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细菌总论——课后习题.doc

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微生物总论——课后习题 第一章 细菌的形态与结构 1、什么是菌落?研究菌落有什么意义? 某个细菌再适合生长的固体培养基表面或者是内部,在适宜的条件下,经过一定时间的培养,生长繁殖出巨大数量的菌体,形成一个肉眼可见的、有一定形态的独立群体称为菌落。 在细菌学工作中,常通过固体培养基上的菌落,进行细菌的分离、纯化、计数及鉴定等 2、比较革兰氏阳性菌和阴性菌的细胞壁的结构及化学组成的差异。 用革兰氏染色法染色可以把细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类 革兰氏阳性菌的细胞壁较厚,化学成分主要是肽聚糖,此外还有磷壁酸、多糖、蛋白质等,其中磷壁酸是革兰氏阳性菌特有的成分,是特异的表面抗原。它带有负电荷,能与镁离子结合以维持细胞膜上的一些酶的活性。此外它对寄主细胞具有黏附作用,是A群链球菌的独立银子:或为噬菌体提供特异的吸附受体。 革兰氏阴性菌的细胞壁较薄,其结构和成分比较复杂,由外膜和周质间隙组成。外膜由脂多糖、磷脂、蛋白质等复合构成,周质间隙是一层薄的肽聚糖。其中脂多糖为革兰氏阴性菌所特有。 3、试述脂多糖及外膜蛋白的组成及功能。 脂多糖(LPS)为革兰氏阴性菌所特有,位于外壁层的最表面,由类脂A、核心多糖和侧链多糖三部分组成。类脂A是一种结合了多种长链脂肪酸的氨基葡萄糖聚二糖链,是内毒素的主要毒性成分,发挥多种生物学效应,能致动物体发热,白细胞增多,直至休克死亡。各种革兰氏阴性菌类脂A的结构极相似,没有属特异性。核心多糖位于类脂A的外层,由葡萄糖、半乳糖等组成,与类脂A共价联结,核心多糖具有属特异性。侧链多糖在LPS的最外侧,即为菌体抗原,由3~5个低聚糖单位重复构成的多糖链,其中单糖的种类、位置、排列和构型的不同,具有种、型特异性。 外膜蛋白(OMP)是外膜中镶嵌的多种蛋白质的统称,按含量和功能的重要性可将其分为主要和次要两类。主要的包括微孔蛋白及脂蛋白等。微孔蛋白由三个相同分子量的亚单位组成,形成跨越外膜的微小通道,仅允许小分子量的营养物质通过,大分子的物质不能通过,因此溶菌酶之类的物质不易作用到革兰氏阴性菌的肽聚糖。脂蛋白的作用是使外膜层与肽聚糖牢固的连接,可作为噬菌体的受体,或参与铁及其它营养物质的转运。 4、什么是原生质体、球状体、细菌L型?细菌L型的常用诱导剂是什么? 革兰氏阳性菌经溶菌酶或青霉素处理后,可完全去除细胞壁,形成只有细胞膜包住细胞质的菌体,成为原生质体。 用溶菌酶等作用革兰氏阴性菌,仅能除去细胞内的肽聚糖,形成仍有外膜层包被的菌体,称为原生质球或球状体。 细菌L型,细胞壁缺失或没有细胞壁的细菌变体,包括原生质体和原生质球,能够长期或短暂的进行有丝分裂。细菌L型常用的诱导剂是青霉素和溶菌酶。 间体:是细胞膜凹入细胞质内形成的一种囊状、管状或层状的结构,革兰氏阳性菌较为常见。其功能和真核细胞的线粒体相似,与呼吸有关,并有促进细胞分裂的作用。 5、试述细菌核体和真核细胞核的异同。 细菌为原核生物,其基因组DNA无核包被,分布于细胞质内,称为核体或拟核。细菌核体是一个共价闭合、环状双链的大型DNA分子 6、解释荚膜、微荚膜、黏液层、糖萼的概念及他们的功用。 荚膜:某些细菌在其生活过程中可在细菌细胞壁外周产生一种黏液状的物质,包围整个菌体,成为荚膜。 微荚膜:荚膜的厚度如在200nm以下,用光学显微镜不能看见,但是可在电子显微镜下看到,称为微荚膜 黏液层:有些细菌分泌一层很疏松的,易与菌体脱离的黏液样物质,称为黏液层 糖萼:有些细菌具有介于荚膜和黏液层二者之间的结构称为糖萼 细菌产生荚膜或者黏液层可以使液体培养基具有黏性,在固体培养基上则形成表面湿润、有光泽的光滑型或黏液型的菌落。 荚膜具有保护细菌的功能,可以抵抗动物吞噬细胞和的吞噬和抗体的作用,从而对宿主具有侵袭力。腐生性细菌的荚膜有保护细菌免受干燥和其他有害环境因素的影响,此外,荚膜也常是营养物质的贮藏和废物的排出之处,是很好的抗原成分。 7、S层是什么样的结构? S层是某些细菌的一种特殊的表层结构,由单一的蛋白质亚单位组成,是一种最简单的生物膜,其功能除作为分子筛和离子通道外还具有类似荚膜的保护屏障作用,能抗噬菌体、蛭弧菌和蛋白酶。 8、试述鞭毛的结构功能? 多数弧菌、螺菌,许多杆菌、个别球菌表面长有以一数十根弯曲的丝状物,称为鞭毛。鞭毛的显微结构由基体、鞭毛沟和鞭毛丝三部分组成,革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的鞭毛结构有些差异。 鞭毛的主要成分是蛋白质,由鞭毛蛋白的亚单位组成,鞭毛蛋白和动物的肌动蛋白类似,具有收缩性。鞭毛具有抗原性,称为鞭毛抗原或H抗原,不同的鞭毛抗原具有型特异性,常作为血清学鉴定的依据之一。 鞭毛的数量和在菌体上的排列可将细菌分为一端单毛菌、两端单毛菌、从毛菌和周毛菌 鞭毛是细菌的运动器官,具有规律的收缩,引起菌体的运动;鞭毛与细菌的致病性也有关系 9、菌毛的本质、分类及功能如何、 大多数革兰氏阴性菌和少数革兰氏阳性菌的军体上生长有一种较短的毛发状细丝,称为菌毛,又称纤毛或伞毛。 菌毛是一种空心的蛋白质管,由菌毛素亚单位组成,具有很好的抗原性,菌毛有很多不同类型,公认的两种分类方法是经典分类和Ottow分类,经典分来是将菌毛分为普通菌毛和性菌毛两类。 10、试述芽孢的结构、功能及对外界环境抵抗力强的原因。 某些革兰氏阳性菌在一定的环境条件下,可在菌体内形成一个圆形或者椭圆形的休眠体称为芽孢或者内芽孢。 芽孢具有较厚的芽孢壁,多层芽孢膜,结构坚实含水量少,折光性强, 芽孢结构多层而且密,各种理化因子不易透入,含水量少,蛋白质受热不容易变性,另外芽孢内含有一种特有的吡啶二羧酸与钙结合形成的复合物能够提高芽孢的耐热性和抗氧化能力,此外芽孢内含有一类特殊的蛋白质称为酸溶性芽孢小蛋白,与芽孢芯髓内的DNA紧密结合使之免受辐射、干燥、高温等破坏,芽孢不能分裂繁殖是细菌抵抗外界不良环境保存生命的一种休眠结构。 杀灭芽孢最可靠的方法是干热灭菌或高压蒸汽灭菌。 11、什么是格兰仕染色?有何意义?其染色机制如何? 细菌对革兰氏染色的不同反应,是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的,在染色过程中,当用乙醇处理时,由于脱水而引起网状结构中的孔径变小,通透性降低,使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色,因此,呈现蓝紫色;革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低,而脂类物质含量高,当用乙醇处理时,脂类物质溶解,细胞壁的通透性增加,使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色,然后又被染上了复染液(番红)的颜色,因此呈现红色。 第二章 细菌的生理 1、形成细菌个体的代谢过程有何特点? 细菌与动物真核生物新陈代谢的主要区别有如下几点: 第一, 细菌生长和繁殖的速度极快,超过动物细胞的10—100倍 第二, 细菌利用各种化合物作为能源的能力远远强于动物细胞 第三, 细菌对营养的需求比动物细胞更为多种多样,因为他们有多种代谢旁路 第四, 细菌可利用超常流水线式生产的方式合成大分子物质 第五, 细菌能产生诸如肽聚糖、脂多糖、磷壁酸等特殊物质 2、细菌新陈代谢过程是怎样的? 细菌的新陈代谢过程可按其功能分为物质摄取、生物合成、聚合作用和组装四个步骤 物质摄取:物质主要通过单纯扩散、促进扩散、主动转运及基因转位等方式进出细菌细胞,单纯扩散亦称为被动扩散是细胞内外物质最简单的一种交换方式,细胞内外物质靠浓度差进行分子扩散不需要能量。此种方式无特异性或选择性。促进扩散:某些物质与某些位于细胞膜的特异性载体蛋白相结合,而后将其转运至细胞内,这一过程具有特异性和选择性,也不需要能量。主动运输是细菌吸收营养物质的一种主要方式,与促进扩散一样需要特异性的载体蛋白能将特异性溶质逆浓度梯度泵入细胞,因此需要能量。基因转位物质在运输的同时受到化学修饰,从而能远远不断的输入细胞,此种方式在缺氧环境中较为常见。其过程涉及从可溶物向分子的化学变化需要特异性载体蛋白的参与,需要能量。 3、细菌的营养类型? 按碳素分为自养型和异养型 按能源区分为光能营养菌和化能营养菌 共四型:光能自(异)养菌和化能自(异)养菌 4、细菌的营养需要。 水分、 无机盐类、 含碳化合物 、 含氮化合物、 生长因子 5、细菌的生长曲线如何确定?有何意义? 一个菌体分裂为两个菌体所需要的时间称为世代时间 如将细菌接种在液体培养基并置于适宜的温度内,定时取样检查活菌数,可发现其生长过程具有规律性,以时间为横坐标,以活菌数的对数为纵坐标,可得出一条生长曲线,曲线显示了细菌生长繁殖的四个时期——迟缓期、对数期、稳定期、衰亡期 细菌的生长曲线是在体外人工培养条件下观察到的,对细菌的生长规律的研究及实践有着重要的参考价值 6、简述细菌生长各个期的特点 迟缓期是细菌来到新环境的一个适应过程,此时细菌菌体增大,代谢活跃,合成并积累所需酶系统,RNA含量明显增多,但是DNA量无变化,此时细菌数并不增加 对数期细菌生长迅速,以恒定速度进行分裂繁殖活菌数以几何级数增长,该期的病原菌致病力最强其形态、染色特性及生理活性均较为典型,对抗菌药物等的作用较为敏感 稳定期因营养的消耗、代谢产物的蓄积等,细菌的繁殖速度下降,死亡数逐步上升,新繁殖的活菌数与死菌数大致平衡,该期细菌的形态及生理形状常有改变,革兰氏阳性菌此时可被染成阴性 衰亡期细菌开始大量死亡,死菌数超过活菌数,此时细菌的菌体变形或自溶,染色不典型,难以进行鉴定 7、培养基有哪些种类? 培养基是人工配制的基质,含有细菌生长繁殖所必需的营养物质。 按营养组成的差异可将培养基分为基础培养基和营养培养基,前者含多数细菌生长繁殖所需的基本营养成分,在基础培养基中添加葡萄糖、血液或血清等即为营养培养基,最常用的是血琼脂平板 按状态的差异分为固体培养基、半固体培养基及液体培养基三类。液体培养基适用于扩增纯培养的菌体、确定细菌生长曲线等,固体培养基是在液体培养基中加入1%到2%的琼脂,加热融化冷却后而成,用于细菌的分离、纯化、生物活性检测等,半固体培养基用于穿刺试验、观察细菌的动力和短期保藏细菌等 按功能的差异可分为鉴别培养基、选择培养基及厌氧培养基。在培养基内加入特定的作用底物及产生显色反应的指示剂,即可肉眼根据颜色识别这就是鉴别培养基,在培养基内加入某种化学物质对不同细菌分别产生抑制或促进作用,从而分离出所需细菌称为选择培养基 8、细菌生长的条件 营养、温度、渗透压、PH、气体(需氧菌、厌氧菌、兼性厌氧菌) 第三章 消毒和灭菌 1、解释什么叫杀菌作用、抑菌作用、抗菌作用、灭菌、消毒、防腐、无菌? 杀菌作用是指某些物质或因素所具有的在一定条件下杀死微生物的作用 抑菌作用是指某些物质或因素所具有的能抑制微生物生长和繁殖的作用 抗菌作用是指某些药物所具有的抑制或杀灭微生物的作用 灭菌是指杀灭物体中所有病原微生物和非病原微生物及其芽孢、霉菌孢子的方法 消毒是指杀灭物体中的病原微生物的方法,消毒只要求达到消除传染性的目的,而对非病原微生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死 防腐是指阻止或抑制微生物繁殖的方法 无菌是指没有活的微生物的状态 2、简述物理因素对微生物的影响? 对微生物影响较大的物理因素包括:温度、辐射、干燥、声波、微波、过滤等 1、温度——不同温度对微生物生命活动呈现不同的作用,适当的温度有利于微生物的生长发育,但温度过高或过低都会影响微生物的新陈代谢,生长发育受到抑制,甚至使之死亡 低温:当微生物处于最低生长温度以下时,其新陈代谢水平降到最低水平,生长繁殖停止,但仍可长时间保持活力,所以常在5到10℃下保存细菌 高温:高温对微生物有明显的致死作用,因此常用于消毒和灭菌,用高温处理微生物时,可对菌体蛋白质、核酸、酶系统等产生直接破坏作用;热力可以使蛋白质中的氢键破坏使之变性或凝固,使双股DNA分开为单股;受热而活化的核酸酶使单股的DNA断裂,导致菌体死亡 2、辐射——辐射除可被一些产色素细菌利用作为能源以外,对多数细菌有损害作用。辐射对细菌的饿影响随其性质、强度、波长、作用的距离、时间而不同,但必须被细菌吸收才能影响到细菌的代谢。辐射对微生物的灭活作用可分为电离辐射和非电离辐射两种,非电离辐射包括可见光、日光、紫外线 可见光具有微弱的杀菌作用,若将某些染料加到培养基或涂在外伤表面,能增强可见光的杀菌作用,这一现象称为光感作用。 紫外线是日光杀菌作用的主要因素,紫外线的穿透力不强,所以只能消毒物体表面 3、干燥:细菌对干燥敏感 4、超声波:超声波处理可使菌体裂解死亡 5、微波:微波灭菌主要是利用微波的加热作用来完成的 6、滤过:滤过除菌是通过机械阻留作用将液体或空气中的细菌等微生物除去的方法,但是滤过除菌不能除去病毒、霉形体以及细菌L型等小颗粒 糖培养基、各种特殊的培养基、血清、毒素、抗毒素、抗生素、氨基酸等不能加热灭菌的液体常用滤过器过滤除菌 3、简述化学因素对微生物的影响 消毒剂的杀菌作用大致分为:使菌体蛋白质变性或凝固;损伤胞浆膜;感染细菌的酶系统和代谢;改变核酸的功能 4、影响消毒剂作用的因素 消毒剂的性质、浓度和作用时间;微生物的种类和数量;温度(一般温度升高可增强消毒剂的杀菌效果);酸碱度;有机物(环境中有机物的存在,尤其是蛋白质能和许多消毒剂结合,严重降低消毒剂的效果);药物的相互拮抗 5、简述生物因素对微生物的影响 1、抗生素、植物杀菌素和细菌素 某些微生物在代谢过程中产生的一类能抑制或杀死另外一些微生物的物质称为抗生素,他们主要来源于放线菌,少数来源于某些霉菌和细菌,大多数对任何动物有毒性 抗生素的抗菌作用主要是干扰细菌的代谢过程,达到可抑制其生长繁殖或直接杀灭的目的,作用原理可概括为四种:感染细菌细胞壁的合成;损伤胞浆膜而影响昂起通透性;影响菌体蛋白质的合成;影响核酸的合成 植物杀菌素:某些植物中存在有杀菌物质,这种杀菌物质称为植物杀菌素 细菌素:是某些细菌产生的一种具有杀菌作用的蛋白质,只能作用于与他同种不同菌株的细菌以及与他亲缘关系相近的细菌。分为多肽细菌素、蛋白质细菌素和颗粒细菌素三种 2、噬菌体 噬菌体是寄生在细菌、霉形体、螺旋体、放线菌以及蓝细菌等的一类病毒,也称为细菌病毒,有蝌蚪形、细杆型、微球形和柠檬形四种形态。典型的蝌蚪形由头部和尾部两部分组成,头部是由蛋白质衣壳内含有一份子的线状双股DNA构成;尾部主要含蛋白质。噬菌体具有抗原性,能刺激机体产生特异性抗体,对理化因素的抵抗力较强 噬菌体的增殖过程可分为吸附、侵入、生物合成、成熟和释放四个阶段 噬菌体可使混浊的细菌液体培养物变得清朗,在固体培养基上可使细菌裂解而呈现无细菌生长的区域极为噬菌现象 由于噬菌体裂解宿主细胞致使菌苔上形成一个个透亮不长菌的圆斑成为噬斑 6、简述噬菌体与寄主细胞的关系 噬菌体与寄主细菌的相互关系可分为溶菌反应和溶原反应两种类型,凡能使寄主细胞迅速裂解引起溶菌反应的噬菌体称为毒性噬菌体或烈性噬菌体。 有些噬菌体侵入寄主细胞后,将其基因整合与细菌的基因组中,与细菌DNA一道复制,并随着细菌的分裂而传给后代,不形成病毒粒子,不裂解细菌,这种现象称为溶原化,引起溶原化的噬菌体叫做温和噬菌体或溶原性噬菌体 7、简述噬菌体的应用 ①细菌的鉴定和分型:噬菌体的噬菌作用具有种和型的特异性,即一种噬菌体只能裂解一种和它相应的细菌,或仅能作用于该种细菌的某一型,故可用于细菌的鉴定和分型 ②检测未知细菌:应用噬菌体的效价增长试验可检测标本中相应细菌 ③分子生物学研究的工具:噬菌体的结构简单,易操作,曾作为研究病毒增殖的模式 8、简述热力灭菌法及其作用 热力灭菌法可分为干热灭菌和湿热灭菌两类,同一温度下后者效力比前者大,因为湿热中菌体蛋白较易凝固,蛋白质含水量越高凝固所需的温度越低 ①干热灭菌法分为火焰灭菌和热空气灭菌两类 火焰灭菌法是以火焰直接灼烧杀死物体中的全部微生物的方法,分为灼烧和焚烧两种 热空气灭菌法利用干热灭菌器,以干热空气进行灭菌的方法,适用于高温下不损坏,不变质的物品 ②湿热灭菌法分为: 煮沸灭菌:煮沸10到20min可杀死所有细菌的呃繁殖体,芽孢通常需煮沸1到2h,外科手术器械、注射器、针头以及食具常用此法灭菌 巴氏消毒法:用较低温度杀灭液态食品中的病原菌或特定微生物,而又不严重损害其营养成分和风味的消毒方法。用以消毒乳品和酒类,具体分为三类,第一类为低温维持巴氏消毒法,第二类为高温瞬时巴氏消毒法,第三类为超高温巴氏消毒法(132℃下维持1-2秒,加热消毒后应迅速冷却到10℃以下)又称为冷击法 流通蒸汽灭菌法:利用蒸汽在蒸笼或蒸汽灭菌器中进行灭菌的方法,也称间歇灭菌法,常用于一些不耐高温的培养基 高压蒸汽灭菌法:即用高压蒸汽灭菌器进行灭菌的方法,是应用最广泛最有效的灭菌方法 第四章 细菌及其他微生物的生态 1、 简述细菌及其他微生物在自然界中的分布状况 ① 土壤:土壤中具备多种微生物生长繁殖所需的营养、水分、气体环境、酸碱度、渗透压和温度等条件,并能防止日光直射的杀伤作用,是细菌和其他微生物生活的良好环境,故有微生物天然培养基之称。土壤中微生物的种类很多,随着土层深度、有机物质的含量、湿度、温度、酸碱度以及土壤的类型不同而异。表层土壤由于受日光照射和干燥,微生物数量较少,在离地面10到20㎝深的土层中微生物的数量最多,愈往深处微生物愈少,在数米深的土层几乎可达到无菌状态 ② 水:水是仅次于土壤的第二天然培养基,水中的微生物主要是腐生性细菌,其次还有真菌、螺旋体、噬菌体、藻类和原生动物等,一般地面水比地下水含菌种类多数量大,雨水和雪水含菌数量少 ③ 空气:空气中不含细菌和其他微生物生长繁殖所需的营养物质和充足的水分,还有直射日光的杀菌作用,因此不是微生物良好的生存场所,但是含有一定种类和数量的微生物。空气中微生物的种类和数量,随地区、海拔高度、季节、气候等环境条件而不同 2、 名词解释 细菌总数:是指于固体培养基上,在一定条件下培养后单位重量(g)、容积(ml)、表面积(c㎡)或体积的被检样品所生成的细菌菌落的总数 大肠菌群是指一群在37℃培养24h能分解乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌 大肠杆菌指数是指每1000ml水中检出的大肠杆菌数,而大肠杆菌价是指能检出大肠杆菌的最小水量 3、 正常动物体内细菌的生态关系 正常菌群:在正常动物体表或体内腔内经常有一层微生物或微生物层存在,他们对宿主不但无害,而且是有益和必需的,这一微生物层称为正常微生物群,或正常菌群. 在一个微生物种群内的个体间存在着协助和竞争的广西 4、 不同微生物种群间的相互关系 共生:两种或多种微生物共同生活在一起,彼此间不伤害或互为有利的关系,可分为中立(相互间不产生任何影响)、栖生(一方受益另一方不受任何影响)、互生(互相受益的关系) 拮抗:两种或多种微生物共同生活时,使双方或一方受害的现象,双方受害叫竞争,一方受害叫偏生 竞争:两种或两种以上微生物共同生存时,为获取能源、空间或有限的生长因子而发生的争取现象 偏生:是指两种微生物共同生长时,一方产生毒害或抑制对方生长的物质,使对方受害或生长受到抑制,而本身不受影响或反而受益 寄生:一种小型生物生活在另一种较大型生物的体内或体表,从中获取营养物质生长繁殖并使后者蒙受伤害甚至杀死的现象 吞噬:是指一种较大型的微生物吞入并消化另一种小型微生物以满足其营养需要的相互关系 5、 正常菌群与其宿主的相互关系 正常菌群和其宿主之间形成一个共生关系,具体表现在营养、免疫和生物颉抗三个方面 6、 名词解释 悉生生物:一切生命形态都知道的动物 悉生生物学:是用无菌动物技术研究微生物与其宿主相互关系的生命科学 悉生动物: 无菌动物:是指不携带任何微生物的动物,即无外源菌动物 悉生动物:狭义的悉生动物是指无菌动物,广义的也指有目的地带有某种或某些已知微生物的动物 无特定病原体动物(SPF):是指不存在某些特定的具有病原性或潜在病原性微生物的动物 清洁动物:是指动物来源于破腹产,饲养于半屏障系统,其体内外不能携带人畜共患病和动物主要传染病的病原体 普通动物:是指在开放条件下饲养,其体内外存在着多种微生物和寄生虫,但不能携带人畜共患病病原微生物的动物 第五章 细菌的感染和致病机理 1、 名词解释: 感染:是指病原微生物在宿主体内持续存在或增殖 发病:表示病原微生物感染后对宿主造成了明显的损害 病原菌:是指那些导致机体发病的细菌 致病性:一定种类的病原菌在一定条件下,能在宿主体内引起感染的能力 毒力:病原菌致病力的强弱程度 半数致死量(LD50):是指能使接种的实验动物在干然后一定时限内死亡一半所需的微生物量或毒素量 半数感染量:某些病原微生物只能感染实验动物、鸡胚或细胞,但不引致死亡,可用ID50来表示其毒力 毒力因子:构成细菌毒力的物质,主要有侵袭力和毒素 侵袭力:病原微生物在机体内定殖,突破机体的防御屏障,内化作用,繁殖和扩散的能力 黏附素:具有黏附作用的细菌结构成分的统称,主要是革兰氏阴性菌的菌毛,其次是非菌毛黏附素,如某些外膜蛋白以及革兰氏阳性菌的脂磷壁酸 类毒素:外毒素在0.4%甲醛溶液作用下,经过一段时间可以脱毒,仍保留原有的抗原性,称之为类毒素。 外毒素:某些病原菌在生长繁殖过程中所产生的对宿主细胞有毒性的可溶性蛋白质,大多数外毒素在菌体内合成后必须分泌于细胞外,故名外毒素,外毒素的毒性极强,有高度的特异性,有良好的免疫原性,可刺激机体产生特异性抗体,而使机体具有免疫保护作用,这种抗体称为抗毒素。 内毒素:内毒素是特指革兰氏阴性菌外膜中的脂多糖(LPS)成分,细菌在死亡后破裂或用人工方法裂解菌体之后才能释放 2、 什么是科赫法则?如何从分子水平解释科赫法则? 科赫法则是确定某种细菌是否具有致病性的主要依据。其要点是:第一、特殊的病原菌应在同一疾病中查见,在健康者不存在;第二、此病原菌能被分离培养得到纯种;第三、次培养物接种易感动物,能导致同样病症;第四、自实验感染的动物体内能重新获得该病原菌的纯培养 从分子水平解释科赫法则,第一、应在治病菌株中检出某些基因或其产物,而无毒力菌株中无;第二、如有毒力菌株的某个基因被损坏,则菌株的毒力应减弱或消除,或将此基因克隆到无毒菌株内,后者称为有毒力菌株;第三、将细菌接种动物时,这个基因应在感染的过程中表达;第四、在接种动物检测到这个基因产物的抗体或产生免疫保护 3、 试述致病菌侵入宿主细胞的主要过程 一、定殖:细菌感染的第一步就是在体内定殖(或称定居),实现定殖的前提是细菌要黏附在宿主消化道、呼吸道、生殖道、尿道及眼结膜处,以免别肠蠕动、黏液分泌、呼吸道纤毛运动等作用所清除 二、干扰或逃避宿主的防御机制:病原菌黏附于细胞或组织表面后,必须克服机体局部的防御机制,特别是要干扰或逃避局部的吞噬作用及分泌抗体介导的免疫作用,才能建立感染 4、什么是外毒素?其基本特性和组成是什么? 外毒素是某些病原菌在生长繁殖过程中所产生的对宿主细胞有毒性的可溶性蛋白质。大多数外毒素在菌体内合成后必须分泌到细胞外,故名为“外毒素” 特性:外毒素通常具有菌种特异性,毒性作用极强,毒性有高度的特异性,较好的免疫原性,可刺激集体产生特异性抗体,使集体具有免疫保护作用,这种抗体称为抗毒素。 多数外毒素不耐热,外毒素和酶都是蛋白质,许多性质相似,事实上很多外毒素本身具有酶的催化作用。 组成:大多数外毒素都是由A、B两种亚单位组成,有多种合成和排列形式.A亚单位是毒素的活性中心,称为活性亚单位,决定毒素的毒性效应。B亚单位称为结合单位,能使毒素分子特异性的结合在宿主易感组织饿细胞膜受体上,并协助A亚单位穿过细胞膜。二者单独均无毒性 5、 试述内毒素的来源、组成、致病意义及检测方法 内毒素特指革兰氏阴性菌外膜中的脂多糖成分(LPS),细菌在死亡破裂或人工方法裂解菌体后才能释放。 组成:LPS由O特异多糖册链、非特异核心多糖和类脂A三个部分组成。具有毒性的部分是类脂A 特性:内毒素耐热,不能被甲醛脱毒成类毒素,抗原性较弱 6、 比较外毒素和内毒素的主要异同点 特性 外毒素 内毒素 化学性质 蛋白质 脂多糖 产生 有某些革兰氏阳性菌或阴性菌分泌 有革兰氏阴性菌菌体裂解产生 耐热 通常不耐热 极为耐热 毒性作用 特异性,为细胞毒素、肠毒素或神经毒素,对特定的细胞或组织发挥特定作用 全身性,致发热、腹泻、呕吐 毒性程度 高,往往致死 弱,很少致死 致热性 对宿主不致热 致热性,常致宿主发热 免疫原性 强,刺激机体产生中和抗体(抗毒素) 较弱,免疫不足以中和毒性 能否产生类毒素 能,用甲醛处理 不能 7、 病原菌引起感染的条件(必要)? 病原菌有足够的毒力;达到一定的数量;有适宜的侵入门户 8、 使细菌毒力减弱的方法 通过非易感动物;在较高的温度下培养;在含有特殊化学物质的培养基中培养;自爱含有特异抗血清、特异噬菌体或抗生素的培养基中培养 9、 使细菌毒力增强的方法 连续通过易感动物;被温和噬菌体感染 第六章 细菌的遗传变异 1、 名词解释 遗传:所谓细菌的遗传系指亲代细菌与子代细菌相似性,它使细菌的形状保持相对稳定,是各种细菌存在的根据 变异:所谓细菌的变异是指亲代以及子代之间的不相似性,细菌得以发展进化 基因组:细菌的基因组位于核体,是遗传的主要物质基础。核体又称染色体,是由两条环状双螺旋DNA长链组成,含细菌的遗传基因,控制细菌的遗传和变异 核质:染色体DNA在细菌胞浆中呈螺旋状缠绕成团,外无核膜包被,故称核质 质粒:质粒是细菌染色体外的遗传物质,多为环状DNA分子。质粒可以自身复制,随宿主菌分裂传到子代菌体。 转座因子:近年来发现微生物的某些DNA片段作为一个毒力的单位可在染色体上移动,此种移动甚至可发生在不同种细胞之间,这种可移动的DNA片段称之为转座因子。有三种类型:插入序列、转座子、以及某些特殊的噬菌体 毒力岛(PAI):是指病原菌的某个或某些毒力基因群,分子结构和功能有别于细菌染色体,但位于细菌染色体之内,因此称之为“岛” 2、 试述细菌变异的类型和方法 基因突变简称突变,是变异的一种,指生物细胞遗传物质DNA分子结构突然发生了稳定的可遗传变化,是生物进化的一个重要因素 变异类型: 菌落形态变异:属于非选择性变异,由光滑S型转为R型,或由R型转为S型 结构变异:荚膜、芽孢、鞭毛变异 培养特性变异、抗原变异、抗性变异、生化特性变异、毒力变异、耐药性变异 诱发变异的方法: 物理方法:包括温度及各种射线(紫外线、激光等非电力辐射和X射线、快中子等电离辐射) 化学方法:主要是各种化学诱变剂,作用机制主要是:取代碱基参入DNA从而使DNA的某些碱基对发生置换;使碱基发生化学变构,从而引起DNA的某些碱基对发生置换;插入DNA相邻的碱基之间,引起移码突变;引起DNA分子断裂而诱发染色体畸变 生物学方法增强或减弱细菌毒力 基因工程的方法:基因分离(酶切、PCR);基因与载体结合;重组体载入受体细胞;筛选;验证 3、 细菌的基因转移和重组 转移和重组的形式有转化、转导、结合、原生质体融合、转染 转化:供体菌游离的DNA片段直接进入受体菌,使受体菌获得新的形状,称为转化。 转导:以温和噬菌体为媒介,把供体菌的DNA小片段携带到受体菌中,通过交换和整合,使受体菌获得供体菌的部分遗传性状,称为转导 结合:是两个完整的细菌细胞通过性菌毛直接接触,由供体细菌将质粒DNA转移给受体细菌的过程 4、 细菌遗传变异研究的实际意义 疾病诊断;疾病预防和治疗;基因工程:是用人工方法将所需要的某一供体生物的DNA大分子提取出来,在离体的条件下用适当的工具酶切,把它与作为载体的DNA链接起来,然后与载体一起导入某一易生长、繁殖的受体细胞中,让外源遗传物质在其中正常的复制和表达,从而获得新的产物; 目的基因分离;目的基因和载体DNA的体外重组;重组载体导入受体细胞;复制和表达 第七章 细菌的分类和命名 在原核生物中,细菌和古细菌是性质有别的两大类 细菌的分类单元和动植物一样,也有纲、目、科、属、种,最重要最基本的是种,其次是属。 属:是具有共性的若干种的组合,应与其他属有明显的差异,不同属之间的16SrRNA序列有较大的差异 种:是微生物学分类的最基本单元,种可认为是一群性质相似的菌株,它与其他菌株有明显的差异,根据16S核糖体RNA序列的异同,可作为定种的依据,凡是16SrRNA序列同源性大于97%的两株细菌即可确定为同一种 菌株:是不同来源的某一种细菌的纯培养物。同一种细菌可以有许多菌株,其主要的性状应完全相同,其次要性状可稍有差异。 2、细菌的命名根据“国际细菌命名法规”的规定,学名用拉丁文,遵循“双名法”。所谓“双名法”就是每一种拉丁文名称由属名和种名两部分构成,属名的第一个字母必须大写,其余应小写,即使种名是以人名或地名命名的,种名的头一个字母也应小写。整个属名及种名的在出版物中应排成斜体。 3、细菌分类鉴定的标准 长期以来细菌分类鉴定的主要依据是其表型特征、即形态、染色、培养、细胞壁结构、生理生化及抗原性的特征。 目前微生物界普遍考虑的分类依据是细菌的种系发生关系,即分析其基因特性从而确定其分类地位 研究细菌的生关系主要采用三种方法:测定DNA碱基(G+C)mol%、核酸分子杂交以及16SrRNA寡核苷酸编目 DNA碱基(G+C)mol%差异超过5%时就不可能是同一种,超过10%则为不同属 解链:是将DNA样本缓缓加热,随着碱基对间的氢键的断裂,DNA在260nm处的吸收逐渐增加,出现30%的增色效应。出现增色效应一半时的温度称为Tm Tm=69.3+0.41(G+C) 核酸分子杂交:原理是将待检细菌的DNA变性,其双链解为单链,而后与标记的参考菌株的单链DNA或rRNA杂交,形成杂交DNA-DNA或DNA-rRNA,互补区越多则同源性越高,60~70%以上的属于同一种,不到50%的为不同种 5、 细菌分类的方法 数值分类法:原理是根据数值分析,借助电子计算机,将拟分类的细菌按其性状相似的程度归类定位 6、 细菌的分类体系:伯吉氏系统细菌学手册 13
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