白血病免疫分型.ppt

白血病白血病/淋巴瘤免疫淋巴瘤免疫(mi(mi ny)ny)分分型型临检(ln jin)(ln jin)血液 蒋能刚第一页，共三十五页。应用目的：n n 确定淋巴系病变的起源和分化程度；n n 鉴别反应性与克隆性淋巴细胞增生性疾病；n n 确定髓系白血病各亚型；确定髓系白血病各亚型；n n 对形态学分类对形态学分类(fn li)(fn li)不明细胞进行定性；不明细胞进行定性；n n 诊断急性未分化型白血病；诊断急性未分化型白血病；n n 诊断急性混合细胞白血病；诊断急性混合细胞白血病；n n 诊断微小残留白血病或白血病浸润；诊断微小残留白血病或白血病浸润；n n 判断白血病判断白血病/淋巴瘤预后。淋巴瘤预后。第二页，共三十五页。流式细胞术(Flow Cytometry):对高速流过检测区的单个细胞或生物颗粒进行多参数、快速分析（或分选）的一种(y zh(y zh n n)技术。第三页，共三十五页。第四页，共三十五页。数据(shj)(shj)显示方式：单参数直方图 双参数二维点图 等高图 二维密度图 三维图第五页，共三十五页。单参数(cnsh)直方图双参数(cnsh)点图第六页，共三十五页。荧光荧光(ynggung)(ynggung)素素n nFITC(FITC(异硫氰酸荧光异硫氰酸荧光(ynggung)(ynggung)素）：素）：530nm530nm（绿）n nPEPE（藻红蛋白）：（藻红蛋白）：575nm575nm（橙黄）n nPI(PI(碘化丙啶）：碘化丙啶）：620nm 620nm（橙红橙红）n nPerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：675nm（深红）n nAPC(别藻兰蛋白）：660nm（红红）第七页，共三十五页。检测物：细胞(xbo)(xbo)表面、胞浆或胞核抗原性物质第八页，共三十五页。CD（cluster of differentiation）：1982年起将识别同一分化抗原的来自不同(b tn(b tn)实验室的单克隆抗体归为一个分化群，并进行流水编号。一个CD相关抗体可包含多个克隆号。其他非CD系列抗原：如TCR、HLA等第九页，共三十五页。正常血细胞中的抗原正常血细胞中的抗原(kngyun)(kngyun)表达特点表达特点1.1.系列保守系列保守(b(b oshosh u)u)性性2.2.时序性时序性3.3.抗原表达量的模式化抗原表达量的模式化第十页，共三十五页。干细胞嗜碱性(jin xn)细胞嗜酸性(sun xn)细胞定向(dn xin)髓系干细胞红系巨核系粒单核系粒系单核系CD36 CD71 CD235aCD41 CD42a/b CD61CD4 CD11b CD14 CD64 HLA-DRCD36CD15 CD71 CD16(TDT CD7)CD34 CD117 CD13 CD33CD38 MPOCD34 CD13 CD33 CD117MPO第十一页，共三十五页。抗原刺激干细胞早前(zo qin)B前B静止(jngzh)期BPro-B ALLPre-B ALLCommon-B ALLCLL/SLL免疫(miny)母细胞浆细胞样淋巴细胞大B细胞淋巴瘤淋巴浆细胞淋巴瘤外套细胞滤泡区母细胞中心母细胞中心细胞边缘带细胞浆细胞套细胞淋巴瘤伯基特淋巴瘤大B细胞淋巴瘤滤泡淋巴瘤边缘带淋巴瘤骨髓瘤TDT+CD34+cCD79a+CD19+CD10 c-TDT+CD34+cCD79a+CD19+CD20 CD10+c-TDT+CD34 cCD79a+CD19+CD20+CD10 c+CD5+CD19+CD20 CD22+CD23+sIg+FMC7-CD38 CD138 CD56 cIg CD19-CD45-CD22+CD5-CD10-CD23-CD22+CD10+FMC7+CD23 bcl-2+CD5-CD19+CD20+CD22+CD38+IgM+sIg+CD22+CD10+sIg+CD34-TDT-CD5+CD22+sIg+FMC7+Cyclin D1+CD23-CD22+bcl-6+CD10 CD5 CD30 第十二页，共三十五页。干细胞胸腺期胸腺期TDT+CD34+CD2cCD3CD7CD71TDT+CD34CD1aCD2cCD3CD7CD4CD8胸腺期TDT+CD2CD3CD5CD7CD4/CD8TCRPrecursor-T ALL成熟(chngsh)T细胞各分化群第十三页，共三十五页。造血细胞在其分化、发育过程中，细胞膜、细胞浆或造血细胞在其分化、发育过程中，细胞膜、细胞浆或胞核抗原的有无、表达强弱与血细胞的分化发育阶段密切胞核抗原的有无、表达强弱与血细胞的分化发育阶段密切相关，表现出与相关，表现出与细胞系列细胞系列(xli)(xli)及其分化程度分化程度相关的特性。相关的特性。第十四页，共三十五页。白血病细胞中的抗原白血病细胞中的抗原(kngyun)(kngyun)表达特点表达特点 表达模式基本与相应阶段正常细胞相似，还具有以下表达模式基本与相应阶段正常细胞相似，还具有以下(y(y xi)xi)特点：特点：1.1.跨系表达跨系表达 2.2.时相混乱时相混乱 3.抗原表达量的改变第十五页，共三十五页。免疫免疫(mi(mi ny)ny)分型四种急性白血病分型四种急性白血病n n单表型急性白血病n n表达(biod)(biod)某一个系列抗原为主的急性白血病n n双表型/双克隆急性白血病n n未分化型急性白血病第十六页，共三十五页。各系急性白血病重要抗原各系急性白血病重要抗原(kngyun)(kngyun)指标指标1.1.急性急性(jxng)(jxng)淋巴细胞白血病淋巴细胞白血病(AL)(AL)敏感性敏感性 特异性特异性B-ALL:B-ALL:CD19 100%CD19 100%非特异非特异cCD79a 99%cCD79a 99%特异特异T-ALL:T-ALL:CD7 100%CD7 100%非特异非特异cCD3 100%cCD3 100%特异特异第十七页，共三十五页。2.2.急性髓细胞急性髓细胞(xbo)(xbo)白血病白血病(AML)(AML)表达率表达率 特异性特异性CD13 70%CD13 70%非特异非特异CD33 70%CD33 70%非特异非特异CD117 70%CD117 70%特异特异cMPO 70%cMPO 70%特异特异第十八页，共三十五页。错译表达（Ly+AML，My+ALL）：白血病细胞表达非本系细胞抗原标志物，具有(jy(jy u)u)预后意义。第十九页，共三十五页。ALL CD13，CD33t(9;22)AML CD2+，DR-M3 t(15;17)，或，或RAR+，t(11;17)CD2+，DR+M4Eo inv(16)或或 t(16;16)CD19+M0t(9:22)多见多见 M2t(8;21)TdT+,CD7+见于见于(jiny)M0 CD56+M5/M4第二十页，共三十五页。双表型急性白血病记分双表型急性白血病记分(j fn)(j fn)系统系统分值分值 B B系系 T T系系 髓系髓系 2 cCD79a cCD3 cMPO 2 cCD79a cCD3 cMPO CD22 TCR CD22 TCR cIgM TCR cIgM TCR 1 1 CD19 CD2 CD117CD19 CD2 CD117 CD10 CD5 CD13 CD10 CD5 CD13 CD20 CD8 CD33 CD20 CD8 CD33 0.5 TdT TdT CD14 0.5 TdT TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD24 CD7 CD15 CD64 CD64第二十一页，共三十五页。部分部分(b fen)(b fen)慢性慢性B B淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型淋巴细胞增殖性疾病的免疫表型 CD5CD5CD10CD10CD19CD19CD22CD22CD23CD23HLA-DRHLA-DRFMC7FMC7SIgSIgCD11cCD11cCLLCLL+-+/-+/-+-+/-+/-PLLPLL-+-+-MCLMCL+-/+-/+-+-HCLHCL-+-+FCLFCL-+-/+-/+/-+/-+-MZLMZL-+-+/-+/-LPLLPL-+-/+-/+-/+-/+注：注：注：注：HCL CD103+CD25+HCL CD103+CD25+第二十二页，共三十五页。部分慢性部分慢性T淋巴细胞增殖性疾病淋巴细胞增殖性疾病(jbng)的免疫表型的免疫表型CD2CD2CD3CD3CD5CD5CD7CD7CD4CD4CD8CD8CD25CD25CD56CD56CD57CD57T-CLL/PLLT-CLL/PLL+/-+/-/+-/+-T-LGLT-LGL+/-+/-+/-+/-+-/+-/+NK-LGLNK-LGL+-+/-+/-+-ATLATL+-+肝脾T细胞(xbo)淋巴瘤：CD2+CD3+CD7+TCR+CD16+/-CD56+/-CD8-/+CD4-TCR-第二十三页，共三十五页。n n标本(biobn)(biobn)种类：怀疑含有病变细胞的组织或体液，如外周血、骨髓、胸腹水、脑脊液、淋巴结等。n n标本要求：细胞有活性，最好不要超过48h。第二十四页，共三十五页。光散射特征与细胞形态光散射特征与细胞形态(xngti)(xngti)的关系的关系第二十五页，共三十五页。淋巴淋巴(ln b)单核粒细胞CD45CD45M4/M5M 3正常正常(zhngchng)白血病白血病L13,M02 M6,M7TSSCSSCMM 非非造血造血(zo xu)来源来源细胞细胞CD45在免疫分型中的应用意义在免疫分型中的应用意义原始原始嗜嗜碱碱嗜酸嗜酸第二十六页，共三十五页。正常(zhngchng)(zhngchng)骨髓第二十七页，共三十五页。AML-M1AML-M1AML-M2AML-M2AML-M3AML-M3AML-M4/M5AML-M4/M5第二十八页，共三十五页。AML-M6AML-M6非造血非造血(zo xu)(zo xu)细胞细胞非特异性染色非特异性染色(r(r ns)ns)（死亡细胞）（死亡细胞）ALLALL第二十九页，共三十五页。分类分类(fn li)(fn li)不明细不明细胞胞第三十页，共三十五页。B B细胞细胞(xbo)(xbo)克克隆性隆性第三十一页，共三十五页。结果(ji gu(ji gu)报告第三十二页，共三十五页。白血病免疫(mi(mi ny)ny)分型其他方法：酶-底物显色 荧光显微镜 第三十三页，共三十五页。谢谢谢谢(xi xie)(xi xie)第三十四页，共三十五页。内容(nirng)总结白血病/淋巴瘤免疫分型。鉴别反应性与克隆性淋巴细胞增生性疾病。PE（藻红蛋白）：575nm（橙黄）。PI(碘化丙啶）：620nm（橙红）。PerCP(多甲藻黄素叶绿素蛋白）：675nm（深红）。APC(别藻兰蛋白）：660nm（红）。CD（cluster of differentiation）：1982年起将识别同一分化抗原的来自不同实验室的单克隆抗体归为一个(y)分化群，并进行流水编号。双表型/双克隆急性白血病第三十五页，共三十五页。