DGLC-33柱后碘衍生法测定芝麻中的黄曲霉毒素.pdf

DGLC-33 柱后碘衍生法测定芝麻中的黄曲霉毒素关键词：柱后碘衍生法；芝麻；黄曲霉毒素DGLC-33 Determination of aflatoxin in sesame with iodine derivation after column Key words：iodine derivation after column,sesame,aflatoxin 引言 黄曲霉毒素(AFT)是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物，具有极强的毒性和致癌性，可引发动物的肝癌、肾癌、胃癌等，其中 B1 的毒性最强。我国规定在玉米、花生、花生油、坚果和干果等食品中的最高允许含量为 20g/kg。1995 年，世界卫生组织规定食品中黄曲霉毒素最高允许浓度为 15g/kg。免疫亲和柱是将特异性的黄曲霉毒素单克隆抗体与载体蛋白偶联并填柱而成，能特效性地、高选择性地吸附黄曲霉毒素，而让其它杂质通过柱子，使样品得以纯化，黄曲霉毒素吸附后可被极性有机溶剂洗脱。本方法采用双三元液相色谱系统，使用 DGP 3600 右泵分析，使用 DGP 3600 左泵衍生，从而实现了对黄曲霉毒素的柱后衍生测定。测试条件仪器：Ultimate DGP 3600RS 系列，包括带有在线脱气单元的双三元梯度泵；带有一个六通阀的柱温箱；FLD-3400RS 检测器。色谱柱：Thermo Syncronis C18,5m 4.6150 mm衍生管：Reaction Coil 750 L(PN:42631)+Reaction Coil 375 L(PN:43700)左泵（衍生泵）：0.05%碘溶液右泵（分析泵）：22%乙腈+22%甲醇+56%水左泵：0.2 ml/min；分析泵：0.8 ml/minFLD 检测器条件：激发波长 365nm 发射波长 435nm衍生化温度：70 进样量：100 L样品前处理方法准确称取经过磨细的样品 10.0g，于 250mL 的具塞锥形瓶中，加入 2.0g 氯化钠及甲醇/水（70/30）至50mL，震摇提取（约 5min），定量滤纸过滤。准确移取 10.0mL 滤液，加入 40mL 水稀释，用玻璃纤维滤纸过滤 2 次，保证滤液澄清。准确移取 25mL 上述样品提取液上到免疫亲和柱（美国 VICAM）上，流速控制在 1 滴/s。上样完成后，注入 20mL 水清洗，并将空气通过免疫亲和柱，去除水分。取 4 mL 甲醇洗脱免疫亲和柱，流速为 1 滴/s。收集全部洗脱液于刻度管中，氮气吹至 0.5mL，用 50%甲醇/水定容至 1mL，待测。应用文集 207 结果和讨论黄曲霉毒素标准品测定谱图各物质浓度：黄曲霉毒素 M1：2.5ppb黄曲霉毒素 G1、G2、B1、B2：0.75ppb图 1 黄曲霉毒素标准品测定谱图样品及加标谱图（黑色为加标谱图）图 2 样品及其加标测定谱图标准工作曲线表 1 各标准品线性 时间 Cal.Type Points 相关系数 C0 C1 线性范围 LOD min (Offset)(Slope)（g/L）(S/N=3)(g/kg)黄曲霉毒素 M1 7.589 LinOff 5 0.9994 6.4397 5005.3058 0.5-15 0.1 黄曲霉毒素 G2 8.709 LinOff 5 0.9997 1345.6901 18171.8937 0.15-4.5 0.03 黄曲霉毒素 G1 10.213 LinOff 5 0.9997 1290.9989 13835.0040 0.15-4.5 0.04 黄曲霉毒素 B2 11.418 LinOff 5 0.9999 68.7725 46151.0730 0.15-4.5 0.018 黄曲霉毒素 B1 13.626 LinOff 5 0.9999 95.7629 36853.7696 0.15-4.5 0.03 208 样品检测及加标回收结果表 2 样品含量及加标回收结果 检测值 加标量 g/L 加标后浓度 g/L 加标回收%黄曲霉毒素 M1 NA 5.0 4.56 91.2 黄曲霉毒素 G2 NA 1.5 1.25 83.0 黄曲霉毒素 G1 NA 1.5 1.47 98.0 黄曲霉毒素 B2 NA 1.5 1.45 96.4 黄曲霉毒素 B1 NA 1.5 1.46 97.4结论本方法采用 GB/T 18979-2003 规定的高效液相色谱-柱后碘衍生法对芝麻中的黄曲霉毒素 M1、G1、G2、B1和 B2 进行了检测。由双三元液相色谱系统实现柱后衍生，即左泵为衍生泵，右泵为分析泵，柱温箱可提供高达70的反应温度，该系统对 5 种黄曲霉毒素的检测灵敏高，检出限分别为 M1 0.1g/kg、G1 0.04 g/kg、G2 0.03 g/kg、B1 0.03 g/kg 和 B2 0.018 g/kg，完全满足国标检测要求（G1、G2、B1 和 B2 总检测限 1g/kg）。应用文集 209