依达拉奉右莰醇抑制TLR4...通路减轻大鼠液压冲击脑损伤_张山.pdf

脑与神经疾病杂志年第卷第期，（）：，（）：（收稿日期：）？论著依达拉奉右莰醇抑制通路减轻大鼠液压冲击脑损伤张山徐伟韩亚非董雨李忆蒙申向竹唐会昌杨德真梁群【摘要】目的探讨依达拉奉右莰醇（）对大鼠液压冲击脑损伤的影响及机制。方法取 只大鼠随机分为假手术组、模型组、组和脂多糖（，激活剂）组，每组只；采用液压冲击法制备脑损伤大鼠模型。组腹腔注射（）给予？依达拉奉？右莰醇，：组给予？依达拉奉？右莰醇，假手术组和模型组给予生理盐水，均次（连续。通过评分评价大鼠神经功能缺损状况，干湿重法检测脑组织含量（），苏木精伊红染色法、染色法观察脑组织病理变化和神经元凋亡状况，法检测炎症因子水平，检测样受体（）核因子（）通路相关蛋白表达。结果治疗后，组大鼠评分和均明显低于模型组（）；模型组脑组织呈现结构疏松、神经元间隙增大、空泡变性、炎细胞浸润等病理变化及大量神经元凋亡，组脑组织病理学变化及神经元凋亡状况较模型组明显改善、凋亡指数明显降低（）；组脑组织肿瘤坏死因子（、白细胞介素（）水平和表达量及、表达比值较模型组均明显降低（）。能够明显逆转对液压冲击脑损伤大鼠上述各指标的调控作用（）。结论可抑制液压冲击脑损伤大鼠炎症反应、减轻脑损伤，其作用机制可能与抑制通路活化有关。【关键词】依达拉奉右莰醇；脑损伤；神经功能；通路；炎症中图分类号：文献标识码：文章标号：（），：（），（），；？（）；？；，（），（），基金项目：河北省医学科学研究课题（）作者单位：河北，邯 郸 市中心医院 神 经 外四科脑与神经疾病杂志年第卷第期 ，（）（），（，），（）；（），（），（）（），；创伤性脑损伤（，）包括机械冲击所致的初始损伤和后续一系列生化反应所引发的继发性脑损 伤两个阶段，病理学研究发现，早期即出现炎症因子大量分泌和脑组织炎性浸润，是导致继发性脑损伤的重要原因。核因子（，）可促进炎症因子分泌而加重机体炎症损伤，而其表达与活化受 样受体（；如（；？明，）调控。依达拉奉右茨醇（，）是按：配比组成的复方制剂，目前临床上主要用于急性缺血性脑卒中（，）的治疗。有文献报道通过下调炎性信号通路能够减轻缺血再灌注大鼠的焦虑抑郁样行为。本研究旨在探讨对大鼠液压冲击脑损伤的影响及相关机制，以期为临床治疗提供新的参考。材料与方法实验动物只级大鼠河北伊维沃生物科技有限公司，（冀），雄性，龄，体质量（）。清 洁控制环境、相对湿度（）饲养，自由饮水进食。实验方案经邯郸市中心医院伦理委员会审核批准（）。主要药物、试剂与实验仪器注射液（：依达拉奉：右莰 醇）购自南京先 声 药业有限公司；脂多糖（，）购自美国公司；苏木精伊红、染色试剂盒和、的法检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；裂解 液、蛋白浓度 检测试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；、抗体购自英国公司；、（抗体和增强型化学发光液（，）购自北足博奧森生物技术有限公司。型颅脑液压打击仪（美国公司）；型多功能酶标仪（美国公司）；型组织包埋机、凝胶成像系统（美国公司）；型切片机（德国公司）；型数码显微成像系统（日本尼康公司）；型电泳仪、型转膜仪（美国公司）。动物分组、造模与给药将实验用大鼠按随机数字表法分为组：假手术组（只）、模型组（只）、：组（以只）、组（只）。参照孙国柱等报道的方法复制液压冲击脑损伤大鼠模型：麻醉后沿头部正中切开皮肤、剥离骨膜，以颅骨矢状缝右、冠状缝后交叉点 为中心开直径骨窗，然后通过颅脑液压打击仪（设置冲击强度为）制备中度液压冲击脑损伤大鼠模型；假手术组按上述方法开颅骨骨窗，但不进行液压冲击。造模完成后，组腹腔注射（）给予？依达拉奉？右襃醇（根据人临床剂量与大鼠剂量换算公式计算所得），组给予？依达拉奉？右茨醇？，假手术组和模型组给予生理盐水，均次连续。神经功 能缺失评分和脑含水量（，）测定各组随机取只大鼠，依标准行神经功能缺失评分，评分越高说明神经功能缺失状况越严重问。处死大鼠后迅速开颅取脑，称重记为。，置于烘烤箱烘干至恒重记为（）（。脑与神经疾病杂志年第卷第期脑组织病理变化和神经元凋亡状况观察在各组剩余大鼠中分别 随机取只大鼠，麻醉后颈椎脱白处死，开颅取脑组织，经中性甲醛固定、脱水处理后制备石蜡切片，部分切片按苏木精伊红染色试剂盒操作说明进行染色处理，封片后通过数码显微成像系统观察脑组织病理变化；剩余切片按试剂盒说明行染色，封片后通过数码显微成像系统观察神经元凋亡状况，每张切片取个视野，视野内细胞数目由两位实验人员独立计数后取平均值，计算凋亡细胞占细胞总数的比例即为调亡指数（，）。脑组织、（水平检测取各组剩余的只大鼠，麻醉后颈椎脱臼处死，剥取脑组织并去除小脑、脑干、嗅球后，剪碎后加人放射免疫沉淀法（，）裂解缓冲液冰上静置后匀浆，？离心取上清，依照试剂盒操作说明处理后，通过酶标仪测定、（水平。脑组织、表达检测取脑组织匀 浆液，？离心取总蛋白，通过法检测总蛋白浓度，各组等量上样、电泳（浓缩胶、，分离胶、）分离蛋白、转膜（、）、脱脂奶粉室温封闭，洗膜后加入目标蛋白和内参（）抗稀释液孵育，洗膜后加入二抗稀释液室温孵育，显影后通过条带灰度值计算目标蛋白相对表达量。？统计学方法实验数据用软件行统计分析，计量资料以）表示，采用单因素方差分析行多组间 比较，采用检验行两组间比较，以为差异有统计学意义，结果？各组大鼠评分和比较（图）注：与假手术组比，；与模型组比，；与组比，图各组大鼠 评分和比较）模型组评分和较假手术组明显升高（）；组和组评分和较模型组明显降低（）；组评分和较组明显升高（）。？各组大鼠脑组织病理学改变比较（图）注：箭头示神经元空泡变性、胞浆固缩深染或炎细胞浸润图各组大鼠脑组织病理学改变（苏木精伊红，）假手术组大鼠脑组织未见病理学变化，模型组可见脑组织结构疏松，神经元数量减少、排列紊乱，空泡变性，胞浆固缩深染，炎细胞浸润等病理变化；与模型组比较，组和组脑组织病理变化均有所改善，其中组改善效果更加显著。？各组大鼠脑神经元凋亡状况比较（图、图）注：箭头示神经元凋亡图各组大鼠神经元凋亡状况（，）脑与神经疾病杂志年第卷第期图各组大鼠脑组织、表达，假手术组模型组组组注：与假手术组比，；与模型组比，；与组比，图各组大鼠脑神经元比较）模型组大鼠脑神经元凋亡数量较假手术组明显增 多，明显升髙（）；组和组脑神经元凋亡数量较模型组明显减少，明显降低（）；：组脑神经元凋亡数量较组明显增多，明显升高（尸）。各组大鼠脑组织、平的比较（图）？注：与假手术组比，尸；与模型组比，；与组比，图各组大鼠脑组织、表达比值比较）模型组大鼠脑 组织、表达量及、表达比值较假 手术组明显升高假手￥组模组组组：生：与假手术组比，；与模型组比，；与组比，图各组大鼠脑组织、水平比较）模型组大鼠脑组织、水平较假手木组明显升高）；组和组、（水平较模型组明显降低）；组、平较组明显升髙）。各组大鼠脑组织、表达比较（图、图、图）假手术组模型组组组：？假手术组模型组组组注：与假手术组比，；与模型组比，；与组比，图各组大鼠脑组织、表达量比较（）假手术组模型组组组刼刼）脑与神经疾病杂志年第卷第期（）；组和组、表达量及、表达比值较模型组明显降低（尸）；组、表达量及、表达比值较：组明显升高（）。讨论常见于交通事故、坠落伤、暴力事件等，约占全身部位意外损伤的，死亡率超过，并且青壮年为高发人群，给社会带来巨大的负担和损失。的初始损伤往往不可控，因此，相关研究主要集中在后期的继发性脑损伤阶段，有研究报道炎症反应在进展过程中发挥着关键作用。因此，靶向抑制炎症反应对减轻具有重要意义。发生后，创伤病灶将病理性刺激、等炎症因子大量释放，引发炎症反应。此外，具有炎症趋化因子属性，能够激活巨噬细胞、胶质细胞等进一步释放白细胞介素、前列腺素等细胞因子而加重炎症反应；能够刺激细胞间黏附分子释放，细胞间黏附分子则能够提高内皮通透性，进而促进炎性细胞浸润。注射液是年上市的是一种多靶点神经保护剂。本研究发现，液压冲击脑损伤大鼠模型神经功能缺失显著，脑含水量升高，脑组织可见神经元数量减少、间隙增大、排列紊乱、空泡变性、胞浆固缩深染以及炎细胞浸润、神经元凋亡等病理变化，脑组织、水 平升高，与￥等报道一致。本研究给予治疗液压冲击脑损伤大鼠后，发现能够明显改善大鼠神经功能、降低脑组织含水量，改善脑组织病变和神经元凋亡状况，降低、（水平，而激活剂能够明显逆转对液压冲击脑损伤大鼠 的影响。提示能够减轻大鼠液压冲击脑损伤，该作用可能与抑 制相关。是一种跨膜识别蛋白，主要由细胞外域、跨膜结构域、细胞内结构域三部分组成，等发现能够特异性识别脂多糖，介导促炎因子释放而激发炎症反应。在脑组织中，主要存在于胶质细胞，在脑组织炎症反应过程中发挥着重要的信号传导作用。生理状态下与其特异性抑 制 剂：结合形成“抓：复合物而无活性。能够诱导和亚基憐酸化，促使“”复合物解离，游离核转位后能够与特异性位点结合而促进、炎性因子表达与释放，进而加重炎症反应。等研究发现抑制通路介导的炎症反应能够减轻。本研究发现，给予治疗能够有效降低液压冲击脑损伤大鼠脑组织、表达 量和、表达比值，而能够明显逆转上述作用，提示对液压冲击脑损伤大鼠炎症反应的抑制作用可能与抑制通路活化有关。综上所述，可抑 制液压冲击脑损伤大鼠炎症反应，减轻脑损伤，作用机制可能与 抑制通路活化有关，本研究结果为做为治疗药物提供了理论支持。利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突作者贡献声明张山、徐伟、李忆蒙、申向竹、唐会昌、杨德真、梁群：资料收集和整理、撰写论文；韩亚非、董雨：论文审阅和指导参考文献，（）：，（）：，（）：张亚洁，王炎强，牟英峰，等依达拉奉右莰醇对脑缺血再灌注大鼠焦虑抑郁样行为的影响及机制中华行为医学与脑科学杂志，（）：孙国柱，王目纲，刘性强，等不同分级液压冲击脑损伤模型的建立？中华实验外科杂志，（）：，（）：，：，（）：，（）：，（）：，脑与神经疾病杂志年第卷第期 ，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：，（）：（收稿日期：）？论著首发急性缺血性卒中后认知 障碍分析刘月华梓心马立欣高伟聪刘琦董惠刘亚玲【摘要】目的探讨首发急性缺血性卒中（）后患者认知障碍的发生率、认知功能的动态变化、认知功能受损特点。方法选取年月至年月在河北医科大学第二医院神经内科住院的首次患者例。急性期使用认知筛查量表简易精神状态量表（）及蒙特利尔认知评定量表（）对例患者进行评估，个月后对患者进行随访，例患者完成认知量表测评。同时经筛选对例既往无脑部疾病的正常人进行了评估，其中例分，纳人作为认知正常组并完善全套认知量表测评。结果以个月 分作为划界值，卒中后认知 障碍发生率为（）。卒中后个月总分及个子域（视空间执行、命名、注意力、抽象、延迟回忆和定向）得分对比急性期均有所提高，差异有统计学意义（）。与正常组相比，患者整体认知及各认知域（注意、执行、语言、视空间、情景记忆）功能均存在不同程度的降低；组虽整体认知 功能正常，执行及视空间功能与正常组相比差异不大（），但注意、语言、情景记忆功能存在不同程度的受损，尤其是情景记忆功能，差异有统计学意义（）。结论卒中后个月患者认知水平有所恢复，但认知损害仍然很普遍。完善详细的认知量表测评，有助于及早发现认知受损以及进行针对性认知康复。【关键词】急性缺血性脑卒中；认知障碍；纵向研究中图分类号：文献标识码：文章编号：（），：，：基金项目：河 北 省 重点研发计划项目（）作者单位：石家庄，河北医科大 学 第二医院神经内科通信 作者：刘亚玲，：