西安地区新型冠状病毒肺炎患...CoV核酸检测复阳结果分析_赵海卫.pdf

175现代检验医学杂志第 38 卷第 1 期2023 年 1 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.1,Jan.2023西安地区新型冠状病毒肺炎患者康复期 2019-nCoV 核酸检测复阳结果分析赵海卫，孙珉，王娟，杨丽华，成蒙蒙，薛婧雯，王友，樊爱琳（西安秦皇医院医学检验中心，西安 710600）摘要：目的研究西安地区新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）患者康复期新型冠状病毒（2019-nCoV）核酸检测复阳情况。方法对 2021 年 12 月 2022 年 2 月在西安秦皇医院的 873 例 COVID-19 患者康复期采集口咽和鼻咽拭子，应用实时荧光定量 PCR 进行 2019-nCoV 核酸检测，核酸复阳结果按性别、年龄、标本类型、靶标基因和Ct值与转阴时间分别进行分组比较。结果核酸检测复阳患者共201例，阳性率为23.02%。不同性别（21.58%vs 24.81%）和年龄组（24.70%vs 25.90%）核酸复阳率之间差异无统计学意义（2=1.272，3.223，均 P0.05）。双拭子（鼻咽+口咽）联合检测复阳率明显高于单鼻咽或单口咽拭子（23.02%vs 19.01%，5.84%），且鼻咽拭子核酸复阳率明显高于口咽拭子，差异均有统计学意义（2=8.699，121.5，69.59，均 P0.05）。双靶标基因阳性标本数明显高于单靶标 N 或 ORF1ab 基因(55.30%vs 28.57%，16.13%)，且单靶标 N 基因阳性标本数明显高于 ORF1ab 基因，差异均有统计学意义（2=31.83，72.51，9.679，均 P0.05）。不同区间 Ct 值组间核酸转阴时间差异有统计学意义（F=16.66，P0.001），且转阴时间与复阳时的 Ct 值呈显著负相关性（r=-0.539，P0.05).The combined detection rate of double swabs(nasopharynx and oropharynx)was significantly higher than that of single nasopharynx or single oropharynx swabs（23.02%vs 19.01%，5.84%）,and the rate of nucleic acid reactivation of nasopharynx swabs was significantly higher than that of oropharynx swabs,and the differences were statistically significant（2=8.699，121.5，69.59，all P0.05）.The number of double target gene positive specimens was significantly higher than that of single target N or ORF1ab genes(55.30%vs 28.57%，16.13%),and the number of single target N gene positive specimens was significantly higher than that of ORF1ab gene,and the differences were statistically significant（2=31.83，72.51，9.679，all P0.05）.There was a significant difference in the time of nucleic acid negative transformation between different Ct values(F=16.66,P0.001),and there was a significant negative correlation between the time of nucleic acid negative transformation and the Ct value at repositive time(r=-0.539，P0.05).ConclusionThe rate of nucleic acid reactivation was still high in COVID-19 patients during the recovery period.The mechanism and cause of reactivation are unknown,and isolation management and health monitoring are still needed to be strengthened.作者简介：赵海卫（1987-），男，硕士，主管技师，研究方向：病原微生物感染及分子诊断，E-mail:。通讯作者：樊爱琳（1970-），女，博士，副主任医师，E-mail:。176现代检验医学杂志第 38 卷第 1 期2023 年 1 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.1,Jan.2023Keywords:COVID-19；2019-nCoV；nucleic acid test；theresults repositive of nucleic acid test新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19）是由新型冠状病毒（2019-nCoV）感染引起的急性呼吸道传染病，临床症状主要表现为干咳、发热和乏力1。自疫情暴发以来，经过两年多的抗疫，我国在 COVID-19 防治方面已取得了阶段性的成果2。随着 COVID-19 患者大量治愈出院，健康监测成为了医学研究关注的焦点。2019-nCoV 核酸检测仍是 COVID-19 康复患者健康监测的重要指标。随着对治愈出院患者的持续观察，陆续有报道发现治愈患者出现核酸检测复阳，复阳原因及机制目前尚不明确，但截至目前，国内尚未报道核酸复阳者具有传染性3-5。国务院在新冠肺炎出院患者复诊复检工作方案（试行）中明确要求新冠肺炎患者治愈出院后应当继续隔离医学观察 14 天(康复期)，康复期满进行核酸检测，并规定了核酸复阳的管理措施6。目前为止，针对COVID-19患者康复期核酸检测复阳结果报道较少，本文对我院 873 例 COVID-19 患者康复期的 2019-nCoV 核酸检测复阳结果进行分析，为 COVID-19患者康复期核酸检测及隔离管理提供参考。1材料与方法1.1研究对象收集 2021 年 12 月 2022 年 2 月在西安秦皇医院进行康复的 COVID-19 患者共计 873例，入院时核酸检测均为阴性。男性 482 例，女性391 例；按年龄分组，30 岁 311 例，30 60 岁477 例，60 岁 85 例。基因测序证实毒株亚型为德尔塔变异株。1.2仪器和试剂重庆中元汇吉全自动核酸提取仪，西安天隆全自动医用 PCR 分析系统，重庆中元汇吉核酸提取试剂盒（磁珠法），重庆中元汇吉 2019-nCoV 核酸检测试剂盒，北京康彻思坦生物 2019-nCoV 核酸（液体）质控品 S3（浓度为 5 000copies/ml）。1.3方法按西安疫情指挥部医疗专家组要求，同时采集康复期患者口咽和鼻咽拭子两份标本进行 2019-nCoV 核酸检测，取 200l 病毒液提取核酸，将 10l 核酸提取液加入到扩增试剂中，配置成 20l 体系扩增，内标基因、N 和(或)ORF 1ab基因扩增曲线同时呈 S 型，且 Ct 40，结果判为阳性,每批含三个阴性和一个弱阳性质控（S3 稀释10 倍）。两份标本均为阴性认为该患者达到出院标准，若有一份标本阳性则判该患者核酸复阳。复阳患者无临床表现和影像学进展的，留院观察，并继续进行核酸检测，采样间隔 24h，连续两次检测均为阴性，则该患者达到出院标准。1.4统计学分析采用 SPSS20.0 软件对数据进行统计学分析，计量资料采用均数 标准差（xs）表示，两组间比较采用 t 检验，多组间比较采用方差分析，计数资料采用卡方（2）检验，采用Pearson 线性相关进行相关性分析，P 0.05 为差异有统计学意义。2结果2.1COVID-19 患者康复期核酸复阳率及不同性别、年龄组之间的比较873 例患者康复期共检出核酸复阳患者201例，阳性率为23.02%（201/873）。男性患者复阳率为 21.58%（104/482），女性患者复阳率为 24.81%（97/391），不同性别之间的差异无统计学意义（2=1.272，P=0.259）。30 岁患者复阳率为 19.61%（61/311），3060 岁患者复阳率为 24.74%（118/477），60 岁患者复阳率为25.88%（22/85），不同年龄组之间的差异无统计学意义（2=3.223，P=0.199）。2.2不同类型标本核酸阳性检出率比较201 例核酸阳性患者中，口咽拭子阳性患者 35 例，鼻咽拭子阳性患者 150 例，口咽拭子和鼻咽拭子均为阳性患者 16 例，鼻咽拭子阳性检出率为 19.01%（166/873），口咽拭子阳性检出率为5.84%（51/873），双拭子（鼻咽+口咽）阳性检出率（23.02%，201/873）明显高于单鼻咽（2=8.699，P=0.003）或单口咽拭子（2=121.5，P0.001），鼻咽拭子阳性检出率明显高于口咽拭子（2=69.59，P0.001），差异均有统计学意义。2.3不同靶标基因核酸复阳标本占比及 Ct 值分析见表 1。217 份核酸阳性的口咽和鼻咽拭子标本中，双靶标基因阳性标本数明显高于单靶标基因（N或 ORF1ab），差异有统计学意义（N：2=31.83，P0.001；ORF1ab：2=72.51，P0.001），单靶标 N 基因阳性标本数明显高于 ORF1ab 基因,差异有统计学意义（2=9.679，P=0.002）。双靶标基因阳性标本的 N 和 ORF1ab 基因 Ct 值均明显低于单靶标基因阳性标本，差异有统计学意义（N：t=6.274，P0.001；ORF1ab：t=5.186，P0.001）。表 1不同靶标基因核酸复阳标本占比（%）及 Ct 值（xs）分析（n=217）靶标基因阳性标本数占比(%)Ct 值N6228.5737.620.83ORF 1ab3516.1338.160.96N+ORF1ab12055.3035.332.80/35.562.922.4不同区间 Ct 值核酸复阳患者占比及核酸转阴时间分析见表 2。201 例核酸复阳患者中，以靶标基因 Ct 值 35 的患者为主，靶标基因 Ct 值177现代检验医学杂志第 38 卷第 1 期2023 年 1 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.1,Jan.2023 30 的患者较少。不同区间 Ct 值组间核酸转阴时间差异有统计学意义（F=16.66，P0.001），且转阴时间与复阳时的 Ct 值呈显著负相关性（r=-0.539，P0.05）。表 2 不同区间 Ct 值核酸复阳患者占比及核酸转阴 时间（n=201，xs）组别阳性患者数阳性占比（%）转阴时间（天）Ct 3515577.111.631.4630Ct354120.402.782.01Ct 3052.494.802.17注：分组依据患者核酸结果靶标基因最低 Ct 值。3讨论我国在疫情防控中积极采取有效措施，大多数感染患者得到了及时治疗并康复出院。随着康复患者出院，陆续报道出现核酸复阳，其机制目前尚不清楚，需进一步研究7。本研究对 873 例COVID-19 康复期核酸检测结果调查发现，核酸复阳率为 23.02%，高于胡星星等8报道的 15.96%，与 ZOU 等5报道的 20%接近，这种差异可能与患者人数及地域差异有关，也不排除与感染毒株亚型有关。本研究发现不同性别之间的核酸复阳率差异无统计学意义，与赵本南等9研究结果一致，不同年龄组之间核酸复阳率差异无统计学意义，因本研究未考虑患者免疫机制、基础疾病和治疗情况等因素，性别和年龄因素是否会直接影响核酸复阳尚待进一步研究。COVID-19 属于呼吸道疾病，口咽和鼻咽拭子是主要检测标本，针对 COVID-19 患者康复期核酸复阳结果，本研究表明鼻咽拭子阳性检出率明显高于口咽拭子（P0.001），机制为鼻咽部病毒受体血管紧张素转移酶 2（Angiotensin converting enzyme 2，ACE2）表达量较高，康复期鼻咽部病毒载量（或核酸片段）高于口咽部10。此外，双拭子（鼻咽和口咽）联合阳性检出率明显高于单鼻咽或单口咽拭子（P35（见表 1），依据 Ct 值与病毒载量（或核酸拷贝数）呈负相关可推测，康复期患者体内病毒载量（或核酸拷贝数）普遍较低。此外，单靶标 N 基因阳性标本数明显高于 ORF1ab 基因，原因主要为康复期患者体内病毒载量（或核酸拷贝数）处于较低水平时，N 基因检出灵敏度高于ORF1ab 基因。依据新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第九版）规定，新冠康复期患者核酸检测 N 和 ORF基因 Ct 值均 35（荧光定量 PCR 方法，界限值为40）即可出院14。本研究 201 例核酸复阳患者中，以靶标基因 Ct 值 35 为主，复阳后在较短时间即可转阴（见表 2），该结果在一定程度上佐证了新出院标准的科学性；而靶标基因 Ct 值 35 的样本仍有携带活病毒15，因此，对于新冠康复患者仍需做好必要的隔离管理和健康 监测。综上所述，COVID-19 患者康复期核酸复阳率较高，具体原因尚待研究，但与以下因素有关：康复期患者免疫功能降低，病毒增殖；出院和康复期采用不同最低检出限的核酸检测试剂盒；康复期患者再次被 2019-nCoV 感染；机体残留部分核酸片段，而非完整的病毒颗粒。2019-nCoV 核酸复阳患者是活病毒携带还是核酸片段残留，必需通过病毒培养或基因组测序进一步鉴别。参考文献：1 WANG Chen,HORBY P W,HAYDEN F G,et al.A novel coronavirus outbreak of global health concernJ.Lancet,2020,395(10223):470-473.2 HUANG Chaolin,WANG Yeming,LI Xingwang,et alClinical features of patients infected with 2019 novel coronavirus in Wuhan,China.J.Lancet,2020,395(10223):497-506.3 LAN Lan,XU Dan,YE Guangming,et al.Positive RT-PCR test results in patients recovered from COVID-19J.JAMA,2020,323(15):1502-1503.4 YE Guangming,PAN Zhenyu,PAN Yunbao,et al.Clinical characteristics of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 reactivationJ.The Journal of 178现代检验医学杂志第 38 卷第 1 期2023 年 1 月J Mod Lab Med,Vol.38,No.1,Jan.2023Infectiou,2020,80(5):e14-e17.5 ZOU You,WANG Binru,SUN Liu,et alThe issue of recurrently positive patients who recovered from COVID-19 according to the current discharge criteria:investigation of patients from multiple medical institutions in Wuhan,ChinaJ.The Journal of Infectious Diseases,2020,222(11):1784-1788.6 国务院应对新型冠状病毒感染肺炎疫情联防联控机制.国办发明电（2020）22 号：关于印发进一步推进新冠病毒核酸检测能力建设工作方案的通知 Z.(2020-08-27)(2020-08-31)中华人民共和国国务 院 公 报.http:/ State Council Joint Prevention and Control Mechanism for Novel Coronavirus Coronavirus Infection Pneumonia Epidemic Notice.State Office of Invention Electricity(2020)22:Working plan for further promoting the capacity building of novel coronavirus nucleic acid testing Z.(2020-08-27)(2020-08-31)Gazette of the National Health Commission of Peoples Republic of China.http:/ AN Jianghong,LIAO Xuejiao,XIAO Tongyang,et al.Clinical characteristics of recovered COVID-19 patients with re-detectable positive RNA testJ.Annals of Translational Medicine,2020,8(17):1084.8 胡星星,倪岚,陈毅斐,等.新型冠状病毒肺炎患者恢复期核酸检测复阳的临床分析 J.武汉大学学报(医学版),2021,42(6):867-871.HU Xingxing,NI Lan,CHEN Yifei,et alClinical characteristics of discharged COVID-19 patients with reappeared positive nucleic acid testJ.Medical Journal of Wuhan University(Medical Edition),2021,42(6):867-871.9 赵本南,杜清,兰丽娟,等.新型冠状病毒肺炎核酸复阳者与未复阳者的临床特征比较 J.热带医学,2022,22(2):212-217 ZHAO Bennan,DU Qing,LAN Lijuan,et al.A comparison of clinical characteristics between COVID-19 patients with and without repositive nucleic acid testJ.Journal of Tropical Medicine,2022,22(2):212-21710 MAWADDAH A,GENDEH H S,LUM S G,et al.Upper respiratory tract sampling in COVID-19J.The Malaysian Journal of Pathology,2020,42(1):23-35.11 杜伟平,陈延平,阳央,等.新型冠状病毒肺炎患者多类型样本 SARS-CoV-2 核酸检测在临床诊疗中的意义 J.现代检验医学杂志,2020,35(3):87-89.DU Weiping,CHEN Yanping,YANG Yang,et al.Clinical significance of detection of SARS-CoV-2 nucleic acid in patients with COVID-19J.Journal of Modern Laboratory Medicine,2020,35(3):87-89.12 张园,周泽奇,王志贤,等.新型冠状病毒核酸、抗原和抗体联合检测的临床价值讨论 J.现代检验医学杂志,2020,35(5):99-102,109.ZHANG Yuan,ZHOU Zeqi,WANG Zhixian,et al.Discussion on the clinical value of combined detection of SARS-CoV-2 nucleic acid,antigen and antibodyJ.Journal of Modern Laboratory Medicine,2020,35(5):99-102,109.13 YU Fengting,YAN Liting,WANG Nan,et al.Quantitative detection and viral load analysis of SARS-CoV-2 in infected patientsJ.Clin Infect Dis,2020,71(15):793-798.14 国家中医药管理局办公室,国家卫生健康委员会办公厅.国卫办医函202271 号:关于印发新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第九版）的通知 EB/OL.(2022-03-14)http:/ of National Administration of Traditional Chinese Medicine,General Office of the National Health Commission.Medical Letter No.71 of the National Health Office(2022):Notice on the issuance of the novel coronavirus pneumonia diagnosis and treatment protocol(Trial Version 9)EB/OL.(2022-03-14)http:/ JAAFAR R,AHERFI S,WURTZ N,et al.Correlation between 3 790 quantitative polymerase chain reaction-positives samples and positive cell cultures,including 1941 severe acute respiratory syndrome Coronavirus 2 isolatesJ.Clin Infect Dis,2021,72(11):e921.收稿日期：2022-07-30修回日期：2022-10-19（上接 168 页）11 KATRANGI W,GREBE S K G,ALGECIRAS-SCHIMNICH A.Analytical and clinical performance of thyroglobulin autoantibody assays in thyroid cancer follow-upJ.Clinical Chemistry&Laboratory Medicine,2017,55(12):1987-1994.12 刘佳,徐援,高霞,等.甲状腺球蛋白基因多态性与自身免疫性甲状腺疾病易感性的 meta 分析 J.中华内分泌代谢杂志,2014,30(3):221-224.LIU Jia,XU Yuan,GAO Xia,et al.A meta-analysis of the association between thyrogiobulin gene polymorphism and autoimmune thyroid disease J.Chinese Journal of Endocrinology and Metabolism,2014,30(3):221-224.13 CLARK P,FRANKLYN J.Can we interpret serum thyroglobulin resultsJ.Annals of Clinical Biochemistry,2012,49(Pt 4):313-322.14 VERBURG F A,LUSTER M,CUPINI C,et al.Implications of thyroglobulin antibody positivity in patients with differentiated thyroid cancer:a clinical position statementJ.Thyroid,2013,23(10):1211-1225.15 ALGECIRAS-SCHIMNICH A,LASHO M A,NESS K M,et al.The Roche Elecsys and Siemens-Centaur thyroglobulin autoantibody assays show comparable clinical performance to the recently unavailable Beckman-Coulter access thyroglobulin autoantibody assay in identifying samples with potentially false-low thyroglobulin measurements due to thyroglobulin autoantibody interferenceJ.Thyroid,2011,21(7):813-814.收稿日期：2022-07-22修回日期：2022-11-19