HPV 组5119.293.32ab16.374.43ab110.4521.19ab24.456.01abHPV 阴性组5725.594.01a10.123.18a89.2920.52a18.285.49a正常组6031.164.825.692.0159.2921.4610.044.76F304.279191.79139.84320.255P0.0010.0010.0010.001 注:a 与正常组比较 P0.05;b 与 HPV 阴性组比较 P0.05;c 与低危 HPV 组比较 P0.052.3 各组 p16、Ki67 蛋白阳性率比较:高危 HPV 组、低危 HPV 组 p16、Ki67 蛋白阳性表达率明显高于 HPV阴性组和正常组(P0.05);HPV 阴性组 p16、Ki67 蛋白阳性表达率明显高于正常组(P0.05)。见表 4。表 4 各组 p16 Ki67 蛋白阳性表达率比较 n(%)组别例数p16 蛋白阳性表达Ki67 蛋白阳性表达高危 HPV 组5645(80.36)ab42(75.00)ab低危 HPV 组5136(70.59)ab35(68.63)abHPV 阴性组5734(59.65)a32(56.14)a正常组609(15.00)7(11.67)248.23256.992P0.0010.001 注:a 与正常组比较 P0.008;b 与 HPV 阴性组比较 P0.0082.4各组 Prdx4、STAT3mRNA 表达比较:高危 HPV组、低危 HPV 组 Prdx4 和 STAT3mRNA 相对表达量明显高于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV组 Prdx4 和 STAT3mRNA 相对表达量明显高于低危HPV 组(P0.05)。见表 5。表 5 各组 Prdx4 和 STAT3mRNA 相对表达量比较(xs)组别例数Prdx4mRNA相对表达量STAT3相对表达量高危 HPV 组561.890.32abc1.690.22abc低危 HPV 组511.400.22ab1.370.21abHPV 阴性组571.210.25a1.240.19a正常组601.010.201.020.18F128.742112.968P0.0010.001 注:a 与正常组比较 P0.05;b 与 HPV 阴性组比较 P0.05;c 与低危 HPV 组比较 P0.053 讨 论HPV 是宫颈病变的主要病因4。HPV 可在 85%95%的宫颈癌患者癌组织中检出5。其机制为 HPV通过黏膜感染靶细胞,紊乱正常细胞周期,促使病变组织形成6。T 淋巴细胞介导的细胞免疫反应能使肿瘤细胞增值、控制肿瘤生长受到抑制。其中 CD4+T 淋巴细胞能识别抗原、激活免疫细胞及生成抗体抵抗肿瘤生长,并与 CD8+T 细胞协同参与机体免疫调节7。T 细胞代表机体免疫总水平,且外周血和宫颈局部免疫情况一致。本研究结果表示,宫颈病变患者感染 HPV 后,CD8+无显著变化,但 CD4+明显降低,与既往研究8报道相似,说明患者 T 细胞的辅助及诱导功能下降,增强抑制和7721 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 杀伤作用并使细胞免疫功能造成损伤,导致患者感染程度加深。且 CD4+随着 HPV 持续感染进一步降低,加重细胞免疫功能损伤。可能机制为:HPV 的早期蛋白过度参与机体局部免疫调节作用,进而导致免疫识别和清除功能降低;感染过程中 CD4+T 细胞减少,抑制了机体抗肿瘤免疫作用,使宫颈组织局部免疫微环境失调9,10。本实验结果表明 HPV 阳性宫颈病变患者血液IgG、IgA 浓度比 HPV 阴性和对照组明显降低,高危感染者两项指标降低更明显,说明患者感染 HPV 后体液免疫功能受损,无法产生足量中和抗体将病毒清除,最终造成感染及宫颈病变发生。IL-2 由 Th1 分泌,主要参与细胞免疫;IL-4、IL-17 由 Th2 分泌,主要参与体液免疫,IFN-激活协调机体免疫系统,调控 Th1/Th2 平衡11。三者密切配合调控机体免疫功能。本实验中高危 HPV 组、低危 HPV组 IL-2 明显低于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),说明患者机体 Th1 型细胞功能受到抑制,高危 HPV 组、低危 HPV 组 IL-4、IL-17 和 TGF-明显高于 HPV 阴性组和正常组(P0.05),机体 Th2 型细胞过度兴奋,Th1/Th2 失衡,免疫功能紊乱。本研究指出,持续感染增加紊乱程度。说明上述细胞功能增强与宫颈病变密切相关,且高危型 HPV 感染可此病变加剧、促进宫颈组织恶变产生。p16 可调控细胞周期,常见于恶性病变的分子事件。正常上皮细胞内 p16 表达水平极低,但病变组织中 p16 显著表达。本研究中高危 HPV 组、低危 HPV组 p16、Ki67 蛋白阳性表达率明显高于 HPV 阴性组和正常组(P0.05);HPV 阴性组 p16、Ki67 蛋白阳性表达率明显高于正常组(P0.05);佐证了上述观点故推测在 p16 高表达可促使宫颈病变。Ki67 调控细胞周期蛋白,但其作用机制尚未明确,但已证实 Ki67 是病变细胞主要的增殖标志物。Ki67 只在病变上皮细胞中增强表达。本研究中宫颈病变患者 p16、Ki67 蛋白呈高表达,且与患者 HPV 感染明显相关。说明 Ki67 参与了宫颈病变的发生与发展,且患者感染 HPV 风险随着 p16、Ki67 蛋白表达升高而增加,故可将 p16、Ki67蛋白的动态监测结果作为宫颈病变的生物学检测指标。免疫环境改变能使宫颈细胞增殖活性受到影响,衡量细胞恶变风险的重要方法是检测相关基因具体表达量。氧化应激诱导的 Prdx4 增加可导致细胞免于凋亡并促使肿瘤发生。STAT3mRNA 可调控细胞增殖、分化等基因表达并参与恶性肿瘤的进展,其高表达能使细胞增殖并阻碍细胞凋亡。本次研究结果表示:与低危型 HPV 感染组及正常对照组比较,高危 HPV 组、低危 HPV 组 Prdx4 和 STAT3mRNA 相对表达量明显高于HPV 阴性组和正常组(P0.05),且高危 HPV 组 Prdx4和 STAT3mRNA 相对表达量明显高于低危 HPV 组(P0.05)。证实 HPV 感染显著增加宫颈细胞增殖活力,且随着病变程度与恶性程度呈逐渐增强,甚至导致肿瘤的发生。综上所述:HPV 感染加重宫颈病变患者免疫调节失衡,促进宫颈细胞异常增殖,尤其在高危型 HPV 感染中,上述作用更加明显。本实验存在不足:本研究仅探讨了 HPV 感染组免疫功能变化,未进一步将 HPV感染类型的免疫功能变化进行分析,且相关机制还需进一步临床研究。【参考文献】1Szymonowicz KA,Chen J.Biological and clinical aspects of HPV-related cancersJ.Cancer Biol Med,2020,17(4):864-878.2Zheng JJ,Miao JR,Wu Q,et al.Correlation between HPV-negative cervical lesions and cervical microenvironmentJ.Taiwan Obstet Gynecol,2020,59(6):855-861.3 许艳茹,林景涛,周正维,等.CT、NG 与 HPV 感染的关系及与宫颈病变发生的相关性J.分子诊断与治疗杂志,2022,14(12):2215-2218.4 McBride AA.Human papillomaviruses:diversity,infection and host interactionsJ.Nat Rev Microbiol,2022,20(2):95-1085 Jee B,Yadav R,Pankaj S,et al.Immunology of HPV-media-ted cervical cancer:current understandingJ.Int Rev Immu-nol,2021,40(5):359-3786 樊慧清.P16、Ki67 在不同级别宫颈上皮内病变的表达及宫颈锥切术后 HPV 持续感染的影响因素D.河北医科大学,2021.7 Piyathilake CJ,Badiga S,Burkholder GA,et al.The accuracy of HPV genotyping in isolation and in combination with CD4 and HIV viral load for the identification of HIV-infected women at risk for developing cervical cancer J.Cancer 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IL-32、sRAGE、NLR 对 MM 患者并发肾损伤的影响;采用ROC 曲线分析 IL-32、sRAGE、NLR 预测 MM 患者并发肾损伤的 AUC 值、敏感度、特异度。结果:观察组的 IL-32、NLR 均高于健康对照组,而 sRAGE 低于健康对照组(P0.05)。肾损伤组的 IL-32、NLR 均高于非肾损伤组,而 sRAGE 低于非肾损伤组(P0.05)。Logistic 回归分析显示,IL-32、NLR 水平升高和sRAGE 水平下降是影响 MM 患者并发肾损伤的危险因素(P0.05)。ROC 曲线分析显示,血清 IL-32、sRAGE、NLR 预测 MM 患者并发肾损伤的 AUC 值分别为(0.761、0.765、0.802,P0.05)。结论:血清 IL-32、sRAGE、NLR 表达水平会随 MM 患者并发肾损伤而升高。【关键词】白细胞介素-32;可溶性晚期糖基化终末产物受体;中性粒细胞/淋巴细胞比值;多发性骨髓瘤;肾损伤【文献标识码】A 【doi】10.3969/j.issn.1006-6233.2023.08.09Correlation Analysis of Serum IL-32 sRAGE and NLR with Multiple Myeloma Complicated with Renal InjuryJIANG Ming,XU Juan,DING Linlin,et al(Rugao Peoples Hospital,Jiangsu Rugao 226500,China)【Abstract】Objective:To investigate the correlation between serum interleukin-32(IL-32),soluble advanced glycation end-product receptor(sRAGE)and neutrophil/lymphocyte ratio(NLR)and multiple my-eloma complicated with kidney injury.Methods:A total of 82 MM patients diagnosed and treated in Rugao Peoples Hospital from June 2020 to June 2022 were selected as the observation group,and were divided into renal injury group(n=27)and non-renal injury group(n=55)according to renal function,and 41 healthy physical examination patients were selected as the healthy control group during the same period.IL-32,sRAGE and NLR levels were compared.Binary Logistic regression was used to analyze the effects of IL-32,sRAGE and NLR on kidney injury in MM patients.ROC curve model was used to analyze the AUC value,sensitivity and specificity of IL-32,sRAGE and NLR in predicting kidney injury in MM patients.Results:IL-32 and NLR in observation group were higher than those in control group,while sRAGE was lower than those in control group(P0.05).IL-32 and NLR in renal injury group were higher than those in control group,9721 第 29 卷 第 8 期2023 年 8 月 河 北 医 学HEBEI MEDICINE Vol.29,No.8Aug.,2023 【基金项目】江苏省南通市卫生健康委员会科研课题项目,(编号:QNZ2022065)【通讯作者】徐 娟