中国主要食用菌子实体γ-氨...丁酸含量测定及产量影响因素_文晴.pdf

Research paper 研究论文 22 January 2023,42(1):231-243 菌物学报 Mycosystema ISSN1672-6472 CN11-5180/Q Doi:10.13346/j.mycosystema.220453 资助项目：国家自然科学基金(31701980)；国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-20)；河南省重大公益专项(201300110700)This work was supported by the National Natural Science Foundation of China(31701980),the China Agriculture Research System of MOF and MARA(CARS-20),and the Major Public Welfare Special Projects in Henan Province(201300110700).*Corresponding authors.E-mail:; ORCID:WEN Qing(0000-0003-4253-7386),SHEN Jinwen(0000-0002-2210-317X)Received:2022-11-04;Accepted:2022-11-22 Copyright 2023 Institute of Microbiology,CAS.All rights reserved.| Http:/journals- Tel:[phone] 菌物学报 231 申进文 河南农业大学教授，现任中国菌物学会理事、河南省食用菌协会副理事长，主要从事食用菌菌种选育、栽培技术、分子生物学等研究，在平菇栽培技术、生理生化等方面取得了比较显著的成绩。中国主要食用菌子实体-氨基丁酸含量测定及 产量影响因素 文晴*，赵浩洋，邵艳红，胡延如，戚元成，王风芹，申进文*河南农业大学生命科学学院，河南 郑州 450002 摘 要：-氨基丁酸(-aminobutyric acid，GABA)是一种功能性非蛋白氨基酸，在维持人体健康方面发挥着重要作用。为探明食用菌子实体的 GABA 含量水平和影响食用菌 GABA 产量的因素，本研究通过对食用菌 GABA 提取和衍生条件优化，建立了食用菌 GABA 检测的 9-芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)柱前衍生 HPLC 法；利用该方法测定了 20 种中国主要食用菌子实体的 GABA 含量，并进一步探究了培养料氮源含量和种类、栽培时间对 GABA 含量的影响。食用菌 GABA 提取的最佳料液比、时间和温度分别为 1:100、1 h 和 65。20 种食用菌子实体的 GABA 含量在 0.203.02 mg/g DW，存在显著种间差异，其中黄白银耳 GABA 含量最高(3.02 mg/g DW)，香菇、银耳、金针菇、双孢蘑菇的 GABA 含量也较高，为 12 mg/g DW。增加培养料含氮量可显著促进 GABA 积累，且添加尿素的促进效果明显优于添加麦麸。栽培时间也可影响子实体GABA产量，第二茬和三茬子实体的GABA含量显著高于第一茬子实体。综上可知，食用菌 GABA 含量不仅与品种密切相关，而且受到培养料中氮源含量和种类、栽培时间的影响。关键词：-氨基丁酸；食用菌；高效液相色谱；芴甲氧羰酰氯；氮源；栽培时间 文晴 等/中国主要食用菌子实体-氨基丁酸含量测定及产量影响因素 研究论文 菌物学报 232 引用本文 文晴，赵浩洋，邵艳红，胡延如，戚元成，王风芹，申进文，2023.中国主要食用菌子实体-氨基丁酸含量测定及产量影响因素.菌物学报，42(1):231-243 Wen Q,Zhao HY,Shao YH,Hu YR,Qi YC,Wang FQ,Shen JW,2023.Content determination and factors influencing production of-aminobutyric acid content in fruiting bodies of main edible fungi in China.Mycosystema,42(1):231-243 Content determination and factors influencing production of-aminobutyric acid content in fruiting bodies of main edible fungi in China WEN Qing*,ZHAO Haoyang,SHAO Yanhong,HU Yanru,QI Yuancheng,WANG Fengqin,SHEN Jinwen*College of Life Sciences,Henan Agricultural University,Zhengzhou 450002,Henan,China Abstract:-aminobutyric acid(GABA)is a functional non-protein amino acid and plays critical roles in maintaining human health.To explore the GABA levels in edible fungi and the factors influencing GABA production,the extraction and derivatization conditions for GABA in edible fungi were firstly optimized,and the HPLC with pre-column derivatization by FMOC-Cl was established for determine GABA content.GABA content in 20 kinds of main edible fungi in China were determined using the optimized method,and effects of the content and species of nitrogen in culture substrate and the cultivation time on GABA content in edible fungi were further explored.The optimum solid-to-liquid ratio,time and temperature for extracting GABA from edible fungi were 1:100,1 h and 65 C,respectively.GABA content in 20 edible fungi were 0.203.02 mg/g DW,showing significantly interspecific difference.The highest GABA content(3.02 mg/g DW)was found in Tremella aurantialba,and GABA content in Lentinula edodes,Tremella fuciformis,Flammulina filiformis,and Agaricus bisporus was also relatively high,being 12 mg/g DW,respectively.GABA accumulation was significantly promoted by increasing the nitrogen content in culture substrate,and the promotion effect of adding urea was obviously better than that of adding wheat bran.GABA accumulation was also influenced by cultivation time.GABA content in the second and third fruiting flush was markedly higher than that in the first fruiting flush.Our results indicate that GABA content in edible fungi is not only closely related to the variety but also affected by the content and species of nitrogen in culture substrate and the cultivation time.Keywords:-aminobutyric acid;edible fungi;high performance liquid chromatography;9-fluorenylmethyl chloroformate;nitrogen source;cultivation time 食用菌不仅味道鲜美，而且具有高蛋白、氨基酸含量丰富、高膳食纤维、富含多种生物活性物质(例如多糖、麦角甾醇及麦角硫因等)、低脂肪和低热量的营养特点，对提高免疫力、降血糖、降血压、抗肿瘤、抗病毒和抗氧化等均具有重要的功效(戴玉成和杨祝良 2008；Taofiq et al.2016；Wu et al.2019；Zhao et al.2020a；El-Maradny et al.2021)。因此，食用菌Research paper 22 January 2023,42(1):231-243 Mycosystema ISSN1672-6472 CN11-5180/Q 菌物学报 233是兼具营养价值和医药保健功效的健康食品，是开发新型功能性食品的理想原料。-氨 基 丁 酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)作为一种广泛存在于动物、植物和微生物中的功能性非蛋白质氨基酸，是哺乳动物中枢神经系统中一种主要的抑制性神经递质，具有改善睡眠、抗焦虑、营养神经细胞、改善记忆力、调节血糖和降血压等多种生理功效(Gajcy et al.2010；Diana et al.2014；Ngo&Vo 2019)，2009 年被卫生部批准为新资源食品。GABA 缺乏会引发癫痫、亨廷顿舞蹈症、帕金森病、阿尔茨海默病、焦虑及抑郁等精神类疾病(陶云海 2006；Gajcy et al.2010)。而随着压力增加和年龄增长，人体中的 GABA 含量日益减少，外源补充 GABA 是改善人体健康的主要途径，因此开发富含 GABA 的天然功能性食品具有重要意义(Diana et al.2014)。目前，多种富含 GABA 的绿色功能性食品(富 GABA 的糙米、酸奶、豆制品、西红柿、茶叶及巧克力等)已被开发(Dhakal et al.2012；Diana et al.2014；Nonaka et al.2017；Xu et al.2017；Luo et al.2021)。在植物中，GABA发挥着调节能量代谢、C/N 平衡、生长发育和胁迫响应等多种生理功能(Seifikalhor et al.2019；张海龙等 2020)。据报道，植物在正常生长条件下的GABA 含量较低且存在显著的品种差异，而环境胁迫可诱导植物产生并积累 GABA，该方法已被广泛用于富 GABA 植物源产品的开发(Shelp et al.1999；王斌等 2018；Wang et al.2018)。与此同时，外源施加 GABA 可显著提高植物抵御多种非生物胁迫(例如热胁迫、冷胁迫、干旱胁迫、盐胁迫及重金属胁迫等)的能力(Mahmud et al.2017；Liu et al.2019；Wang et al.2019；Xu et al.2021；杨小青等 2020；Zhao et al.2020b)。GABA 含量测定方法有多种，其中应用较为广泛的是邻苯二甲醛(OPA)柱后衍生 HPLC 法(顾宇翔等 2013)、异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生 HPLC 法(Bai et al.2009)和 FMOC-Cl 柱前衍生 HPLC 法(Horanni&Engelhardt 2013；朱广跃等 2015)，但 OPA 衍生产物不稳定，难以适用于大量样本的快速检测；PITC 衍生法的副产物较多，影响测定结果。与之相比，FMOC-Cl 衍生产物稳定性高(GABA 衍生产物日内和日间精密度的相对标准偏差均低于 3%)、无副反应、方法准确度高(GABA 样品加标回收率的相对标准偏差低于 3%)(朱广跃等 2015)，可适用于大量样本的快速检测。另外，植物 GABA 含量测定值还与提取条件密切相关(刘能等 2017)。然而，关于食用菌 GABA 提取条件、含量检测及合成影响因素的研究鲜有报道。本研究通过利用 FMOC-Cl 柱前衍生 HPLC法对食用菌子实体 GABA 的提取条件和含量测定条件进行了优化，利用优化后的方法对常见市售食用菌子实体的 GABA 含量进行测定和比较分析，并进一步比较了培养料含氮量、氮源种类和栽培时间对子实体 GABA 含量的影响。本研究结果可为高产 GABA 食用菌选育和栽培、富GABA 食用菌产品开发等奠定理论基础。1 材料与方法材料与方法 1.1 供试材料 1.1.1 供试食用菌子实体 香菇、金针菇、刺芹侧耳、双孢蘑菇、斑玉蕈(白色和褐色)、猴头菌、毛头鬼伞、草菇、黄白银耳、银耳、黑木耳、大杯伞、美味牛肝菌、羊肚菌、巴氏蘑菇、白蚁伞、广叶绣球菌和蛹虫草 19 种我国主要食用菌子实体购自郑州市金水区经八路海鲜农贸市场，糙皮侧耳8105 菌株子实体由本实验室栽培获得。将食用菌子实体去除基部杂质，切成合适大小的薄片，放置在阴凉、干燥、通风处风干脱水48 h，文晴 等/中国主要食用菌子实体-氨基丁酸含量测定及产量影响因素 研究论文 菌物学报 234 55 烘干脱水至恒重(约24 h)，然后用高速万能磨粉机将子实体干品磨成粉末，过80 目筛，备用。1.1.2 栽培原辅料 棉籽壳(含氮量 12.57 g/kg、含碳量 362 g/kg)和麦麸(含氮量 26.37 g/kg、含碳量 390.1 g/kg)购自河南世纪香食用菌开发有限公司，尿素(分析纯)购自国药集团化学试剂有限公司，石灰和轻质碳酸钙购自三门峡三山石膏厂。1.1.3 主要试剂和仪器 甲醇(色谱纯)和乙腈(色谱纯)购自天津市四友精细化学品有限公司；-氨基丁酸(GABA)(分析纯)购自北京索莱宝科技有限公司；四氢呋喃(分析纯)、FMOC-Cl(分析纯)购自上海麦克林生化科技有限公司；冰乙酸、硼酸、无水乙酸钠、氢氧化钠(均为分析纯)购自国药集团化学试剂有限公司。Thermo Ultimate 3000 超高效液相色谱仪(赛 默 飞世尔 科技 公司)；Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18 色谱柱(4.6 mm250 mm，5 m)(安捷伦科技有限公司)；高速万能粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；SpectraMax i3x 多功能酶标仪(美国分子仪器有限公司)。1.2 方法 1.2.1 糙皮侧耳栽培 根据本实验室前期研究结果设计配方(表 1)。准确称取各组分，参照胡延如等(2022)的方法进行拌料、装袋、灭菌、接种、培养、出菇管理和采收，每个配方 10 袋。1.2.2 食用菌子实体 GABA 含量测定 参照 Horanni&Engelhardt(2013)的 GABA提取方法以及朱广跃等(2015)的GABA衍生和检测方法，对食用菌子实体中的 GABA 提取、衍生和检测条件进行优化。提取条件优化：精确称量 50 mg 子实体粉末至 100 mL 离心管中，加入不同体积超纯水使料液比分别达到 1:50、1:100、1:150、1:200、1:250和 1:300，颠倒混匀，使样品粉末完全溶解；将离心管放入 85 水浴锅中提取 2 h，12 000g 离心 10 min；将上清液经 0.22 m 尼龙有机滤头过滤至新的离心管中。每种食用菌重复提取3次。在此基础上，采用最佳料液比(1:100)和 85 提取温度，对提取时间(0、0.5、1、1.5、2、2.5 和 3 h)进行优化。最后采用最佳料液比(1:100)和最佳提取时间(1 h)，对提取温度(25、35、45、55、65、75 和 85)进行优化。GABA 衍生条件优化和衍生产物检测：取80 L GABA 标准品或样品溶液至 1.5 mL 离心管中，分别向离心管中加入 120 L 超纯水、160 L 0.1 mol/L硼酸盐缓冲液(pH 8.6)、240 L乙腈和 160 L 4 mmol/L FMOC-C1 衍生试剂(乙腈溶解)溶液，旋涡振荡混匀，40 恒温金属浴中反应 5 min。反应液经 0.22 m 尼龙有机滤头过滤至进样瓶中，最后利用 Ultimate 3000 UHPLC色 谱 仪(ThermoFisher)和Agilent ZORBAX Eclipse XDB C18反向柱(5 m 粒径、4.6 mm250 mm)(Agilent Technologies,Inc.)分离和测定。色谱条件为：流速 1.3 mL/min、柱温 40、进样体积 20 L、检测波长 265 nm、检测时间 20 min。表 1 培养料配方 Table 1 Culture substrate formulas 配方 Formula 1 2 3 4 5 6 7 棉籽壳 Cottonseed hull 97 87 77 67 96.9 96.5 96 麦麸 Wheat bran 0 10 30 40 尿素 Urea 0.1 0.5 1 含氮量 Nitrogen content 1.22 1.36 1.63 1.77 1.27 1.44 1.72 其他 Others 石灰 Lime 2%、轻质碳酸钙 Light calcium carbonate 1%，料液比 Solid to water ratio=1:1.2 Research paper 22 January 2023,42(1):231-243 Mycosystema ISSN1672-6472 CN11-5180/Q 菌物学报 235 梯度洗脱程序为：流动相 A 50 mol/L 乙酸钠溶液(pH 4.8):甲醇:乙腈:四氢呋喃溶液的体积比为 82:8.5:8.5:l；流动相 B 50 mol/L 乙酸钠溶液(pH 4.8):甲醇:乙腈:四氢呋喃溶液的体积比为22:38.5:38.5:1从70:50 至50:50洗脱3 min，从 50:50 至 30:70 洗脱 5 min，最后 30:70 洗脱12 min。以双孢蘑菇提取液作为测试对象，将衍生反应体系中乙腈和4 mmol/L FMOC-Cl衍生试剂总体积固定为 400 L，分别添加 0、40、80、160、240、320、400 L 4 mmol/L FMOC-Cl衍生试剂进行衍生反应，对衍生试剂用量进行优化。GABA 标准曲线绘制：准确称取 GABA 标准品至烧杯中，用适量超纯水溶解后转移至50 mL 容量瓶中定容，得 100 g/mL GABA储备液，0.22 m 微孔滤膜过滤，4 保存备用。移取相应体积的 GABA 储备液配制成浓度分别为 0、5、10、30、50、70、90 和100 g/mL 的 GABA 标准品溶液。按照上述方法对 GABA 标准品进行衍生处理，按照上述色谱条件对衍生产物进行检测，以标准品质量浓度(g/mL)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制 GABA 标准曲线。将测得的样品的 GABA峰面积带入标准曲线中，计算得到样品中的GABA 含量。1.3 数据处理 分别利用 Microsoft Office Excel 2007 和SPSS 19.0 进行数据处理和统计分析，利用OriginPro 8.5 进行图形制作。2 结果与分析结果与分析 2.1 GABA 标准曲线绘制 以峰面积 y 对 GABA 标准品浓度 x 进行线性回归，绘制 GABA 标准曲线。GABA 浓度在 5100 g/mL 范围内，GABA 浓度与峰面积均呈现良好的相关性，其标准曲线方程式为y=0.284x0.386 1，R2=0.997 3。2.2 FMOC-Cl 衍生试剂用量对 GABA 含量测定结果的影响 鉴于食用菌与微生物制备液中 GABA 含量水平存在巨大差异(朱广跃等 2015)，本研究以双孢蘑菇子实体提取液作为测试对象，对FMOC-C1 衍生试剂用量进行了优化(图 1)。在衍生试剂体积低于 160 L 时，GABA 含量随着衍生试剂体积增大而显著升高；当衍生试剂体积高于 160 L 时，衍生试剂用量趋于饱和，GABA 含量不再随衍生试剂体积增大而变化，因此 160 L 衍生试剂可获得较好的衍生效果，可用于后续食用菌子实体提取液中 GABA 的衍生反应。图 1 衍生试剂用量对 GABA 含量测定结果的影响 不同小写字母表示 P0.05 水平的差异显著.下同 Fig.1 Effects of the derivativation reagent dosage on the determination result of GABA content.Different lower case letters indicate significant difference at P0.05.The same below.2.3 提取条件对 GABA 提取效果的影响 以双孢蘑菇子实体作为测试对象，分别按照 1:10、1:30、1:50、1:100、1:150、1:200、1:250 和 1:300 的料液比制备样品提取液，并测定各提取液中的 GABA 浓度，进一步计算双孢 文晴 等/中国主要食用菌子实体-氨基丁酸含量测定及产量影响因素 研究论文 菌物学报 236 蘑菇子实体干粉中的 GABA 含量。提取液中的GABA 浓度随着料液比增加而显著降低，料液比在 1:1001:250 之间时，GABA 浓度降低幅度显著高于料液比在1:501:100之间的降低幅度(图 2A)。1:50 料液比对应的子实体干粉GABA 含量显著低于其他处理，且料液比在1:1001:300 之间各处理的 GABA 含量无显著性差异(图 2B)。综合图 2A 和 2B 的结果可知，料液比为 1:100 时的 GABA 提取效果最佳。采用1:100的料液比，先后对双孢蘑菇子实体 GABA 的提取时间和温度进行了优化。随着提取时间延长，GABA 得率呈现先升高后降低的趋势，在提取时间为 1 h 时，GABA 得率最高，达到(1.090.02)mg/g DW(图 2C)。随着提取温度升高，GABA 得率呈现先升高后降低的趋势，在提取温度为 65 时，GABA 的得率最高，达到(1.300.04)mg/g DW；且在温度高于 75 的提取条件下，GABA 的得率显著降低(图 2D)。综上可知，食用菌子实体中 GABA 提取的最佳条件为：料液比为 1:100、提取时间为1 h、提取温度为 65。图 2 子实体 GABA 提取条件优化 A：不同料液比下提取液中的 GABA 浓度.B：不同料液比下的GABA 含量.C：不同提取时间下的 GABA 含量.D：不同提取温度下的 GABA 含量 Fig.2 Optimization of GABA extraction conditions from fruiting bodies.A:GABA concentration in extract under different solid-to-liquid ratios.B:GABA content under different solid-to-liquid ratios.C:GABA content under different extraction time.D:GABA content under different extraction temperature.Research paper 22 January 2023,42(1):231-243 Mycosystema ISSN1672-6472 CN11-5180/Q 菌物学报 237 2.4 食用菌子实体 GABA 检测方法验证 参照殷朝敏等(2019)的精密度试验、重复性试验、稳定性试验和加标回收试验方法，对食用菌子实体 GABA 检测方法进行了验证。2.4.1 方法精密度分析结果 以 90 g/mL 的 GABA 标准品作为测试对象，利用优化后的方法进行衍生处理和衍生产物检测，重复进样 6 次，测得 GABA 衍生产物的峰面积，计算出 6 次峰面积的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)。GABA 衍生产物峰面积之间的RSD为1.63%(表2)，表明该方法的精密度较高。表 2 方法精密度 Table 2 Precision analysis of the method 编号 Number GABA 峰面积 Peak area of GABA (mAUmin)1 52.361 2 52.487 3 54.212 4 54.016 5 53.058 6 52.227 平均值 Average value 53.060 相对标准偏差 RSD(%)1.63 2.4.2 方法重现性分析结果 以双孢蘑菇子实体作为测试对象，利用优化后的提取条件重复制备 5 份提取液，然后测定并计算每份样品的 GABA 含量，计算其 RSD。5 份样品 GABA 含量之间的 RSD 为 2.32%(表 3)，表明该方法重现性较好。2.4.3 GABA 衍生产物稳定性分析结果 以双孢蘑菇子实体为测试对象，利用优化后的提取条件制备提取液和进行衍生反应，分别将衍生产物室温放置 0、2、4、6、8 和 12 h 后测定并计算各处理的 GABA 含量及其 RSD。不同处理 GABA 含量之间的 RSD 为 2.20%(表 4)，表明以 FMOC-Cl 作为柱前衍生试剂得到的衍生产物的稳定性较高。表 3 重现性分析 Table 3 Repeatability analysis of the method 编号 Number GABA 含量 GABA content(mg/g DW)1 1.099 2 1.014 3 1.111 4 1.088 5 1.052 平均值 Average value 1.080 相对标准偏差 RSD(%)2.32 表 4 GABA 衍生产物稳定性分析 Table 4 Stability analysis of GABA derivatives GABA 衍生产物放置时间 Storage time of GABA derivatives(h)GABA 含量 GABA content (mg/g DW)0 1.109 2 1.061 4 1.072 6 1.071 8 1.128 10 1.118 12 1.093 平均值 Average value 1.093 相对标准偏差 RSD(%)2.20 2.4.4 加标回收试验结果 以双孢蘑菇子实体为测试对象，利用优化后的提取条件制备提取液。将 80 L 提取液与80 L 5 g/mL 或 10 g/mL 的 GABA 标准品溶液混匀，然后测定并计算各混合液的 GABA 浓度，并进一步计算其加标回收率、平均加标回收率和 RSD。样品的平均加标回收率为 97.88%、RSD 为 2.72%(表 5)，表明该方法的准确度较高。2.5 不同食用菌子实体GABA含量比较分析 以属于木腐型、草腐型、共生型和寄生型4 大生态类型的 20 种中国主要食用菌作为研究对象，利用上述优化的条件对其子实体中的GABA 进行了提取、衍生和含量测定。双孢蘑菇和糙皮侧耳中 GABA 的出峰时间分别为9.393 min、9.441 min，与 GABA 标准的出峰时间9.435 min接近，样品中GABA峰型较好且周围几乎无杂峰(图3)。由此表明，FMOC-Cl柱前 文晴 等/中国主要食用菌子实体-氨基丁酸含量测定及产量影响因素 研究论文 菌物学报 238 表 5 GABA 样品加标回收率 Table 5 Recovery rates of the spiked GABA 样品 GABA 浓度 GABA concentration of sample(g/mL)GABA 标准品浓度 GABA concentration of standard(g/mL)测定值 Measured value(g/mL)回收率 Recovery rate(%)平均回收率 Average recovery rate(%)相对标准偏差 RSD(%)10.332 7 5 15.187 97.094 97.88 2.72 15.155 96.443 15.429 101.934 10.332 7 10 20.095 97.619 19.661 100.895 20.059 97.265 图 3 GABA 标准品和子实体提取液高效液相色谱图 A：GABA 标准品的高效液相色谱图.B：双孢蘑菇子实体提取液的高效液相色谱图.C：糙皮侧耳子实体高效液相色谱图 Fig.3 HPLC chromatograms of GABA standard and fruiting body extract.A:HPLC chromatogram of GABA standard.B:HPLC chromatogram of Agaricus bisporus fruiting body extract.C:HPLC chromatogram of Pleurotus ostreatus fruiting body extract.衍生 HPLC 法对食用菌子实体 GABA 具有很高的分离度和测量精确度。测试食用菌子实体中均检测到了 GABA，但不同种类食用菌的 GABA 含量存在显著差异(表 6)。根据 GABA 含量，将食用菌分为 4 个梯度，第一梯度为黄白银耳，GABA 含量最高，为 3.02 mg/g DW，是其他 19 种食用菌的1.7615.12 倍；第二梯度包括香菇、大杯伞、美味牛肝菌、银耳、金针菇和双孢蘑菇 6 种食用菌，GABA 含量在 1.002.00 mg/g DW 之间；Research paper 22 January 2023,42(1):231-243 Mycosystema ISSN1672-6472 CN11-5180/Q 菌物学报 239 表 6 不同食用菌子实体的 GABA 含量 Table 6 GABA content of different edible fungi 样品名称 Sample name GABA 含量 GABA content (mg/g DW)样品名称 Sample name GABA 含量 GABA content (mg/g DW)黄白银耳 Tremella aurantialba 3.020.35 a 毛头鬼伞 Copyinus comatus 0.490.18 g 香菇 Lentinula edodes 1.710.32 b 羊肚菌 Morchella esculenta 0.380.04 hik 大杯伞 Clitocybe maxima 1.410.12 c 巴氏蘑菇 Agaricus blazei 0.380.02 hik 美味牛肝菌 Boletus edulis 1.230.05 d 褐色斑玉蕈 Hypsizygus marmoreus(Brown)0.330.06 hik 银耳 Tremella fuciformis 1.190.09 d 猴头菌 Hericium erinaceus 0.270.02 ik 金针菇 Flammulina filiformis 1.080.09 de 蛹虫草 Cordyceps militaris 0.260.03 ik 双孢蘑菇 Agaricus bisporus 1.060.04 de 白蚁伞 Termitomyces albuminosus 0.250.02 ik 黑木耳 Auricularia heimuer 0.940.10 ef 白色斑玉蕈 Hypsizygus marmoreus(White)0.200.03 k 草菇 Volvariella volvacea 0.830.23 f 刺芹侧耳 Pleurotus eryngii 0.570.08 g 糙皮侧耳 Pleurotus ostreatus 0.540.06 g 广叶绣球菌 Sparassis latifolia 0.510.06 g 数据为平均值标准偏差.不同小写字母表示 P0.05 水平的差异显著性.拉丁学名参考戴玉成等(2010，2018，2021)、吴芳等(2015)和 Wu et al.(2019)的报道 Values are meansSD.Different lower case letters indicate significant difference at P0.05.Latin names of the 20 edible fungi are referred to Dai et al.(2010,2018,2021)and Wu et al.(2015,2019).第三梯度包括黑木耳、草菇、刺芹侧耳、糙皮侧耳、广叶绣球菌和毛头鬼伞 6 种食用菌，GABA 含量在 0.501.00 mg/g DW 之间；第四梯度包括羊肚菌、巴氏蘑菇、斑玉蕈(白色和褐色)、猴头菌、蛹虫草和白蚁伞 7 种食用菌，GABA 含量在 0.200.50 mg/g DW。2.6 培养料氮源含量和种类、栽培时间对子实体 GABA 含量的影响 以糙皮侧耳作为测试对象，分别利用含有不同比例麦麸和尿素的培养料栽培糙皮侧耳，探究了氮源种类和培养料含氮量对子实体 GABA含量的影响。添加 10%40%麦麸可显著提高糙皮侧耳子实体的 GABA 含量(P0.05，图 4A)，且 GABA 含量随麦麸含量增加呈现先升高后降低的趋势，在麦麸含量为 30%时达到最高，为(0.810.02)mg/g DW。添加 0.5%和 1%尿素可显 著 提 高 糙 皮 侧 耳 子 实 体 的 GABA 含 量(P0.05，图 4B)，且 GABA 含量随着尿素含量增加而增加，最高为(0.950.04)mg/g DW。通过对比两种氮源下的 GABA 含量变化趋势发现，含氮量相近(即添加 40%麦麸或 1%尿素)的情况下，添加尿素源栽培的糙皮侧耳子实体 GABA含量为(0.950.04)mg/g DW，显著高于添加麦麸栽培的糙皮侧耳子实体(0.630.03)mg/g DW。由此可见，食用菌 GABA 含量与培养料含氮量和氮源种类存在显著的相关性。本实验室前期研究发现随着栽培时间延长，糙皮侧耳培养料含氮量升高、pH 和含水量降低(未发表)，为了探究培养料理化性质改变对子实体 GABA 含量的影响，本研究以含有 10%麦麸的培养料栽培的第一、二和三茬糙皮侧耳子实体作为测试对象，探究了栽培时间(或培养料理化性质变化)对 GABA 含量的影响。第二和三茬子实体的 GABA 含量显著高于第一茬子实体(P0.05，图 5)。由此可见，培养料理化条件改变可影响食用菌的 GABA 含量。文晴 等/中国主要食用菌子实体-氨基丁酸含量测定及产量影响因素 研究论文 菌物学报 240 图 4 麦麸(A)和尿素(B)用量对糙皮侧耳子实体GABA 含量的影响 Fig.4 Effects of wheat ban content(