白藜芦醇对酒精依赖致大鼠肝损伤的相关研究.pdf

白藜芦醇对酒精依赖致大鼠肝损伤的相关研究郑天翼安子宜任禹霖王瑞媛赵国旭杨 勇刘洪凤岳 辉(.牡丹江医学院黑龙江 牡丹江.河北省开滦总医院河北唐山.温州医科大学浙江温州)摘要:目的 观察白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝损伤的保护作用 方法 大鼠()雄性随机数字表法分为空白对照组、酒精依赖模型组选用 酒精以及双瓶自由饮方式构造酒精依赖模型模型制备成功将其随机分为酒精依赖模型组、白藜芦醇高、中、低剂量治疗组每组 只 白藜芦醇治疗后提取大鼠肝脏组织检测肝组织超氧化物歧化酶()、谷胱甘肽过氧化物酶()、过氧化氢酶()和丙二醛()水平应用实时荧光定量聚合酶链反应()方法检测大鼠肝脏组织中腺苷酸活化蛋白激酶()、过氧化物酶体增生物激活受体()和过氧化物酶体增殖物激活受体 辅激活因子()的基因表达水平 结果 与空白组比酒精依赖模型组大鼠肝组织、与 均成下降趋势(.)酒精依赖模型组大鼠肝组织 明显增高(.)与酒精依赖模型组比白藜芦醇高剂量和中剂量治疗组、与 显著增高(.)显著下降(.)与空白组比较酒精依赖模型组大鼠肝脏、和 相对表达量显著降低与酒精依赖模型组比白藜芦醇高和中剂量组对、和 的表达显著升高(.)结论白藜芦醇可以有效改善酒精依赖大鼠肝脏组织氧化应激相关指标其机制可能是白藜芦醇通过激活/信号通路降低肝脏组织氧化应激损伤进而对酒精依赖大鼠的肝脏发挥了保护作用关键词:白藜芦醇酒精依赖氧化应激 中图分类号:.文献标识码:文章编号:()基金项目:黑龙江省自然科学基金项目()黑龙江省卫生健康委科研课题项目()黑龙江省省属高校基本科研业务费项目()作者简介:郑天翼()女硕士研究生研究方向:病理学与病理生理学酒精依赖肝损伤 通讯作者:岳辉讲师研究方向:淋巴瘤发生机制、纳米材料对肿瘤早期诊断治疗的基础研究 ():.()()()().()()()().(.)(.).(.)(.).(./()和酒精偏好(饮酒量占总液体摄入量的百分比)逐渐稳定在 时即成功制备 大鼠酒精依赖模型建模过程中由于大鼠饮酒量不足和体重原因剔除 只大鼠再将建模成功的酒精依赖模型大鼠随机分为 组每组 只酒精依赖模型组()、白藜芦醇治疗组(高、中、低剂量)(、)白藜芦醇各剂量治疗组灌胃、/()白藜芦醇空白、模型组按 /()给予生理盐水灌胃 周连续灌胃 用药结束 后处死大鼠取完整肝脏组织冻存备用.样样本本的的采采集集与与指指标标检检测测 治疗结束后禁食水 处死大鼠取部分肝组织备用 采用南京建成生物工程的、和 按照相应说明书测定肝组织中、和 含量.法法检检测测大大鼠鼠肝肝组组织织 、和和 表表达达水水平平 取各组大鼠肝组织加入 试剂提取总 检测浓度后以.纯度为的样本作为 提取液 按照试剂盒说明书完成逆 转 录 配 制 反 应 体 系:上游引物.下游引物.灭菌水.模板 扩增条件为:第 步:预变性 、循环 次第 步:反应循环:、循环 次溶解曲线仪器自动设置 引物序列见表 表 引物序列 值 年 月 牡丹江医学院学报 第 卷 第 期 数据分析方法结果表达水平采用使用 计算首先计算每一组样品 值(目的基因)(内参基因)计算 值(实验组)(对照组)最后通过计算出相对表达量.统统计计学学方方法法 所有实验数据采用 表录入数据分析采用 .计量资料采用“均数标准差”表示实验数据正态分布检验符合正态性多组间比较采用单因素方差分析方差没有显著性应用 进行多重比较方差具有显著性采用 检验 正态分布检验不符合正态性采用 非参数检验以中位数(四分位数间距)展示数据 结果.白白藜藜芦芦醇醇治治疗疗组组对对酒酒精精依依赖赖大大鼠鼠肝肝组组织织 、和和 水水平平的的影影响响 五组大鼠肝组织、和 方差分析结果具有显著性差异(.)、(.)、(.)、(.)与空白组相比酒精依赖模型组大鼠肝组织 水平明显升高(.)与酒精依赖模型组比较白藜芦醇高、中、低治疗组大鼠肝组织 水平显著下降(.)、(.)、(.)与空白组相比酒精依赖模型组大鼠肝组织 水平明显降低(.)与酒精依赖模型组比较白藜芦醇高和中治疗组大鼠肝组织 水平显著升高(.)、(.)与空白组相比酒精依赖模型组大鼠肝组织 水平明显降低(.)与酒精依赖模型组比较白藜芦醇高、中、低治疗组大鼠肝组织 水平显著升高(.)、(.)、(.)与空白组相比酒精依赖模型组大鼠肝组织 水平明显降低(.)与酒精依赖模型组比较白藜芦醇高、中、低治疗组大鼠肝组织 水平显著升高(.)、(.)、(.)见表 图 表 白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝组织、和 的影响()组别(/)(/)(/)(/).注:与空白组比较.与模型组比较.图 白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝组织、和 的影响注:、和 表达水平的统计学分析与空白组比较.与模型组比较.)方差没有显著性(.)五组多重比较有统计学意义(.)模型组与空白组比较差异有统计学意义(.)白藜芦醇高剂量组与模型组差异有统计学意义()白藜芦醇中剂量组与模型组差异有统计学意义(.)其中白藜芦醇中剂量治疗组 相对表达量最接近空白组详见表、图 表达情况该组数据符合正态分布(.)方差具有显著性(.)方差没有显著性(.)五组数据多重比较有统计学意义(.)模型组与空白组相比较差异有统计学意义()白藜芦醇中剂量组与模型组差异有统计学意义()白藜芦醇中剂量治疗组 相对表达量最接近正常组详见表、图 表 白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝组织、与 相对表达量的影响()组别.注:表示与空白对照组比较.表示与模型对照组比较.图 白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝脏组织、与 相对表达量的影响注:、与 表达水平的统计学分析与空白对照组比较.与模型对照组比较.讨论 具有抗氧化功能 及其下游因子是重要的能量代谢信号途径改善氧化应激常见的有/样受体热蛋白结构域相关蛋白()通路、/核因子 相关基因()通路、蛋白质酪氨酸磷酸酯酶()/通路等 可以通过多种信号通路消除因氧化应激形成的活性氧()堆积哺乳动物雷帕霉素靶蛋白()/通路可以改变线粒体功能障碍从而改善 的过度生成 等人提出辣木叶通过增强抗氧化剂防御系统通过激活 保护细胞免受氧化应激损伤 受到上游 的调控 的激活剂可以有效激活 抑制氧化应激损伤减少 释放 研究发现 参与 信号通路介导肝细胞抗氧化功能 酒精性肝损伤中 阻断 积累并激活了/线粒体融合蛋白()信号 综上 作为 下游因子又是线粒体新生过程必备的基因线粒体的损伤修复转移因子 过量酒精摄入抑制 的表达代谢产物抑制了脂肪酸 氧化引发 失活 水平受影响导致线粒体功能障碍肝组织的氧化应激反应恶化酒精依赖性肝损伤发病过程包括脂质堆积、细胞器应激、炎细胞浸润、肝细胞死亡以及肝星状细胞参与的纤维化以上过程均会受到氧化应激的刺激而加重病情 肝脏是乙醇代谢的主要场所乙醇和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸()通过乙醇脱氢酶代谢为乙醛和生成还原性()导致 的比例增加、脂肪酸 氧化被抑制和线粒体功能障碍肝组织氧化应激 另一方面乙醇通过细胞色素 ()基因的代谢途径导致 副产物产生加剧氧化应激酒精暴露下的肝脏内乙醇及其代谢产物乙醛、氧自由基等对肝脏具有不同程度的毒性作用 酒精代谢产物导致脂质堆积脂质的过氧化破坏了细胞器结构氧化应激反应加剧 受损肝细胞活性降低抗氧化酶、等水平降低氧化应激标志物 以及 水平增加 因此改善氧化应激成为缓解酒精依赖肝损伤的关键 多靶点、毒副作用小的中药发挥抗氧化作用在酒精依赖肝损伤治疗过程中应用前景广泛中药复方或是其有效成分都具有清除氧自由基增强抗氧化酶指标活性的能力 年 月 牡丹江医学院学报 第 卷 第 期 白藜芦醇具有显著的抗氧化作用通过蛋白激酶()/肝激酶()/通路/信号通路肝脏沉默信息调节因子()/通路白藜芦醇可以调控 的表达水平逆转线粒体功能障碍和氧化应激 临床实验结果证实了白藜芦醇可以改善血清中氧化应激标志物的影响 因此白藜芦醇的抗氧化特性在 治疗中存在着多种可能机制综上所述本实验结果表明酒精依赖大鼠肝组织内、和 的表达水平受到显著抑制给与白藜芦醇治疗后、和 表达上调白藜芦醇增强抗氧化酶活性恢复肝脏氧化平衡环境 综上所述白藜芦醇对酒精依赖性大鼠的肝损伤具有保护作用其机制可能是通过激活/信号通路从而改善大鼠肝脏氧化应激反应来实现 本实验研究为白藜芦醇对酒精依赖致大鼠肝脏损伤的保护作用提供了科学的实验依据参考文献 姚立群柯昌荣亓建羽等.年我国与世界不同社会人口学指数地区归因于饮酒导致的疾病负担比较分析.中国卫生经济():.():.于丹丹杨雪雯杨立群.酒精依赖伴抑郁患者心理干预研究进展.中国药物依赖性杂志():.吴菲倪照军高雪娇等.酒精依赖成瘾的机制及治疗研究进展.中国医刊():.龚元东徐晓慧鹿子龙等.年山东省居民酒精摄入归因死亡分析.疾病监测():.():.():.:.()():.().():.刘洪凤郑天翼王瑞媛等.白藜芦醇对酒精依赖大鼠肝脏的影响.吉林中医药():./.():./.():.():./.():.():./.():./.():.():.():.张茹曲中原杜娟.基于/通路探讨五指毛桃醇提取物对酒精性肝损伤小鼠的抗氧化保护机制.中药新药与临床药理():./.():./.():./.():.:.():.(收稿日期:本文编辑:郭丽双)年 月 牡丹江医学院学报 第 卷 第 期