进口保健食品中维生素检测方法现状及展望.pdf

进 口保健食品中维生素检测方法现状及展望 杨 大进 方从 容 王 竹 天 蒋 定 国 马 兰(中国疾控 中心 营养与食 品安全所，北京 1 0 0 0 2 1)摘 要：为介绍 目前我 国进 口保健食 品中维生素分析方法现状，归纳 总结 了维生素 A、维 生素 D、维 生素 E、胡萝 卜素等脂溶性 维生素，维生素 B 、维生素 B 、维生素、烟酸、烟酰胺、生物素、泛酸、维 生素 B，、叶酸、维生素 c等水溶性维 生素，肉碱、辅酶 Q 1 0、肌醇等 类维生素在进 口保 健食 品 中的常 用分析方法，对 目前存在的 问题 和今 后 的分析 发展 方 向提 出 了建议。通过 对上 述 方法进行 总 结，为今后 的维生素分析提供 参考。关键词：营养保健品；维生素类；化 学，分析 M e t h od s f or de t e r mi na tion o f v i t ami ns i n i m p o r t he a l t h f o od s-t he c u r r e nt s i t u atio n a nd pr o s pe c t Y a n g D a j i n，e t a1(N a t i o n a l n s t i t u t e f o r N u t r i t i o n a n d F o o d S a f e t y，C h i n a C D C，B e i j i n g 1 0 0 0 2 1)Ab s t r ac t：To i n t r o d uc e t h e p r e s e nt d e t e c t i v e me t h o d s o f v i t a mi ns i n i mp o r t h e alt h f o o ds，t he h e alt h f o o d s we r e c o mp a r e d w i t h g e n e r a l d o me s t i c f ood s a n d v i t a mi n p i l l s a b o u t c o mp o n e n t s a n d l e v e l o f v i t a mi n s T h e p o p u l a r a naly z i n g me t hod s f o r i mp r o t h e alt h f o o d s we r e s u mma r i z e dS o me a d v i c e wa s g i v e n t o o v e r c o me t h e d i ffi c u l t i e s i n a n aly s i s an d the de v e l o p i ng t rend o f p res e n t me t h o d s Was d i s c u s s e dTh i s s u mma r y ma y o f f e r s o me r e f e r e n c e i n t h e u s e o f de t e c t i v d me t h o d s for t h e an aly s i s o f v i t a mi n s Ke y W or d s：Di e t a r y S u p p l e me n t；Vi t a mi n s；Ch e mi s t ry，An aly t i c a l 自保健食品审批 制度 实施 以来，大 量进 口保健 食品进 入 我 国。由于保 健 食 品是 具 有 调节 机 体 功 能，不 以治疗疾病 为 目的的食品，因此作 为对人体机 能有 重要辅 助调节作用 的维生素成 为了保健食 品重 要组 成，约 占保健 食 品 总数 的 4|D 左 右，对 其 质量 进行控 制的检 验方法也是保健食 品功效成分研究 的 重点 和难点，现将几 年来 检测方 法 研究 的现状 和经 验教训进行 阶段性 总结，供 相关研究 人员参考使用。1 保健食 品与普通 食品和药品 中维生素 的比较 保健食 品、普 通食 品 和药 品中维 生素 及分 析方 法的 比较见表 1和表 2。从 两表 中可知保 健食 品是 介于药 品和普通食 品之 间 的一 类产 品，兼有 两者 的 特点，分析方 法应综 合考虑产品特点，以达到快速简 便 的 目的。2 保健 食品 中添加的维生素的分类 保健食 品中添加的维生素按美 国营养百科 全书 基金项 目：卫生部 保健 食品专 项基 金课题(B J O l 一 2 0)。作 者简 介：杨 大进 男 副研 究 员 表 1 保健食品与普通食品和药品中维生素的比较 普 通食 品 保 健食 品 药品 基 质 复杂 较 简单 简单 维 生素 含量 低 较 高 高 维 生素形 式天然维 生素，基 本 属 于 添加 的基 本 属 于 添 加 多种结 构形 式合成 维生 素，结 构的合 成 维 生 素，共存。形式单一。结构形式单一。表 2 普通食品和药品中维生素分析方法的比较 分为 脂 溶 性 维 生 素、水 溶 性 维 生 素、类 维 生 素 3 类。其 中脂溶性维生素有：维生素 A、维生 素 D、维 生素 E、胡 萝 卜素和维 生 素 K。保 健食 品 中 添加 的 水溶性维生素 主要有：维生素 B。、维生素 B 、维生素 T h i s wo r k wa s s u p po r t e d b y t h e S p e c i a l F u nd s f o r He a l t h F o o d o f M i l 1 i s t r y o f He a l t h，C h i n a (B J O l 一 2 O)C HI NE S E J中OU国R食NA品L卫OF生F杂OO志D H Y G I E N E 2 0 o 4年第 l 6卷第 1 期 L 蚪平帚 l O苍帚删 维普资讯 http:/ B 、烟酸、烟酰胺、生物 素、泛酸、维生素 B。z、叶酸、维 生素 C。类维生 素主要有：肉碱、辅 酶 Ql O、肌醇等。3 脂溶性维 生素 分析 鉴于脂溶性维 生素 的特 点 和样 品基 质情 况，试 样一般需要 在皂化，经有 机溶剂提取后测定。维生素 A 保 健 食 品 中 一 般 添加 视 黄 醇 醋 酸 酯、视黄醇棕榈酸 酯中两者之一或两种均添加。通 常情况下成分复杂 的试样需 采用皂化反应后 测定其 中的视 黄醇 0 TM成 分相 对 简单 的片剂 和胶 囊 试样可采用异丙醇、己烷等溶剂提取，直接测定视 黄 醇醋酸酯和视黄醇棕榈 酸酯。奶粉等产 品使用胰酶 和蛋 白酶处理，己烷 等溶剂 提取 后测 定视 黄醇 醋酸 酯或视黄醇棕榈酸 酯。由于视黄醇不稳定，前处理过程 中容易被氧化，采用 内标法才能保 证结果 的准确，但 视黄 醇醋 酸酯 和视黄醇棕榈酸酯 相对稳 定，采用 外标 法 就能够 保 证分析结果。维生素 E 一般情况 下在保 健食 品 中添加 的是 d一维生素 E。角鲨烯等成分 简单 的试样 可用溶 剂提取后直接 测定。多数试样需要 在皂化 反应后测定其 中的维生 素 E。鉴于 天然维 生素 E有 a一、口一、y一、一 4种 形式，在反相色谱柱上 口一和 7一无法 分离，因此要 同时分析维生素 E的 4种结 构并 包括 内标 物，可参 照表 3中正相色谱柱及色谱条件。其 中内标 物 与 a一维 生素 E结 构极其相 似，只 表 3天然 维生 素 E分 析参 考条 件 1：口一生育酚；2：口一三烯生育 酚甘 油醚；3：内标 物；4：口一生 育酚；5：y一生 育酚；6：y一三烯生 育酚甘 油醚；7：一生 育酚 图 1 天然维生素色谱图(色谱条件为表 3中第一项)是 2个 2位取代基均为 甲基。维生素 D通 常在保 健食 品 中添加 的是 维生素 D，或者维生素 D 。成分 简单 的钙+维 生素 D的试样 可 以采用 溶 剂提取、浓缩 后测定，成 分复 杂 的试 样 需要 在皂化、提取后测定。目前维 生素 D的分析 尚不 如维生 素 A和维 生素 E成 熟，主 要原 因是维 生 素 D含 量低，不稳定，试样处理 过程损失多，此 外试样 中维 生素 E 要高出维生素 D数百倍，且在 一般 色谱条件 下与 维 生素 E较难 分离。目前 通 常用 2 5 0仃 u n长 的 z o r b a x s BC。色谱 柱，乙睛+甲醇+水=2 5+7 5+4作为 流动相，根 据试 样 中维 生 素 D的情 况，选 择维 生 素 I)2和维生 素 D 1 互为 内标 的方法。一胡萝 卜素 一胡萝 卜素 主 要存 在 植物 提 取物类保健食 品中，分析方法相对成熟。根据 目前试样 的特点 可用 二氯 甲烷提 取，采用 不 同的波长将维生 素 E、番茄红素 和 一胡萝 卜素 3 种物 质一次性 分析。为保 证试 样组 分不 被氧 化，在 分析过程 中需 要加 入 B H T等抗 氧 化剂。流 动相 为 甲醇+乙睛=5 0+5 0，色谱 柱 可使 用 S u p e l c o s i l R P Cl 8。目前初步将其 与 一胡萝 卜素一 同分析。试样 用丙酮进行提取，流动 相为 甲醇+甲基 叔丁 基醚+水=3 1 0+7 6+1 4，色谱 柱使用 S y m me t r y C。，检测 波 长 为 4 5 0 n m 4水溶性维生素分析 目前建立并推 广 了一 套 系统 分 析方法，通 过选 用离子对 高效液相 色谱可 以解决 维生素 B 、维生素 B 6、烟 酸、烟酰胺、维生 素 C的分析。生 物素、泛 酸、叶酸需采用单独的高效液相色谱分析条件。维生素 B 采用荧光分光光度法分析。维生素 B。(盐酸硫胺、硝酸 硫胺)分析维 生素 B。可用甲醇+水+磷酸提 取液，流 动相为硫 酸月桂 酯钠溶 液(5 g 5 3 0 m L)+乙睛+磷 酸=5 3 0+4 7 0+0 4，盐酸苯海拉 明作为 内标 0 TM 维生素 B (呋 喃硫 胺)日本 药典 中特别 指 出 进 口保健食品中维生素检测方法现状及展望杨大进 方从容 王竹天等 维普资讯 http:/ 呋喃硫 胺是 维生 素 B，的活性 结构，因此在韩 国、日 本等 国家产品 中有 所使 用。呋喃硫 胺与 盐酸硫 胺、硝酸硫胺 的色谱性 质有较大 区别。因此可使用 甲醇+水+乙酸+P i g B 6=4 5 0+5 3 0+2 0+2 0作为流动相，色谱柱采用 一B o n d a p a k C 检测波长为2 8 0 n m。维生素(吡 哆醇)、烟 酸、烟 酰胺 保 健食 品 中维生 素 使 用吡 哆醇形 式，烟酸极 少使用，基本 使用烟酰胺。试样分析 同维 生素 B ，采用 甲醇+水+磷 酸作 为提 取 溶 液，流 动 相 为 1一 癸 烷 磺 酸 钠 溶 液(1 2 2 g 8 5 0 mL)+乙腈+磷 酸=8 5 0+1 5 0+0 4，检 测波长2 8 0 n m，利用 愈创 木 酚 甘油 醚作 为 内标。该 方法对 于功 能性 饮料 中添加 的咖啡 因和苯 甲酸也 可 以同时检测。维生素 C除颜色较深、含量较低、天 然植物干 制 品外。一般样品 中的维 生素 C均可 以采用 药典 中 的碘溶 液滴定 法进行测定。如用高效 液相色谱法测定 维生 素 c可采 用 4 4 提供 的流 动相 体 系，因维 生 素 C保 留时间较 短，可 以将 乙腈 的比例降低至 5。提取溶 剂尽 可能使用 水，以避免在维生 素 c色谱 峰前 出现倒 峰影 响定量 结果 的准确性。检测波长为 2 5 4 n m。维生素 B 在保健食 品 中维生素 一般 以核 黄素磷酸盐的形式存在。有关维生素 B 的色谱分析方法有报道，但在实 际试样 分析 过程 中因其保 留时 间较 短且与其 它峰难 以较好 分离，故 多将 其转 化 为光黄 素后 进行 荧光分 光光度法分析。泛酸(维生 素 B )保 健食 品 中添 加 的泛 酸 以 泛酸钙形式存 在。目前采用液相色 谱分析 法 进行 检测，试样 用水 提取，流动相 为 0 0 2 m o l L磷 酸二 氢钾 溶液+乙腈=9 5+5，p H=3 0。色谱柱使用 一B o n d a p a k C l 8 4 6 m i l l 3 0 0 I n l T l，检测波长 2 0 0 n m。生 物素 保健食品 中生物素 的分析处 于初 步摸 索 阶段，目前采用 p H=3 5，0 2 5 m o l L磷 酸盐缓 冲 溶液+甲醇=7 7+2 3的流动相，检测 波长 2 0 0 n m。目前需要解决 的问题 是保 留时间 较长，大 约在 3 0 m i n左右，此外灵敏度较 低。叶酸 一般使 用弱 碱性水 溶 液提取，为保证 提 取效果可 以在 5 0 C水浴 中加热 1 0 m i n，具体 方 法可 参 照药典。实际试样检测 中发现，在 2 8 0 n m波 长处 叶酸的 响应明显 比通常报道 的 2 5 4 n m高许 多，因此检测波 长选择 2 8 0 n m。通过大量实 际试样 检测 分析，发现 在虫草等 天 然产物 中存 在 与 叶 酸色 谱保 留时 间完 全 一致 的物 质；此外不少试样中叶酸含量较低，拟采用固相萃取 等技术作为前处 理手段进 行富集 净化。维生素 B 目前保健食品分析 中维生 素 B，的 化学分析还是 一个难 以逾 越的障碍，对 于含量较高，组成简单的原料进行高效液相色谱分析技术可行，但对含量较低、成分 复杂 的多种 维生 素试样 的分 析 方法 目前 尚在摸索之 中。虽然维 生 素 B 有 2 7 8、3 6 1、5 5 0 n m 3个 特征 波 长，但试样在不 经处 理 的情况 下也很 难 分析。在 溶 液 中钴胺 素很 容易出现氰钴 胺素、甲钴胺素、羟钴胺 素等几种形式 共存 的现 象。为 避免 出现上 述 问题，需更好地 去除样品中的干扰杂质并对试样 中的维生 素 B 进行 富集，目前采用加入表 面活性 物质、盐 析、有机溶剂萃取 等方法去 除杂 质，再通 过 固相 萃取 法 进行 富集、净化。5类维生素 分析 方法概况 保健食 品 中肉碱 可参 照 维生 素、烟 酸、烟 酰 胺 的分析 方法，辅酶 Q 1 0采用 液 相 色谱 分 析 方法，肌 醇采用气相 色谱分析方法。肉碱(维生 素 B )目前 在 保健 食 品检 测 中使 用高效液 相 色谱 法 代替 繁 杂 的分 光光 度 法检 测 肉 碱，使测定简单。利 用高效 液相 色谱 法测定 肉碱 同 样 可以使用 测 定维 生素(吡哆醇)、烟酸、烟酰胺 的流动 相体 系。肉碱色 谱保 留 时 间虽 比维 生素 C 长但仍相 对 较 短，因 此 流 动 相 可 以 同维 生 素 C一 样。提取溶 剂 尽可 能使 用水 或 p H=56的水，以 避免在 肉碱色谱峰前 面出现倒峰影 响定量结 果的准 确，检测波长 2 1 0 n m。辅酶 Q1 0 辅酶 Q1 0的检测采用液 相色谱分 析 法。试样 中辅酶 Q 1 0使 用正 己烷作 为提取 溶 剂，色 谱柱可用 T S K G e l C 流 动相 为 乙腈+四氢 呋喃+水=5 5+4 0+4，检测波长 2 8 0 n m。肌醇 肌醇 的检测现建立 了一套衍 生化一气相 色谱分析法，具体 方法可参 考相关文献。6 6 保健食品 中维 生素检 测方 法需 要解 决的 问题及 今后的发展方 向 试样 前处理技术 不少油性胶囊样品 中加入 了 水溶性维生 素或 水溶性 维 生素经 处理 成 为脂溶性，需要解 决提取、净化 问题。对 于含量较低，干扰较 大 的试样需 要解 决如 何 应用 固相萃取 等手段进行 富集，以提高检测效果。目前采用 超声 1 0 v a i n以 上，用含 甲醇、乙醇 的 C HI NE S E J中OU国R食NA品L卫OF生F杂OO志D H Y G I E N E 2 5 J O o t 年第 l 6卷第 l 期 平 l O面帚 l 朋 维普资讯 http:/ 提取溶液作 为前 处理 手段 检测 大量 进 口样 品，尚未 遇到微囊化对 检测 的影 响，因此原 料微 囊化 制作 的 检测 问题是 否已经解决?有些需要 酶解的成分是否 也能通过 上 述前 处 理 手段 加 以破 解 还 需 进一 步 验 证。色谱 多组分分析技术 在 目前现有 的维生 素 B 多组分 分析技术 的基础上，如何能将维生素 B。并入 维生素 系列之 中或创建新 的流动相体 系，再 囊括 维生素 B 和叶酸等是 今后 研究的重要方 面。分析过程快速化 在 目前大量试样检测 的基础 上应归纳总结 出试 样前 处理 方法 指南，确 定试 样组 成 和前处 理方法 之间的关系。参考 文献：1 A H恩斯明格，M E恩斯明格，J E康兰德，等 营养 素 A 见：美国 食物与营养百科全书 选辑(4)c 北 京：农 业 出版 社，1 9 9 1 G B l 2 3 8 8 1 9 9 0 食物 中维 生 素 A和 维 生 素 E的测 定 方 法 l S J 杨祖英，李良学 高压液相色谱法测定食 品中 卢一胡 萝 卜 素 J 食品与发酵工业，1 9 9 4，6：5 7 6 1 王竹天，杨大进，方从容 高效液相色谱法检测 B族维 生 素及 咖啡 因 的研 究 J 中 国食 品卫生 杂 志，1 9 9 8，1 0 (6)：9 一 l 1 王 永芳，韩 宏 伟，赵 馨，等 光 黄素 荧 光 法 测 定 保 健食 品中维生素 B 的方法研究 J 中国食 品卫生杂志，2 0 0 0，1 2(2)：2 0 2 2 中华人民共和国药典 M 2 0 0 0年版，二部 杨大 进，方 从容，王竹 天 保健 食 品中 肌醇 含量 测定 方 法的研究 J 中国食品卫生杂志，1 9 9 9，l l(2)：l 一3 收稿 日期：2 0 0 3 0 3 0 6 中 图分 类 号：R1 5；T S 2 1 8；0 6 5 2 文 献 标 识 码：E 文 章 编 号：1(1 0 48 4 5 6(2 0 0 4)0 l 一0 0 6 20 4 食物 中维生素 A、叶酸和维生素 E分析方法研究进展 文小青 杨月欣(中国疾 控 中心营养与食 品安全所，北京 1 0 0 0 5 0)摘 要：对食物 中 3种 重要 的维生素：维生素 A、叶酸 和维 生素 E的常 用分析 方法进行 了综述。指 出了不同分析 方法的适 用范 围以及各 自的优缺 点。着重介绍 了高效液相 色谱 法在此 3种 维生素分 析 中的应 用。并提 出了分析方法的发展 趋 势是 高效液 相 色谱 法(包括 正相 高效液 相 色谱 法、反 相 高效液相 色谱 法和非水反 相 高效液相 色谱 法)、高效液相 一质谱 法、气相 色谱 一质谱 法和 离子 色谱 一质谱 法等 方法。关键词：维 生素 A；叶酸；维 生素 E；色谱 法，高压液相 Pr og r e s s i n a na l y t i c a l me t ho d s o f v i t a m i n A，f o l at e a nd v i t a m i n E i n f o o d s We n Xi a o q i ng，e t a1 (N a t i o n a l I n s t i t u t e f o r N u t r i t i o n a n d F o o d S a f e t y，C h i n a C D C，B e i j i n g 1 0 0 0 5 0)Ab s t r a c t：T h e d e v e l o p me n t o f t h e c o mmo n an a l y t i c al me t h o d s o f t h r e e i mp o r t ant v i t a mi n s(v i t a mi n A、f o l a t e and v i t a min E)i n f o o d s w e r e r e v i e w e d T h e r a n g e o f a p p l i c a b i l i t y a n d t h e a d v ant a g e and d i s a d v ant age o f t h e s e d i ff e r e n t analy t i c al me t h o d s w a s d i s c u s s e dTh e an t h e r e mp h asi z e d t h e a p p l i c a t i o n o f h i g h p e r f o r manc e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y(H P L C)i n t h e a n al y s i s o f t h e t h ree v i t a mi n s I t w a s c o n c l u d e d t h a t t h e c u r r e n t t i d e o f anal y t i c a l me t h ods i s t h e a p p l i c a t i o n o f HP L C(i n c l u d i n g n o r mal p h a s e a n d r e v e r s e d p h ase g r a d i e n t h i g h p e rf o r ma n c e l i q u i d c h roma t o g r a p h y anal y s i s、N R H P L C)，HP L C MS，G C M S and I C MS Ke y W o r d s：Vi t a mi n A；F o l i c Ac i d；Vi t a mi n E；Ch r o ma t o g r a p h y，Hi g h P r e s s u r e Li q ui d 作者简 介：文小青女硕 士 维生素 A、叶酸 和维生 素 E是 3种 十分 重 要的 维生素，存在着多种 的结构形式，它们是评 价食 品价 食物中维生素 A、叶酸和维生素 E分析方法研究进展文小青 杨月欣 一6 5 一 J J 1 j J J J 2 3 4 5 6 7 r r L 维普资讯 http:/