高效液相色谱方法开发（安捷伦科技）.pdf

HPLC Method DevelopmentApril,2007高效液相色谱高效液相色谱方法开发方法开发使用新的色谱柱加快方法开发速度PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 2常见的方法开发途径常见的方法开发途径1.按照按照“方法开发指南方法开发指南”按步操作按步操作基于选择性改变参基于选择性改变参数数 比如比如:pH值值,色谱柱，流动相等色谱柱，流动相等2.使用方法开发软件使用方法开发软件 运行几个预设方法最后选用结果运行几个预设方法最后选用结果最好的一个方法最好的一个方法3.在多种色谱柱及多种流动相下测试并比较结果，最后在多种色谱柱及多种流动相下测试并比较结果，最后选用最好的一个方法选用最好的一个方法很多人采用途径1进行方法开发。PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 3常见的方法开发从哪里开始常见的方法开发从哪里开始?1.选择C18键合相 种类很多，不同的键合特点a)一根短的色谱柱可以减少方法开发时间b)较小的色谱柱填料粒径可以在短时间内提高所需的分离度c)Eclipse Plus C18色谱柱可以改进分离结果色谱柱可以改进分离结果 更好的柱效和峰形更好的柱效和峰形2.选择简单的流动相 可靠，并适用多种样品a)水相：磷酸缓冲液 pH 3,三氟乙酸,或甲酸b)有机相：乙腈或甲醇3.调速流动相得到更理想的保留和分离度分离度a)所有的峰有适当的分离度(Rs 2.0)相应较高的柱效b)第一个峰的保留值最好至少等于1c)分离时间在20分钟内 更短d)更新的色谱柱选择，小粒径更短的色谱柱可以在短时间内提高分离度及柱效，加更新的色谱柱选择，小粒径更短的色谱柱可以在短时间内提高分离度及柱效，加快方法开发速度快方法开发速度PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 4分离度公式分离度公式选择性选择性受流动相和固定相的影响N 柱效柱效 受柱长和颗粒度的影响k保留因子保留因子(保留)受固定相和流动相，梯度斜率和延迟体积(梯度)的影响PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 5常见的方法开发参数常见的方法开发参数 选择性，柱效，保留值对分离度的影响选择性，柱效，保留值对分离度的影响0.001.002.003.004.005.006.007.00123456789101112131415161718192021ResolutionIncrease NIncrease AlphaIncrease k选择性最影响分离度选择性最影响分离度改变键合相改变键合相改变流动相改变流动相柱效是最容易预测的因素柱效是最容易预测的因素Rs=N/4 (-1)/k/(k+1)Plates:500010000150002000025000Alpha:1.101.351.601.852.1k:2.04.57.09.512.0PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 6选择性选择性选择性选择性 细细微微的的差异差异可以使可以使得得分离度分离度上有上有较较大大的的不同不同Eclipse Plus C8Greatest Resolution for this sampleEclipse XDB-C8Eclipse Plus C18Resolutionpeaks 1,21.434.15peaks 2,31.293.55Resolutionpeaks 1,21.333.55peaks 2,31.313.82Resolutionpeaks 1,21.686.12peaks 2,31.44.97caffeinebarbitalsulfamethoxazoleCols:4.6 x 150,5 umm.p.:40%MeOH,60%watermin01234min01234min01234PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 7在最开始时如何制定方法开发方案在最开始时如何制定方法开发方案?流动相流动相(改变的改变的第第一选择，因一选择，因为为最易行最易行)流动相 有机相(乙腈,甲醇等)流动相 pH 在一个更宽的pH范围 有时会是pH 1-12键合相键合相(提提供供多种最多种最优化优化方法的可方法的可能能)很多种选择 C18 C8,Phenyl,CN等AQ 柱可以用于高水相的流动相体系选择新的色谱柱得到更好的峰形使用使用两两个个重要重要参数改变选择性以提高分离度参数改变选择性以提高分离度 流动相和键合相流动相和键合相PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 8好的液相色谱柱所应具备的性能好的液相色谱柱所应具备的性能好的峰形 尤其对于碱性化合物,可以不加额外的流动相添加剂 减小拖尾因子以提高分离度和定量准确性高的柱效 1.8um,3.5um和5um，不同的颗粒粒径可以满足任何分离的柱效要求 柱效N 采用柱效进一步优化分离度好的选择性 C18是最受欢迎的键合相，且适用于大部分化合物的分离 C8 是在C18之后的受欢迎的键合相在较宽的流动相范围内均可使用 简化方法开发 适于更多的应用出色的重现性 不同批次的色谱柱都有很好的重现性好的使用寿命 至少能分析 1000 个样品PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 9采用新的色谱柱进行方法开发采用新的色谱柱进行方法开发1.小小颗颗粒的更短的色谱柱粒的更短的色谱柱 1.8um粒径的高分离度快速液相色谱柱(RRHT)采用50mm或更短的柱长可以用于快速的方法开发 较长的色谱柱可以提高柱效 11种键合相可供选择2.改进的键合相可以提改进的键合相可以提供供更好的结果更好的结果 更好的峰形和柱效可以提高分离度 对于建立好的方法至关重要 新的Eclipse Plus 色谱柱可以提供更好的峰形PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 10一根色谱柱可以满足很多分离要求吗一根色谱柱可以满足很多分离要求吗?是是!新的 ZORBAX Eclipse Plus 色谱柱可以做到!与其它厂商相比，有更好的结果！PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 11ZORBAX Eclipse Plus 色谱柱色谱柱ZORBAX Eclipse Plus 色谱柱色谱柱:使用ZORBAX 硅胶 采用更好的专利技术处理硅胶采用改进的键合试剂及键合过程更加严格的质控标准，批与批之间更加好的重现性CHCHCHCHCHCHOSiOOOOSiSiSiCHCHCHCHCHCHSi333333333333改改进进的的硅硅胶胶基基质质改进的改进的双封双封端技术端技术更好的峰形PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 12改进所带来的好处改进所带来的好处:更好的峰形 对于大部分的碱性化合物 对于大部分的流动相 无需额外的添加剂 与其它色谱柱相比对于除了碱性化合物之外的样品同样也有更好的峰形和更好的柱效 酸碱混合物 中性化合物PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 13Eclipse Plus C18 分离分离碱碱性性化化合合物物时时没有拖尾没有拖尾 标准标准测试测试混混合合样品样品1Eclipse Plus C18Ace 5 C18Discovery HS C18Gemini C18Luna C18(2)SunFire C18XTerra MS C18XBridge C18min00.511.522.533.51.吡啶吡啶(碱碱)2.酚酚(酸酸)流动相流动相:60/40 水水/乙腈乙腈1111111122222222PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 14ZORBAX Eclipse Plus 在在甲醇甲醇和和磷酸盐磷酸盐流动相流动相中中分离分离阿米替林阿米替林峰形最好峰形最好Eclipse Plus C18Phenomenex Gemini C18Phenomenex Luna C18(2)Waters SunFire C18Ace C18(2)Inertsil ODS(3)Tf=1.00Tf=1.25Tf=1.26Tf=1.20Tf=1.92Tf=1.11Amitriptyline 0.1g 80%Methanol 8mM total Potassium Phosphate Buffer pH 7.0,Detection:UV 215 nm,Flow Rate:1.0 mL/min Columns:4.6x100mm 5 columnsPeak Shape is normally better in Methanol mobile phases.Eclipse Plus is superior under these conditions.PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 15Eclipse Plus 在在中中等等pH范围没有三乙胺添范围没有三乙胺添加加剂剂下下也也可以提可以提供供更好峰形更好峰形Eclipse Plus C18 4.6 x 75 mm 3.5 mEclipse XDB-C18 4.6 x 75 mm 3.5 m1.Famotidine2.Cimetidine3.PirenzipineConditions:Columns:As listed Mobile Phase.:20%MeOH,80%20 mM phosphate pH 7.0 Flow Rate=1 mL/min.Detection:UV 254 semi micro flow cellN=7800TF:1.05N=7800TF:1.00N=5700TF:1.12N=4300TF:1.74min024681012141618min024681012141618High efficiency with a 3.5um particle is easily achieved with Eclipse PlusNo mobile phase modifiers are needed for perfect performance!PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 161.采用采用RRHT进行快速方法开发：进行快速方法开发：采采用短的用短的RRHT C18色谱柱在短时间内色谱柱在短时间内得到得到更高柱效更高柱效RRHT SB-C18 4.6 x 50mm,1.8 ummin0.511.522.5RRHT SB-CN 4.6 x 50mm,1.8 um1,243min0.511.522.5Column:4.6 x 50mm,1.8um Mobile Phase:A=0.1%Formic Acid,B=ACN+0.1%Formic Acid(95:5)Flow rate:1.5 mL/min Inj.Vol:2 ul Sample:Xanthines:1.1-methylxanthine,2.1,3-dimethyluric acid,3.3,7-dimethylxanthine,4.1,7-dimethylxanthine1234The C18 gives the most effective resolution and with a 4.6 x 50mm,1.8um column the initial results are achieved in just a couple of minutes,with the highest efficiency.The 50mm length is short and fast methods can be approximated or completed in just minutes!PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 171.采采用用RRHT进行快速方法开发进行快速方法开发:不同不同的的 ZORBAX RRHT C18键合相键合相所具有所具有的的不同不同的选择性的选择性EclipsePlus C18EclipseXDB-C18Extend-C18StableBondSB-C18Mobile phase:(69:31)ACN:waterFlow 1.5 mL/min.Temp:30 CDetector:Single Quad ESI positive mode scan Columns:RRHT 4.6 x 50 mm 1.8 umSample:1.anandamide(AEA)2.Palmitoylethanolamide(PEA)3.2-arachinoylglycerol(2-AG)4.Oleoylethanolamide(OEA)12341234512341234512,34123451234min12345不同的键合相具有不同的选择性，根据所分析的样品选择适合的键合相。PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 18方法开发的起始步骤方法开发的起始步骤选择一根性能优越的 C18或 C8键合相作为方法开发的起始，这个键合相应对酸性、碱性及中性化合物都可以提供好的峰形和保留。优化流动相中有机相的组成以改变其选择性。如果必需的话，选择不同的键合相来完成方法的优化。当当pH在在1-2时，选择时，选择 SB-C18 如果使用新的如果使用新的RRHT色谱柱，色谱柱，这些这些步步骤骤可以可以很很快快地完成地完成，使，使得寻找得寻找最最佳佳方法变方法变得得更更为为容易容易。低 pH 调节%ACN for 0.5 k 20 选择选择 Eclipse Plus C18改变 有机相比例 改变键合相改变键合相 Eclipse Plus C8,SB-C18,CN,Phenyl,其它其它的的反反相键合相相键合相改变改变有机有机相相 调速有机相比例以使 0.5 k 20STEP 1STEP 2STEP 3STEP 4峰间隔问题峰间隔问题峰间隔问题PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 19为什么在方法优化中，建议您在改变键合为什么在方法优化中，建议您在改变键合相前应先尝试改变有机流动相？相前应先尝试改变有机流动相？易操作易操作 乙腈乙腈和和甲醇都甲醇都是是实验室常备溶实验室常备溶剂。剂。对于对于任何任何键合相，键合相，都会起都会起一一定定的作用的作用。PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 20以下化合物的方法开发以下化合物的方法开发diltiazemdipyridamolepropranololpindololdisopyramide-阻滞剂(-blocker)抗心律不齐药物(Anti-arrhythmic)血管扩张药物(Vasodilator)钙通道阻滞剂(Ca+channel blocker)PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 21从低从低pH值开始值开始,调速有机相调速有机相比例比例采用采用Eclipse Plus C18在在乙腈乙腈流动相中分流动相中分析几种强心剂析几种强心剂2mAU01002003004002mAU0255075100125min24681012mAU-200204060Column:ZORBAX RRHT Eclipse Plus C18,4.6 x 50 mm,1.8 mMobile Phase:A:25 mM NaH2PO4,pH 3.0 B:ACNFlow Rate:2.0 mL/min Temperature:30C Detection:UV 240 nm Sample:Cardiac Drugs 1.Pindolol 2.Diisopyridamide3.Propranolol 4.Dipyridamole 5.Diltiazem40%ACN20%ACN30%ACNk=44!RRHT Eclipse Plus C18 可以在可以在低有机低有机相比相比例中例中快速快速优化优化方法方法。好的分离度好的分离度快速分离快速分离节省节省时间时间PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 222mAU01002003004002mAU0255075100125min24681012mAU020406080Column:ZORBAX RRHT Eclipse Plus C18,4.6 x 50 mm,1.8 mMobile Phase:A:25 mM NaH2PO4,pH 3.0 B:MeOHFlow Rate:2.0 mL/min Temperature:30C Detection:UV 240 nm Sample:Cardiac Drugs 1.Pindolol 2.Diisopyridamide3.Propranolol 4.Diltiazem 5.Dipyridamole70%MeOH40%MeOH50%MeOHk=49!采采用用RRHT色谱柱可以快速色谱柱可以快速地地看出看出不同有机溶剂不同有机溶剂的影响的影响甲醇甲醇改变选择性，改变选择性，但但分分析析时间更时间更长长从低从低pH值开始值开始,调速有机相调速有机相比例比例采采用用Eclipse Plus C18在在甲醇甲醇流动相流动相中中分分析析几种几种强心强心剂剂PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 23方法开发方法开发 改变有机相改变有机相种类种类乙腈乙腈和和甲醇甲醇的比较的比较123mAU-2002040608010012014012mAU-2002040608010012014023450%MeOH30%ACN1234Column:ZORBAX RRHT Eclipse Plus C18,4.6 x 50 mm,1.8 mMobile Phase:A:25 mM NaH2PO4,pH 3.0 B:organicFlow Rate:2.0 mL/min Temperature:30C Detection:UV 240 nm Sample:Cardiac Drugs 1.Pindolol 2.Disopyridamide3.Propranolol 4.Diltiazem 5.Dipyridamole551Resolution of pairs(2,3),(3,4),(4,5)is better in MeOH.Peak 5 selectivity shiftResolution of critical pair(1,2),is better in ACNPDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 24使使用用不同不同色谱柱色谱柱规格规格的最的最佳条件比较佳条件比较 长长度，度，粒粒径，分离度径，分离度RRHT SB-CN 4.6 x 50mm,1.8um1.5 ml/min 1 l injectionRRHT SB-CN 4.6 x100mm,1.8um1.5 ml/min 2 l injection1.Estril2.Estradiol3.Ethynyl Estradiol4.Dienestrol5.Diethylstilbestrol6.Ethynl estradiol methyl esterSB-CN 4.6 x150 mm,5um1.0 ml/min 3 l injectionmin2.557.51012.51517.5mAU0255075100125150175)1234562.557.510mAU050100150200)234561A:WaterB:30%MeOH/70%MeCN40%B Detection:UV 210 nm2.55mAU-20020406080100120140234561RRHT Columns allow rapid resolution optimization during initial method development.Column lengths compared quickly.PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 25改变有机相改变有机相乙腈乙腈vs.甲醇甲醇采采用用ZORBAX Eclipse XDB-CN 分离分离雌激雌激素素min0246810121416181234567min0246810121416181234567Column:ZORBAX Eclipse XDB-CN Column Dimensions:4.6 x 150 mm,5 m Mobile Phase:As shownFlow Rate:2.0 ml/min Injection Volume:2.00 l Column Temperature:25 C Detector:UV,210 nmMobile Phase:47.5:52.5 MeOH:WaterSample:1.Estriol(0.00130 g/l),2.-Estradiol(0.00130 g/l),3.Ethinyl Estradiol(0.00147 g/l),4.Dienestrol(0.00123 g/l),5.Diethylstilbestrol(0.00128 g/l)6.Ethynylestradiol 3-methyl ether(0.00103 g/l)7.Ethynodiol Diacetate(0.00139 g/l)Mobile Phase:35:65 ACN:WaterSolvent comparison with all samples can yield optimized methods.PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 26RRHT色谱柱可以快速色谱柱可以快速地找出地找出最最佳佳有机相的选择有机相的选择更更长长的色谱柱提的色谱柱提供供更好的分离度更好的分离度242424Eclipse Plus-C18 4.6 x 50 mm 1.8um31251.Anandamide(AEA)2.Palmitoylethanolamide(PEA)3.2-Arachinoylglycerol(2-AG)4.1(3)-Arachidonylglycerol5.Oleoylethanolamide(OEA)65%ACN69%ACN77%ACN12,34543124,5min24681069%ACN12453Eclipse Plus-C18 4.6 x 150 mm 1.8umEndocannabinoids dissolved in methanol(1 mg/mL)and diluted 1:100 in water.Mobile Phase is 69%acetonitrile at 1.5 mL/min.,30C.MS is ESI,positve mode,total ion scan.PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 27为什么改变键合相为什么改变键合相是是有有效效的的?不同键合相对于极性及非极性化合物的作用是不同的。改变键合相有时可以提高选择性/分离度,减小分离时间。采采用用RRHT进行键合相的选择可以提高进行键合相的选择可以提高工工作效作效率率!前提是，必须有多种RRHT键合相可供选择！PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 28不同不同键合相键合相表现出表现出不同不同的选择性的选择性流动相流动相为为30%ACN1mAU010012mAU010012mAU010012mAU010012mAU0100RRHT SB-C184.6 x 50 mm,1.8 mRRHT SB-Phenyl4.6 x 50 mm,1.8 mRRHT Eclipse Plus C184.6 x 50 mm,1.8 mRRHT SB-AQ4.6 x 50 mm,1.8 mRRHT SB-CN4.6 x 50 mm,1.8 m 5 种种不同不同的键合相比较的键合相比较 每每一个运行时间一个运行时间只需只需2分分钟钟 在最在最佳有机佳有机相比相比例例下比较下比较更多的键合相可以更多的键合相可以优化优化!PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 29极极性键合相在分离性键合相在分离类固醇类固醇时时与与非极非极性键合相性键合相C18/C8的选择性的选择性比较比较min051015201234567051015201234,567505101520123467405101520123567Column:ZORBAX Eclipse XDB-CN Mobile Phase:35:65 ACN:WaterColumn:ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl Mobile Phase:48:52 ACN:WaterColumn:ZORBAX Eclipse XDB-C8 Mobile Phase:54:46 ACN:WaterColumn:ZORBAX Eclipse XDB-C18 Mobile Phase:60:40 ACN:WaterColumn Dimensions:4.6 x 150 mm,5 mFlow Rate:2.000 ml/minInjection Volume:2.00 lColumn Temperature:25 CDetector:UV,210 nmSample:1.Estriol(0.00130 g/l),2.-Estradiol(0.00130 g/l),3.Ethinyl Estradiol(0.00147 g/l),4.Dienestrol(0.00123 g/l),5.Diethylstilbestrol(0.00128 g/l)6.Ethynylestradiol 3-methyl ether(0.00103 g/l)7.Ethynodiol Diacetate(0.00139 g/l)Eclipse XDB-CN is the optimum bonded phase the only one that can resolve all the components in under 20 minutes.PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 30为什么为什么pH在方法开发中在方法开发中对对选择性很选择性很重重要要?为什么化合物对流动相的为什么化合物对流动相的pHpH值敏感值敏感?流动相的流动相的pHpH值如何影响保留和分离度值如何影响保留和分离度?流动相的流动相的pHpH值如何影响方法开发值如何影响方法开发?流动相的流动相的pHpH值如何影响色谱柱选择值如何影响色谱柱选择?PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 31pH 什么时什么时候影响候影响分离度分离度?化合物化合物类型比较类型比较 Ionizable compounds acids and bases can change retention and selectivity most with changes in pHnon-polarpolarionizablenaphthalenebenzyl alcoholbenzoic acidacenaphthenenitrobenzenebenzanilidepH 3pH 70 1 2 3 4 5 6 7 8 9 100 1 2 3 4 5 6 7 8 9 100 1 2 3 4 5 6 7 8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 1 2 3 4 5 6 7 8 Time(min)Time(min)Time(min)PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 32分分析析离离子子化的化合物时化的化合物时改变改变pH值值对于对于方法开发方法开发至关重至关重要要不带电的化合物有较好的保留(比如酸性化合物在低pH值，碱性化合物在高pH)硅胶上的硅羟基在中等pH值时离子化增加对碱性化合物的保留(可以存在离子交换的作用)在方法开发中选择流动相的pH值优化保留及选择性Eclipse Plus可以用在宽的pH值范围高pH时可以选择Extend C18PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 33碱碱性化合物性化合物抗阻胺剂抗阻胺剂的的保留保留 vs.pH值值-在低在低pH值下变化值下变化较少较少DoxylamineChlorpheniramineTriprolidineDiphenhydraminepH3456750403020100Retention Volume mL Column:Eclipse XDB-C84.6 x 150 mm,5 mMobile Phase:75%25 mM phosphate buffer25%Acetonitrile Slight changes in pH may dramatically change retention and selectivity Always evaluate retention changes with pH during method developmentNo change in retention in this rangepKa 4.4,9.2 pKa 9.1 pKa 6.5 pKa 9.0 PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 34方法开发步骤方法开发步骤 在中在中等等pH值下值下 pH 7(6-9)20-50 mM buffer,调节%ACN for 0.5 k 20 ZORBAX Eclipse Plus C18改变有机相比例 改变有机相(MeOH)调节有机相比例以使 0.5 k 20 从步骤6重新开始STEP 5STEP 6STEP 7STEP 8峰间隔问题峰间隔问题峰间隔问题从低pH值到中等pH值 尝尝试试采采用用Eclipse Plus Phenyl-Hexyl,Eclipse XDB-CN,Phenyl or Bonus-RP 从步骤5重新开始在等在等pH可可能能可以提可以提供供更好的选择性更好的选择性可可能能与你与你的的样品样品更更兼兼容容在在中中等等pH下方法下方法优化优化步步骤骤与与低低pH下相下相同同Eclipse Plus 在在中中等等pH值下性值下性能优能优越越如果如果需需要要改变选择性可以改变选择性可以考虑考虑其它其它键合键合相相PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 35Eclipse Plus 色谱柱色谱柱是是在中低在中低pH值下进行值下进行方法开发的方法开发的理想理想选择选择适适用于用于 pH 2-9的流动相的流动相适适合于合于中低中低pH值下的方法开发值下的方法开发使使得得对对pH较较敏感敏感的分离的分离得到优化得到优化Eclipse Plus提提供供极极好的峰形和柱效好的峰形和柱效PDF created with pdfFactory trial version HPLC Method DevelopmentApril,2007Page 36Eclipse Plus 可以在可以在宽宽的的pH范围范围(pH2-9)下优化选择性下优化选择性1.procainamide2.buspirone3.pioglitazone4.eletriptan5.dipyridamole6.diltiazem,7.furosemidemin024681234567pH 2.7 0.1%formic acid/acnmin024681742653pH 4.8 NH4AC/acn024681234567pH 7 NaPO4/acnSelectivity and resolution can change with pHEclipse Plus can be used with many mobile phases and pHsConditions:Column:Eclipse Plus C18 4.6 x 100mm,5um Gradient:10 90%in 10 minutes Detection:UV 254 nmPDF created with pd