Agilent_1100液相色谱仪使用操作指导书.doc

Agilent 1100液相色谱仪使用操作指导书
一、目的：规范液相色谱仪使用，保证检验结果的准确性。
二、适用范围：适用于我司的液相色谱仪日常使用及维护。。
三、职责：理化检验员负责该作业指导书的执行。
理化组组长负责监督指导。
四、操作方法：
1.首先对流动相进行过滤，根据需要选择不同的滤膜，一般为有机系和水系。（有机系用尼绒的，水系用纤维素的）
2.对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3.开机：（1）打开计算机,进入Windows画面。
（2）把脱气后的流动相放入溶剂瓶中。
（3）打开1100LC各模块电源。
（4）待各模块自检完成后，双击Instrument1Online图标，化学工作站自动与1100LC通讯，进入工作站画面。
（5）从“视图”菜单中分别选择“方法和运行控制”、“显示顶部工具栏”、“显示状态工具栏”、“系统视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
（6）打开冲洗阀。
（7）单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“设置泵”选项，进入泵编辑画面。
（8）设流速：1ml/min，单击“确定”。
（9）单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“启动”，单击“确定”，则系统开始运行，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止。
（10）关闭冲洗阀。
（11）单击泵下面的瓶图标，选择“溶剂瓶填充量”，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入停泵的体积，单击“确定”。
（二）数据采集方法编辑：
1、开始编辑完整方法：
●从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，全部选中，单击“确定”，进入下一画面。
2、方法信息：
在“方法信息”中加入方法的信息（如：方法的用途等）。单击确定。
3、泵参数设定：
在“流速”处输入流量,如1ml/min，在“溶剂B”处输入40,(C=100-B),也可在时间表中插入一行时间表,编辑梯度。在“压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。单击“确定”。
4、MWD检测器参数设定:
●在”波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如618nm,在”Peakwidth(Responsetime)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间,如>0.2min(4s)。
●在Timetable中可以“Insert”一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。点击ok进入下一画面。
5、在“Runtimechecklist”中选中“Dataacquisition”，单击Ok。
6、单击“方法”菜单，选中“保存方法”，输入方法名，如“test”，单击Ok。
7、从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入操作者名称，在“数据文件”中选择“前缀/计数器”或“手动”。
区别: 手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖。
前缀/计数器—在前缀框中输入前缀，（如：070705）在计数器框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如0707050001……。
8、在子目录框中输入目录文件名。
9、等仪器Ready，基线平稳，进样。输入样品信息后，先把进样环转至“LOAD”位置，插入针，进完样品后要快速到把进样环转至“INJECT”位置，然后拨出针头。
（三）数据分析方法编辑:
1、从“视图”菜单中，单击“数据分析”进入数据分析画面。
2、从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名。单击“确定”。
3、做谱图优化,从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围“中选择“自定义量程”及合适的显示时间，单击“确定”,或选择”自动量程”调整。反复进行，直到图的比例合适为止。
4、积分:
(1)从“积分”中选择“积分”,如积分结果不理想,再从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的斜率灵敏度，峰宽，最小峰面积，最小峰高。
(2)从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。
(3)如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
(4)单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。
5、打印报告:
(1)从“报告”菜单中选择“设定报告”选项。
(2)单击“定量结果”框中“计算”右侧的黑三角，选中处标法，其它选项不变。
(3)单击“确定”.
(4)从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则单击报告底部的“打印”钮。
(四)、关机:
●关机前，用纯水与乙腈洗机，然后关泵，关灯。
●退出化学工作站，及其它窗口，关闭1100LC各模块电源。关闭计算机。
五、注意事项：
1.流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)，冲洗20-30分钟后，仪器方可稳定，最重要的是仪器基线走后，方可进样测试。
2.溶剂必须干净，在使用前需经过滤板除去颗粒杂质，必要时，在进样口再加一块滤板，以除去可能由泵带来的颗粒。
3.必须控制吸附色谱中溶剂的含水量，过量水会使吸附剂活性降低，溶质保留值下降。
4. 一定要使用保护柱，因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。一般保护柱的选择以同型号为原则，这样柱子的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似。当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。
5.将管子完全插入开口端，直至其与开口端的末端相碰为止。否则将产生死体积，引起峰展宽。
6.为了使柱外效应减到最小，获得理想的分析结果，尽量使用管径细的管路作为连接。
7.管路接头不要拧的过紧，以防损坏螺纹。
8.在使用仪器过程中，注意贮液瓶里的流动相是否够用，如快用尽，应及时更换。
9.更换流动相时务必停泵，防止吸入大量空气，影响仪器正常运作。
10.在启动分析进样时，请快速板动进样阀，否则会引起系统压力突跳，影响仪器的使用寿命。在每次使用后，尤其是进浓度差异比较大的样品时要用专用工具（不是带针头的注射器）冲洗进样阀，冲洗时必须冲洗进样阀两头数次。以防止无机盐沉积和样品微粒造成阀内部磨损或阻塞以及样品的交叉污染。
11.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用去离子水冲洗管路及柱子一小时，然后用甲醇(或甲醇水溶液)冲洗40分钟以上，以充分洗去离子。
12.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水易长霉。
13.每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。
14.C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂（甲醇、乙腈或异丙醇），两端封死。
15. 更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振动边清洗，然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下。
16.紫外检测器中的氘灯是有一定的使用寿命的。为了节省灯的使用寿命，在暂时不使用时可在不关机的情况下，只把灯关掉（建议：最好在需要关灯时间4小时以上才关灯，因为频繁的开关灯，同样会缩短灯的使用寿命）。
六、维护及故障排除：
1.柱效损失的可能原因
①额外的峰展宽。当使用小直径或者长度较短的柱子时，峰展宽的情况可能比较明显。要保证管路的长度和内径都保持最小。检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积。
②洗脱的平衡时间不够。
③不正确的修正浓度。
④床压缩。使用了过大的洗脱流速。将柱子反向，使用低流速。
2.用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化。
关于漂移问题：
① 温度控制不好，解决方法以是采用恒温装置，保持柱温恒定
② 流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等
③ 柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡
关于快速变化问题
① 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定
② 泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出
③ 流动相不合适，解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合
3.出现峰拖尾或出现双峰的原因：
①筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
②存在干拢峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子。
4.HPLC灵敏度不够好的主要原因及解决办法
①样品量不足，解决办法为增加样品量
②样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子
③样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器
④ 检测器衰减太多。调整衰减即可
⑤ 检测器时间常数太多。解决办法为降低时间参数
⑥ 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗
⑦ 检测器中有气泡。解决办法为排气
⑧ 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可
⑨ 流动相流量不当。调整流速即可
⑩ 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线
5.泵压明显的偏高
原因：流速设定过高；流动相或进样中有机械杂质，造成过滤器阻塞；流动相粘度过大；柱温过低；缓冲盐结晶；压力传感器故障。
6.基线不稳，上下波动或漂移
a.流动相有溶解气体；用超声波脱气15-30分钟或用充氮气脱气
b.单向阀堵塞；取下单向阀，用超声波地纯水中超20分钟左右，去除堵塞物
c.系统存在漏液点；确定漏液位置并维修
d.泵密封损坏，造成压力波动；更换泵密封
e.柱后产生气泡；流通池出液口加负压调整器
f.检测器没有设定在最大吸收汉长处；将波长调整至最大吸收波长处
g.柱平衡慢，特别是流动相发生变化时；用中等强度的溶剂进行冲洗，更换流动相，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗
7.进样阀漏液
a.转子密封损坏；更换转子密封
b.定量环阻塞；清洗或更换定量环
c.进样口密封松动；调整松紧度
d.进样针头尺寸不合适，一般是过短；使用恰当的进样针（注意针头形状）
e.废液管中产生虹吸；清空废液管
8.保留时间的波动：
温度控制不当；调节好柱温。流动相组分变化；防止流动相蒸发、反应等，做梯度时尤其要注意流动相混合的均匀。色谱柱没有不衡；在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱。
9.泵的维护注意事项
   泵的密封圈是最易磨损的部件，密封圈的损坏可引起系统的许多故障，要注意保养和定期更换。应采取下列措施以延长使用寿命：
①绝对不允许在没有流动相或流动相还没有进入泵头的情况下启动泵而造成柱塞杆的干磨。
②每天使用后应将整个系统管路中的缓冲液体冲洗干净，防止盐沉积，整个管路要浸在无缓冲液的溶液或有机溶剂中。长期不用也要定期开泵冲洗整个管路。
③要用HPLC级试剂。
④ 输液管前端要用烧结不锈钢沉子过滤流动相。要注意防止管路阻塞造成压力过高而损坏仪器。
⑤压力下限应设置在0.5～1MPa，以防止储液器中的流动相被抽干或严重渗漏而引起柱塞杆的干磨。
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