QuEChERS-UPLC-MS_MS同时测定鸡肉中80种兽药残留.pdf

基金项目：湖 南 创 新 型 省 份 建 设 专 项 重 点 研 发 项 目（编 号：）作者简介：李宏，男，湖南省产商品质量检验研究院工程师，硕士。通信作者：向俊（），女，湖南省产商品质量检验研究院高级工程师，博士。：收稿日期：改回日期：犇 犗 犐：犼 狊 狆 犼 狓 文章编号 （）同时测定鸡肉中 种兽药残留 李宏犔 犐犎 狅 狀 犵向俊，犡 犐 犃犖犌犑 狌 狀，李丹犔 犐犇 犪 狀李丽娟犔 犐犔 犻 犼 狌 犪 狀何青科犎犈犙 犻 狀 犵 犽 犲（湖南省产商品质量检验研究院食品安全监测与预警湖南省重点实验室，湖南 长沙 ；中南大学化学化工学院，湖南 长沙 ；湖南食品药品职业学院，湖南 长沙 ）（犎 狌 狀 犪 狀犘 狉 狅 狏 犻 狀 犮 犻 犪 犾 犐 狀 狊 狋 犻 狋 狌 狋 犲狅 犳犘 狉 狅 犱 狌 犮 狋犪 狀 犱犌 狅 狅 犱 狊犙 狌 犪 犾 犻 狋 狔犐 狀 狊 狆 犲 犮 狋 犻 狅 狀，犎 狌 狀 犪 狀犘 狉 狅 狏 犻 狀 犮 犻 犪 犾犓 犲 狔犔 犪 犫 狅 狉 犪 狋 狅 狉 狔狅 犳犉 狅 狅 犱犛 犪 犳 犲 狋 狔犕 狅 狀 犻 狋 狅 狉 犻 狀 犵犪 狀 犱犈 犪 狉 犾 狔犠 犪 狉 狀 犻 狀 犵，犆 犺 犪 狀 犵 狊 犺 犪，犎 狌 狀 犪 狀 ，犆 犺 犻 狀 犪；犆 犲 狀 狋 狉 犪 犾犛 狅 狌 狋 犺犝 狀 犻 狏 犲 狉 狊 犻 狋 狔，犛 犮 犺 狅 狅 犾 狅 犳犆 犺 犲 犿 犻 狊 狋 狉 狔犪 狀 犱犆 犺 犲 犿 犻 犮 犪 犾犈 狀 犵 犻 狀 犲 犲 狉 犻 狀 犵，犆 犺 犪 狀 犵 狊 犺 犪，犎 狌 狀 犪 狀 ，犆 犺 犻 狀 犪；犎 狌 狀 犪 狀犉 狅 狅 犱犪 狀 犱犇 狉 狌 犵犞 狅 犮 犪 狋 犻 狅 狀 犪 犾犆 狅 犾 犾 犲 犵 犲，犆 犺 犪 狀 犵 狊 犺 犪，犎 狌 狀 犪 狀 ，犆 犺 犻 狀 犪）摘要：目的：建立一种同时测定鸡肉中包括喹诺酮类、磺胺类、受体激动剂类、糖皮质激素类、大环内酯类、抗病毒类药物、四环素类等在内的 种兽药的 超高效液相色谱串联质谱法（）分析方法。方法：样品经甲酸乙腈水溶液提取，多兽 药残 留净 化 柱 净 化，超 高 效 液 相 色 谱串 联 质 谱（）多反应监测模式检测，基质标准曲线外标法定量。结果：种兽药在特定质谱条件下响应性高，样品在质谱检测条件下检测灵敏，无杂峰干扰。种药物质量浓度在 的范围内，线性关系良好，相关系数 均 大 于 。种 兽 药 的 方 法 检 出 限 均 为。样品中，加标浓度的平均回收率为 ，相对标准偏差为 。结论：种药物在样品中加标回收率均符合 实验室质量控制规范食品理化检测 标准要求，适用于鸡肉中 种兽药残留的筛查测定。关键词：兽药残留；超高效液相色谱串联质谱法；鸡肉犃 犫 狊 狋 狉 犪 犮 狋：犗 犫 犼 犲 犮 狋 犻 狏 犲：，（）犕 犲 狋 犺 狅 犱 狊：，（），犚 犲 狊 狌 犾 狋 狊：，；犆 狅 狀 犮 犾 狌 狊 犻 狅 狀：犓 犲 狔 狑 狅 狉 犱 狊：；兽药是指用于预防、治疗、诊断动物疾病，或者有目 第 卷第期 总第 期 年月的地调节动物生理机能的物质。目前常用的兽药有喹诺酮类、磺胺类、受体激动剂类、糖皮质激素类、大环内酯类、四环素类、抗病毒类药物等。兽药残留是指食品动物用药后，动物产品的任何食用部分中与所用兽药有关的物质的残留，包括原型兽药或和其代谢产物。滥用兽药极易造成动物源食品中兽药残留，这些药物通过食物链在人体蓄积，从而导致人体产生过敏反应或者产生抗药性等副作用。目前，中国国家标准关于动物源性食品中兽药残留检测主要以分类检测为主，一个样品要经过多种前处理方式，多种检测手段进行检测，这需要耗费大量的财力、人力、物力和时间。同时，动物源性食品的食品基质复杂，基质干扰较大，兽药种类繁多。近年来，国内外对动物源性食品中兽药残留检测方法研究主要集中在样品前处理方法研究以及检测技术上。常用的前处理方法主要有：固相萃取法、固液萃取法、基 质固 相 萃取 法、快 速 净 化法 等。主要的检测技术包括：液相色谱法 、液相色谱串联质谱法 等。快速净化法是一种新型的快速净化样品前处理方法，其具有操作简单、快速、环保、价廉等优点。液相色谱串联质谱法因其具有分离能力强、灵敏度高、选择性强以及准确度高等优点而被广泛应用于动物源性食品中兽药残留检测。研究拟使用 新型的快速净化样品前处理方法处理鸡肉样品，建立鸡肉中 种兽药残留检测液相色谱串联质谱分析方法，以期实现对鸡肉中多种兽药残留的同时测定。材料与方法材料与试剂 种磺胺混合标准物质、种喹诺酮混合标准物质、种大环内酯混合标准物质、种糖皮质激素混合标准物质、种受体激动剂混合标准物质、种四环素类混合标准物质：质量浓度，天津阿尔塔科技有限公司；金刚烷胺标准物质、尼卡巴嗪代谢物标准物质：质量浓度，上海安谱实验科技股份有限公司；多兽药残留净化柱、多兽药残留净化柱：日本岛津公司；固相萃取柱：上海安谱实验科技股份有限公司；微 孔 滤 膜：上 海 安 谱 实 验 科 技 股 份 有 限公司；甲酸、乙腈：色 谱 级，上 海 安 谱 实 验 科 技 股 份 有 限公司；乙酸铵：分析纯，上海安谱实验科技股份有限公司；所用水均为超纯水；实际样品来源于湖南省 个地州市国家监督抽检样品。仪器设备超高效 液 相 色 谱 串 联 质 谱 联 用 仪：型，美 国 公司；高速冷冻离心机：型，美国贝克曼库尔特有限公司；电子分析天平：型，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；多管 涡 旋 振 荡 器：数 显 型，美 国 公司；超纯水机制备系统：型，美国 公司。试验方法样品前处理准确称取样品于 离心管中，加入 甲酸乙腈溶液，涡旋混匀，于高速振荡器中振荡提取 ，离心 。取 上清液通过已用乙腈活化的 多兽药残 留 净 化 柱，接 收 滤 液，室 温 下 氮 吹 至 近 干，用甲酸乙腈溶液溶解定容至，过 有机滤膜，分析。溶液的配制（）甲 酸 溶 液：准 确 吸 取 甲 酸 于 容量瓶中，用水定容至 。（）甲 酸 乙 腈 溶 液：准 确 吸 取 甲 酸 于 容 量 瓶 中，加 水，用 乙 腈 定 容 至 。（）乙 酸 铵：准 确 称 取 乙 酸 铵 于 容量瓶中，纯水定容至 。（）甲酸溶液 乙酸铵溶液：准确吸取 乙酸铵于 容量瓶中，甲酸溶液定容至 。标准溶液的配制（）混合标准溶液配制：准确移取一定量的混合标准溶液，用乙腈配制成 标准储备液，再将 储备液稀释成 的混合标准使用溶液，于 冷冻保存。（）基质标准溶液配制：用空白基质鸡肉样品按照样品前处理获得空白基质溶液，采用空白基质溶液配制成，的标准工作溶液。液 相 色 谱 条 件色 谱 柱：（，）；柱温：；进样量：；流速：；流动相：甲酸 乙酸铵（）和甲醇（），梯度洗脱条件见表。，李宏等：同时测定鸡肉中 种兽药残留表流动相及梯度洗脱条件 时间 甲酸 乙酸铵甲醇 停止质谱条件离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描（）；毛细管电压：；离子源温度：；检测方式：多反应监测（）；碰撞气：氩气；加热气：氮气；雾化气：氮气；具体监测条件见表。数据处理谱图在 软件上处理，可疑样品通过保留时间、定性离子、定量离子及离子峰度比匹配进行定性确证，外标法计算各组分含量。结果与分析提取溶剂选择通过查阅文献以及结合食品安全国家标准，将 种兽药按照类别分为喹诺酮类、磺胺类、受体激动剂类、糖皮质激素类、大环内酯类、抗病毒类药物、四环素类个大类，在空白鸡肉样品中加入 含量的标准物质，以类药物的平均回收率为考察指标，考察种不同提取溶剂对目标分析物的提取效果，提取溶剂分别是甲醇、乙腈、甲酸乙腈水溶液以及 缓冲溶液。结果如图所示。结果发现：甲醇、乙腈作为提取溶剂提取时，总体回收率偏低，尤其是受体激动剂类，回收率。原因可能在于甲醇、乙腈溶液能够使蛋白沉淀变性，当样品中加入纯的甲醇或者乙腈时，鸡肉样品表面蛋白迅速变性后结块，不利于目标分析物的提取；缓冲溶液进行提取时样品分散，提取较完全，但 缓冲溶液提取剂中蛋白含量高，溶剂混浊，不利于样品净化与检测，其整体平均回收率水平低于甲酸乙腈水溶液的提取水平；甲酸乙腈水溶液作为提取溶剂既能分散样品基质，使目标分析物提取完全，同时部分乙腈溶液能够沉淀蛋白，使样品提取剂离心后较澄清，杂质相对较少，同时甲酸可以增强目标物分析信号，提高检测灵敏度。因此，选取甲酸乙腈水溶液作为提取溶剂。净化条件的优化在空白鸡肉样品中加入 含量的标准物质，以类药物的平均回收率为考察指标，考察 图提取溶剂对类药物残留的提取效果 多兽药残留净化柱、多兽药残留净化柱、固相萃取柱种不同的多功能固相萃取净化柱对目标分析 物 的 提 取 效 果，结 果 如 图所 示。结 果 发 现：多兽药残留净化柱净化效果较好，上机溶剂澄清，且 操 作 简 便，快 捷。所 有 分 析 物 的 回 收 率 在 。多兽药残留净化柱净化效果一般，杂质较多，且受体激动剂类药物平均回收率，不满足检测要求。固相萃取柱操作复杂且过柱速度慢，某些分析物回收率较低，如受体激动剂类药物和抗病毒类药物，不满足检验要求。因此，选择 多兽药残留净化柱进行净化。方法选择性按照液相色谱条件，质谱条件进行 种兽药仪器分析，获得 种兽药分析图谱。按照样品前处理方法，制备空白样品、空白鸡肉样品及鸡肉加标样品，上机分析，结果见图。图固相萃取柱对类药物残留的提取效果 安全与检测 总第 期 年月图 种兽药仪器总离子色谱图、空白总离子色谱图、空白鸡肉样品总离子色谱图及空白鸡肉样品加标总离子色谱图 ，由图可知，种兽药在特定仪器色谱、质谱条件下响应性高，分离度较好，满足样品定性和定量要求。空白色谱图中仪器基线噪音小，空白鸡肉样品在质谱检测条件下检测灵敏，基本无杂峰干扰。综上所述，该方法选择性良好，灵敏度较高，能满足样品快速检验要求。线性结果及方法检出限以药物浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，外标法定量，绘制标准曲线，种药物质量浓度在 的范围内，线性良好，相关系数均大于。将 种兽药混合标准储备溶液用空白基质溶液逐级稀释后，以倍信噪比的溶液浓度计算方法检出限，得出该方法中 种兽药的方法检出限均为。添加回收结果将空白鸡肉样品进行，含量加标后，按照前处理方法处理后上机，平行测试份样品，重复次考察回收率和相对标准偏差（），具体结果见表。添加水平的平均回收率为 ，为 ；添加水平的平均 回 收 率 为 ，为 ；添加水平的平均回收率为 ，为 。种药物在鸡肉样品中加标回收率符合 实验室质量控制规范食品理化检测 标准要求。实际样品检测根据 食品安全监督抽检和风险监测实施细则 中的采样要求，采用研究建立的鸡肉中 种常用兽药残留检测方法，完成了鸡肉样品兽药残留监测 批次，监测情况见表。其中：长沙、株洲、湘潭、邵阳、郴州、衡阳、娄底、益 阳个 地 区 的 样 品 检 出 兽 药 残 留；长 沙 共 抽 样 批次，检出兽药残留样品批次，检出率为；由于其他地区样品基数不够多，且问题样品主要集中在少数几个企业，导致部分地区的问题样品所占比率较高。批次鸡肉样品中有 批次检出兽药残留，检出率为。其中：检出违禁兽药金刚烷胺批次，不合格率为；检出违禁兽药尼卡巴嗪批次，不合格率为。鸡肉样品检出兽药残留原因在于鸡饲养过程主要采取笼养方式进行，鸡养殖密度大，容易致病。同时，鸡成长期较短，因此使用兽药的休药期较短，这直接导致鸡兽药残留检出数概率增大。建议：禽类养殖场在使用兽药过程中严格遵守兽药的休药期尤其是产蛋鸡的休药期，从而减少禽类产品中的兽药残留；金刚烷胺和尼卡巴嗪为严禁使用兽药，企业需要严格遵守兽药使用规则；市场监管部门应加强对企业尤其是禽类养殖企业的监督，以确保禽类产品安全。结论研究建立了 超高效液相色谱串联质谱法（）测定鸡肉中 种兽药残留的分析检测方法，对提取溶剂、净化条件以及方法选择性因素进行了优化，对方法灵敏度和准确度进行验证，并对实际样 ，李宏等：同时测定鸡肉中 种兽药残留表 种药物多反应监测（）参数及鸡肉加标回收率和 结果 药物名称保留时间 离子对（犿狕）碰撞能 添加水平 回收率 回收率 回收率 恩诺沙星 环丙沙星 氧氟沙星 诺氟沙星 培氟沙星 洛美沙星 达氟沙星 伊诺沙星 沙拉沙星 双氟沙星 司帕沙星 吡派酸 西诺沙星 萘啶酸 氟甲喹 氟罗沙星 奥比沙星 喹酸 麻保沙星 螺旋霉素 阿奇霉素 氨基泰霉素 竹桃霉素 红霉素 泰乐菌素 克拉霉素 罗红霉素 莱克多巴胺 沙丁胺醇 特布他林 息喘宁 克伦特罗 妥洛特罗 戊巴洛尔 普萘洛尔 氯丙那林 群勃龙 睾酮 甲睾酮 去甲睾酮 安全与检测 总第 期 年月续表药物名称保留时间 离子对（犿狕）碰撞能 添加水平 回收率 回收率 回收率 醋酸甲地孕酮 泼尼松 泼尼松龙 皮质醇 甲泼尼龙 地塞米松 倍他米松 可的松 氟地塞米松 曲安奈德 磺胺醋酰 磺胺甲噻二唑 磺胺二甲异唑 磺胺氯吡嗪 磺胺氯哒嗪 磺胺嘧啶 磺胺甲基异唑 磺胺噻唑 磺胺间甲氧嘧啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺邻二甲氧嘧啶 磺胺吡啶 磺胺对甲氧嘧啶 磺胺甲氧哒嗪 磺胺二甲嘧啶 磺胺苯吡唑 磺胺间二甲氧嘧啶 磺胺脒 磺胺二甲异嘧啶 磺胺恶唑 磺胺苯酰 磺胺喹恶啉 磺胺硝苯 甲氧苄啶 金刚烷胺 尼卡巴嗪 土霉素 四环素 金霉素 强力霉素 ，李宏等：同时测定鸡肉中 种兽药残留表不同地区鸡肉中兽药残留监测结果 样品类别样品数兽药残留检出数检出率问题样品问题数问题率长沙 株洲 湘潭 衡阳 邵阳 常德 益阳 娄底 郴州 永州 怀化 张家界 岳阳 湘西 合计 品进行检验论证。结果表明：所建方法前处理操作简单、快速、灵敏度高、准确度好。将该方法应用于实际样品检测中，成功检测出鸡肉中违禁兽药。该方法快速准确，方法可靠，适用于鸡肉中 种兽药残留常规检测及日常监督检测工作中。参考文献?中国国家标准化管理委员会?动物源性食品中?种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱质谱质谱法?北京?中国标准出版社?中国国家标准化管理委员会?动物源性食品中受体激动剂残留检测方法液相色谱质谱质谱法?北京?中国标准出版社?中国国家标准化管理委员会?动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定高效液相色谱质谱质谱法?北京?中国标准出版社?中国国家标准化管理委员会?动物源性食品中四环素类兽药残留量检测方法液相色谱质谱质谱法与高效液相色谱法?北京?中国标准出版社?张秋云?杨洪生?谭秀慧?等?液相色谱串联质谱测定水产品中?种苯二氮卓类镇静剂的药物残留?食品与机械?（?）?（?）?张今君?夏慧丽?高海波?等?液相色谱串联三重四极杆复合线性离子阱质谱法测定水生蔬菜中?种抗生素?食品与机械?（?）?（?）?（?）?（下转第 页）安全与检测 总第 期 年月?王萍?朱渊?乔勇升?等?包装饮用水中铜绿假单胞菌?种鉴定方法的比较?生物加工过程?（?）?（?）?慕妮?何薛纯?樊青青?等?包装饮用水中铜绿假单胞菌检测方法的比较分析?生物化工?（?）?（?）?冯秀娟?高俊峰?董川?核酸等温环介导荧光检测法检测包装饮用水中的铜绿假单胞菌?食品科技?（?）?（?）?（?）?（?）?吴春明?李洪涛?覃慧敏?等?建立?实时?定量方法检测铜绿假单胞菌?水平?中华医院感染学杂志?（?）?（?）?黄河?易晓明?王铁军?等?一种铜绿假单胞菌核酸荧光?检测试剂盒及检测方法?徐璇?钟礼立?张兵?等?荧光实时定量?检测铜绿假单胞菌方法建立及价值?中国医师杂志?（?）?（?）?钟杰?包装饮用水中铜绿假单胞菌检测?造纸装备及材料?（?）?（?）?杨曼琼?荧光实时定量?检测铜绿假单胞菌?基因方法学的建立及运用?长沙?中南大学?韩娜?彭贤慧?张婷婷?等?一种新的定量?基因扩增子测序方法?生物工程学报?（?）?（?）?（?）?（上接第 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