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测定饲料中单宁的方案（分光光度法）引言引言 目前，“饲料禁抗”已成为全球畜牧业生产的趋势，对提高畜产品质量安全、增加绿色优质畜产品供给、降低养殖生产成本、促进畜产品出口、实现畜牧业可持续发展意义深远。单宁作为替抗产品在动物生产中的应用具有一定的可行性。关键词 单宁 分光 美析 原理原理 用丙酮溶液提取饲料中单宁类化合物,经过滤后,取滤液加钨酸钠-磷钼酸混合溶液和碳酸钠溶液，显色后,以试剂为空白对照,用分光光度计于 760 nm 波长处测定吸光度值,用单宁酸作标准曲线测定饲料中单宁含量。仪器及试剂仪器及试剂 美析 UV-1500 紫外可见分光光度计:带 10 mm 比色皿,可在 760 nm 处测定。电子天平:感量为 0.1 mg.粉碎机。振荡仪。单标线吸管:1 mL,10 mL,50 mL,A 级。刻度吸管:5 mL。容量瓶:50 mL,100 mL,200 mL,A 级。具塞三角瓶:250 mL。中速定量滤纸。除非另有说明,本标准中所用试剂均为分析纯,水符合 GB/T 6682 三级用水规定。钨酸钠(Na2O4W2H2O).磷钼酸(H2Mo12O40PXH2O)。钨酸钠-磷钼酸混合溶液:称取 100.0 g 钨酸钠、20.0 g 磷钼酸,溶于约 750 mL 水中，移入1000 mL 回流瓶中,加入 50 mL 磷酸,充分混匀,接上冷凝管,在沸水浴上加热回流 2h,冷却,转入1000 mL容量瓶中,用水定容至刻度摇匀,过滤置棕色瓶中保存。室温下可保存14 d。无水碳酸钠(Na2CO3)。碳酸钠溶液(75 g/L):称取 37.5 g 无水碳酸钠，溶于 250 mL 温水中,混匀,冷却,稀释至 500 mL,过滤到储液瓶中备用。室温下可保存 7d.丙酮(C3H6O)。丙酮溶液(11,体积比):分取等体积的水和丙酮(4.6),等体积混合,摇匀,即得。单宁酸标准品(C76 H52O46):含量95.0%。单宁酸标准储备液:称取单宁酸标准品适量(精确到 0.0001g),加适量水溶解,用水定容至100 mL,摇匀,制成单宁酸质量浓度约为 1 mg/mL 的标准储备液。在冰箱中 4可保存 5d。单宁酸标准使用液;精密量取单宁酸标准储备液 10.00 mL,置 200 mL 容量瓶中,用水定容至200 mL,摇匀。此溶液单宁酸质量浓度为 50 mg/L,用时现配。试样制备试样制备 按 GB/T 14699.1 采样,按 GB/T 20195 制备试样,磨碎,通过 0.45 mm 孔筛,混匀,装入密闭容器中,避光低温保存备用。分析步骤分析步骤 试液的制备 称取试样 1 g2 g(精确至 0.000 1 g),置于 250 mL 具塞三角瓶中,精密加入丙酮溶液 50.00 mL,加塞密封,置振荡仪上振摇 40 min,静置,用中速定量滤纸过滤,弃去初滤液,续滤液供测定用。测定测定 标准曲线的绘制 精密量取单宁酸标准使用液 0.00 mL,0.50 mL,1.00 mL,2.00 mL,3.00 mL,4.00 mL、5.00 mL和6.00 mL,分别置盛有约30 mL水的50 mL容量瓶中,摇匀;加钨酸钠-磷钼酸混合溶液2.5 mL,加碳酸钠溶液 5.0 mL,摇匀;分别用水定容至 50 mL,播匀。单宁酸标准溶液浓度分别为 0.00 mg/L,0.50 mg/L、1.00 mg/L、2.00 mg/L,3.00 mg/L、4.00 mg/L,5.00 mg/L 和 6.00 mg/L,放置 30 min 显色后,以标准曲线 0.00 mg/L 为空白,在 760 nm 波长处测定标准溶液的吸光度,以单宁酸浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。试样的测定试样的测定 精密量取试液 1.00 mL,置盛有约 30 mL 水的 50 mL 容量瓶中,摇匀;加钨酸钠-磷钼酸混合溶液 2.5 mL,加碳酸钠溶液 5.0 mL,摇匀;用水定容至 50 mL,摇匀。放置 30 min 显色后，以标准曲线 0.00 mg/L 为空白,在 760 nm 波长处测定试样溶液的吸光度,根据标准曲线求出试液中单宁酸的浓度。如果吸光度值超过6.00 mg/L单宁酸的吸光度时,将试液稀释后重新测定。计算和结果的表述计算和结果的表述 试样中单宁(以单宁酸计)的含量 X,以质量分数表示,单位为毫克每千克(mg/kg),按式计算。式中:c试样测定液中单宁酸的浓度,单位为毫克每升(mg/L);v试样定容体积,单位毫升(mL);D试样稀释倍数;m试样质量,单位为克(g)。仪器参数仪器参数 UV-1500PC 紫外可见分光光度计 仪器特点*采用单片微机控制，128*64 位液晶显示*宽大的液晶显示器可显示多组数据*巨大的内存空间，可存储多组数据和曲线*自动调 0、调 100%功能*波长自动调节*光源自动切换，滤色片自动切换*宽大样品池（5mm100mm）*具有最多十点标样建标准曲线测量功能*可通过直接输入 K、B 因子建立标准曲线进行定量测量*可直接输入标样和对应浓度值建立标准曲线进行定量测量*可断电保存测量设置的标准曲线参数*配备通用并行打印接口，可打印标题栏、测量数据、曲线参数、曲线标准样品点和曲线*配 USB 接口*可通过 PC 软件控制实现光谱扫描等更精确和灵活的测量要求 技术指标及基本参数*波长范围：1901100nm *光谱带宽：2nm*波长准确度：0.5nm*波长重现性：0.2nm*透射比准确度:0.3%*透射比重复性：0.15%*杂散光：0.05%(220nm NaI，340nm NaNO2)*稳定性：0.001A/h（500nm 预热后）*测光方式：透过率、吸光度、浓度、能量*波长调节：自动调节*光度范围：-0.33A*显示方式：128*64 液晶*检测器：进口硅光二极管*光源：进口氘灯，进口钨灯*电源：AC 220V/50Hz 或 110V/60Hz*功率：120W*仪器尺寸：480350220mm*主机净重：15Kg 关于美析关于美析 美析主营光谱类仪器可见分光光度计、紫外可见分光光度计、原子吸收光谱仪、超微量分光光度计、原子荧光光度计、ICP 电感耦合等离子体发射光谱仪、ICP 电感耦合等离子体质谱仪，目前，我们的产品已广泛应用于有机化学、无机化学、生物化学、医药、环保、冶金、石油、农业等领域。同时美析利用在产品机械结构、光学设计、电气应用和软件开发方面积累的丰富经验，结合市场的最新实际需求，近期将陆续推出一批全新的分析类仪器