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植物组织培养课程论文--——百合的组织培养研究.docx

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资源描述

1、百合的组织培养天津师范大学生命科学学院植物组织培养课程论文百合的组织培养研究摘要:百合是百合科百合属,多年生草本球根植物。是著名的观赏花卉,可食用,有很高的利用价值。利用组织培养进行繁育是百合无毒化和商品化的必要途径。由于百合的常规繁殖率低,易感染病毒,所以对繁殖技术提出了更高的要求,人工繁殖技术对百合具有重要的意义。本实验主要通过植物组织培养手段,以MS为基本培养基,以百合鳞茎为外植体,对其进行灭菌消毒,并置于温度为25摄氏度,湿度为80%的温箱中,8小时睡眠16小时光照的情况下进行培养。随后观察其生长情况,并拍照记录。本次实验外植体成功发育成愈伤组织,并长出芽。此实验主要在于掌握植物组织培

2、养技术,了解其方法过程。关键词:组织培养;百合;无菌操作目录摘要I一、文献综述11.1百合组织培养技术进展11.2植物组织培养概述1参考文献:2二、百合植物组织培养32.1实验试剂32.2仪器32.3生物材料3三、实验步骤33.1培养基的配制33.1.1配制培养基母液的配制方法33.1.2 完全培养基的制备43.2兰州百合外植体灭菌处理和初代培养4四、实验结果及讨论54.1实验结果54.2讨论10百合的组织培养一、文献综述1.1百合组织培养技术进展百合植物资源丰富,栽培历史悠久,花色多样,它不仅适用于庭院栽培,布置花境,也可盆栽观赏,并早已成为花卉研究领域的佼佼者。百合虽然观赏性很高,但大多抗

3、性很弱,尤其抗寒性。一般在东北地区种植商品百合时, 每年秋季必须起球,窖藏或者冷库存放,这大大增加了百合的生产成本,限制了东北地区花卉业的发展。随着百合在国内外鲜切花市场的走俏,百合花生产和消费逐年增加,但由于百合种球繁殖率低,病毒侵染造成退化,难于满足切花生产需要。目前主要采用组织培养进行百合脱毒和快速繁殖,以促进百合商品种球的生产。但是百合试管苗小鳞茎较小,结鳞茎时间较长,移植成活率低,制约了工厂化商品生产。目前国内繁殖百合主要通过进口鳞茎进行繁殖。但是市场售价较高,而且有时鳞茎质量难以保证、繁殖率低、易造成鳞茎退化。采用组织培养的方法在很短时间内可以得到大量的组培苗,而且一般在第二年即可

4、开花。11.2植物组织培养概述植物组织培养是一种将植物体的部分细胞或组织与母体分离,在适当的条件下加以培养,使它们能够生长、发育、分化与增殖的技术。原理是来自植物细胞的全能性分化能力,也就是植物体内的某一类细胞,能够独立发育并且分化成为完整的植物成体。植物组织培养能够以少量的母体培养出大量的植物,这使植物组织培养有许多的用途,例如基础植物学与遗传学研究,以及农业上的育种与品种保留。2植物组织培养是根据植物细胞具有全能性的理论,利用植物体离体的器官、组织或细胞以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下,能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根,最后形成完整的植株。1902年,德国著名植物学

5、家G.Haberlanclt根据细胞学理论,大胆地提出了高等植物的器官和组织可以不断分割,直到单个细胞,即植物体细胞,在适当的条件下,具有不断分裂和繁殖,发育成完整植株的潜力的观点。1943年,美国人White在烟草愈伤组织培养中,偶然发现形成一个芽,证实了G.Haberlanclt的论点。组织培养选用的基础培养基一般较多采用的是MS。采用固体培养基较多,因为相比液体培养基,固体培养基在操作上更方便,被广泛使用。在基础培养基里添加一定的外源激素,可以诱导出愈伤组织、胚状体、不定芽、根等器官,最终可获得再生植株或者次生产物。常用的激素类型有生长素类、细胞分裂素类、赤霉素等。3参考文献:1:周威,

6、百合的组织培养,科技向导,2011年第09期2:https:/zh.wikipedia.org/wiki/%E6%A4%8D%E7%89%A9%E7%B5%84%E7%B9%94%E5%9F%B9%E9%A4%8A3:梁一池,杨华,植物组织培养技术的研究进展,福建林学院学报,2002, 22(1):93-96二、百合植物组织培养2.1实验试剂NH4NO3, KNO3, CaCl22H2O, MgSO47H2O, KH2PO4, KI, H2BO3,MnSO44H2O, ZnSO47H2O, Na2MoO42H2O, CuSO45H2O, CoCl26H2O, Na2EDTA2H2O,FeSO4

7、7H2O,烟酸,甘氨酸, 盐酸硫胺素, 肌醇, 盐酸吡哆醇;琼脂,蔗糖,蒸馏水,NAA,6-BA,1mol/L HCl,1mol/L NaOH;75%酒精。2.2仪器冰箱、天平、酸度计或pH试纸、电炉、高压灭菌锅、超净工作台、光照培养箱、三角瓶、容量瓶、量筒、移液管、烧杯、培养皿、滤纸、牛皮纸、绳、玻璃棒、镊子、刀等。2.3生物材料百合三、实验步骤3.1培养基的配制 3.1.1配制培养基母液的配制方法 a) 大量元素的配制:依次称取KNO3 19g、NH4NO3 16.5g、MgSO47H2O 3.7g、KH2PO4 0.17g、CaCl22H2O 4.4g ,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,然后

8、再将它们混溶,以防互相发生反应,最后用容量瓶定容至1L,转入试剂瓶中,贴上标签,置冰箱冷藏保存。 b) 微量元素的配制:依次称取MnSO44H2O 2.23g、ZnSO47H2O 0.86g、H3BO3 0.32g、KI 0.083g、Na2Mo2H2O 0.025g、CuSO45H2O 0.0025g、CoCl26H2O 0.0025g ,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,再将它们混溶,最后用容量瓶定容至1L,转入试剂瓶中,贴上标签,置冰箱冷藏保存。 c) 铁盐的配制:称取FeSO47H20 1.390g、Na2EDTA1.856g,分别用少量的蒸馏水彻底溶解,再将它们混溶,最后用容量瓶定容至50

9、0ml,保存在玻璃瓶中,贴上标签,置冰箱冷藏保存。d) 有机物母液的配制: 依次称取甘氨酸0.1g、盐酸硫胺素 0.005g、盐酸吡哆醇0.025g、烟酸0.025g、肌醇5g,用少量蒸馏水充分溶解,最后定容至250ml,转入试剂瓶中,贴上标签,置冰箱冷藏保存。 e) 激素溶液的配制:分别称取6-BA、NAA各10mg,将6-BA用1ml的0.1mmol/L的NaOH溶液溶解,将NAA用1ml无水乙醇预溶,待溶解完全后,分别用容量瓶定容至100ml,即得到0.1mg/ml的母液(实验时按需要量取)。 3.1.2 完全培养基的制备 1. 取出母液并按添加顺序放好,将实验所需的量筒,移液枪,烧杯,

10、移液管,吸耳球和玻璃棒等放在实验台上,以备实验所需。 2. 取一干净的烧杯,加入1/3左右(配制培养基总量的1/3左右)的蒸馏水,取大量元素母液150ml、微量元素母液15ml、铁盐母液15ml、机物母液7.5ml,上述溶液移入容量瓶中,加蒸馏水定容。3. 将定容好的培养基倒入烧杯中,称取琼脂粉,倒入上面配好的溶液中,放在电炉上加热,直到琼脂粉完全熔化溶液透明。4. 然后称取蔗糖45g搅拌溶解。5. 初代培养基按1mg/L 6-BA 15微升、0.1mg/L NAA1.5微升。用移液枪精确量取所需激素母液,加入培养基中。 6. 用精密试纸或PH计调整pH至6.0。用配制好的0.1mol/L的H

11、Cl和0.1mol/L的NaOH溶液来调节pH值。 7. 稍微冷却后,分装入以洗净的三角培养瓶中。再用布塞和牛皮纸封口,最后用绳子扎紧。 8. 另取适量滤纸(多张/组)、培养皿(2套/组),用牛皮纸包好扎紧;另取去离子水适量装入盐水瓶,盖好塞子;另取小镊子和刀等包好(2套/组)。 9. 将步骤7、8所准备的物品统一放入高压锅内,120KPa灭菌30min左右。灭菌后从灭菌锅中取出培养基,平放在实验台上令其冷却凝固,放入超净台备用。在开始操作前将所用器材放入超净台,打开紫外灯进行消毒。3.2兰州百合外植体灭菌处理和初代培养 将买来的新鲜兰州百合的鳞茎拨开,洗去上面的泥土,在用流动的自来水冲洗2h

12、,用前再用蒸馏水洗1-2遍放到4度冰箱保存待用。在超净工作台上采用75%的酒精溶液侵泡90s,去离子水水冲洗3次,然后用3%NaClO3溶液浸泡15min,用去离子水冲洗3次,进行外植体消毒处理。然后放在无菌滤纸上,用无菌刀切成0.5cm大小的小块,凹面向上,接种于培养基上。每人接种1瓶,每瓶接种3块外植体。培养条件: 25、湿度80%、光照8h/d、光照强度2000lx。每5天向培养箱中加一次水,每隔两天进行观察和记录生长情况,一周左右鳞片的颜色会发生变化,由刚开始的白色慢慢有点变紫色,培养10天左右鳞片由淡绿色慢慢变为绿色。四、实验结果及讨论4.1实验结果图1:5月20日,第4天,生长正常

13、,边缘变成浅黑色图2、3:5月23日,第7天,无染菌现象,黑色边缘加深,表面有紫色纹路图4:5月27日,第11天,表面紫色加深,有绿色出现图5:5月30日,第14天,表面绿色加深,无染菌现象图6:6月3日,第18天,和上次相比没有太大变化,无染菌现象图7:6月6日,第21天,无太大变化,此时边缘变为深黑色图8、9:6月14日,第29天,长出芽图10:6月22日,第37天,芽变大4.2讨论在本次百合的植物组织培养实验中,我接种的锥形瓶中一次就成功长出了愈伤组织,且没有出现染菌现象。在接种后第十天左右,百合鳞茎表面出现绿色;第18天时观察到绿色加深;第29天时长出芽。总结实验成功原因如下:1、实验

14、台、器材等灭菌彻底,无菌操作严格,包扎严密,因此没有杂菌污染;2、配制母液时各试剂用量严格控制,保证没有某些物质过多或过少影响百合生长;3、培养环境适宜;4、接种时用镊子动作要轻,防止破坏组织;5、在接种过程中控制百合鳞茎在酒精中的浸泡时间;6、选取较为强壮的百合鳞茎,切成适宜的大小。但是在培养过程中外植体生长速度较慢,可能是因为培养箱内湿度不够,接种时鳞茎凹面朝下。通过本次实验,我认识到了无菌操作的重要性,并且在老师和学姐的悉心指导下,规范了操作动作,熟悉了实验步骤,积累了实战经验,为以后各学科的实验操作打下坚固基础。本课程论文是在李硕老师和学姐的悉心指导下完成的,特此感谢!1. 基于C80

15、51F单片机直流电动机反馈控制系统的设计与研究2. 基于单片机的嵌入式Web服务器的研究 3. MOTOROLA单片机MC68HC(8)05PV8/A内嵌EEPROM的工艺和制程方法及对良率的影响研究 4. 基于模糊控制的电阻钎焊单片机温度控制系统的研制 5. 基于MCS-51系列单片机的通用控制模块的研究 6. 基于单片机实现的供暖系统最佳启停自校正(STR)调节器7. 单片机控制的二级倒立摆系统的研究8. 基于增强型51系列单片机的TCP/IP协议栈的实现 9. 基于单片机的蓄电池自动监测系统 10. 基于32位嵌入式单片机系统的图像采集与处理技术的研究11. 基于单片机的作物营养诊断专家

16、系统的研究 12. 基于单片机的交流伺服电机运动控制系统研究与开发 13. 基于单片机的泵管内壁硬度测试仪的研制 14. 基于单片机的自动找平控制系统研究 15. 基于C8051F040单片机的嵌入式系统开发 16. 基于单片机的液压动力系统状态监测仪开发 17. 模糊Smith智能控制方法的研究及其单片机实现 18. 一种基于单片机的轴快流CO,2激光器的手持控制面板的研制 19. 基于双单片机冲床数控系统的研究 20. 基于CYGNAL单片机的在线间歇式浊度仪的研制 21. 基于单片机的喷油泵试验台控制器的研制 22. 基于单片机的软起动器的研究和设计 23. 基于单片机控制的高速快走丝电

17、火花线切割机床短循环走丝方式研究 24. 基于单片机的机电产品控制系统开发 25. 基于PIC单片机的智能手机充电器 26. 基于单片机的实时内核设计及其应用研究 27. 基于单片机的远程抄表系统的设计与研究 28. 基于单片机的烟气二氧化硫浓度检测仪的研制 29. 基于微型光谱仪的单片机系统 30. 单片机系统软件构件开发的技术研究 31. 基于单片机的液体点滴速度自动检测仪的研制32. 基于单片机系统的多功能温度测量仪的研制 33. 基于PIC单片机的电能采集终端的设计和应用 34. 基于单片机的光纤光栅解调仪的研制 35. 气压式线性摩擦焊机单片机控制系统的研制 36. 基于单片机的数字

18、磁通门传感器 37. 基于单片机的旋转变压器-数字转换器的研究 38. 基于单片机的光纤Bragg光栅解调系统的研究 39. 单片机控制的便携式多功能乳腺治疗仪的研制 40. 基于C8051F020单片机的多生理信号检测仪 41. 基于单片机的电机运动控制系统设计 42. Pico专用单片机核的可测性设计研究 43. 基于MCS-51单片机的热量计 44. 基于双单片机的智能遥测微型气象站 45. MCS-51单片机构建机器人的实践研究 46. 基于单片机的轮轨力检测 47. 基于单片机的GPS定位仪的研究与实现 48. 基于单片机的电液伺服控制系统 49. 用于单片机系统的MMC卡文件系统研

19、制 50. 基于单片机的时控和计数系统性能优化的研究 51. 基于单片机和CPLD的粗光栅位移测量系统研究 52. 单片机控制的后备式方波UPS 53. 提升高职学生单片机应用能力的探究 54. 基于单片机控制的自动低频减载装置研究 55. 基于单片机控制的水下焊接电源的研究 56. 基于单片机的多通道数据采集系统 57. 基于uPSD3234单片机的氚表面污染测量仪的研制 58. 基于单片机的红外测油仪的研究 59. 96系列单片机仿真器研究与设计 60. 基于单片机的单晶金刚石刀具刃磨设备的数控改造 61. 基于单片机的温度智能控制系统的设计与实现 62. 基于MSP430单片机的电梯门机

20、控制器的研制 63. 基于单片机的气体测漏仪的研究 64. 基于三菱M16C/6N系列单片机的CAN/USB协议转换器 65. 基于单片机和DSP的变压器油色谱在线监测技术研究 66. 基于单片机的膛壁温度报警系统设计 67. 基于AVR单片机的低压无功补偿控制器的设计 68. 基于单片机船舶电力推进电机监测系统 69. 基于单片机网络的振动信号的采集系统 70. 基于单片机的大容量数据存储技术的应用研究 71. 基于单片机的叠图机研究与教学方法实践 72. 基于单片机嵌入式Web服务器技术的研究及实现 73. 基于AT89S52单片机的通用数据采集系统 74. 基于单片机的多道脉冲幅度分析仪

21、研究 75. 机器人旋转电弧传感角焊缝跟踪单片机控制系统 76. 基于单片机的控制系统在PLC虚拟教学实验中的应用研究77. 基于单片机系统的网络通信研究与应用 78. 基于PIC16F877单片机的莫尔斯码自动译码系统设计与研究79. 基于单片机的模糊控制器在工业电阻炉上的应用研究 80. 基于双单片机冲床数控系统的研究与开发 81. 基于Cygnal单片机的C/OS-的研究82. 基于单片机的一体化智能差示扫描量热仪系统研究 83. 基于TCP/IP协议的单片机与Internet互联的研究与实现 84. 变频调速液压电梯单片机控制器的研究 85. 基于单片机-免疫计数器自动换样功能的研究与

22、实现 86. 基于单片机的倒立摆控制系统设计与实现 87. 单片机嵌入式以太网防盗报警系统 88. 基于51单片机的嵌入式Internet系统的设计与实现 89. 单片机监测系统在挤压机上的应用 90. MSP430单片机在智能水表系统上的研究与应用 91. 基于单片机的嵌入式系统中TCP/IP协议栈的实现与应用92. 单片机在高楼恒压供水系统中的应用 93. 基于ATmega16单片机的流量控制器的开发 94. 基于MSP430单片机的远程抄表系统及智能网络水表的设计95. 基于MSP430单片机具有数据存储与回放功能的嵌入式电子血压计的设计 96. 基于单片机的氨分解率检测系统的研究与开发

23、 97. 锅炉的单片机控制系统 98. 基于单片机控制的电磁振动式播种控制系统的设计 99. 基于单片机技术的WDR-01型聚氨酯导热系数测试仪的研制 100. 一种RISC结构8位单片机的设计与实现 101. 基于单片机的公寓用电智能管理系统设计 102. 基于单片机的温度测控系统在温室大棚中的设计与实现103. 基于MSP430单片机的数字化超声电源的研制 104. 基于ADC841单片机的防爆软起动综合控制器的研究105. 基于单片机控制的井下低爆综合保护系统的设计 106. 基于单片机的空调器故障诊断系统的设计研究 107. 单片机实现的寻呼机编码器 108. 单片机实现的鲁棒MRAC

24、S及其在液压系统中的应用研究 109. 自适应控制的单片机实现方法及基上隅角瓦斯积聚处理中的应用研究110. 基于单片机的锅炉智能控制器的设计与研究 111. 超精密机床床身隔振的单片机主动控制 112. PIC单片机在空调中的应用 113. 单片机控制力矩加载控制系统的研究 项目论证,项目可行性研究报告,可行性研究报告,项目推广,项目研究报告,项目设计,项目建议书,项目可研报告,本文档支持完整下载,支持任意编辑!选择我们,选择成功!项目论证,项目可行性研究报告,可行性研究报告,项目推广,项目研究报告,项目设计,项目建议书,项目可研报告,本文档支持完整下载,支持任意编辑!选择我们,选择成功!单片机论文,毕业设计,毕业论文,单片机设计,硕士论文,研究生论文,单片机研究论文,单片机设计论文,优秀毕业论文,毕业论文设计,毕业过关论文,毕业设计,毕业设计说明,毕业论文,单片机论文,基于单片机论文,毕业论文终稿,毕业论文初稿,本文档支持完整下载,支持任意编辑!本文档全网独一无二,放心使用,下载这篇文档,定会成功!11

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