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Stomatology,:673678,696College基础研究基础研究基础研究6732023年8 月第43卷第8 期口腔医学Er：YA G 激光激活荡洗对不同机械预备锥度根管系统的荡洗效果研究分析赵斯佳，何新宇，于悦？，薛晓伟3，潘独？，赵继志！摘要目的研究不同机械预备锥度下，Er：YA G 激光激活荡洗在根管内的荡洗效果。方法在不同预备锥度（15/.0 5、20/.06及2 5/.0 8）的树脂离体牙模型中进行Er：YA G 激光荡洗模拟，高速摄像机拍摄每个激光脉冲的根管内气泡反应，计算根管内气泡的灰度积分。收集牙髓完好的离体第三磨牙，即刻进行不同锥度根管预备（13/.0 2、15/.0 5、2 0/.0 6 及2 5/.0 8），分别采用Er：YA G 激光激活荡洗及手用空针冲洗结合5.2 5%NaCIO进行根管预备，完成后固定、脱钙、包埋、切片并进行HE染色，观察牙髓组织残留情况，进行统计分析。结果在相同单脉冲能量下，15/.0 5组根管中的气泡灰度积分少于2 0/.0 6 及2 5/.0 8组，具有统计学差异（P0.05）。病理学切片结果显示，相同条件下，Er：YA G 激光荡洗组牙髓残留风险较手用空针冲洗组低（P0.05）。Er：YA G 激光荡洗组组内，与2 5/.0 8 组相比，15/.0 5组牙髓残留风险较高（P0.05）。结论相同参数设置条件下，Er：YA G 激光荡洗的效果在2 0/.0 6 组与2 5/.0 8 组的根管系统中差异无统计学意义，但均优于15/.0 5组。【关键词Er：YA G 激光；根管治疗；机械预备锥度；微创预备中图分类号R781.05【文献标识码 A文章编号1003-9872(2023)08-0673-07doi 10.13591/ki.kqyx.2023.08.001Study on the effect of Er:YAG laser irrigation on the root canal system with different mechanical preparation tapersZHAO Sijia,HE Xinyu,YU Yue,XUE Xiaowei,PAN Chong,ZHAO Jizhi.(Department of Stomatology,Beijing Union MedicalHospital,Chinese Academy of Medical Sciences and Beijing Union Medical College,Beijing 100730,China)Abstract:Objective:To study the effect of Er:YAG laserirrigation on root canal system with different mechanical preparationtapers.Methods Er:YAG laser irrigation process was conducted in different prepared resin tooth models(15/.05,20/.06 and25/.08).The bubble oscillation in root canal was recorded by a high speed camera and the gray scale integral of the bubbles was cal-culated.The third molars with vital pulp were collected and divided.into three groups for different taper root canal preparation(13/.02,15/.05,20/.06 and 25/.08)after extraction.The root canals were prepared by Er:YAG laser irrigation,hand empty needle washingand 5.25%NaClO,respectively.The specimens were fixed,decalcified,embedded,sectioned and stained by HE.The residual pulptissue was observed and analyzed statistically.Results Under the same mono-pulse energy,the gray scale integral of air bubbles inroot canals of 15/.05 group was significantly less than 20/.06 and 25/.08 group(P0.05).The pathological results showed that the risk of residual pulp in Er:YAG laser group waslower than that of empty needle group under the same condition(P0.05).Compared with 25/.08 group,15/.05 group had a higherresidual risk of residual pulp(P0.05).Conclusion Under same parame-ters,the effect of Er:YAG laser on root canal system has no significant difference between 20/.06 and 25/.08 group,but both groupshave better cleaningeffects than 15/.05 group.Key words:Er:YAG laser;root canal therapy;mechanical preparation taper;minimally invasive preparation基金项目：中央高水平医院临床科研专项（2 0 2 2-PUMCH-B-037，2022-PUMCH-A-014）；中国医学科学院临床与转化医学研究专项(2022-12M-C&T-B-003)作者单位：1中国医学科学院北京协和医院口腔科，北京（10 0 7 30）；2北京航空航天大学，流体力学教育部重点实验室，北京（10 0 191）；3中国医学科学院北京协和医院病理科，北京（10 0 7 30）通信作者：赵继志E-mail:何新宇E-mail:根管治疗的核心是感染控制，主要手段是通过机械预备和化学预备，清理根管系统内的坏死牙髓组织、细菌生物膜及其代谢产物，清理感染物质，促进组织愈合 。由于根管解剖结构复杂多样，机械预备仅能切割到部分感染的牙本质管壁，具有局限性 2 。另外，反复的机械预备可以导致牙根微裂；大锥度机械预备通过磨削牙本质、降低牙齿的整体.674.赵斯佳，等.Er：YYAG激光激活荡洗对不同机械预备锥度根管系统的荡洗效果研究分析机械完整性，可显著降低牙齿折断负荷 3。因此，高效的根管化学预备对机械预备后的根管系统感染控制显得尤为重要近年来，随着口腔激光医学的发展，研究发现Er：YA G 激光激活荡洗具有良好的感染控制效果 4。Er:YAG激光能量在髓腔内被荡洗液吸收后，可以产生蒸汽气泡，推动髓腔内液体高速流动，流人根管系统,有效去除牙本质碎屑和玷污层 5-7 近年来,部分学者尝试利用Er：YA G 激光高效的化学预备效果，减少并取代部分机械预备过程，从而达到微创治疗的目的 8 。然而，对于不同根管预备锥度，Er：YA G 激光激活荡洗的作用效果差异尚罕见系统的研究。因此，本文拟通过使用高速摄影技术对树脂离体牙模型中的空穴效应气泡进行观测，分析不同根管预备锥度对饵激光激活荡洗流体动力学的影响，并进一步通过活髓离体牙验证不同预备锥度对Er：YA G 激光激活荡洗清理牙髓软组织能力的影响，以期为根管治疗的微创机械预备提供参考。1材料与方法1.1树脂离体牙的空穴效应气泡观测1.1.1树脂根管模型的制备本实验用三维打印的树脂根管模型(nano-ArchS140,重庆魔方精密科技有限公司，中国）（如图1A），结合中国成年人的牙体解剖流行病学调查结果设计 9。髓腔结构为开髓孔直径4mm，髓室底直径2 mm，髓室顶底距离8 mm；根管结构为工作长度12 mm，根尖直径0.2 5mm;参考既往研究 10,宽度及锥度分别为15/.0 5、2 0/.0 6 和2 5/.0 8。锥度的定义是：（根管口直径-根尖孔直径）/工作长度。宽度的定义是：根尖孔直径。树脂根管模型的样本量为1,经过千分尺的精细测量验证，以保证树脂模型的打印精度。1.1.2Er：YA G 激光实验参数的设置本实验选择波长2 940 nm的Er：YA G 激光器（Li g h t w a l k e r,Fo t o n a，斯洛文尼亚），装配牙科专用手具（H14,Fotona，斯洛文尼亚）以及9mm锥形工作尖（8 90 36,Fotona，斯洛文尼亚）。连接Er：YA G 激光器、激光手具与工作尖，并将工作尖垂直固定于模型中，尖端5mm置于液面下，保持髓腔充盈蒸馏水。Er：YA G 激光在液面下激活，产生稳定的气泡（如图1B)。根据课题组前期研究-13,Er:YAC激光参数如下：超短脉宽模式（super shortpulse，SSP)模式，激励频率设置为15Hz,单脉冲能量设置为10 40 mJ,以10 mJ 递增A4mmB激光手具8mm21mm蒸汽气泡25/.08激发Er:YAC激光20/.06Er:YAC(入=2 940 nm)12mm15/.05高速背侧光源摄像机4mm计算机4mmA：Er：YA G 激光激活荡洗根管树脂模型；B：空泡测试及图像采集系统图1树脂根管模型空泡实验测试及图像采集系统Fig.1Bubble experiment test model and image acquisition system in resin root canal model1.1.3空泡图像的采集和计算使用高速摄像机（i-SPEED726mono144GB，i XCamerasLtd,英国）对Er：YA G 激光形成的空穴效应气泡进行全程观测。该设备全画幅分辨率（2 0 48像素1536 像素）顿速为8 512 顿/s。在模型背景处放置7 50 0 0 流明LED（U-10 0 S型，上海兆基电子科技有限公司，中国）的背光光源，摄像机设置为200000帧/s的帧速，快门时间为5s，分辨率降至150像素2 8 0 像素，可以获得清晰的根管冷沸腾气泡图像（图2 A）1.1.4气泡的灰度计算使用Matlab软件Er：YA G 激光激活前图片作为背景（图2 A），标记图像根管区域内的531个像素点（图2 B），根据背景图片测量待测图片每个像素点的6752023年8 月第43卷第8 期口腔医学灰度值,并计算根管系统内所有像素点的灰度值总和。最后，通过观测髓腔中初级空穴效应蒸汽气泡的变化,确定蒸汽气泡的脉冲周期（图2 C）,将脉冲周期中的所有照片进行根管内灰度积分合计，得到该样本的灰度积分值。该数值反映了由气泡带来的光吸收率变化过程，可以表征流场混乱程度，在一定程度上体现了流场的强弱。每个单脉冲能量下进行10次独立实验，每个实验取一个脉冲作为样本，最终取10 个独立脉冲的平均值作为最终测量数值。ABCA：激活前根管图像；B：根管内像素点标记图；C：单个脉冲周期内的根管内蒸汽气泡变化图2Er：YA G 激光激活荡洗根管气泡图Fig.2Bubble shape in Er:YAG laser-activated irrigation in resin root canal model1.2牙髓残留组织的病理学检测1.2.1人离体牙的获取本院门诊收集当日（2 0 2 1年8 月9日至2 0 2 1年12 月30 日）拔除的完整非龋性人第三磨牙，拔牙前均使用冷测试（艾龙集团，法国）和电测试仪（思博安，美国评估牙髓状态。将牙髓活力正常的患牙进行编号，后随机放人两个装有生理盐水的小瓶中进行分组，分别为激光组和冲洗组。所有牙髓活力正常的患牙均按照以下标准纳人和排除。纳人标准：牙体组织长度超过15mm；完好、可视的生理性根尖孔；冠部组织较为完整，具有四面完整龈壁；根面完整无龋坏。排除标准：曾行牙髓治疗；大面积修复体修复；根管形态为C型根或扁根；根管系统锥度过大或机械预备过程中无法形成实质根管壁切割。两组中的离体牙随机分为5组：空白对照组（不进行预备）、阴性对照组（预备至13/.0 2）、实验组1（预备至15/.0 5）、实验组2（预备至2 0/.0 6）、阳性对照组（预备至2 5/.0 8）。所有离体牙在分组后进行开髓及8 号不锈钢K挫（马尼公司，日本）探查，将自然锥度过大的离体牙丢弃排除，并均于拔除当日完成后续实验。研究方案获北京协和医院伦理委员会（ZS-2337)批准。计算得到离体牙的样本量为16 0 个,每组16 个 141.2.2根管系统的机械预备使用水冷高速手机及7 0 1型号车针（马尼公司，日本）进行离体牙开髓，8 号不锈钢K锉探查根管直到根尖孔处可见并测量长度，该长度减去0.5mm定义为工作长度。在实验过程中均按照统一系统进行依次预备，顺序为13/.0 2（Pathfile，登士柏公司，美国）、15/.0 5（MTWO，VD W 公司，德国）、20/.06（M T W O，VD W 公司，德国）、2 5/.0 8（ProtaperGold,登士柏公司，美国）。按照工作长度，将各组患牙的终末预备宽度分别预备至13/.0 2、15/.0 5、20/.06以及2 5/.0 8。每次更换锉均使用5.2 5%NaClo冲洗。1.2.3终末化学预备将完成根管机械预备后的离体牙样本随机分为两组，并按照以下方式进行终末化学预备。激光组：采用5.2 5%NaClO配合Er：YA G 激光激活荡洗，能量为40 mJ,每次荡洗时间为15s，间歇期5s,共进行8 个周期（NaC1O荡洗激活总时间12 0 s）。冲洗组：采用5.2 5%NaC1O配合双侧方开口28G空针进行冲洗（2 2 6 型号，康特齿科，瑞士），冲洗过程中以2 3mm振幅的垂直短距离移动，冲洗时间每根管12 0 s。完成中终末预备后，离体牙样本均使用5mL蒸馏水冲洗根管，置换NaClO,吸潮纸尖（登士柏，美国）干燥根管并准备进行进一步组织学分析。离体牙的实验操作均由1名医师完成，以保证操作的一致性。1.2.4组织学评估根管治疗完成后，将离体牙在10%甲醛缓冲液中固定48 h，在10%盐酸和5.2 5%EDTA混合液中冲洗脱矿2 周。自来水中彻底冲洗2 4h后进行包埋，进行离体牙切片，使用数字显微镜（NikonEclipse LV100POL,Nikon Instruments inc.，日本）和显微镜相机（Nikon DS-Ril,Nikon Instruments inc.,.676.赵斯佳，等.Er：YA G 激光激活荡洗对不同机械预备锥度根管系统的荡洗效果研究分析日本）在2 9和59倍放大率下观察。使用NISEle-mentsAR3.10图像分析软件（Nikon Instrumentsinc.，日本）处理和分析捕获的图像，由2 名组织学阅片人员判断并记录根管内根尖段是否残留牙髓组织。如根尖段残留牙髓组织，记为阳性；如根尖段未见残留牙髓组织，记为阴性。组织学阅片人员经过一致性检验（Kappa值为：0.8 34），均经验丰富、经过培训，且对实验分组不知情。1.3统计学方法应用SPSS19.0统计学软件分析数据，数值统计采用Pearson相关分析与二分类Logistic回归分析，P0.05为差异具有统计学意义。2结果2.1树脂模型气泡特征在10、2 0、30 和40 mJEr：YA G 激光激活荡洗下，15/.0 5,2 0/.0 6 和2 5/.0 8 组根管模型中可见髓腔内出现蒸汽气泡，根尖段出现次级空穴效应气泡（图3A）。各组根尖冷沸腾气泡灰度积分相比（图3B），15/.05组根管中的气泡灰度积分少于2 0/.0 6 及25/.08组，具有统计学差异（P0.05）A5108B15/.0520/.0625/.08*r=0.81115/.05*r=0.989*r=0.769410820/.06*r=0.907*r=0.576*r=0.88240mJ*r=0.94625/.083108*r=0.9412108工1108冷沸腾气泡010203040激光荡洗能量/mJA：不同锥度根管模型中髓腔中蒸汽气泡及根管中次级空穴效应气泡的典型形态（40 mJ）；B：多种激光荡洗能量下不同锥度根管模型中次级空穴效应气泡灰度积分的变化，*：P0.05，*：P 0.0 1图3不同锥度根管模型中冷沸腾气泡的变化Fig.3Variation of laser-induced bubbles in root canal models with different tapers2.2离体牙根管荡洗效果根管预备后，空白对照组及阴性对照组（13/.0 2组)中所有样本根尖段均可见牙髓组织残留（图4）；实验组（15/.0 5组与2 0/.0 6 组）与阳性对照组（2 5/.0 8 组）均有部分样本可见牙髓组织或成牙本质细胞残留于髓腔内或根管侧壁（表1）。本研究采用二分类Logistic回归评估预备锥度和激光荡洗对预备后牙髓残留风险的影响。Logistic模型具有统计学意义,X2=35.390,P0.001。该模型能够正确分类8 4.4%的研究对象。模型敏感度为98.5%，特异度为51.7%，阳性预测值为8 2.5%，阴性预测值为93.8%。模型纳人的2 个自变量中，预备制度和组别均有统计学意义。激光组与冲洗组相比，激光荡洗组牙髓残留风险显著较低，OR值为0.110(95%CI:0.031%0.387%）。与2 5/.0 8 组相比，15/.0 5组牙髓残留风险较高，0 R值为2 5.0 94（95%CI:5.0 96%12 3.57 7%）；与2 5/.0 8 组相比，20/.06组牙髓残留风险差异无统计学意义。3讨论彻底的感染控制是避免根管治疗失败的重点。近年来多项研究证实，Er：YA G 激光可通过在根管内产生流体场，冲洗根管壁，高效清洁根管内的坏死牙髓组织，对根尖区残留牙髓组织的清理效果显著优于手动冲洗方法 15。本实验比较了不同预备锥度下Er：YA G 激光对根尖区牙髓组织的清理效果，实验结果发现，激光荡洗可显著降低牙髓残留风险，然而，2 0/.0 6 组与2 5/.0 8 组之间牙髓残留差异无统计学意义，这一结果与既往超声荡洗研究相一致。Lee等 16 采用超声激活NaClO荡洗方法对具有完整牙髓组织的前磨牙进行的体外组织学研究，结果显示2 0/.0 4组与40/.0 4组根管清理效果一致。完善的根管充填是根管系统的感染控制的必要条件，能够有效杜绝根管系统的再感染。因此，微创机械预备的前提之一是在该锥度下能够进行完善的根管充填。目前临床常用的充填技术为热牙胶充填和单尖充填法，两种方法常用的标准牙胶尖为.0 4和.0 6锥度，而.0 4锥度的机械预备通常不能完成.0 4锥度主尖的充填,因此本文中使用的最小机械预备锥度为.0 5。在实验过程中我们选择了多种机扩系统、按照统一顺序进行依次预备，顺序为13/.0 2（Pathway），.6772023年8 月第43卷第8 期口腔医学空白对照阴性对照实验组1实验组2阳性对照未预备13/.0215/.0520/.0625/.08激光组冲洗组空白对照阴性对照实验组1实验组2阳性对照未预备13/.0215/.0520/.0625/.08激光组冲洗组图中小图放大倍数为2 9倍，大图为59倍；实验组2 和阳性对照无牙髓残留图4不同锥度根管预备下根尖切片病理染色Fig.4Pathological assessment of inferior root sections prepared with different tapers表1不同锥度根管预备下，Er：YA G 激光辅助荡洗及手动空针冲洗后的牙髓残留阳性样本数量Tab.1Number of positive samples of pulp residue afterEr:YAG laser-assisted rinsing and manual empty needlerinsing in root canal preparation with different tapersn=160分组激光组冲洗组空白对照组1616阴性对照(13/.0 2)组1616实验组1(15/.0 5）组415实验组2(2 0/.0 6)组25阳性对照(2 5/.0 8）组1215/.05（M T W O）,2 0/.0 6（M T W O）,2 5/.0 8（Pr o t a p e rGold）。目前市面上常见的机扩系统中,只有MTWO系统具有.0 5锥度的预备器械，因此选择了MTWO系统，而该系统没有.0 8 锥度，因此使用ProtaperGold进行补充。不同品牌的预备器械切削效率、碎屑排除效率等均有不同，可能对根管壁最终形态和牙髓残留状态存在影响。由于激光对牙髓和碎屑有高强度的溶解和清理效果已被不断证实，其核心机制在于饵激光增强了对荡洗液的流体动力学效应，因此，容纳荡洗液的根管终末预备形态对饵激光物理作用发挥和荡洗效果影响可能更为关键。在本研究中，我们着重对不同终末预备锥度对饵激光荡洗效果的影响进行探讨。另外，我们发现难以找到包含所有实验设计锥度的定锥机扩系统，考虑到现有机扩系统为变锥度，因此主要对根尖区残留牙髓的清理效果进行了探讨。由于根管系统的感染控制及残碎清理难点主要位于根尖区，同时饵激光激活荡洗也存在邻近根尖孔位置流体场速度较小，荡洗效果较弱的问题。因此本研究主要针对根尖区，探索饵激光激活荡洗在不同预备锥度下的牙髓清理效果。牙髓清理效果是Er：YA G 激光荡洗作用的临床效果体现，空穴效应气泡观测则是对Er：YA G 激光激活荡洗的流体力学机制分析。本实验对不同预备锥度下Er：YA G 激光的作用效果进行了对比。饵激光荡洗可以通过增强根管内荡洗液流体动力，增强机械预备的荡洗效果。树脂离体牙模型实验研究目的是通过对饵激光激活荡洗形成的气泡动力分析，评估不同牙体组织机械预备条件下饵激光的荡洗效果，探索最小根管预备量，为微创机械预备提供临床指导。树脂离体牙模型分组参考既往研究 10 ，根据终末化学消毒前临床常用机械预备锥度进行设计分组。基于研究目的，本实验选择了小一号的根尖孔直径和锥度，未纳人30/.0 6 组，也未采用.0 9或者.12锥度。此外，13/.0 2 组虽然为通道机扩常见型号，而目前临床尚无法实现在该锥度下的理想充填，不是终末化学消毒前的常见锥度，因而未设立该组。树脂根管模型空泡观测实验中，树脂根管模型采用三维打印。在设计打印图纸的过程中我们尝试在树脂根管模型中区分解剖性根尖孔和生理性根尖孔，然而我们发现目前绝大部分三维打印材料的精度无法实现构建解剖性根尖孔到生理性根尖孔的细小结构。因此，实验中树脂模型的根尖孔指解剖性根尖孔。678赵斯佳，等.Er：YA G 激光激活荡洗对不同机械预备锥度根管系统的荡洗效果研究分析结果发现，在相同的单脉冲能量下，15/.0 5组根尖冷沸腾气泡灰度积分均显著低于2 0/.0 6 及25/.08组，2 0/.0 6 与2 5/.0 8 组间均未见明显差异，与前述牙髓残留的实验结果相一致。气泡的灰度是通过对照片里蒸汽气泡阴影的观测，进行积分得到。气泡灰度反映了由气泡带来的光吸收率变化过程，可以表征流场混乱程度，在一定程度上体现了流场的强弱。因此,灰度不能直接对应临床意义，只能提示饵激光激活荡洗形成的流体场状态。灰度积分越大，流体场越强，荡洗效果可能越好。既往研究证实，Er：YA G 激光在根管内通过荡洗液吸人-流出循环流动对侧壁产生剪切应力，从而将侧壁牙髓组织从根管侧壁分离 7 空泡的膨胀缩过程会在根管内诱导产生高速流动。由于黏性作用，荡洗液在根管壁产生剪切应力，从而将玷污层剥离17 。当根管锥度较小时，一方面，根管口处直径与根管体积较小，荡洗液移动空间不足,因此流人根管内的流体动能更少；另一方面，更小的锥度会导致根管内流体的剪切作用增强，流体受到的阻滞作用更大，也会导致流体动能减少 18 。由牛顿内摩擦定律可得，根管壁所受的剪切应力随壁面附近流体运动速度的增加而增加。因此流体动能减少将导致根管壁所受的剪切应力缩小。因此当锥度为15/.0 5时，荡洗液流人根管的动能较少而耗散更多、流体运动速度较低，根管壁面所受的剪切应力更小，荡洗液的掺混程度更低，因此表征流场混乱程度的根尖区冷沸腾气泡灰度积分明显更小,根管的荡洗清洁效果相对较差。在根管锥度分别为2 0/.0 6 和2 5/.0 8 时，根管体积和锥度均较大，流体运动速度也较大，两组根管壁面处的剪切应力均足够清除附着的牙本质碎屑，因此两组间荡洗清洁效果差异无统计学意义。由此我们推测，饵激光荡洗可能可以对6%以上预备宽度的残留牙髓组织进行有效松解，使其足以被荡洗液中的NaClO分解，并进一步被流动产生的剪切应力去除。近年来，随着Er：YA G 激光荡洗研究的深人，根管预备微创治疗逐渐受到关注。虽然较大的根管预备宽度和锥度可以提高根管冲洗的有效性，然而,牙本质壁的大量损失可能导致根管结构减弱 19，增加根折风险 2 0 。因此,减小预备宽度对降低牙本质微裂以及处理复杂根管具有一定意义。既往研究建立粪肠球菌感染根管模型，实验结果发现NaCIO荡洗下，机械预备2 0#组与机械预备至40#辅助Er：YA G激光荡洗组，在根管10 0 30 0 m深度的细菌减少率均相当 2 1。也有研究发现,2 5/.0 2 组与2 5/.0 6组间Er：YA G 激光的杀菌效果并无显著差异 2 2 另一项研究显示，根管预备至15/.0 4并采取Er：YAG激光辅助NaCIO荡洗，可最大限度减少根管内细菌残留 2 3此外，为对应树脂离体牙的空穴效应气泡观测结果，本实验中牙髓清理效果评估采用离体牙连续纵切，选择根尖区完整的组织学切片层面进行统计，仅进行了定性测量和判断。本实验对根管峡部、侧支根管等位置尚未进行细致、完善的评价，仍有待于进一步明确和验证。综上所述，Er：YA G 激光辅助根管治疗可以高效地清除根尖区牙髓组织，可以用来替代部分机械预备，从而实现相对微创的机械预备 2 4，最大化保存牙体组织。参考文献1Rath PP,Yiu CKY,Matinlinna JP,et al.The effect of root canalirrigants on dentin:A focused review J.Restor Dent Endod,2020,45(3):e39.2Wang H,Yang XQ,Zou L,et al.Shaping outcome of ProTaperNEXT for root canal preparation in mandibular incisors:A micro-CT studyJ.BMC Oral Health,2022,22(1):302.3Ossareh A,Rosentritt M,Kishen A.Biomechanical studies on theeffect of iatrogenic dentin removal on vertical root fracturesJ.JConserv Dent,2018,21(3):290-296.4Cheng XG,Xiang DD,He WX,et al.Bactericidal effect of Er:YAG laser-activated sodium hypochlorite irrigation 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