2,4-二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中牛磺酸含量.pdf

分析检测食品科学2 0 0 8,V 0 1 2 9,N o 0 34 1 52，4 一二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中牛磺酸含量黄拮雯，唐钦强(深圳海王生物工程股份有限公司，广东深圳5 1 8 0 5 7)捷要：目的：探讨使用2，4 一二硝基氟苯柱前衍生高效液相法测定婴幼儿配方乳粉中牛磺酸含量的可行性。方法：H P L C 法，色谱柱：K r o m a s i lC n(2 5 0 m m 4 6 m m，5 I I m)，流动相：乙腈一0 0 5 m o l L 醋酸钠溶液(3 5：6 5)，流速1 0 m l m i n，检测波长3 6 0 n m。结果：测得的标准曲线在0 0 0 2 0 3 4 p g h a 范围内线性关系良好(r=0 9 9 9 6)，平均回收率为在9 9 6，R S D 为2 0(n-5)。结论：该方法准确，重现性好，可用于婴幼J l,i l 已方乳粉中牛磺酸的质量控制。关键词：牛磺酸；含量测定；H P L C；婴幼儿配方乳粉A s s a yT a u r i n ei nM i l kP o w e rf o rI n f a n ta n dY o u n gC h i l d r e nw i t hIr e c o l u m nD e r i v a t i z a t i o nH P L CH U A N GZ h e w e n，T A N GQ i n q i a n g(S h e n z h e nN e p t u n u sB i o l o g ya n dT e c h n o l o g i cC o L t d，S h e n z h e n5 1 8 0 5 7，C h i n a)A b s t r a e t：O b j e c t i v e：S t r e n g t ht h er e l i a b i l i t yo f d e t e m i n i n gt h ea s s a yf o rt a u r i n ei nm i l kp o w e rf o ri n f a n ta n dy o u n gc h i l d r e nw i t hp r e c o l u m nd e r i v a t i z a t i o nH P L C M e t h o d s：H P L Cm e t h o dW a su s e d c h r o m a t o g r a p h yc o n d i t i o ni n c l u d e d：T h ei n s t r u m e n tW a sS H m 邶Z U 1 0 Aw i t haK r o m a s i lC l lc o l u m n,a n dt h em o b i l ep h a s eW a sm e t h a n o l-0 0 5 m o l LN a A c(3 5：6 5)a tf l o wr a t eo f1 0m l m i n T h eU Vd c f 呛c 吐o nw a v e l e n g eW a s3 6 0 姗R e s u l t s：T a u r i n eh a dag o o dl i n e a r i t y(v=o 9 9 9 6)i nt h er a n g eo f0 0 0 2 0 3 4ug，m 1 T h er e l a t i v er e c o v e r yW a s9 9 6，R S DW a s2 0(n _ 5)C o n c l u s i o n：A na c c u r a t em e t h o dw i t hg o o dr e p r o d u c i b i l i t yf o rc o n t r o lo fm a r i n ei nm i l kp o w e rf o ri n f a n ta n dy o u n gc h i l d r e nw e e s t a b l i s h e d K e yw o r d s：t a u d n e；a s s a y：H P L C；m i l l【p o w e rf o ri n f a n ta n dy o u n gc h i l d r e n中图分类号：T S 2 5 2 5 1文献标识码：A文章编号：1 0 0 2 6 6 3 0(2 0 0 8)0 3 0 4 1 5 0 4牛磺酸(分子式N H：C H 2 C H：S O z O H，分子量1 2 5)是一种氨基磺酸，牛磺酸除了能促进大脑的正常发育外，还能增强机体的免疫力I l】。它作为一种新型营养强化剂添加在最新研制的第二代母乳化奶粉及其他各类儿童营养食品中。在婴幼儿食品中一般的添加量为3 0-5 0 m g l1 0 0 9 t 2 1，常用的含量测定方法有：邻苯二醛柱后衍生【3 1、2,4 二硝基氟苯柱前衍生【4】、邻苯二醛柱前衍生【5】高效液相色谱法。目前国标推荐的婴幼儿配方食品和乳粉中牛磺酸的含量测定方法为H P L C 柱后衍生法：样品经预处理，在阳离子交换柱中被分离，再与邻苯二甲醛(O P A)进行柱后衍生反应由荧光检测器检测定量【3】，该方法具有灵敏度高、定量准确等优点，但是分离需使用的钠离子交换柱价格昂贵，这给测定方法的推广应用带来了困难。为了有效控制海王牌牛初乳营养粉的质量，本实验参考文献【6】通过选择供试品溶液的制备方法和H P L C条件，采用2,4 二硝基氟苯为柱前衍生化试剂与牛磺酸在p H 9 的碳酸氢钠溶液中定量进行化学衍生反应，缩合成二硝基苯氨基酸，在反相色谱C 1 8 柱上进样分离，用紫外检测器检测定量，对建立牛初乳营养粉中的牛磺酸含量的测定方法进行研究。1材料与方法1 1试剂牛初乳营养粉深圳海王健康科技发展有限公司；牛磺酸对照品(批号：111 6 0 1-2 0 0 3 0 1)中国药品生物制品检定所r 乙腈为色谱纯；水为自制超纯水 其他试收稿日期：2 0 0 7 0 2 0 7作者简介：黄拮雯(1 9 7 9 一)，女，执业药师，研究方向为药物及保健食品分析。E m a i l：h u a n g z h e w e n h o t m a i l c o m 万方数据4 1 62 0 0 8,V 0 1 2 9,N o 0 3食品科学分析检测剂均为分析纯；1 2仪器S H I M A D Z U 一1 0 A 液相色谱系统(u v 检测器)岛津公司：T D L 4 0 B 型大容量离心机成都市生科仪器有限公司；超声仪上海船舶仪器研究院。1 3色谱条件与系统适应性实验色谱柱：K r o m a s i lCJ K 2 5 0 m m 4 6 m m，5pm)；流动相：乙腈0 0 5 m o l L 醋酸钠溶液(3 5：6 5)；流速：1 0 m J m J n；柱温：3 5；进样量1 0 ul；检测波长3 6 0 n m。理论塔板数按牛磺酸峰计算应不低于3 0 0 0，相邻峰的分2 0 0葺1 0 0O2 051 0时间(m i n)1 05l O时间(m i n)51 01 5时间(m i n)图1空白(A)、对照品(B)、供试品(C)高效液相色谱图F i g 1H P L Cc h r o m a t o g m m so fb l a n k r e f e r e n c es u b s t a n c e(1 3)a n ds a m p l e(C)离度应大于1 5。按上述色谱条件得到的空白，对照品及供试液的色谱图见图l。1 4 i 溶液的制备1 4 1对照品溶液的制备。精密称取牛磺酸对照品l O m g，加水稀释至1 0 0 m l，制成每l m l 含0 1 m g 的溶液，按1 4 3 方法操作，即得。1 4 2供试品溶液的制备精密称取样品约5 9 于具塞锥形瓶中，精密加入2 5 m l水，超声溶解，精密加入0 1 m o l L 盐酸溶液1 0 m l，摇匀，加入1 5 9 L 硫酸锌溶液5 m l，摇匀，精密加入1 0 m l水，摇匀，4 0 0 0 r r a i n 离心2 0 r a i n，取上清液过滤，取续滤液2 m l，按1 4 3 方法操作，即得。1 4 3衍生化反应分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液，分别置于1 0 m l 量瓶中，加0 5 m o l L 碳酸氢钠溶液2 0 m l 和1 的2。4 一二硝基氟苯乙腈溶液1 0 m l，混匀，置暗处6 0 水浴1 h，放冷至室温，用p H 7 0 的磷酸盐缓冲液定容，摇匀。用微孔滤膜过滤，即得。2方法与结果2 1线性关系考察精密量取对照品溶液0 0 0、0 4 0、0 8 0、1 2 0、1 6 0、1 8 0、2 0 0 m l，分别置于1 0 m l 量瓶中，按1 4 3 项下操作，分别精密吸取对照品溶液1 0ul，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品的浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线见图2。数据及处理见表1。表1标准曲线数据T a b l e1D a t ao fs t a n d a r dc u r v 8浓度(ug，m 1)04 0 78 1 41 2 2 01 6 2 71 8 3 12 0 3 4峰面积02 9 0 3 7 96 0 8 4 5 49 3 9 4 9 21 2 4 7 7 9 11 3 8 4 3 3 1 1 5 6 4 0 2 21 8 0(o D O1 6 D 0 0 0 01 4 0 0 0 0 01 2 0 0 0 0 01 使)0 0 0 0氍8 0 0 0 0 0基6 0 0 0 0 0。4 0 0 0 0 02 a 舢0-2 0 D 0 0 0O51 01 52 02 5浓度(g m 1)图2 标准曲线F i g 2S t a n d a r dc u r V O 万方数据分析检测食品科学2 0 0 8,场正2 9,N o 0 34 1 7结果表明，牛磺酸在0 0 0 2 0 3 4 1 a 咖l 范围内呈良好线性关系，回归方程为：Y=7 7 0 0 7 X 一1 0 6 0 4，R 2=0 9 9 9 6。2 2稳定性实验取供试品溶液，按上述色谱条件，分别在0、1、2、3、4、5、6 h 进样，测其峰面积，R S D=O 3 1(n=6)。结果表明，供试品溶液6 h 内基本稳定(表2)。表2 稳定性实验数据T a b M2R e s u l t so fs t a b i l i t y时间0 2s4sa 篙蓉芸：丝画丞垡蛩堕1 2 蛰!逝；Z!塑；蹩!望丝咝!兰Q；l2 3精密度实验精密吸取供试品溶液，按上述色谱条件，连续进样6 次，记录峰面积，牛磺酸的峰面积平均值为6 0 6 8 4 4，R S D=0 1 7(n=5)(表3)。表3 精密度实验T a b l e3R e s u l t so fp r e c l s i n次数。-zs4s6 赣盏乏峰面积6 0 7 0 1 36 0 8 7 4 16 0 6 5 5 26 0 6 2 3 46 0 5 I 啪(5 0 6 8 4 46 0 7 0 1 36 0 6 8 4 40 1 72 4重复性实验取同一批样品6 份，精密称定，按1 4 2 项下方法操作，依法显色，进样测定，样品中牛磺酸含量为4 1 2 0 m g 1 0 0 9(n=6)，R S D 为1 9 2(n _ 6)。结果见表4。表4重复性实验结果(n-5)T a b l e4R e s u l t so fr e p r o d u c i b i l i t y次数-2，4s6 盛高2 5加样回收率实验取已知含量的牛初乳营养粉5 9，共5 份，精密称取，分别精密加入1 0 1 7pg m l 牛磺酸对照品溶液1 0 m l，按2 2 项下操作制各溶液，在上述色谱条件下测定，计算回收率，牛磺酸的平均回收率为9 9 6，R S D=2 O(n _ 5)。2 6样品测定取3 批供试品(生产日期分别为2 0 0 4 0 2 0 4、2 0 0 4 0 2 0 5、2 0 0 4 0 2 0 6)，每批三份，分别按1 4 2 项下操作制成供试品溶液，依上述色谱条件测定，结果见表5。3讨论表5 样品含量测定结果T a b l e5D e t e r m i n a t i o nr e s u l t so fs a m p l e s生产日期平均含量(m g 1 0 0 9)R S D()2()0 4 0 2 0 44 3 9 91 4 02 0(珥呦54 6 1 30 8 92 c 1 0 4 0 2 0 64 0 2 81 6 l3 1样品预处理方法的考察3 1 1沉淀试剂的选择分别使用l O g L 偏磷酸溶液、6 0 9 L 磺基水杨酸溶液与1 5 9 L 硫酸锌溶液等不同的试剂进行沉淀。结果表明，1 5 9 L 硫酸锌溶液的效果最好。实验确定，在溶液p H 4 5 时，沉淀较完全，离心后沉淀与样液分离彻底。3 1 2提取时间的考察结果表明，超声1 5 r a i n 后，延长超声时间，牛磺酸的提取率没有明显差异。3 2流动相的筛选对乙腈0 0 5 m o l L 醋酸钠溶液(3 5：6 5)、甲醇一0 0 5 m o l L醋酸钠溶液(3 7：6 3)等不同流动相系统进行考察。结果表明，流动相为乙腈0 0 5 m o l l L 醋酸钠溶液(3 5：6 5)时，供试品溶液中牛磺酸的色谱峰峰形好，与2，4 二硝基氟苯及其他峰能达到基线分离，不拖尾。参考文献：【1】1王晓洁牛磺酸与儿童发育m 中国学校卫生，1 9 9 8 1 9(1)：11【2】G B1 4 8 8 0 9 4 食品营养强化剂使用卫生标准【S】【3】G B T 5 4 1 3 2 6 1 9 9 7 婴幼儿配方食品和乳粉牛磺酸的测定【S 1【4】杨素珍。王淑华高效液相色柱前衍生化法测定食品中的牛磺酸【J】食品工业科技，2 0 0 2，2 3：6 8-6 9 嘲任一平，黄百芬应用O P A 柱前衍生法测定食品中的牛磺酸们食品与发酵工业。1 9 9 5(1)：4 3 4 8 阎张志国，刘宁，贾云虹，等采用H P I,C 法柱前衍生检测乳粉中的牛磺酸【J】食品与发酵工业，2 0 0 4，3 0(9)：1 0 0-1 0 3 忉李占胜，张家麟王家伟，等高效液相色谱法测定乳粉中牛磺酸哪肉品卫生。1 9 9 6(5)：1 7 一1 9 万方数据2,4-二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法测定婴幼儿配方乳2,4-二硝基氟苯柱前衍生高效液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中牛磺酸含量粉中牛磺酸含量作者：黄喆雯，唐钦强，HUANG Zhe-wen，TANG Qin-qiang作者单位：深圳海王生物工程股份有限公司,广东,深圳,518057刊名：食品科学英文刊名：FOOD SCIENCE年，卷(期)：2008,29(3)被引用次数：3次 参考文献(7条)参考文献(7条)1.GB/T 5413,26-1997.婴幼儿配方食品和乳粉牛磺酸的测定2.GB 14880-1994.食品营养强化剂使用卫生标准3.王晓洁 牛磺酸与儿童发育期刊论文-中国学校卫生 1998(01)4.李占胜;张家麟;王家伟 高效液相色谱法测定乳粉中牛磺酸 1996(05)5.张志国;刘宁;贾云虹 采用HPLC法柱前衍生检测乳粉中的牛磺酸期刊论文-食品与发酵工业 2004(09)6.任一平;黄百芬 应用OPA柱前衍生法测定食品中的牛磺酸 1995(01)7.杨索珍;王淑华 高效液相色柱前衍生化法测定食品中的牛磺酸期刊论文-食品工业科技 2002(5)引证文献(3条)引证文献(3条)1.刘亚风.祝伟霞.袁萍.梁炜.杨冀州.孙转莲 婴幼儿配方奶粉中牛磺酸质量分数的检测方法期刊论文-中国乳品工业 2010(2)2.薛勇.薛丰.孙成均 功能食品与饮品中牛磺酸的柱前衍生-高效毛细管电泳法快速测定期刊论文-分析测试学报2010(4)3.邹晓莉.黎源倩.曾红燕.张婧.郑波 脉冲安培检测-高效阴离子色谱对药品和保健食品中牛磺酸的快速测定期刊论文-分析测试学报 2009(4)本文链接：http:/