活的不可培养细菌及其检测.pdf

饮 料 工 业2015，Vol.18，No.5摘要：活的不可培养（viable but non-culturable state，VBNC）细菌是细菌抵抗恶劣生存环境的一种自我保护形式。细菌在不良环境中，其细胞缩成球形或表现为细胞伸长，体积增大，用常规方法较难或无法进行分离培养，也不能进行检测，但仍具有代谢活性，在一定条件下仍可诱导复苏，具有潜在致病性，给食品安全、公共卫生带来隐患。介绍食品和环境中常见的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、副溶血弧菌、肺炎克雷伯氏菌、粪链球菌、霍乱弧菌、空肠弯曲菌、志贺氏菌等细菌的诱导和复苏条件，和目前对 VBNC 状态细菌常用的检测方法，以及水环境中致病微生物 VBNC 和啤酒中易感微生物 VBNC 研究现状，希望能够对细菌 VBNC 状态的研究者提供一定的参考。关键词：细菌；活的不可培养；诱导复苏；水环境；啤酒Non-culturable Bacteria and Test MethodsLIU Hong1，ZHANG Ming*，JIANG Ming-hong，WU Guang-hong（Qingdao Laoshan Mineral Water Co.，Ltd.，Tsingtao 266101，China）Abstract:Viable But Non-culturable State（VBNC）is a special condition of the bacteria in the bad environment，but itis difficult or unable to separate culture，and can not detected in this state.It is harm for food safety and public health.Introduction to inducements and recovery conditions of Salmonella，Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Vibrioparahaemolyticus，Klebsiella peneumoniae，Enterococcus faecal，Vibrio cholerae，Campylobacter jejuni，Shigella bacteria，and current commonly used detection methods of VBNC state of bacteria commonly used detection methods，and currentsituation of pathogenic microorganisms VBNC in water environment in pathogenic microorganisms and susceptibleVBNC in beer VBNC will provide some reference of bacteria in CBNC State for researchers.Key words:bacteria；viable but non-culturable；induced recovery；water environment；beer中图分类号：TS201.3文献标志码：A文章编号：1007-7871（2015）05-0074-06收稿日期：2015-10-06作者简介：刘红（1983 一），女，工程师，硕士，研究方向为食品科学。E-mail：通讯作者：张明（1981 一），男，助理工程师，研究方向为质量控制。E-mail：活的不可培养细菌及其检测刘红1，张明*，姜明洪，吴光虹（青岛崂山矿泉水有限公司，山东青岛266101）活的不可培养细菌（viable but non-culturable stateVBNC）是指细菌为适应不良的生存环境而形成的一种自我保护状态，处于非可培养状态的细菌虽然用常规方法无法培养，不能生长繁殖，也不能用常规方法进行检测，但其仍具有代谢活性，在一定的条件下仍可以被诱导并复苏，具有潜在的致病性。该状态自 20 世纪 80 年代首次由徐怀恕等人通过对大肠杆菌和霍乱弧菌存活规律的研究提出以来，引起了微生物学各领域的广泛关注。随着人们对 VBNC 状态细菌的研究不断深入，截止到目前，已发现 60 多种细菌存在 VBNC 状态1-2，包括沙门菌属、志贺菌属、大肠肝菌、肠球菌属、弧菌属、弯曲菌属等等。研究表明，细菌进入 VBNC 状态除了受细菌的生理状态和环境因素如温度、湿度、时间、盐度（渗透压）、溶氧量、营养成分甚至光照强度等条件影响外，其它因素如重金属、消毒剂，生物因素等均可影响细菌进入 VBNC 状态。不同的细菌受诱导的方式也不尽相同。在以上众多影响因素中，温度对细菌 VBNC 状态有显著的影响；盐度对肠道细菌也有明显的作用。另外，这些 VBNC 状态细菌重新恢复到可生长繁殖的条件也存在着多样性和不确定性3-7。有的细菌在恢复培养温度、湿度、pH、时间和控制好盐度、添加足够的营养物质即可使其复苏，但并非所有的 VBNC 细菌通过以上综述74饮 料 工 业2015，Vol.18，No.5方法都可以进行复苏。这些不确定性对人类安全和周围的环境构成潜在威胁，人们迫切需要对 VBNC 状态细菌有充分的认识和了解，并且研究各种新的检测方法来弥补传统细菌检测方法的不足。本文针对食品和环境中已存在 VBNC 状态的细菌进行一一介绍，并列出目前对细菌 VBNC 状态的检测方法，此外还对水环境和啤酒中VBNC 状态细菌的研究现状作一概述，以供参考。1食品和环境中细菌 VBNC 状态诱导和复苏1.1沙门氏菌（Salmonella）沙门氏菌作为重要的肠道科病原菌，能引起动物和人的沙门氏菌病以及食物中毒。据统计，在我国细菌性食物中毒中，70%80%是由沙门氏菌引起。因此，世界各地都把沙门氏菌作为各种食品、水以及进出口商品检疫的重要项目之一。传统的培养方法无法检测出 VB-NC 状态的细菌，因此很容易造成漏检。而漏检的 VB-NC 状态细菌很有可能在一定条件下复苏重新造成沙门氏菌病的暴发性流行。因此，建立 VBNC 状态沙门氏菌实验室快速诱导条件方便检测，显得十分重要。胡烨等8研究沙门氏菌的快速诱导条件，其中以 4低温诱导为对照组，在此基础上，添加不同浓度 Cu2+和冰醋酸进行试验。实验显示，在 4低温条件下，添加低浓度的Cu2+对沙门氏菌进入 VBNC 状态有明显促进作用，添加冰醋酸对沙门氏菌的诱导没有明显的促进作用。孙晓媛等9设计 11 种不同的生长培养条件对 3 株沙门氏菌进行诱导培养，观察可培养菌数的变化。结果表明标准株S1 在 LB 液体培养基 4需氧培养到 55d 时可培养菌数降为零，同时菌体变为球杆菌，可认为其进入 VBNC状态。1.2金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus，SA）金黄色葡萄球菌是一种常见的高致病性革兰氏阳性菌，传播途径较多，对人类的安全构成了威胁。食品中的 SA 在一定情况下可以产生肠毒素，从而导致食物中毒。因此，了解 SA 的诱导和复苏条件，至关重要。田聪等10采取温度、pH 和渗透压 3 个因素复合，尝试四种复苏方法诱导 VBNC 金黄色葡萄球菌。结果显示：pH 对金黄色葡萄球菌可培养菌数的影响最大，其进入VBNC 状态的最适条件为在含 15%NaCl 和 0.3%乙酸的营养肉汤培养基中于 4下培养 12d；8%无菌 Tween80可以使 VBNC 状态金黄色葡萄球菌 48h 后复苏。鲁梅芳等11将浓度为 107cfu/mL 的 Staphyloccocus aureus 分别采用 4冷藏、-20冷冻及添加 0.010.05mmol/LCu2+的方法进行诱导，并对 VBNC 状态的 SA 进行了检测；采用逐步升温和化学促进法对 VBNC 状态的 SA 进行复苏。结果表明经 0.015mmol/L Cu2+诱导 4d 或-20低温冷冻诱导 72h 均可诱导 Staphyloccocus aureus 进入 VB-NC 状态；将 0.5%吐温 20 或 l%过氧化氢酶添加到培养基中培养 24h 可使处于 VBNC 状态的 Staphyloccocus aureus 实现复苏。1.3大肠埃希氏菌O157H7（EscherichiacoliO157H7）大肠杆菌 O157H7 是一种常见的食源性致病菌，能够通过食物和水源传播，对人类的安全构成威胁。温度和营养成分的变化是导致大肠杆菌进入 VBNC 状态的主要影响因子，盐度或渗透压对大肠杆菌的存活也有一定的影响，除此之外还有光照、pH 变化、化学物质、外界环境变化和辐射强度等。E.coli O157H7 在低温寡营养条件下诱导 21d 后进入 VBNC 状态，通过在平板培养基中加入过氧化氢酶或者丙酮酸盐等物质，2d 内平板计数增加到 104105CFU/mL12。Ohtomo R 等13研究大肠杆菌在高盐磷酸盐缓冲液环境中，通过活菌直接计数法观察到可培养菌数迅速下降，当解除高盐环境压力后，细胞在 2h 内恢复可培养性，菌落数达到诱导前水平。Pinto D 等14首次利用在基本培养基中加入氨基酸或者改变温度的方法，使得 4条件下诱导的 E.coli 成功复苏。田聪等15将 VBNC 状态的 Ecoli O157H7 分别置于生理盐水和 LB 液体培养基中，在-18条件下诱导培养，分别在 18d 和 15d 观察到进行 VBNC 状态。采用 3 种方法进行复苏研究，分别是直接将培养液升温到37、加入 25%体积的酵母浸膏（25）和加入 8%体积的吐温-80（37）。结果表明：以上 3 种方法均能使VBNC 状态的大肠埃希氏菌在 2d 内复苏；但复苏时间要有合适的时机，在细菌进入 VBNC 状态 15d 后，再采用以上相同的方法则无法使其复苏。1.4副溶血性弧菌（Vibio parahemolyticus，VP）副溶血性弧菌是一种嗜盐菌，多生长于近海的海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。沿海地区居民常因生食受此菌污染的鱼贝类等海产引起食物中毒。杜萌等16为研究副溶血弧菌进入 VBNC 状态的条件，将110CFU/mL 浓度的 HW799 在 4寡营养条件的海水中培养，每隔 5 天取样分别用吖啶橙染色荧光显微镜直接计数法、活菌直接计数法和涂布平板法测定细菌总数、活细菌数和可培养细菌数。在第 30 天时绝大部分HW799 进入了 VBNC 状态；采用在培养液中添加营养物质升温培养的方法，使 VBNC 状态的副溶血弧菌细胞在 48h 内复苏为可培养状态。郝小斌等17在低温（4)寡营养（人工海水、陈海水）条件和低温（4）富营养条件（TSB-3%NaC1）下分别对副溶血性弧菌 BJ1.1997 和BJ1.1616 进行诱导培养。结果表明，两菌株都能进入VBNC 状态。采用升温至 37、热激、添加化学物质、添加营养物质和添加吐温 20 等多种方法对已经进入综述75饮 料 工 业2015，Vol.18，No.5VBNC 状态的副溶血性弧菌进行复苏。结果显示，只有升温和添加营养物质能够使 VBNC 状态细菌复苏，其它方法均不能得到复苏细菌。1.5肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella peneumoniae）肺炎克雷伯氏菌对人致病性较强，是重要的条件致病菌和医源性感染菌之一。因此诱导肺炎克雷伯氏菌快速进入 VBNC 状态以便检测至关重要。沈菊等18利用饥饿冷冻高渗透压法诱导 9d 后超过 30%的肺炎克雷伯氏菌进行 VBNC 状态。1.6粪肠球菌（Enterococcus faecal）粪肠球菌是革兰氏阳性球菌，是人和动物肠道内主要菌群之一。由于粪肠球菌比大肠杆菌对外界环境温度适应性强、抵抗力强及耐受性强，甚至可以与多种抗生素相抵抗和生长营养要求不高，因此在自然界分布广，存活力持久。目前该菌多作为生活饮用水，管道水和一些水质的指示菌。卫生学家认为，肠球菌类似于大肠菌群的生态活动，但其对恶劣的外环境和冷冻条件具有较强的抵抗力，作为监测水质卫生，环境卫生质量的污染指标更具有卫生学意义。当粪肠球菌面对不良生存环境时，可进入 VBNC 状态，从而在不利条件下继续存活，当条件适宜时再恢复其致病性，造成感染。低温和寡营养是诱导粪肠球菌进入 VBNC 状态的关键因素。Sig-noretto C 等19研究发现低温可以促使粪肠球菌进入 VB-NC 状态，大大缩短了培养时间。Heim S 等20研究发现可见光对粪肠球菌有明显的诱导作用。他将湖水过滤消毒后在（40.5）下培养，并将其置于 4 个 100W 的灯泡中间大约60cm处2W，粪肠球菌就可以进入VBNC状态。1.7霍乱弧菌（Vibrio cholerae）霍乱弧菌是人类霍乱病的病原菌。广泛存在于自然界的水环境中。Colwell R R 等21研究表明霍乱弧菌是河、湖及沿海区域天然微生态的成员之一。霍乱弧菌在温暖的条件下，能够进行培养繁殖；在低温条件下，其生存状态发生改变，通常不能用普通方法进行培养，即进入 VBNC 状态。许兵等22先将霍乱菌株采用低温方式使其进入 VBNC 状态，制备 VBNC 状态的霍乱菌株浓缩液，然后将浓缩液注入兔肠结扎段中，并作对照试验。通过兔肠可使 VBNC 状态的霍乱弧菌复苏，恢复成为可培养状态。通过对死亡兔子的解剖实验观察到，复苏的霍乱弧菌具有很强的毒力，使兔肠结扎段肿胀、积水、内壁紫红色并出现溃疡。1.8空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni）空肠弯曲杆菌是一种重要的革兰氏阴性致病菌，其产生的肠毒素可引起急性肠胃炎。可使空肠弯曲杆菌进入 VBNC 状态的外界环境因素较多，其中以温度、pH值、营养、水等最为重要。空肠弯曲菌的生长温度在3047，42为最适生长温度。在 30时，空肠弯曲菌的生长率迅速下降。空肠弯曲菌的热敏感性表现在温度高于 42后。因此，对空肠弯曲菌的培养来说，温度是其中重要的影响因素之一23。Boucher S N 等24在研究不同温度条件对可培养性的影响时发现，空肠弯曲菌在30条件下，48h 内即进入 VBNC 状态。温度越低，培养时间越长。空肠弯曲菌在 pH6.57.5 时最适合生长繁殖，最高 pH 值不能超过 9.0，在 pH 值高于 9.0 或低于4.0 时细胞数会明显减少，因此乙酸、抗坏血酸、醋酸和乳酸可以抑制空肠弯曲菌生长，Chaveerach 等25研究表明，酸性环境可使空肠弯曲菌容易进入 VBNC 状态。营养缺乏也容易诱导空肠弯曲菌进入 VBNC 状态。由于空肠弯曲菌对空气中的 O2、N2和 CO2都较为敏感，因此其在空气中不能生长繁殖。特别是 CO2作为最适生长条件的关键。水中低含氧量、温度等都可以导致空肠弯曲菌进入 VBNC 状态。Bafone 等26研究 9 株 VBNC 空肠弯曲菌在 4人工海水中的可培养性时发现，3 株VBNC 空肠弯曲菌在 1215d 之间具有可培养性，5 株在 25d 时具有可培养性，2 株在 35d 时具有可培养性。这些菌株在注射到活鼠体内后得到了复苏，从而表明空肠弯曲菌在 VBNC状态下可以坚持数月，并具有传染性。1.9志贺氏菌（Shigella）志贺氏菌是人类细菌性痢疾最为常见的革兰氏阴性病原菌。研究志贺氏菌对人类预防痢疾有重要意义。孙宗科等27研究了用低温寡营养因素可诱导处于活的非可培养状态的痢疾志贺菌复苏，探讨其潜在致病性，并建立了逆转录定量 PCR 检测方法来检测处于 VBNC 状态的痢疾志贺菌。2检测方法随着人们对 VBNC 状态细菌的研究不断深入，用于VBNC 细菌检测的方法也越来越多，如荧光显微镜检测技术（包括基于底物吸收能力的活菌直接计数法、细胞质膜结构完整性的活/死细菌试剂盒检测法、根据氧化还原能力的呼吸检测法）、分子生物学检测方法以及免疫学检测方法等。本综述就“活的非可培养状态”细菌的常用检验方法进行一一列举，以满足各类研究目的需要。2.1荧光显微镜检测技术荧光显微镜检测技术研究细菌活的非可培养状态所用的最基本的技术手段。主要包括活菌直接技术法、细胞完整性检测法、呼吸检测法等。2.1.1活菌直接计数法（DVC）由 Koguret28在 1979 年首次提出。原理是向细菌培综述76饮 料 工 业2015，Vol.18，No.5养液中添加少量的营养物和能够抑制 DNA 合成的萘啶酮酸，培养 6h，25。吖啶橙染色，然后荧光显微镜观察，如果细胞伸长则说明其为存活状态。因为在萘啶酮酸的作用下，活的非可培养状态细胞可以吸收营养生长，进行蛋白质合成，细胞会变长但不能分裂。DVC法是目前最常用的检测方法，如检测自然环境中某种特定的细菌时，结合单克隆抗体、原位杂交等技术，可特异性地检测目标菌体，且灵敏度很高。此方法适用于革兰氏阴性菌，不适用于阳性菌，因为阳性菌对萘啶酮酸有强烈的抵抗作用，所以改良的活菌直接计数法可以使用环丙沙星、诺氟沙星等具有抑制 DNA 多聚酶的药物代替萘啶酮酸。2.1.2LIVE/DEAD 试剂盒检测利用活/死细菌背光源试剂盒29，30进行荧光显微镜检测，该试剂盒中含有两种核酸染料 SYTO-9 和 PI（Propidium iodide），在波长 480/500nm 时，SYTO9 将活细菌和死细菌都染色并呈现绿色荧光；PI 由于不能进人具有完整细胞膜的细菌而只能染色“死”细胞，且会减低 SYTO-9 造成的绿色荧光效果，在 490/500nm 波长下呈红色，因此死/活细胞在荧光显微镜下分别显示红色和绿色。研究者可通过荧光下细菌所呈现的不同颜色来区分活菌和死菌。该方法优点在于颜色对比鲜明，操作简单方便且节省时间，应用试剂盒可快速鉴别培养细菌的死活状态。2.1.3呼吸检测方法在细菌培养物中加入无色的 CTC 或 INT 等电子受体物质，活细胞的新陈代谢作用可以将其无色还原成紫色或者红色，因此可以通过颜色来判断活菌或死菌。这些方法相对 DVC 方法优点显著，无论是异养还是自养细菌，只要有活跃的电子传递链，均可被检测到。该方法可以采取结合活菌直接计数法，会使观察效果更加明显。以上荧光检测技术在 VBNC 细菌研究中也显现出很多局限性。比如操作繁琐，耗费时问，不利于 VBNC 细菌的快速检测；适应范围窄，仅对革兰氏阴性细菌适用，而对革兰氏阳性则不适用；不能真实反映活菌数量；所用材料种类多，且取材不便。基于以上方法的不足，分子生物学、免疫学等方法以其准确、快速、灵敏度高和特异性强等优点，近些年得到了广泛的应用。2.2分子生物学方法利用分子生物学方法检测 VBNC 状态细菌已成为一种新趋势。PCR 作为分子生物学的一项基础性的检测技术，包括 PCR 检测技术、基因芯片技术和核酸探针技术等，已得到广泛的应用和发展。研究表明，引起细菌VBNC 状态有关的是一组易受环境变化影响的基因群，并且不同细菌发生 VBNC 状态，其基因群也不相同。因此，PCR 检测技术原理便是根据该细菌的特异基因DNA 和 mRNA，设计引物，进行扩增检测的一种方法。李影等31利用 mRNA 差异显示 RT-PCR 技术分析沙门氏菌 Spullorum VBNC 状态与正常状态所表达的差异基因。Warne J M 等32采取随即扩增多态 DNA 技术检测VBNC 细菌，发现在细菌进入 VBNC 状态的过程中，检测信号逐渐消失。氯霉素可以抑制检测信号的消失说明细菌在进入 VBNC 过程中产生的 DNA 结合蛋白可能是检测信号消失的原因。Coutard F 等33采用即时 RT-PCR和核酸探针相结合的方法，对培养于 4的人工海水15d 后进入 VBNC 状态的 Vparahaemolyticus Vp5 菌株进行检测。分子生物学检测方法的特点是直接从样品中提取DNA 或 RNA，中间没有筛选过程，所以得到的提取物能准确地反映样品中微生物的实际情况，避免了传统培养方法非直接检测的不足，能够对某一微生物在环境下存在的含量做出估计，对研究未可培养微生物资源，发现新基因及其他生物活性物质的基因有着非常重要的意义。2.3免疫学检测方法免疫学检测方法因具有较高的特异性和敏感性成为检测细菌的主要手段之一。徐怀恕等34的研究结果表明，进入 VBNC 状态的细菌和正常细菌一样，都保持着表面抗原，因此可以采用免疫技术对它们进行检测。李孝权等35采用间接免疫荧光的方法对水中 VBNC 状态的霍乱弧菌（O1 群、O139 群）进行了检测，成功检测到了非可培养状态的霍乱弧菌。Biosca E G 等36采用特异性 LPS 抗原的 ELISA 方法，对创伤弧菌 2 型在环境中的存活规律进行了研究，成功检出处于生长阶段的病原菌细胞和 VBNC 状态细胞。通过研究者近几年对以上检测方法的研究及应用，发现单一的检测方法总会存在各种各样的缺陷与不足，而将几种检测方法结合起来不仅可以提供新的思路，而且可以有效避免单一检测方法的不足，提供检测准确性。鉴于此种情况，利用新兴技术建立新型检验方法，成为目前人们研究 VBNC 状态细菌的当务之急。3水环境和啤酒中细菌 VBNC 状态的研究水环境中常见的致病微生物主要是弧菌属和气单胞菌属细菌，其中很多种都能够进入 VBNC 状态。常规方法不能检测出此状态的细菌，但并不影响其潜在的致病力。水环境中致病微生物对温度、营养条件、高渗透压、光照和辐射等环境条件都较敏感。因此，低温度、综述77饮 料 工 业2015，Vol.18，No.5寡营养和光照等条件共同作用可加速促进细菌进入 VB-NC 状态。Habibur R 等37研究嗜水气单胞菌在 5和25时进入 VBNC 状态的数量，发现嗜水气单胞菌在5时的细菌存活数量比 25要少很多。但并不是说所有的水环境致病菌在低温条件下都能进入 VBNC 状态。潘高山等38在室温 25下用湖水培养温和气单胞菌，90的细菌在 4d 后就进入 VBNC 状态。此实验说明，当水环境的营养物质缺乏时，细菌容易进入自我保护的VBNC 状态。水环境中 VBNC 状态细菌复苏通常只需要恢复适宜细菌生长的生存环境即可。Thomas V 等39提高VBNC 状态弧菌 Vibrio shiloi 和 Vibrio tasmaniensis 的培养温度，使其温度提高至 20，两种细菌均可以继续培养繁殖：Morris J 等40将处于寡营养条件下 VBNC 状态的原绿球菌（Prochlorococcus）重新放置于富营养环境时，原绿球菌可迅速恢复生长繁殖的能力。瓶装水中，大肠菌群和金黄色葡萄球菌通常作为微生物污染的指标菌。曹小红等41研究表明，将大肠杆菌和金黄色葡萄球菌放置于低温环境或添加 Cu2+进行培养，可使大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进入 VBNC 状态。同时过氧化氢酶和吐温 20 可使处于 VBNC 状态中的两种细菌在短时间内实现复苏，重新具有可培养性。啤酒一般被认为是安全性食品，不易生长微生物，主要在于其缺乏微生物生长和繁殖所需要的营养物质。并且啤酒中一定浓度的酒精、极低含量的氧、高浓度的二氧化碳、较低 pH 在某种程度上都可以抑制微生物的生长。但啤酒的生产环境中，仍然有一些耐酸、厌氧微生物，对啤酒的安全存在一定的隐患。目前，国内外关于各种啤酒中 VBNC 状态细菌报道还很少。2006 年，Suzuki 等通过采用啤酒内连续传代的方法研究 L.lindneri和 L.paracollinoides 的可培养性，结果表明当分别传代培养至 40 和 70 代后，这两种啤酒有害乳杆菌为进行自我保护可进入 VBNC 状态，难以检测，但对于啤酒同样具有污染能力。研究还表明，升温至 52可加快 L.lindneri 和 L.paracollinoides 进入 VBNC 状态。针对水环境和啤酒中致病微生物的检测，可以使用前面提到的荧光显微镜检测技术、分子生物学检测方法和免疫学方法，其中活菌直接计数法是目前检测水环境中致病微生物 VBNC 状态的常用方法之一。此外还可以使用 LIVE/DEAD 试剂盒以及分子生物学方法进行检测。对于啤酒中微生物的检测，还可以使用 ABD 培养基全面检测啤酒易感乳杆菌，包括在 MRS、NBB 等传统培养基上无法检出的 L.lindneri 和 L.paracollinoides 等难培养菌株。ABD 培养基适宜培养有害乳酸菌的生长，抑制非啤酒有害微生物的生长，与几种常用的检测培养基相比，已达到快速检测难培养啤酒易感微生物的目的。4结论VBNC 是细菌在不利环境条件下形成的一种特殊的自我保护状态。随着人们对 VBNC 的认识更加深入，细菌 VBNC 诱导、复苏条件的研究和检测方法的开发，也日渐成为人们探索的热点。这对保障食品安全、人类健康以及公共卫生安全具有重要的意义，同时也能够为传染病源的追溯和病原菌的预防提供重要的理论支持和依据。希望本综述能给更多的微生物研究者提供一些参考和研究思路。参考文献：1OLIVER J D.The viable but nonculturable state in bacteriaJ.Micro-biol，2005，43：93-1002李影.大肠杆菌、乳酸杆菌“活的非可培养状态”研究D.长春：吉林农业大学，2007.3DUSSERRE E，GINEVRA C，HALLIER-SOULIER S，et al.APCR-based method for monitoring Legionella pneumophila in watersamples detects VBNC that can recover their cuhivability J.ApplEnviron Microbiol，2008，10：1128.4BASAGLIA M，POVOLO S，CASELLA SResuscitation of viablebut not culturable Sinorhizobium meliloti 41 pRP4-luc：effects of oxy-gen and host 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