PRAF2在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生物学功能的影响.pdf

基础医学文章编号:1002-0217(2023)04-0317-04基金项目:皖南医学院校重点项目科研基金(WK2021ZF27)收稿日期:2023鄄01鄄13作者简介:赵志勇(1992鄄),男,住院医师,(电子信箱)silently00 ;任俊玲,女,主任医师,(电子信箱)94366511 ,通信作者。PRAF2 在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生物学功能的影响赵志勇1,徐摇 栋1,刘三保1,鲍摇 军1,于昌盛2,吴梦超1,芮绍瑞1,任俊玲1(1.皖南医学院第二附属医院摇 甲乳外科,安徽摇 芜湖摇 241000;2.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院摇 甲乳外科,安徽摇芜湖摇 241001)揖摘摇 要铱目的:研究异戊二烯化 Rab 受体 1 结构域家族 2(PRAF2)在乳腺癌中的表达及其对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法:使用 RT鄄qPCR、Western blot 检测 37 例新鲜冰冻乳腺癌组织及癌旁组织中 PRAF2 的 mRNA 和蛋白表达水平。在人乳腺癌株 MCF鄄7 细胞中转染小干扰 RNA(siRNA),观察对 MCF鄄7 细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果:乳腺癌组织中 PRAF2 基因表达水平高于癌旁组织(P0郾 001);乳腺癌组织中 PRAF2 蛋白相对表达强度高于癌旁组织(P0郾 001);PRAF2 基因表达的下调抑制了乳腺癌细胞的增殖能力(P0郾 05);PRAF2 基因表达的下调抑制了乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力(P0郾 001)。结论:乳腺癌组织中 PRAF2 呈高表达,PRAF2 是一种促癌基因,能够促进乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭。揖关键词铱异戊二烯化 Rab 受体 1 结构域家族 2;乳腺癌;生物学功能揖中图号铱R 737郾 9摇 摇 摇 揖文献标志码铱A揖DOI铱10郾 3969/j.issn.1002鄄0217.2023.04.003Expression of PRAF2 and its effect on the biological function in breast cancerZHAO Zhiyong,XU Dong,LIU Sanbao,BAO Jun,YU Changsheng,WU Mengchao,RUI Shaorui,REN JunlingDepartment of Thyroid&Breast Surgery,The Second Affiliated Hospital of Wannan Medical College,Wuhu 241000,China揖Abstract铱Objective:To investigate the expression of prenylated Rab acceptor 1(PRA1)domain family,member 2(PRAF2)in breast cancer(BC)andthe impact of PRAF2 on the biological behavior of breast cancer cells.Methods:The mRNA and protein levels of PRAF2 in 37 newly frozen BC tissues andadjacent tissues were detected by RT鄄qPCR and Western鄄blot assay.Small interfering RNA(siRNA)was transfected into human breast cancer cell linesMCF鄄7 to observe the effects on the proliferation,migration and invasion of MCF鄄7 cells.Results:The expression level of PRAF2 gene and the relativeexpression intensity of PRAF2 protein were significantly higher in BC cancer tissues than in adjacent tissues(both P0郾 001).Down鄄regulation of PRAF2significantly led to inhibiting the proliferation of breast cancer cells(P0郾 05)as well as the invasion and migration of breast cancer cells(P50)。计算各组 MCF鄄7 细胞集落数(number of colonies)平均值。1.2.7摇 Transwell 实验摇乳腺癌 MCF鄄7 细胞系转染PARF2 及空白对照 24 h 后,制备单细胞悬液,以每孔 5伊104个接种到 Transwell 小室。小室上层加入100 滋L 无血清培养基,下层加入 500 滋L 含血清的培养基继续培养48 h。倒置显微镜下观察各组细胞侵袭和迁移情况。1.2.8摇 划痕试验摇取对数期细胞,接种于 6 孔板,培养24 h 后转染,转染后至细胞汇合度为90%以上时,用移液枪头划横线,PBS 洗 2 遍后更换新鲜培养基,显微镜下随机选择3 个位置进行拍照。培养 24 h后在原位置再次镜下拍照,计算细胞迁移情况。1.3摇 统计学方法摇采用 SPSS 26.0 统计软件进行分析,采用 Graph Pad Prism70、ImageJ 绘图。计量资料以軃x依s 表示,两组间比较采用配对 t 检验;多组间的比较采用单因素方差分析,多组间两两比较采用LSD鄄t 检验。P0郾 05 为差异有统计学意义。2摇 结果2.1摇 PRAF2 在乳腺癌组织中的表达摇 37 例乳腺癌组织中 PRAF2 的 mRNA 表达水平较癌旁组织升高(t=6郾 902,P0郾 001;图 1A)。6 例乳腺癌组织中PRAF2 蛋白的相对表达强度高于癌旁组织(t=6郾 346,P0郾 001;图 1B)。2.2摇 MCF鄄7 细胞中 PRAF2 转染效率摇 MCF鄄7 细胞转染 siRNA鄄1 后,与阴性对照组相比,PRAF2 的表达下调(F=2 260郾 537,P0郾 001;图 2)。2.3摇 MCF鄄7 细胞转染 PRAF2 后细胞增殖的影响摇与对照组相比,PRAF2 基因的下调抑制了乳腺癌细胞的增殖活力。MCF鄄7 细胞转染 siRNA鄄PRAF2 后,实验组细胞的克隆形成数量低于 siRNA鄄NC 对照组的细胞克隆形成数(P0郾 001;图 3A);转染 72 h 后siRNA鄄PRAF2 转染组细胞的增殖率低于阴性对照组(P0郾 05;图 3B)。2.4摇 MCF鄄7 细胞转染 PRAF2 后侵袭能力的影响摇Transwell 试 验 结 果 显 示,siRNA鄄PRAF2 转 染 组MCF鄄7 细胞的侵袭能力与 siRNA鄄NC 对照组相比降低(P0郾 001;图 4)。2.5摇 MCF鄄7 细胞转染 PRAF2 后迁移能力的影响摇划痕实验结果显示,siRNA鄄PRAF2 转染组 MCF鄄7 细胞的迁移能力与 siRNA鄄NC 对照组相比降低(P0郾 001;图 5)。813皖南医学院学报(J of Wannan Medical College)2023;42(4)A.RT鄄qPCR 结果;B.Western blot 结果;*P0郾 001。图 1摇 PRAF2 在乳腺癌组织中的表达F=2 260郾 537,*P0郾 001。图 2摇 Western blot 检测 siRNA 干扰效率A.平板克隆实验结果,F=38郾 997,P0郾 001;B.CCK鄄8 实验结果,F=5郾 206,P=0郾 024;*P0郾 05,*P0郾 001。图 3摇 PRAF2 对 MCF鄄7 细胞增殖的影响F=153郾 692,*P0郾 001。图 4摇 PRAF2 对 MCF鄄7 细胞侵袭能力的影响F=92郾 813,*P0郾 001。图 5摇 PRAF2 对 MCF鄄7 细胞迁移能力的影响3摇 讨论中国女性直至 2019 年乳腺癌发病率和病死率均呈持续上升趋势9。乳腺癌的发生与多种因素有关,如乳腺癌家族史、初潮早、未婚未育、肥胖等10。但乳腺癌发生发展的具体分子生物学机制,至今还没有完全阐明。本研究通过 RT鄄qPCR、West鄄ern blot 等技术发现 PRAF2 基因在乳腺癌组织中表达水平显著高于癌旁组织。乳腺癌是一种异质性疾病,基因组存在明显异常。本课题组推测 PRAF2 的高表达可能与乳腺癌的发生发展存在一定的相关性。过度增殖是肿瘤细胞持续发展的典型特征,PRAF2 的高表达可能会影响乳腺癌细胞的增殖能力。本 研 究 通 过 构 建 PRAF2 特 异 性 的 siRNA鄄PRAF2,Western blot 验证 siRNA1 具有较好的敲低效果。将 siRNA 转染至乳腺癌细胞系 MCF鄄7 中,采用平板克隆与 CCK鄄8 检测乳腺癌细胞增殖能力,结果表明下调 PRAF2 的表达能够抑制 MCF鄄7 细胞的增殖能力。这一发现为乳腺癌靶向治疗中新靶点的探索提供了思路。肿瘤转移是一个复杂的级联反应,涉及癌细胞与周围的微环境(包括间充质细胞,免疫细胞和细胞外基质)之间的相互作用11。乳腺癌转移的是原发性肿瘤细胞侵袭基底膜,继而成为弥散性肿瘤细胞12。肿瘤细胞随后促进异常的血管生成,进入循环系统或淋巴系统,迁移到远处器官并形成继发性肿瘤13。乳腺癌细胞的侵袭与迁移性使得肿瘤发生转移,进而导致患者预后不良。本研究通过乳腺癌细胞系 MCF鄄7 在转染 siRNA鄄PRAF2 后,Tran鄄swell、划痕实验表明,下调 PRAF2 明显降低了乳腺癌 MCF鄄7 细胞的侵袭性及迁移能力。Qian 等7发现食管癌组织中 PRAF2 高表达,与食管癌细胞的增殖和侵袭能力密切相关,本研究结果与之相似。综上所述,本研究初步证实了 PRAF2 基因在乳腺癌组织中高表达。沉默 PRAF2 基因可抑制 MCF鄄7细胞增殖、迁移和侵袭,但其潜在机制尚未阐明。因此,PRAF2 在乳腺癌中的作用机制以及是否能够作为治疗与抗转移靶点仍需进一步探究。揖参考文献铱1摇SUNG H,FERLAY J,SIEGEL RL,et al.Global cancer statistics2020:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwidefor 36 cancers in 185 countriesJ.CA Cancer J Clin,2021,71(3):209-249.(下转第 328 页)913皖南医学院学报(J of Wannan Medical College)2023;42(4)化疗纳入列线图模型,经 ROC 曲线、校准曲线及决策曲线对模型的准确性进行了充分的验证,说明该模型对预测胰腺癌患者术后的 1、2、3 年生存率有较高的准确性。本研究的样本量较少,得出的结果存在一定的偏倚,但能为临床胰腺癌患者的预后判断提供一定的理论支持。后续,我们将进一步扩大样本量,进行分组研究来排除化学治疗及其他抗肿瘤治疗对患者预后的干扰,使得结果更具说服力。揖参考文献铱1摇LI S,XU HX,WU CT,et al.Angiogenesis in pancreatic cancer:current research status and 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Medical College)2023;42(4)