PMS2通过ERK_ERCC1通路对结肠癌SW480细胞生物学行为的影响.pdf

第 49 卷 第 4 期2023年 7 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.4Jul.2023DOI：10.13481/j.1671587X.20230414PMS2通过 ERK/ERCC1通路对结肠癌 SW480细胞生物学行为的影响黄雪茹1,丁绪浩1,陈素贤2,谭琦2,吴月明3,牛晓敏1,王亚帝4,佟青1（1.锦州医科大学附属第三医院临床检验诊断学教研室，辽宁 锦州 121000；2.锦州医科大学附属第三医院病理科，辽宁 锦州 121000；3.锦州医科大学附属第三医院肿瘤二科，辽宁 锦州 121000；4.锦州医科大学附属第三医院精准医学中心，辽宁 锦州 121000）摘要 目的目的：探讨减数分裂后分离蛋白 2（PMS2）表达对结肠癌 SW480 细胞生物学行为的影响，阐明 PMS2与切除修复交叉互补组 1（ERCC1）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号转导通路的关系。方法方法：将 PMS2 siRNA 质粒和 PMS2过表达质粒分别转染入结肠癌 SW480细胞（分别为 PMS2敲减组和 PMS2 过表达组），同时设 PMS2 敲减对照组（siRNA-NC 组）和 PMS2 过表达对照组（PMS2 control组）。采用实时荧光定量 PCR（RT-qPCR）法检测各组细胞中 PMS2 mRNA 表达水平，Western blotting法检测各组细胞中 PMS2蛋白表达水平，CCK-8法检测各组细胞增殖活性，细胞划痕实验检测各组细胞迁移率，Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数，流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率。通过 String数据库，对 PMS2、ERCC1和 ERK上下游蛋白的关系进行生物信息学分析。SW480细胞分别采用 3条 siRNA 进行 PMS2和 ERCC1敲减，采用 RT-qPCR 法验证 PMS2与ERCC1 的 相 互 作 用，采 用 Western blotting 法 检 测 各 组 细 胞 中 PMS2、细 胞 外 调 节 蛋 白 激 酶 1/2（ERK1/2）和磷酸化 ERK1/2（p-ERK1/2）蛋白表达水平。结果结果：RT-qPCR 法和 Western blotting法检测，PMS2基因敲减和过表达细胞模型构建成功。与 siRNA-NC 组比较，PMS2 敲减组细胞增殖活性和细胞迁移率明显升高（P0.05或 P0.01），侵袭细胞数明显增加（P0.01），顺铂作用后细胞凋亡率明显降低（P0.01）；与 PMS2 control组比较，PMS2过表达组细胞增殖活性和细胞迁移率明显 降 低（P0.01），侵 袭 细 胞 数 明 显 减 少（P0.01），顺 铂 作 用 后 细 胞 凋 亡 率 明 显 升 高（P0.01）。蛋白-蛋白互作（PPI）富集 P 值为 2.09e-07，包含 ERCC1和 ERK1/2等相互作用节点数共有13个，提示 PMS2、ERCC1和 ERK1/2之间可能存在调控作用。与 siRNA-NC 组比较，各 PMS2敲减组细胞中 ERCC1 mRNA 表达水平明显降低（P0.05 或 P0.05）。与 siRNA-NC 组比较，PMS2 敲减组细胞中 PMS2、ERK1/2 和 p-ERK1/2 蛋白表达水平均明显降低（P0.05 或 P0.01）；与 PMS2 control组比较，PMS2过表达组细胞中 PMS2、ERK1/2和 p-ERK1/2蛋白表达水平均明显升高（P0.01）。结论结论：PMS2表达可影响结肠癌 SW480细胞增殖、迁移、侵袭和抗凋亡能力。PMS2与 ERCC1存在互相作用关系，并可通过调节 ERCC1参与 ERK信号转导通路。关键词 结肠肿瘤；SW480细胞；减数分裂后分离蛋白 2；切除修复交叉互补组 1；细胞外调节蛋白激酶 1/2；信号通路中图分类号 R735.35文献标志码 文章编号 1671587X(2023)04093110收稿日期 20220720基金项目 辽宁省教育厅科学研究经费项目（JYTJCZR2020071）作者简介 黄雪茹（1992），女，辽宁省丹东市人，在读硕士研究生，主要从事临床检验方面的研究。通信作者 佟青，教授，主任检验师，硕士研究生导师（E-mail：）；王亚帝，副教授（E-mail：）931第 49 卷 第 4 期 2023 年 7 月吉林大学学报（医学版）Effect of PMS2 on biological behaviors of colon cancer SW480 cells through ERK/ERCC1 pathwayHUANG Xueru1,DING Xuhao1,CHEN Suxian2,TAN Qi2,WU Yueming3,NIU Xiaomin1,WANG Yadi4,TONG Qing1（1.Department of Clinical Laboratory Diagnostics，Third Affiliated Hospital，Jinzhou Medical University，Jinzhou 120001，China；2.Department of Pathology，Third Affiliated Hospital，Jinzhou Medical University，Jinzhou 120001，China；3.Department of Oncology，Third Affiliated Hospital，Jinzhou Medical University，Jinzhou 120001，China；4.Precision Medicine Center，Third Affiliated Hospital，Jinzhou Medical University，Jinzhou 120001，China）ABSTRACT Objective：To discuss the effect of the expression of post-meiotic segregated protein 2（PMS2）on the biological behaviors of colon cancer SW480 cells，and to clarify the relationships between PMS2 and excision repair cross-complementation group 1（ERCC1）and extracellular regulated protein kinase（ERK）signal transduction pathway.Methods：The PMS2 siRNA and PMS2 over-expression plasmids were respectively transfected into the colon cancer SW480 cells（knockdown group and PMS2 over-expression group）.The PMS2 knockdown control group（siRNA-NC group）and PMS2 over-expression control group（PMS2 control group）were wet up.Real-time fluorescence quantitative PCR（RT-qPCR）method was used to detect the expression levels of PMS2 mRNA in cells in various groups；the expression levels of PMS2 protein in the cells in various groups were detected by Western blotting method；the proliferation activities of cells in various groups were detected by CCK-8 assay；cell scratch test was used to detect the migration rates of cells in various groups；the numbers of invasion cells in various groups were detected by Transwell chamber assay；the apoptotic rates of cells in various groups after cisplatin treatment were detected by flow cytometry；bioinformatics analysis was performed on the relationship between upstream and downstream proteins of PMS2，ERCC1，and ERK by using String Database；the PMS2 and ERCC1 knockdown in the SW480 cells were treated with 3 siRNA.The RT-qPCR method was used to verify the reaction between PMS2 and ERCC1；the expression levels of PMS2，extracellular regulated protein kinases 1/2（ERK1/2），and phosphorylated ERK1/2（p-ERK1/2）proteins in the cells in various groups were detected by Western blotting method.Results：The RT-qPCR and Western blotting results showed that the cell model of PMS2 gene knockdown and over-expression was successfully established.Compared with siRNA-NC group，the cell proliferative activity and cell migration rate in PMS2 knockdown group were increased（P0.05 or P0.01），the number of invasion cells was increased（P0.01），the apoptotic rate was decreased after cisplatin treatment（P0.05）；compared with PMS2 control group，the cell proliferative activity and cell migration rate in PMS2 over-expression group were decreased（P0.05），the number of invasion cells was decreased（P0.01），and the apoptotic rate was increased after cisplatin treatment（P0.05）.The protein-protein interaction（PPI）enrichment P value was 2.09e-07，including a total of 13 interaction nodes such as ERCC1 and ERK1/2，suggesting that there might be a regulatory effect between PMS2，ERCC1 and ERK1/2.Compared with siRNA-NC group，the expression levels of ERCC1 mRNA in the cells in various PMS2-knockout groups were significantly decreased（P0.05 or P0.05）.Compared with siRNA-NC group，the expression levels of PMS2，ERK1/2，and p-ERK1/2 proteins in the cells in PMS2 knockdown group were decreased（P0.05 or P0.01）；compared with PMS2 control group，the expression levels of PMS2，ERK1/2，and p-ERK1/2 proteins in the cells in 932黄雪茹，等.PMS2通过 ERK/ERCC1通路对结肠癌 SW480细胞生物学行为的影响PMS2 over-expression group were increased（P0.05）.Conclusion：PMS2 expression can affect the proliferation，migration，invasion，and anti-apoptotic abilities of the colon cancer SW480 cells.PMS2 interacts with ERCC1 and participates in ERK signaling transduction pathway by regulating ERCC1.KEYWORDS Colon neoplasms；SW480 cells；Posteiotic segregation increased 2；Excision repair cross-complementation group 1；Extracellular regulated protein kinases 1/2；Signaling pathway结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，其发病率逐年升高，且发病人群逐渐年轻化1。目前对结肠癌发生发展机制和特异性生物标志物的研究主要涉及体细胞突变、基因融合、遗传不稳定性和表观遗 传 学 改 变 等2。错 配 修 复（mismatch repair，MMR）是正常机体重要的修复方式，前期研究3显示：结肠癌中 MMR 蛋白缺失率以减数分裂后分离 蛋 白 2（posteiotic segregation increased 2，PMS2）最高，提示 PMS2 可作为结肠癌的重要监测指标，但其具体调控机制尚未阐明。在级联反应中，细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）磷酸化会激活各种转录因子，调控细胞生理学过程，同时也参与肿瘤的发生发 展 过 程4。切 除 修 复 交 叉 互 补 组 1（excision repair cross-complementation group 1，ERCC1）是 ERK 下游转录因子之一，可识别损伤 DNA 并修复。研究5-6显示：PMS2和 ERCC1在幽门螺杆菌诱导的早期和晚期胃癌组织上皮细胞核中的表达水平均明显降低，在肠型和弥漫型胃癌组织上皮细胞核中表达完全缺失或低表达，在早期结肠癌组织中ERCC1 和 PMS2 蛋 白 表 达 缺 失，提 示 PMS2 与ERCC1 具有协同作用。本研究旨在从细胞水平研究 PMS2 表达对结肠癌 SW480 细胞生物学行为的影响，进一步探讨 PMS2 与 ERCC1和 ERK 信号转导途径的关系，为研究 PMS2在结肠癌发生发展中的作用提供理论依据。1 材料与方法 1.1细胞细胞、主要试剂和仪器主要试剂和仪器结肠癌 SW480 细胞（武汉普诺赛生命科技有限公司）。引物由北京博迈德基因技术有限公司合成。pcDNA3.1-3xflag-C质粒（广州优宝生物科技有限公司），小干扰 RNA（small interfering RNA，siRNA）（苏州吉玛基因股份有限公司），Higene 转染试剂（北京普利莱基因技术有限公司），质粒提取试剂盒 天根生化科技（北 京）有 限 公 司，DMEM 培 养 基（美 国Hyclone 公司），CCK-8 试剂盒（苏州新赛美生物科技有限公司），PCR 反转录和扩增试剂盒（南京诺唯赞生物科技股份有限公司），PMS2 和 ERCC1单克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司），细胞外调节蛋白激酶 1/2（extracellular regulated protein kinases 1/2，ERK1/2）和 磷 酸 化ERK1/2（phosphorylated-ERK 1/2，p-ERK1/2）单克隆抗体（美国 Cell Signaling Technology 公司），-actin 单克隆抗体（南京巴傲得生物科技有限公司），二抗（美国 Earthox公司），超敏 ECL 化学试剂盒（上海碧云天生物技术有限公司），凋亡检测试剂盒（北京四正柏生物科技有限公司）。Leica DM1000显微镜（德国 LEICA 公司），流式细胞检测仪（美国BD公司），多功能酶标仪、自动凝胶成像仪和实时荧 光 定 量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）仪（美国 Thermo公司）。1.2 PMS2 基 因 敲 减 和 过 表 达 细 胞 模 型 制 备基 因 敲 减 和 过 表 达 细 胞 模 型 制 备 SW480 细胞在含 10%胎牛血清和 1%青-链霉素双抗的 DMEM 培养基中，置于 5%CO2、37 细胞培养箱内培养。SW480 细胞按每孔 5105个细胞的密度铺板，密度达 60%80%时按转染试剂说明书分别将 PMS2 siRNA 质粒（siPMS2-2190、siPMS2-373 和 siPMS2-679）及其阴性对照质粒分别转入 SW480 细胞中，根据 PMS2 mRNA 表达水平确定最佳 siPMS2 转染质粒用于后续实验，同时将 PMS2 过表达 pcDNA3.1-3xflag-C 质粒及其对照质粒转染入 SW480 细胞，故实验分为 PMS2 敲减组、PMS2 敲减对照（siRNA-NC）组、PMS2 过表达组和 PMS2过表达对照（PMS2 control）组。1.3 RT-qPCR 法 检 测 各 组 细 胞 中法 检 测 各 组 细 胞 中 PMS2 和和ERCC1 mRNA 表达水平表达水平TRIzol法提取各组细胞总 RNA，按 照 反 转 录 试 剂 盒 说 明 进 行 模 板 链cDNA 合成，引物序列见表 1。按照 RT-qPCR试剂盒说明书进行检测，实验重复 3 次，采用 2Ct法计 算 各 组 细 胞 中 PMS2 和 ERCC1 mRNA 表 达水平。1.4Western blotting 法检测各组细胞中法检测各组细胞中 PMS2、ERCC1、ERK1/2 和和 p-ERK1/2 蛋 白 表 达 水 平蛋 白 表 达 水 平 细胞分组见“1.2”。RIPA 裂解液提取各组细胞总蛋白，BCA 试剂盒进行蛋白定量。将提取的933第 49 卷 第 4 期 2023 年 7 月吉林大学学报（医学版）蛋白样品按每孔 30 g 进行 SDS-PAGE 蛋白电泳。转至 PVDF膜后封闭 1 h，清 洗 后 加 一 抗（PMS2 11 500，ERCC1 11 000，p-ERK1/2 12 000，ERK1/2 11 000，-actin 19 000）4 孵育过夜，使用 ECL 试剂盒曝光成像，以-actin为内参，计算目的蛋白表达水平，实验重复 3次。目的蛋白表达水平=目的蛋白条带灰度值/-actin蛋白条带灰度值。1.5CCK-8 法检测各组细胞增殖活性法检测各组细胞增殖活性细胞分组见“1.2”。细胞铺板后转染，置于 37、5%CO2培养箱中分别培养 24、48 和 72 h，更换无血清培养基，每孔加入 10 L CCK-8试剂，继续培养 2 h，采用酶标仪检测 450 nm 波长处吸光度（A）值，以 A 值表示各组细胞增殖活性。实验重复 3次。1.6细胞划痕实验检测各组细胞迁移率细胞划痕实验检测各组细胞迁移率细胞分组见“1.2”。以每孔 5105个细胞的密度铺板，细胞贴壁后进行转染，6 h 后更换完全培养基。待细胞生长至 90%95%时，用 200 L 无菌枪头垂直于背面线条轻轻划下，PBS 缓冲液清洗 3次洗去漂浮细胞，更换无血清培养基。5 倍物镜下，0、24、36 和 48 h 时进行同一位置处观察拍照，计算细胞迁移率，实验重复 3 次。细胞迁移率=（0 h 划痕面积48 h划痕面积）/0 h划痕面积100%。1.7Transwell小室实验检测各组细胞中侵袭细胞小室实验检测各组细胞中侵袭细胞数数细胞分组见“1.2”。无血清培养基稀释基质胶并取 100 L 均匀涂于 Transwell小室中，成胶后每孔接种 3104个细胞，同时进行细胞转染，下孔板加入 600 L 完全培养基，37、5%CO2培养箱中培养 48 h。加入 4%多聚甲醛 600 L 后室温固定30 min，0.1%结晶紫染色 10 min，清洗风干后，在 20倍镜下选取 5个视野观察并计数侵袭细胞。实验重复 3次。1.8流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率率细胞分组见“1.2”。培养皿内接种细胞，每孔3106个，贴壁后转染，同时每孔加入 10 mgL1顺铂，48 h后收集各组培养基中全部细胞。去离子水 13 稀释结合缓冲液，200 L 重悬细胞沉淀，调节其密度为 1107mL1，取 100 L 细胞悬液于5 mL 流式管中，加入 5 L Annexin/FITC 混匀后室温避光孵育 30 min，加入 10 L 7-AAD，并加入 400 L PBS 缓冲液，采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率，实验重复 3次。细胞凋亡率=凋亡细胞数/细胞总数100%。1.9String 数据库分析数据库分析 PMS2 与与 ERCC1 和和 ERK的互相作用的互相作用在 String 数据库中使用蛋白-蛋白互作（protein-protein interaction，PPI）网 络 分 析，对 PMS2、ERCC1 和 ERK 上下游蛋白的相互作用关系进行生物信息学分析，获得相应的关系网络图。1.10 RT-qPCR 法 和法 和 Western blotting 法 验 证法 验 证PMS2与与 ERCC1和和 ERK的相互作用的相互作用将 SW480细胞分别用siPMS2-2190、siPMS2-373和siPMS2-679 3 条 siRNA 进行 PMS2 敲减，并设转染 siRNA-NC质粒的对照组（siRNA-NC 组），采用 RT-qPCR 法检测各组细胞中 ERCC1 mRNA 表达水平；随后将SW480细胞分别用 siERCC1-294、siERCC1-559和siERCC1-632 3 条 siRNA 进行 ERCC1 敲减，并设转 染 siERCC1-NC 质 粒 的 对 照 组（siERCC1-NC组），采 用 RT-qPCR 法 检 测 各 组 细 胞 中 PMS2 mRNA 表 达 水 平。细 胞 分 组 见“1.2”，采 用Western blotting 法 检 测 各 组 细 胞 中 PMS2、ERK1/2 和 p-ERK1/2 蛋白表达水平，具体方法和步骤见“1.4”。1.11统计学分析统计学分析采用 SPSS 22.0统计软件进行统计学分析。各组细胞中 PMS2 和 ERCC1 mRNA表达水平，各组细胞增殖活性、细胞迁移率和侵袭细胞数，各组细胞中 PMS2、ERCC1、ERK1/2 和p-ERK1/2 蛋白表达水平，均符合正态分布，以xs表示，进行方差齐性检验，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间样本均数两两比较采用 LSD-t检验。以 P0.05为差异有统计学意义。2 结 果 2.1 PMS2 基 因 敲 减 和 过 表 达 后 各 组 细 胞 中基 因 敲 减 和 过 表 达 后 各 组 细 胞 中PMS2 mRNA 和蛋白表达水平和蛋白表达水平将 SW480 细胞分别 用 siPMS2-2190、siPMS2-373和siPMS2-679 3 条 siRNA 进行 PMS2 基因敲减，与 siRNA-NC 组比较，各 PMS2 敲减组细胞中 PMS2 mRNA 表达表表 1RT-qPCR引物序列引物序列TabTab.1 1Primer sequences of RTPrimer sequences of RT-qPCRqPCRPrimerPMS2ERCC1-actinSequence（53）Forward:CCTATTGATCGGAAGTCAGTCCAReverse:CTACTAACTCCTTTACCGCAGTGForward:CCCTGGGAATTTGGCGACGTAAReverse:CTCCAGGTACCGCCCAGCTTCForward:ACACTGTGCCCATCTACGAGGReverse:AGGGGCCGGACTCGTCATACT934黄雪茹，等.PMS2通过 ERK/ERCC1通路对结肠癌 SW480细胞生物学行为的影响水平明显降低（P0.01），siPMS2-373 组细胞中PMS2 mRNA 表达水平降低最明显，故后续实验中采 用 siPMS2-373 质 粒 进 行 PMS2 基 因 敲 减；与PMS2 control 组 比 较，PMS2 过 表 达 组 细 胞 中PMS2 mRNA 表 达 水 平 明 显 升 高（P0.01）。见图 1。与 siRNA-NC 组比较，PMS2 敲减组细胞中 PMS2 蛋白表达水平明显降低（P0.01）；与PMS2 control 组 比 较，PMS2 过 表 达 组 细 胞 中PMS2 蛋 白 表 达 水 平 明 显 升 高（P0.05）。见图 2。2.2各组各组 SW480 细胞增殖活性细胞增殖活性与 siRNA-NC 组比较，不同时间点 PMS2敲减组细胞增殖活性明显升高（P0.05或 P0.01）；与 PMS2 control组比较，不同时间 PMS2过表达组细胞增殖活性明显降低（P0.01）。见表 2。2.3各组各组 SW480 细胞迁移率细胞迁移率细胞划痕实验 48 h时，与 siRNA-NC 组（30.90%0.20%）比 较，PMS2 敲减组细胞迁移率（48.02%1.59%）明显升高（P0.01）；与PMS2 control组（28.03%0.86%）比较，PMS2过表达组细胞迁移 率（12.72%0.98%）明 显 降 低（P0.01）。见图 3。2.4各组各组 SW480 细胞中侵袭细胞数细胞中侵袭细胞数Transwell小室实验，与 siRNA-NC 组（51.00 个5.57 个）比 较，PMS2 敲 减 组 细 胞 中 侵 袭 细 胞 数（146.00 个11.53 个）明显增多（P0.01）；与PMS2 control 组（61.33 个 3.79 个）比 较，PMS2 过表达组细胞中侵袭细胞数（29.33 个 2.52个）明显减少（P0.01）。见图 4。2.5顺铂作用后各组顺铂作用后各组 SW480细胞凋亡率细胞凋亡率以浓度为 10 mgL1的顺铂分别作用于各组 SW480 细胞，与siRNA-NC组（39.47%0.55%）比 较，PMS2 敲减组细胞凋亡率（29.07%0.38%）明显 降低（P0.01）；与PMS2 control组（53.07%0.50%）比较，PMS2 过表达组细胞凋亡 率（67.17%0.40%）明 显 升 高（P0.42）包 含ERCC1 和 ERK1/2 等相互作用节点共 13 个，提示PMS2、ERCC1和 ERK1/2之间可能存在相互作用关系。2.7PMS2与与 ERCC1相互作用关系验证相互作用关系验证SW480细 胞 分 别 用siPMS2-2190、siPMS2-373和siPMS2-679 3 条 siRNA 进行 PMS2 基因敲减，与siRNA-NC 组比较，各 PMS2 敲减组细胞中 PMS2和 ERCC1 mRNA 表达水平均明显降低（P0.05或P0.01）（图 7A 和 7B）。SW480 细 胞 分 别 用siERCC1-559、siERCC1-294 和 siERCC1-632 3 条A：Expression of PMS2 mRNA after down-regulation of PMS2 gene；B：Expression of PMS2 mRNA after over-expression of PMS2 gene.*P0.01 vs siRNA-NC group；P0.01 vs PMS2 control group.图图 1RT-qPCR法检测各组细胞中法检测各组细胞中 PMS2 mRNA表达水平表达水平Fig.1Expression levels of PMS2 mRNA in cells in various groups detected by RT-qPCR method935第 49 卷 第 4 期 2023 年 7 月吉林大学学报（医学版）siRNA 进行 ERCC1 基因敲减，与 siERCC1-NC 组比较，各 ERCC1 敲减组细胞中 ERCC1 mRNA 表达水平明显降低（P0.05）（图7C和 7D）。2.8 各 组各 组 SW480 细 胞 中细 胞 中 PMS2、ERK1/2 和和p-ERK1/2 蛋白表达水平蛋白表达水平与 siRNA-NC 组比较，PMS2 敲减组细胞中 PMS2、ERK1/2 和 p-ERK1/2蛋白表达水平均明显降低（P0.05 或 P0.01）；与 PMS2 control 组比较，PMS2 过表达组细胞中PMS2、ERK1/2和 p-ERK1/2蛋白表达水平均明显升高（P0.01）。见图 8。3 讨 论 结肠癌的发生发展是多因素和多通路共同作用的结果7-8。研究9显示：PMS2 低表达或缺陷的结肠癌在右结肠更常见，与本课题组前期研究3结果一致。研究10表明：结直肠癌患者可因自身胚系突变导致 PMS2蛋白不表达、低表达或表达缺陷，参与结肠癌的发生，PMS2被认为是一种肿瘤候选抑癌基因。PMS2在鼻咽癌、结直肠癌和子宫内膜癌等肿瘤组织中表达下调11-12，且 PMS2参与肿瘤的发生发展过程。本研究结果显示：敲减PMS2 基因后 SW480 细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强，而过表达 PMS2 基因后 SW480 细胞增殖、迁移和侵袭能力明显减弱。研究13表明：下调 PMS2 表达可促进结肠癌 SW480 细胞增殖、迁移和侵袭能力，可能与遗传不稳定性的产生有关，即 PMS2 表达减少可能是结肠癌进展的早期步骤。PMS2基因过表达促进肿瘤细胞凋亡，顺铂作用后可增强其所致的凋亡作用，而 MMR 缺乏的肿瘤细胞在应用顺铂造成 DNA 损伤后的促凋亡作用明显减弱14。本研究中，应用顺铂后 PMS2 过表达组细胞凋亡率升高而 PMS2 敲减组细胞凋亡率降低，与上述研究结果一致。研究13表明：在正常结肠组织或癌旁组织中ERCC1呈高表达，提示 ERCC1的低表达可能导致结肠癌的发生，进一步说明 ERCC1 与 PMS2 对肿瘤发展作用可能一致。本研究结果显示：敲减PMS2 基 因 后 SW480 细 胞 中 ERCC1 表 达 随 之 下调，而敲减 ERCC1 后 SW480 细胞中 PMS2 表达未见明显变化，说明在 PMS2 与 ERCC1 的相互作用中，PMS2可能位于调控通路的上游。研究15-16显示：ERCC1 在结直肠癌肝转移组织中的低表达与Lane 1：siRNA-NC group；Lane 2：siRNA-PMS2 group；Lane 3：PMS2 control group；Lane 4：PMS2 over-expression group；1：siRNA-NC group；2：siRNA-PMS2 group；3：PMS2 control group；4：PMS2 over-expression group.*P0.01 vs siRNA-NC group；P0.05 vs PMS2 control group.图图 2Western blotting法检测各组细胞中法检测各组细胞中 PMS2蛋白表达蛋白表达电泳图电泳图（A）和直条图和直条图（B）Fig.2 Electrophoregram（A）and histogram（B）of expressions of PMS2 protein in cells in various groups detected by Western blotting method表表 2CCK-8法检测各组细胞增殖活性法检测各组细胞增殖活性TabTab.2 2Proliferation activities of cells in various groups detected by CCKProliferation activities of cells in various groups detected by CCK-8 8 assay assay(n=5，xs）GroupsiRNA-NCsiRNA-PMS2PMS2 controlPMS2 over-expressionProliferation activity（t/h）24 0.4290.1120.4940.256*0.5450.0560.4530.023480.5960.5160.7660.385*0.8050.0380.6680.310721.0800.1051.4880.144*1.2270.0821.0150.608*P0.05，*P0.01 vs siRNA-NC group；P0.01 vs PMS2 control group.936黄雪茹，等.PMS2通过 ERK/ERCC1通路对结肠癌 SW480细胞生物学行为的影响图图 3细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况细胞划痕实验检测各组细胞迁移情况（5）Fig.3Migration of cells in various groups detected by cell scratch assay（5）A：siRNA-NC group；B：siRNA-PMS2 group；C：PMS2 control group；D：PMS2 over-expression group.图图 4Transwell小室实验检测各组细胞侵袭情况小室实验检测各组细胞侵袭情况（结晶紫结晶紫，20）Fig.4Invasion of cells in various groups detected by Transwell chamber assay（Crystal violet，20）A：siRNA-NC group；B：siRNA-PMS2 group；C：PMS2 control group；D：PMS2 over-expression group.图图 5流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率流式细胞术检测顺铂作用后各组细胞凋亡率Fig.5Apoptotic rates of cells in various groups after treated with cisplatin