中药制剂分析的一般程序精.pptx

第二节第二节 中药制剂分析的一般程序中药制剂分析的一般程序取样取样鉴别鉴别含量测定含量测定检查检查提取提取纯化纯化一、取样 1.取样均匀、合理、代表性 2.按规定方法取样 （中药材、中药制剂）二、鉴别二、鉴别（一）显微鉴别（一）显微鉴别 在下列情况中应用：药材及炮制在下列情况中应用：药材及炮制品的外形鉴别特征不明显或外形相似品的外形鉴别特征不明显或外形相似难于鉴别而组织构造不同时；药材破难于鉴别而组织构造不同时；药材破碎或呈粉末不易用肉眼辨认或区分时；碎或呈粉末不易用肉眼辨认或区分时；含原药材粉末的中药制剂。含原药材粉末的中药制剂。丸剂、片剂、胶囊剂、散剂丸剂、片剂、胶囊剂、散剂 快速，简便，覆盖面大快速，简便，覆盖面大选择原则选择原则 1 1、应选有专属性的特征进行、应选有专属性的特征进行鉴别鉴别 2 2、多来源的药材应选择共有、多来源的药材应选择共有的特征进行鉴别的特征进行鉴别安宫牛黄丸安宫牛黄丸1 1、水牛角浓缩粉、水牛角浓缩粉2 2、麝香、麝香3 3、珍珠、珍珠4 4、朱砂、朱砂5 5、雄黄、雄黄6 6、黄连、黄连7 7、栀子、栀子8 8、郁金、郁金9、黄芩、黄芩 显微化学反应鉴别法：一般可显微化学反应鉴别法：一般可取药材切片或粉末，中成药取粉末，取药材切片或粉末，中成药取粉末，置载玻片上，滴加各种试剂，加盖置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察产生的结晶、玻片，在显微镜下观察产生的结晶、沉淀物，以及特殊的颜色变化，作沉淀物，以及特殊的颜色变化，作为鉴别特征。该法可以确定基础品为鉴别特征。该法可以确定基础品种中特殊化学成分的存在及在组织种中特殊化学成分的存在及在组织中的分布。中的分布。(二）化学鉴别二）化学鉴别 抗干扰能力差抗干扰能力差显色、显色、荧光、荧光例例 二妙丸中苍术的鉴别二妙丸中苍术的鉴别苍术酮苍术酮苍术炔苍术炔（三）色谱鉴别（三）色谱鉴别TLCTLC法法应用最多（应用最多（R Rf f、颜色、荧光）、颜色、荧光）GCGC法法 适用于含挥发性成分的药适用于含挥发性成分的药物物HPLCHPLC法法常与含量测定同时进行常与含量测定同时进行鉴定有临床疗效的已知成分鉴定有临床疗效的已知成分黄连黄连 小檗碱（抗菌消炎）小檗碱（抗菌消炎）麻黄麻黄 麻黄碱（支气管哮喘）麻黄碱（支气管哮喘）乌头乌头 乌头碱（毒性）乌头碱（毒性）洋地黄洋地黄 强心苷（强心）强心苷（强心）延胡索延胡索 延胡索乙素（镇痛）延胡索乙素（镇痛）阴、阳对照法阴、阳对照法阳性对照阳性对照 将要鉴别的药材按制将要鉴别的药材按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶液溶液阴性对照阴性对照 把制剂中要鉴别的药把制剂中要鉴别的药材除去，用剩下的各味药按制剂工材除去，用剩下的各味药按制剂工艺处理，再按鉴别方法提取的溶液艺处理，再按鉴别方法提取的溶液 OO O O O O O O O O O 阴阴 样样 阳阳 对对 品品 对对例例大补阴丸大补阴丸大补阴丸大补阴丸 黄柏的黄柏的黄柏的黄柏的TLCTLCTLCTLC法鉴别法鉴别法鉴别法鉴别 样样品品对照对照药材药材小小檗檗碱碱O O OO O 例例薄层板的选择薄层板的选择薄层板的选择薄层板的选择 硅胶硅胶硅胶硅胶G G G G板（可加板（可加板（可加板（可加0.3%0.3%0.3%0.3%0.5%CMC-0.5%CMC-0.5%CMC-0.5%CMC-NaNaNaNa）多用多用多用多用氧化铝板氧化铝板氧化铝板氧化铝板 常用于生物碱类药物常用于生物碱类药物常用于生物碱类药物常用于生物碱类药物聚酰胺板聚酰胺板聚酰胺板聚酰胺板 常用于黄酮类及酚类常用于黄酮类及酚类常用于黄酮类及酚类常用于黄酮类及酚类 药物药物药物药物 纤维素板纤维素板纤维素板纤维素板 常用于氨基酸类药物常用于氨基酸类药物常用于氨基酸类药物常用于氨基酸类药物 （四）中药鉴别新技术中药指纹图（四）中药鉴别新技术中药指纹图谱（色谱）谱（色谱）1.1.定义：定义：中药材或中药制剂经适当处理中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的色谱分析手段，后，采用一定的色谱分析手段，得到的能够标定该中药材或中药得到的能够标定该中药材或中药制剂特性的共有峰的色谱图制剂特性的共有峰的色谱图2.2.色谱指纹图谱的基本属性色谱指纹图谱的基本属性 a.a.整体性整体性 将指纹图谱作将指纹图谱作为一个整体来分析和比较它的综合为一个整体来分析和比较它的综合特征以达到鉴别的目的。特征以达到鉴别的目的。b.b.模糊性模糊性 强调分析、比强调分析、比较指纹图谱的相似性，而不是完全较指纹图谱的相似性，而不是完全相同。相同。是一种综合的、量化的色是一种综合的、量化的色谱鉴别手段。谱鉴别手段。色谱指纹图谱在中药质量评价中色谱指纹图谱在中药质量评价中能够尽可能多地反应中药的全貌。能够尽可能多地反应中药的全貌。不需要清楚每一个组分的化学结不需要清楚每一个组分的化学结构；不需要对每一个组分都进行定量；构；不需要对每一个组分都进行定量；只要求不同批号的同一种药品的指纹只要求不同批号的同一种药品的指纹图谱保持一致。图谱保持一致。3.3.指纹图谱的应用指纹图谱的应用雅莲云莲味莲味莲雅莲雅莲云莲云莲IIIIII诃诃 子子小诃子小诃子大诃子大诃子绒毛诃子绒毛诃子人参须根人参须根人参主根人参主根不不同同产产地地高高良良姜姜的的气气相相指指纹纹图图谱谱指纹图谱研究过程中的注意事项：指纹图谱研究过程中的注意事项：1 1、在药效学指导下进行研究，保证、在药效学指导下进行研究，保证指纹图谱反映的化学成分包括中指纹图谱反映的化学成分包括中药材中有效部位所含的绝大部分药材中有效部位所含的绝大部分成分或有效成分的全部。成分或有效成分的全部。2 2、样品的预处理过程及测定方法应、样品的预处理过程及测定方法应简便、经济、易行，且专属性、简便、经济、易行，且专属性、准确度与重现性好。准确度与重现性好。三、杂质检查三、杂质检查水分水分水分水分总灰分和酸不溶性灰分总灰分和酸不溶性灰分总灰分和酸不溶性灰分总灰分和酸不溶性灰分重金属重金属重金属重金属砷盐砷盐砷盐砷盐残留农药残留农药残留农药残留农药 主要项目主要项目杂质来源及检查意义杂质来源及检查意义水分水分 结块、霉变或有效成分水解结块、霉变或有效成分水解灰分灰分 控制药物本身及泥土、沙石等控制药物本身及泥土、沙石等 无机杂质无机杂质重金属重金属 环境污染和使用农药引入环境污染和使用农药引入砷盐砷盐 剧毒，常由除草剂、杀虫剂或剧毒，常由除草剂、杀虫剂或 化肥引入化肥引入残留农药残留农药 有毒有毒（一）水分测定法（一）水分测定法烘干法（不含或少含挥发性成分）烘干法（不含或少含挥发性成分）甲苯法甲苯法 （含挥发性成分）（含挥发性成分）减压干燥法（含挥发性成分贵重药）减压干燥法（含挥发性成分贵重药）GCGC法法酸不溶性灰分的测定酸不溶性灰分的测定（二）总灰分和酸不溶性灰分的测定（二）总灰分和酸不溶性灰分的测定总灰分的测定总灰分的测定WHOWHO规定植物药规定植物药铅铅10ppm10ppm镉镉0.3ppm0.3ppm干法破坏干法破坏湿法破坏湿法破坏硫代乙酰胺法硫代乙酰胺法（三）（三）重金属的测定重金属的测定干法破坏（干法破坏（ChPChP）湿法破坏（湿法破坏（USPUSP）(调到中性调到中性)碱融法破坏碱融法破坏湿法破坏湿法破坏碱融法碱融法H+（四）（四）砷盐的测定砷盐的测定（五）残留农药的测定（五）残留农药的测定1 1、总氯量的测定、总氯量的测定2 2、总磷量的测定、总磷量的测定3 3、GCGC法法 中国药典中药制剂含量测定所占比例中国药典中药制剂含量测定所占比例 版本版本%1977 1.48 1977 1.48 1985 5.31 1985 5.31 1990 8.73 1990 8.73 1995 12.81 1995 12.81 2000 62.09 2000 62.09 （HPLC 36%TLCS 24%GC 3%)HPLC 36%TLCS 24%GC 3%)含量测定项目的选定含量测定项目的选定四、四、测定成分的选定原则测定成分的选定原则1.1.首选君药及贵重药、剧毒药建首选君药及贵重药、剧毒药建立含量、限量测定方法立含量、限量测定方法2.2.其次考虑臣药及其他味药其次考虑臣药及其他味药3.3.有效成分明确的，可选有效成有效成分明确的，可选有效成分分4.4.成分类别清楚的，可测某一类总成分类别清楚的，可测某一类总成分的含量成分的含量5.5.检测成分应归属某单一药味检测成分应归属某单一药味6.6.检测成分应与中医用药的功能主检测成分应与中医用药的功能主 治相近治相近7.7.确无法含量测定的，可测定浸出确无法含量测定的，可测定浸出 物含量物含量化学分析法化学分析法色谱法色谱法常用定量方法常用定量方法 分光光度法分光光度法（一）化学分析法（一）化学分析法 重量分析法重量分析法 容量分析法容量分析法特点特点 A A、准确度、精密度高、准确度、精密度高 B B、抗干扰能力差、抗干扰能力差例例（二）分光光度法（二）分光光度法UVUV法法 比色法比色法特点特点 A A、灵敏度高、灵敏度高 B B、简便、快速、简便、快速 C C、精密度稍低、精密度稍低 D D、干扰多、干扰多 芦丁芦丁黄芩苷黄芩苷小檗碱小檗碱 丹皮酚丹皮酚（三）（三）TLCSTLCS法法 测定薄层板上斑点对单色光的吸测定薄层板上斑点对单色光的吸收或反射的强度而进行定量的方法收或反射的强度而进行定量的方法特点特点 A A、分离效果好、分离效果好 B B、适用于无法用、适用于无法用UVUV、HPLCHPLC 法测定的组分法测定的组分 C C、准确度、精密度低于、准确度、精密度低于HPLCHPLC20002000年版中国药典（年版中国药典（20002000年版）年版）薄层扫描法品种薄层扫描法品种 品种数量品种数量 TLCSTLCS数量数量 占总数占总数%534534（药材）（药材）20 3.7420 3.74458458（成药）（成药）32 6.9932 6.99978978（总数）（总数）52 10.7352 10.73 1.1.选择测定条件选择测定条件（1 1）薄层色谱条件）薄层色谱条件 分离好分离好 不拖尾不拖尾（2 2）检测方法）检测方法 吸收测定法吸收测定法 荧光测定法荧光测定法 反射法反射法 透射法透射法 外标法外标法 内标法内标法（3 3）扫描方式）扫描方式 单波长单波长 双波长双波长 线性扫描法线性扫描法 锯齿扫描法锯齿扫描法（4 4）散射参数）散射参数SXSX薄层板的散射使薄层板的散射使Kubelka-MunkKubelka-Munk方程方程2.2.注意事项注意事项（1 1）薄层板）薄层板 均匀、平整均匀、平整（2 2）点样量）点样量 准确准确（3 3）斑点）斑点 应完全分离，不拖尾应完全分离，不拖尾（4 4）显色剂）显色剂 均匀、适当均匀、适当（5 5）保护斑点）保护斑点 用相同大小洁净玻璃用相同大小洁净玻璃盖住薄层板，并用透明胶纸封住边缘，盖住薄层板，并用透明胶纸封住边缘，以起固定和隔绝空气作用以起固定和隔绝空气作用 样样 样样 对对 对对 样样 样样 对对 对对 样样 样样 对对 对对 低低 高高 低低 高高 低低 高高 外标法（两点校正法）外标法（两点校正法）（四）（四）HPLCHPLC法法 外标法和内标法外标法和内标法RP RP HPLC HPLC 色谱柱色谱柱 ODS ODS 流动相流动相 甲醇甲醇 -水水PICPIC反离子反离子 氢氧化四丁基铵氢氧化四丁基铵RP-PIC RP-PIC 反离子反离子 烷基磺酸盐烷基磺酸盐 无机阴离子无机阴离子离子对色谱法（离子对色谱法（PICPIC）极性流动相中加入离子对试剂，极性流动相中加入离子对试剂，与被分析离子生成中性离子对，从而与被分析离子生成中性离子对，从而增加在非极性固定相中的溶解度，使增加在非极性固定相中的溶解度，使分配系数增大分配系数增大20002000年版中国药典（年版中国药典（20002000年版）年版）HPLCHPLC法品种法品种 品种数量品种数量 HPLCHPLC数量数量 占总数占总数%534534（药材）（药材）54 10.1154 10.11458458（成药）（成药）48 10.4848 10.48978978（总数）（总数）102 20.59102 20.59应用实例应用实例-小青龙合剂小青龙合剂 处方处方 麻黄麻黄125g 125g 桂枝桂枝125g 125g 白芍白芍125g 125g 干姜干姜125 125 五味子五味子125g125g 细辛细辛62g 62g 甘草甘草(蜜炙蜜炙)法半夏法半夏188g188g生物碱生物碱桂皮醛桂皮醛芍药甙芍药甙挥发油挥发油三萜皂甙三萜皂甙应用实例应用实例-小青龙合剂小青龙合剂 制法制法 以上八味，细辛、桂枝提取挥以上八味，细辛、桂枝提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与白芍、麻黄、五味子、甘草加水煎煮至味白芍、麻黄、五味子、甘草加水煎煮至味尽，合并煎液，滤过，滤液和蒸馏后的水尽，合并煎液，滤过，滤液和蒸馏后的水溶液合并，浓缩至约溶液合并，浓缩至约1000ml1000ml。法半夏、甘。法半夏、甘姜照流浸膏剂项下渗漉法，用姜照流浸膏剂项下渗漉法，用70%70%乙醇作溶乙醇作溶剂，浸渍剂，浸渍2424小时后进行渗漉，漉液浓缩，小时后进行渗漉，漉液浓缩，与上述药液合并，静置，滤过，滤液浓缩与上述药液合并，静置，滤过，滤液浓缩至至1000ml1000ml，加入苯甲酸钠，加入苯甲酸钠3g3g与细辛、桂枝与细辛、桂枝挥发油，搅匀，即得。挥发油，搅匀，即得。性状性状 本品为棕黑色的液体；气微本品为棕黑色的液体；气微香，味甜、微辛。香，味甜、微辛。功能与主治功能与主治 解表化饮，止咳平喘。解表化饮，止咳平喘。用于风寒水饮，恶寒发热，无汗，用于风寒水饮，恶寒发热，无汗，喘咳痰稀。喘咳痰稀。用法与用量用法与用量 口服，一次口服，一次10-20ml10-20ml，一日，一日3 3次，用时摇匀。次，用时摇匀。方药分析：方药分析：君君 麻黄麻黄发汗为君发汗为君臣臣 桂枝桂枝解表为臣解表为臣佐佐 甘草甘草恐发汗太过恐发汗太过,佐以甘草缓佐以甘草缓 之之使使 白芍、干姜、细辛、法半夏、五白芍、干姜、细辛、法半夏、五 味子味子几药合力共为使。几药合力共为使。可外发汗，内行水，散表里之邪。可外发汗，内行水，散表里之邪。汉代张仲景汉代张仲景伤寒论伤寒论小青龙汤小青龙汤 近代由重庆桐君阁中药厂该汤近代由重庆桐君阁中药厂该汤剂为合剂剂为合剂 本方治疗伤寒表不解，心下有水本方治疗伤寒表不解，心下有水气，干呕，发热而咳。近代也用于气，干呕，发热而咳。近代也用于慢性支气管炎，支气管哮喘、肺气慢性支气管炎，支气管哮喘、肺气肿，均见咳、喘、痰白清稀者。肿，均见咳、喘、痰白清稀者。供试品溶液与阴性对照液的制备：供试品溶液与阴性对照液的制备：取合剂取合剂10 ml10 ml，石油醚分，石油醚分3 3次萃取，次萃取，合并石油醚萃取液合并石油醚萃取液 油层油层，浓缩至，浓缩至1ml1ml，为供试品溶液为供试品溶液A A；水层水层 用用NaNa2 2COCO3 3调调PH11-12PH11-12，用氯仿萃取，用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，残渣用合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，残渣用1ml1ml甲醇溶解，为供试品溶液甲醇溶解，为供试品溶液B B；阴性对照液阴性对照液如上法同步进行。如上法同步进行。1.1.桂皮醛的鉴别桂皮醛的鉴别 取供试品液取供试品液A A、阴性对照液、桂、阴性对照液、桂皮醛对照液（皮醛对照液（1ug/ml1ug/ml）15ul15ul，点于，点于同一硅胶同一硅胶G G板上，环己烷板上，环己烷-乙酸乙酯乙酸乙酯（1717：3 3）展开，晾干，喷）展开，晾干，喷2 2，4 4二二硝基苯肼乙醇硝基苯肼乙醇T.ST.S，供试品，供试品A A与对照与对照品在相应位置上显相同的橙色斑点，品在相应位置上显相同的橙色斑点，而阴性对照液无此斑点。而阴性对照液无此斑点。2.2.细辛挥发油的鉴别细辛挥发油的鉴别 取供试品液取供试品液A A、阴性对照液、细、阴性对照液、细辛挥发油对照液（辛挥发油对照液（1 1：1010乙醚液）乙醚液）5ul5ul，点于同一硅胶，点于同一硅胶G G板上，环己烷板上，环己烷展开，晾干，喷展开，晾干，喷10%10%香草醛浓硫酸香草醛浓硫酸T.ST.S，加热至显色，供试品，加热至显色，供试品A A与对照与对照品在相应位置上显相同的粉红色斑品在相应位置上显相同的粉红色斑点，而阴性对照液无此斑点。点，而阴性对照液无此斑点。3.3.麻黄碱的鉴别麻黄碱的鉴别 取供试品液取供试品液B B，阴性对照液，麻，阴性对照液，麻黄碱对照品液（黄碱对照品液（1mg/ml1mg/ml）各）各5ul5ul，点，点于同一硅胶于同一硅胶G G，氯仿，氯仿-甲醇甲醇-浓氨水浓氨水（2020：5 5：0.50.5）展开，晾干，喷茚三）展开，晾干，喷茚三酮酮T.ST.S，加热至斑点显色，供试品，加热至斑点显色，供试品B B与与对照品在相应位置上显相同的蓝紫色对照品在相应位置上显相同的蓝紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。斑点，而阴性对照液无此斑点。取合剂取合剂5ml5ml，上聚酰胺柱，上聚酰胺柱，DWDW洗洗脱，洗脱液水浴浓缩至干，用脱，洗脱液水浴浓缩至干，用1ml1ml甲甲醇溶解，为供试品溶液醇溶解，为供试品溶液C C；聚酰胺柱再用聚酰胺柱再用95%95%乙醇洗脱，弃乙醇洗脱，弃取洗脱液，用取洗脱液，用3M3M氨乙醇液洗脱，收氨乙醇液洗脱，收集洗脱液水浴蒸干，集洗脱液水浴蒸干，1ml1ml甲醇溶解，甲醇溶解，为供试品溶液为供试品溶液D D。4.4.芍药甙的鉴别芍药甙的鉴别 取供试品液取供试品液C C、阴性对照液、芍、阴性对照液、芍药甙对照液（药甙对照液（1mg/ml1mg/ml）10ul10ul，点于同，点于同一硅胶一硅胶G G板上，氯仿板上，氯仿-乙酸乙酯乙酸乙酯-甲醇甲醇-冰醋酸冰醋酸-甲酸（甲酸（8 8：1 1：2 2：0.040.04）展开，）展开，晾干，喷晾干，喷10%10%硫酸乙醇液，加热至显硫酸乙醇液，加热至显色，供试品色，供试品C C与对照品在相应位置上与对照品在相应位置上显相同的紫色斑点，而阴性对照液无显相同的紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。此斑点。5.5.甘草酸的鉴别甘草酸的鉴别 取供试品液取供试品液D D、阴性对照液、甘、阴性对照液、甘草酸铵对照液（草酸铵对照液（2mg/ml2mg/ml）2ul2ul，点于同，点于同一硅胶一硅胶G G板上，乙酸乙酯板上，乙酸乙酯-甲酸甲酸-冰醋酸冰醋酸-蒸馏水（蒸馏水（3030：2 2：2 2：4 4）展开，晾干，）展开，晾干，喷喷10%10%硫酸乙醇液，加热至显色，硫酸乙醇液，加热至显色，UVUV灯灯365nm365nm观察，供试品观察，供试品D D与对照品在相应与对照品在相应位置上显相同的紫色斑点，而阴性对位置上显相同的紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。照液无此斑点。含量测定含量测定HPLCHPLC法测定芍药甙的含量法测定芍药甙的含量仪器与色谱条件仪器与色谱条件 BECKMAN 332BECKMAN 332型高效液相色谱仪型高效液相色谱仪163163型可变波长紫外检测仪，型可变波长紫外检测仪，220nm220nm427427型记录及数据处理仪型记录及数据处理仪色谱柱为色谱柱为YWGC18YWGC18流动相乙腈流动相乙腈-水（水（1515：8585）标准曲线制备标准曲线制备 精密称取芍药甙精密称取芍药甙5.08mg5.08mg，溶于水至溶于水至50ml50ml量瓶中，定容，分别吸取量瓶中，定容，分别吸取0.500.50、1.001.00、1.501.50、2.00ml2.00ml于于10ml10ml量瓶中量瓶中定容。定容。回收率测定回收率测定 精密吸取除去白芍制成的合精密吸取除去白芍制成的合剂（剂（即阴性对照液即阴性对照液）0.3ml0.3ml与适量芍药甙对与适量芍药甙对照品液，通过照品液，通过0.5g0.5g聚酰胺柱，用水洗脱至聚酰胺柱，用水洗脱至50ml50ml量瓶中至刻度，依前述条件测定，平量瓶中至刻度，依前述条件测定，平均回收率为均回收率为99.42%99.42%，RSDRSD为为0.23%0.23%（n=3n=3）。）。样品测定样品测定 取自制小青龙合剂摇匀，用滤取自制小青龙合剂摇匀，用滤纸过滤，精密吸取纸过滤，精密吸取0.3ml0.3ml滤液通过滤液通过聚酰胺柱，以不同回收率测定条件聚酰胺柱，以不同回收率测定条件进行测定。进行测定。分析实例分析实例万氏牛黄清心丸万氏牛黄清心丸 处方处方 牛黄牛黄10g 10g 朱砂朱砂6060g g 黄连黄连200200g g 黄芩黄芩120120g g 栀子栀子120120g g 郁金郁金8080g g分析实例分析实例万氏牛黄清心丸万氏牛黄清心丸 制法制法 以上六味，除牛黄外，朱砂水以上六味，除牛黄外，朱砂水飞或粉碎成极细粉；其余黄连等四飞或粉碎成极细粉；其余黄连等四味粉碎成细粉；将牛黄研细，与上味粉碎成细粉；将牛黄研细，与上述粉末配研，过筛，混匀。每述粉末配研，过筛，混匀。每100100g g粉末加炼蜜粉末加炼蜜100-200100-200g g制成大蜜丸，制成大蜜丸，即得。即得。古方为糊丸，亦有水丸古方为糊丸，亦有水丸 性状性状 本品为红棕色至棕褐色的大本品为红棕色至棕褐色的大蜜丸；气特异，味甜、微涩、苦。蜜丸；气特异，味甜、微涩、苦。功能主治功能主治 清热解毒，镇惊安神。清热解毒，镇惊安神。用于热邪内闭，烦躁不安，神昏谵用于热邪内闭，烦躁不安，神昏谵语，小儿高热惊厥。语，小儿高热惊厥。方药分析方药分析 本方来源于明本方来源于明.痘疹世痘疹世医医心法心法 ，本方为清心开窍剂，本方为清心开窍剂，主治热邪内陷心包所致窍闭神昏症。主治热邪内陷心包所致窍闭神昏症。方中牛黄，清心解毒，豁痰开方中牛黄，清心解毒，豁痰开窍为君药；黄连、黄芩、栀子清热窍为君药；黄连、黄芩、栀子清热泻火，为臣药；朱砂清心，重镇安泻火，为臣药；朱砂清心，重镇安神，郁金行气开窍共为佐使药，合神，郁金行气开窍共为佐使药，合用以奏透邪泻热，开窍安神之效。用以奏透邪泻热，开窍安神之效。方药分析方药分析 牛黄牛黄清热解毒药，主含胆酸类成分。清热解毒药，主含胆酸类成分。黄连黄连清热燥湿药，主要为小檗碱。清热燥湿药，主要为小檗碱。黄芩黄芩清热燥湿药，主要为黄酮类。清热燥湿药，主要为黄酮类。栀子栀子清热泻火药，主含栀子甙。清热泻火药，主含栀子甙。朱砂朱砂安神药，主含硫化汞（安神药，主含硫化汞（HgSHgS）。）。郁金郁金活血去瘀药，主含挥发油。活血去瘀药，主含挥发油。鉴别鉴别q 显微鉴别显微鉴别郁金郁金糊化淀粉团块几乎无色。糊化淀粉团块几乎无色。栀子栀子种皮石细胞。种皮石细胞。黄芩黄芩纤维淡黄色，梭形，厚壁，孔沟细。纤维淡黄色，梭形，厚壁，孔沟细。黄连黄连纤维鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显。纤维鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显。朱砂朱砂不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色。鲜红色或棕黄色。郁金郁金糊化淀粉团块糊化淀粉团块栀子栀子种皮石细胞种皮石细胞黄芩黄芩纤维纤维黄连黄连纤维纤维朱砂朱砂不规则块状物不规则块状物或颗粒状物，暗红棕或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色色、鲜红色或棕黄色化学鉴别化学鉴别1.1.朱砂的鉴别朱砂的鉴别 取本品取本品3g3g，加水适量，研匀，反复加水适量，研匀，反复洗去悬浮物，可得少量朱红色沉淀，取出，洗去悬浮物，可得少量朱红色沉淀，取出，加入盐酸加入盐酸1 1mlml及铜片少量，加热煮沸，铜及铜片少量，加热煮沸，铜片由黄色变为银白色。片由黄色变为银白色。HgS+2HCl+CuHgS+2HCl+CuCuClCuCl2 2+Hg+H+Hg+H2 2S S 在酸性条件下，朱砂与铜片发生置换在酸性条件下，朱砂与铜片发生置换反应析出金属汞，在铜片表面形成银白色反应析出金属汞，在铜片表面形成银白色汞齐。汞齐。2.2.人工牛黄的鉴别人工牛黄的鉴别 取本品，剪碎，加硅藻土取本品，剪碎，加硅藻土0.6g0.6g，研匀，加氯仿，研匀，加氯仿10ml10ml、冰醋酸冰醋酸0.50.5mlml，加热回流加热回流3030min,min,放冷，滤过，滤放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇液蒸干，残渣加乙醇2 2mlml使溶解，滤使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。过，滤液作为供试品溶液。胆酸和猪去氧胆酸加乙醇制成胆酸和猪去氧胆酸加乙醇制成1 1mlml含含1 1mgmg的混合溶液，作为对照品的混合溶液，作为对照品溶液。溶液。TLCTLC法法 CMC-NaCMC-Na，硅胶，硅胶G G展开剂展开剂 醋酸乙酯醋酸乙酯-正己烷正己烷-醋酸醋酸-甲醇甲醇 （32:6:1:132:6:1:1）显色剂显色剂 10%10%磷钼酸乙醇液，磷钼酸乙醇液，1101100 0C,10minC,10min人人工工牛牛黄黄供供试试品品牛牛黄黄空空白白猪去氧胆酸猪去氧胆酸胆胆酸酸3.3.黄芩的鉴别黄芩的鉴别 供试品溶液的制备：取本品供试品溶液的制备：取本品3g3g，剪碎，加硅藻土，剪碎，加硅藻土0.5g0.5g，研匀，加，研匀，加甲醇甲醇20ml20ml，加热回流加热回流1hr,1hr,放冷，滤放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。过，滤液作为供试品溶液。对照品溶液的制备：黄芩甙对对照品溶液的制备：黄芩甙对照品加甲醇制成每照品加甲醇制成每1 1mlml含含1 1mgmg的溶液，的溶液，作为对照品溶液。作为对照品溶液。TLCTLC法法 CMC-NaCMC-Na，硅胶，硅胶G G （4%4%醋酸钠）醋酸钠）展开剂展开剂 醋酸乙酯醋酸乙酯-丁酮丁酮-甲酸甲酸-水水 （5:3:1:15:3:1:1）显色剂显色剂 2%2%三氯化铁乙醇液三氯化铁乙醇液使斑点更为集中使斑点更为集中-OH与与Fe+3络合络合黄芩甙供试品黄芩空白4.4.栀子的鉴别栀子的鉴别 供试品溶液的制备：取本品供试品溶液的制备：取本品3g3g，加乙醚，加乙醚15ml15ml，研磨，弃去乙醚。残渣挥干乙醚，研磨，弃去乙醚。残渣挥干乙醚，加醋酸加醋酸乙酯乙酯30ml30ml，加热回流加热回流1hr,1hr,放冷，滤放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml3ml溶解，滤过，溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。滤液作为供试品溶液。对照品溶液的制备：栀子甙对照品加甲对照品溶液的制备：栀子甙对照品加甲醇制成每醇制成每1 1mlml含含1 1mgmg的溶液，作为对照品溶的溶液，作为对照品溶液。液。TLCTLC法法 CMC-NaCMC-Na，硅胶，硅胶G G展开剂展开剂 醋酸乙酯醋酸乙酯-丙酮丙酮-甲酸甲酸-水水 （10:7:2:0.510:7:2:0.5）显色剂显色剂 10%10%硫酸乙醇硫酸乙醇 1051050 0C,10minC,10min栀栀子子甙甙供试供试品品栀子空白栀子空白5.5.黄连的鉴别黄连的鉴别 供试品溶液的制备：取含量测供试品溶液的制备：取含量测定项下剩余的盐酸定项下剩余的盐酸-甲醇提取液甲醇提取液4ml4ml，水浴蒸干，残渣加甲醇水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，使溶解，使成成1ml1ml作为作为供试品溶液。供试品溶液。对照药材溶液对照药材溶液的制备：黄连对的制备：黄连对照药材照药材50mg50mg，加甲醇，加甲醇10ml10ml，回流加，回流加热热15min,15min,滤过，滤液蒸干，残渣加滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇甲醇1ml1ml使溶解，作为对照药材溶液。使溶解，作为对照药材溶液。对照品溶液的制备对照品溶液的制备：再取盐酸小：再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇檗碱对照品，加甲醇制成每制成每1 1mlml含含 0.5mg0.5mg的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为对照品溶液。TLCTLC法法 硅胶硅胶G CMC-NaG CMC-Na展开剂展开剂 苯苯-醋酸乙酯醋酸乙酯-甲醇甲醇-异丙醇异丙醇-浓浓氨试液（氨试液（12:6:3:3:112:6:3:3:1）显色剂显色剂 UVUV（365nm365nm）盐酸小檗碱黄连黄连公式品供试品供试品黄连空白黄连空白含量测定含量测定 1.1.朱砂朱砂 取本品约取本品约5g5g，剪碎，精密称定，剪碎，精密称定，置置250ml250ml凯氏烧瓶中，加硫酸凯氏烧瓶中，加硫酸30ml30ml与硝酸钾与硝酸钾8g8g，加热俟溶液至近无色，放冷，转入，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml250ml锥形瓶中，用水锥形瓶中，用水50ml50ml分次洗涤烧瓶，分次洗涤烧瓶，洗液并人溶液中，滴加洗液并人溶液中，滴加1%1%高锰酸钾溶液至高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消失，再滴显粉红色，两分钟内不消失，再滴加加2%2%硫硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液示液2ml2ml，用硫氰酸铵滴定液滴定，即得。，用硫氰酸铵滴定液滴定，即得。每每1 1mlml的的硫氰酸铵滴定液相当于硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg11.63mg的的硫化汞硫化汞。硫酸与硝酸钾硫酸与硝酸钾分解试样及有机破坏分解试样及有机破坏高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液除去试样分解时产生的亚硫除去试样分解时产生的亚硫酸酸粉红色两分钟内不消失粉红色两分钟内不消失亚硫酸可将亚硫酸可将HgHg2+2+还原还原HgHg+使含量变低，观察两分钟完全除去使含量变低，观察两分钟完全除去亚硫酸亚硫酸硫酸亚铁溶液硫酸亚铁溶液除去过量的高锰酸钾除去过量的高锰酸钾滴定反应滴定反应 HgHg2+2+2CNS+2CNS-Hg(CNS)Hg(CNS)2 2显色反应显色反应 CNSCNS-(过量过量)+Fe)+Fe3+3+Fe(CNS)Fe(CNS)2 2+(红红色色)2.2.黄连黄连 取本品约取本品约4g4g，剪碎，精密称定，剪碎，精密称定，置索氏提取器，盐酸置索氏提取器，盐酸-甲醇（甲醇（1:1001:100）适量，）适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至加热回流提取至提取液无色，提取液移至50ml50ml量瓶中，用盐酸量瓶中，用盐酸-甲醇适量稀释至刻甲醇适量稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法，精密量取度，摇匀，照柱色谱法，精密量取5ml5ml，上上ALAL2 2O O3 3柱柱,25ml,25ml洗脱，收集洗液置洗脱，收集洗液置50ml50ml量量瓶中，乙醇稀释至刻度，精密吸取瓶中，乙醇稀释至刻度，精密吸取2ml2ml置置50ml50ml量瓶中，加量瓶中，加0.05mol/L0.05mol/L硫酸溶液稀释硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。至刻度，摇匀。UV345nmUV345nm测定测定A A。为为728,728,本品含总生物碱按盐酸小檗碱计不本品含总生物碱按盐酸小檗碱计不得少于得少于1.7%1.7%。黄连黄连 方中臣药之首方中臣药之首 用量最大用量最大有效成分清楚有效成分清楚 黄连有效成分为小檗碱，尚含黄连有效成分为小檗碱，尚含其它少量生物碱，如黄连碱、甲基其它少量生物碱，如黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、巴马亭等，均为黄连碱、药根碱、巴马亭等，均为原小檗碱型生物碱。原小檗碱型生物碱。硫酸溶液硫酸溶液 在酸性条件下，在酸性条件下，N N原子呈共轭体系的季铵状态，在原子呈共轭体系的季铵状态，在345nm345nm处有最大吸收。其它五味药的处有最大吸收。其它五味药的空白提取液在该波长处略有吸收，空白提取液在该波长处略有吸收，约相当于约相当于0.3%0.3%小檗碱，因此测定结小檗碱，因此测定结果偏高。果偏高。本品为蜜丸制剂，其黄连生物本品为蜜丸制剂，其黄连生物碱溶出速率较药材相对缓慢，回流碱溶出速率较药材相对缓慢，回流至提取液无色后应放置一段时间。至提取液无色后应放置一段时间。