乌拉草提取物对大鼠皮肤烫伤...黄色葡萄球菌感染的抑菌作用_孙宏宇.pdf

第 49 卷 第 2 期2023年 3 月吉林大学学报（医学版）Journal of Jilin University（Medicine Edition）Vol.49 No.2Mar.2023DOI：10.13481/j.1671587X.20230214乌拉草提取物对大鼠皮肤烫伤后金黄色葡萄球菌感染的抑菌作用孙宏宇,陈子涵,崔佰吉,冯宪敏,刘迪（吉林医药学院基础医学院病原生物学教研室，吉林 吉林 132013）摘要 目的目的：探讨乌拉草提取物黄酮类成分对大鼠皮肤烫伤后金黄色葡萄球菌（S.aureus）感染的抑菌作用，为新型抗感染中药的研发提供新思路。方法方法：采用水醇提取法提取乌拉草有效成分并利用紫外分光光度法测定其黄酮含量，采用牛津杯法抑菌试验检测乌拉草有效成分对细菌的抑菌活性，试管稀释法测定其最低抑菌浓度（MIC）。24只 SD 大鼠采用自制烫伤仪构建度烫伤模型，随机分为生理盐水对照组、青霉素钠（NaBP）对照组和乌拉草提取物 CM-70治疗组，每组 8只。3组大鼠创面皮内多点注射接种 20 L（1.0108 CFU mL1）S.aureus，次日 3 组大鼠分别涂抹无菌生理盐水（0.5 g无菌脱脂棉吸附生理盐水 0.5 mL cm2）、NaBP（0.5 g 无菌脱脂棉吸附 NaBP，5 000 U kg1 体质量）和 10 g L1 乌拉草 CM-70提取物稀释液（0.5 g无菌脱脂棉吸附 0.5 mL cm2乌拉草 CM-70提取液）。观察各组大鼠创面感染情况，采用创面痂下细菌定量实验检测各组大鼠烫伤后第 1、2、3、4、5、6和 7天创面细菌数（CFU g1），酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组大鼠烫伤前和烫伤后第 1、3、7 及 14 天血清白细胞介素 1（IL-1）、白 细 胞 介 素 10（IL-10）和 肿 瘤 坏 死 因 子（TNF-）水平。结果结果：体外抑菌活性检测，不同稀释浓度乌拉草 CM-70提取物稀释液针对金黄色葡萄球菌形成不同大小抑菌圈，针对大肠埃希菌和白色念珠菌未形成抑菌圈。MIC检测，乌拉草有效成分对 S.aureus的 MIC 值为 2.5 g L1。各组大鼠烫伤创面感染和愈合情况观察，与生理盐水对照组比较，感染后第 3天，乌拉草 CM-70提取物治疗组大鼠伤口浆液渗出较少；感染后第 7天，伤口浆液渗出减少；红肿减轻，伤口面积缩小；感染后第 14天，伤口创面已完全干燥，无浆液渗出，表面形成痂皮，伤口愈合良好，与 NaBP 对照组相近。烫伤创面痂下细菌定量，与生理盐水对照组比较，同一时间点乌拉草 CM-70提取物治疗组大鼠创面痂下细菌数明显减少（P0.01）。ELISA 法检测，与生理盐水对照组比较，乌拉草 CM-70提取物治疗组大鼠血清中 IL-10 水 平 在 烫 伤 后 第 1 和 3 天 明 显 升 高（P0.05），在第 7 和 14 天明显降低（P0.05）；乌拉草 CM-70 提取物治疗组大鼠血清中 IL-1 和TNF-水平在烫伤后第 1、3、7和 14天明显降低（P0.05）。结论结论：乌拉草有效成分可明显抑制大鼠皮肤烫伤后 S.aureus感染，通过调控血清 IL-1、IL-10和 TNF-水平发挥抗炎和抑菌作用。关键词 乌拉草；皮肤烫伤；感染；金黄色葡萄球菌；炎症因子；抑菌作用中图分类号 R378.11文献标志码 A文章编号 1671587X(2023)02037708收稿日期 20220518基金项目 吉林省卫健委卫生与健康青年科技骨干培养计划项目（2019Q031）；吉林省教育厅科学技术研究项目（JJKH20210499KJ，JJKH20210481KJ）；吉林省中医药管理局中医药科技项目（2019139）作者简介 孙宏宇（1989），女，吉林省吉林市人，实验师，医学硕士，主要从事病原体分子致病机制和疫苗研发方面的研究。通信作者 冯宪敏，教授，硕士研究生导师（E-mail：）；刘迪，副教授（E-mail：）377第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）Becteriostatic effect of Carex meyeriana Kunth extract on infection of Staphylococcus aureus after skin scalding in ratsSUN Hongyu,CHEN Zihan,CUI Baiji,FENG Xianmin,LIU Di（Department of Pathogeny Biology，School of Basic Medical Sciences，Jilin Medical University，Jilin 132013，China）ABSTRACT Objective：To discuss the becteriostatic effect of flavonoids in the Carex meyeriana Kunth extract on infection of Staphylococcus aureus（S.aureus）of the rats after skin scalding，and to provide the new ideas，for the research on new-style anti-infection traditional Chinese medicine.Methods：The water-alcohol extraction method was used to extract the active ingredients of Carex meyeriana Kunth and the content of flavonoids was determined by UV spectrophotometry，Oxford cup bacteriostatic test was used to detect the bacteriostatic activity of active ingredients of the Carex meyeriana Kunth against bacteria，and its minimal inhibitory concentration（MIC）was determined by tube dilution method.A total of 24 SD rats were used to establish degree scalding models and randomly divided into normal saline control group，penicillin sodium（NaBP）control group and Carex meyeriana Kunth extract CM-70 treatment group，and there were 8 rats in each group.The rats in three groups were inoculated with 20 L（1.0108 CFU mL1）S.aureus by multi-point injection in the wound skin；on the next day，the rats in three groups were smeared with sterile normal saline（0.5 g sterile absorbent cotton adsorbed normal saline 0.5 mL cm2），NaBP（0.5 g sterile absorbent cotton adsorbed NaBP，5 000 Ukg 1 body mass）and 10 g L1 Carex meyeriana kunth CM-70 extract diluent（0.5 g sterile absorbent cotton adsorbed 0.5 mL cm2 Carex meyeriana Kunth extract CM-70 extract diluent）.The wound infection of the rats in various groups were observed；the bacteria number（CFU g1）under scalding wound scab of the rats on the 1st，2nd，3rd，4th，5th，6th，and 7th days after scalding was measured by bacteria quantitative test；the serum levels of interleukin-1（IL-1），interleukin-10（IL-10），and tumor necrosis factor-（TNF-）of the rats in various groups before scalding and on the 1st，3rd，7th，and 14th days after scalding were detected by ELISA method.Results：The in vitro bacteriostatic activity test results showed that different dilution concentrations of Carex meyeriana Kunth extract CM-70 formed different sizes of inhibition zones against S.aureus，and did not formed the inhibition zones against Escherichia and Candida albicans.The MIC detection results showed that the MIC value of active ingredients of the Carex mgyeriana Kunth extract to S.aureus was 2.5 g L1.The observation results of infection and healing of scalding wounds of the rats in various groups showed that compared with normal saline control group，on the 3rd day after scalding，the exudation of wound serous of the rats in Carex meyeriana Kunth extract CM-70 treatment group was less；on the 7th day after scalding，the wound serous exudation，redness and swelling，and the wound area of the rats were decreased；on the 14th day after scalding，the wounds of the rats were completely dry without serous exudation，the scabs were formed on the surface，and the wounds healed well，which was similar to that in NaBP control group.The number of bacteria under scalding wound scab detection results showed that compared with normal saline control group，the number of bacteria under scalding wound scab of the rats in Carex meyeriana Kunth extract CM-70 treatment group was decreased significantly at the same time（P0.01）.The ELISA results showed that compared with normal saline control group，the level of serum IL-10 of the rats in Carex meyeriana Kunth extract CM-70 treatment group was increased significantly on the 1st day and 3rd day after scalding（P0.01），and it was decreased significantly on the 7th day and 14th day（P0.05）；the serum levels of IL-1 and TNF-of the rats in Carex meyeriana Kunth extract CM-70 treatment group were decreased significantly on the 7th day and 14th day（P0.05）.378孙宏宇，等.乌拉草提取物对大鼠皮肤烫伤后金黄色葡萄球菌感染的抑菌作用Conclusion：The active ingredients of Carex meyeriana Kunth can significantly inhibit the infection of S.aureus after skin scalding in the rats and exert the anti-inflammatory and bacteriostatic effects by regulating the levels of serum IL-10，IL-1，and TNF-.KEYWORDS Carex meyeriana Kunth；Skin scalding；Infection；Staphylococcus aureus；Inflammatory factor；Bacteriostasis金 黄 色 葡 萄 球 菌（Staphylococcus aureus，S.aureus）是一种重要的病原菌，可引起皮肤蜂窝组织炎、关节炎、骨髓炎和心内膜炎等感染性疾病，重度感染者可因败血症和脓毒血症等导致死亡1-2。研究3表明：S.aureus是引起社区获得性感染和院内感染的常见耐药病原菌。自 1961 年英国 首 次 发 现 耐 甲 氧 西 林 金 黄 色 葡 萄 球 菌（methicilin-resistant Staphalococcus aureus，MRSA）以来，MRSA 已在全世界范围内广泛传播4。调查数据5-6显示：MRSA 感染常伴随着死亡 率、发 病 率 和 住 院 时 间 增 加，尽 管 近 年 来MRSA 的发病率在一些地区有所下降，但 MRSA发病率和死亡率仍然居高不下，对临床治疗构成了巨大的威胁。因此，探索 S.aureus 的致病机制、开发疫苗和新的抗菌药物逐渐成为研究的热点7-8。乌拉草，又称靰鞡草，是莎草科薹草属植物的全草9。胡敏等10研究发现：乌拉草具有多数植物不具备的终身抵御细菌和真菌侵蚀及寄生的能力。利用乌拉草编织制备成草鞋或鞋垫，可用于吸湿、保暖或防治脚部感染等11-12，已有几百年的历史。有关乌拉草的抗菌和抗真菌研究仅限于其有效成分的体外抑菌试验，未对其在体抗感染作用及其抑菌机制进行深入研究。迄今为止，国内外有关乌拉草的化学成分、质量控制指标和药理药效研究报道较少。本研究通过牛津杯法抑菌试验和大鼠度烫伤模型等方法，验证乌拉草有效成分体外和在体抑菌作用，同时对其作用机制进行了初步探讨，为乌拉草抗感染机制的研究奠定基础，为新型抗感染中药前瞻性研究开拓新视角。1 材料与方法 1.1菌株菌株、实验动物实验动物、主要试剂和仪器主要试剂和仪器S.aureus（ATCC6538）、大肠埃希菌（Escherichia coli，E.coli，ATCC25922）和 白 色 念 珠 菌（Monilia albicans，M.albican，ATCC10231），由 本 室 冻存。24只清洁级 SD 大鼠购自长春市亿斯实验动物技 术 有 限 公 司，动 物 生 产 许 可 证 号：SCXK（吉）2020-0002，所有动物实验操作符合动物实验伦理（SN：2022-LW001）。乌拉草由吉林吾本草乌拉草制品有限公司馈赠，产地为长白山。芦丁（批号：20200718）购自成都普菲德科技有限公司，LB 肉汤培养基等细菌培养基购自杭州滨河微生物试剂有限公司，抗生素药敏纸片购自中国药品生物制品鉴定所，白细胞介素 10（interleukin-10，IL-10）、白 细 胞 介 素 1（interleukin-1，IL-1）和 肿 瘤 坏 死 因 子 （tumor necrosis factor-，TNF-）酶 联 免 疫 吸 附 试 验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒购自武汉基因美科技有限公司，青霉素钠（penicillin sodium，NaBP）（1 666 U mg1）购自山东鲁抗医药股份有限公司。I-250 恒温培养箱（美国 Thermo Fisher 公司），1525EF 半制备高效液相色谱仪（美国沃特 世 Waters 公 司），LC20AT 液 相 色 谱 仪 和UV1800 紫 外 分 光 光 度 计（日 本 岛 津 公 司），MS104TS/02 电子天平（瑞士梅特勒-托利多国际贸易有限公司），KQ2500D 超声波清洗仪（昆山超声仪器有限公司），SHZ-D循环水式真空泵（上海力辰邦西仪器科技有限公司），冷冻离心机（美国赛默飞世尔科技公司），移液器（德国艾本德股份有限公司）。1.2乌拉草提取物的制备乌拉草提取物的制备取乌拉草粉末，用70%乙醇溶液加热回流提取 3 次，过滤，合并滤液，减压浓缩，冷冻干燥，获得 70%乙醇乌拉草CM-70提取物。1.3乌拉草乌拉草 CM-70提取物总黄酮含量的测定提取物总黄酮含量的测定对照品溶液的制备：精密称取芦丁对照品 10 mg 置10 mL 容量瓶中，加入甲醇溶解、定容，得对照品储备液。分别量取对照品储备液适量，加甲醇稀释至 浓 度 分 别 为 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 和0.6 g L1的对照品溶液。供试品溶液的制备：取乌拉草 CM-70 提取物粉末 0.5 g 置 50 mL 的三角瓶中，精密加入 70%乙醇溶液 30 mL，称定质量，超声（250 W，40 Hz）提取 30 min，冷却至室温，再次称定质量，用 70%乙醇补足减失的质量，过滤取续滤液，即得供试品溶液。总黄酮含量的测定：分别精密量取各对照品溶 液 和 供 试 品 溶 液379第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）1 mL 置 10 mL 量瓶中，加入 5%的亚硝酸钠 溶 液0.6 mL 混 匀，放置 6 min；加入 10%硝酸铝 溶 液0.6 mL 混 匀，放置 6 min；加入 4%氢氧化 钠 溶液 4 mL 混 匀，放置 15 min；最终用 70%的乙醇溶液定容至刻度、混匀。按照紫外分光光度法，在510 nm 波长处分别测定吸光度（A）值。以对照品溶液绘制浓度（X）-A 值（Y）标准曲线。将供试品溶液 A 值代入标准曲线，计算供试品溶液总黄酮的含量。1.4 菌 悬 液 的 制 备菌 悬 液 的 制 备 将 S.aureus、E.coli 和M.albican 活化后，挑取单个菌落，接种到 5 mL MH 培养液中，35、150 r min1振荡培养 24 h，取适 量 菌 液 加 至 肉 汤 培 养 基 中，配制成约 1108 CFU mL1的菌悬液备用。1.5抑菌活性的测定抑菌活性的测定MH 琼脂培养基分别涂布接种 200 L S.aureus、E.coli 和 M.albican（1108 CFU mL1），随后在培养基表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙。在杯中加 入 200 L 不 同 稀 释 浓 度（0.312 5、0.625 0、1.250 0、2.500 0、5.000 0 和 10.000 0 g L1）供试品溶液，35 培养 16 h。用游标卡尺量取抑菌圈直径（diameters of bacterial inhibition zone，DIZ）。1.6 最 低 抑 菌 浓 度最 低 抑 菌 浓 度（minimum inhibitory concentration，MIC）的测定的测定取 1 mL 无菌 MH 肉汤培养基加至 17 号试管中，取 1 mL 20 g L1供试品溶液加至 1号试管，按照体积比 11倍比稀释至 6号试管，混匀后，取 1 mL 弃去。7号试管为不含供试品溶液的肉汤培养基对照管。各设 3个平行管。将制备好的菌悬液（1108 CFU mL1）稀释成浓度为 1106 CFU mL1，每支试管内分别加入稀释后的菌悬液 1 mL（1106 CFU mL1），置35 温箱中培养 20 h，观察是否有细菌生长，以肉眼观察无细菌生长的试管所含的最低供试品浓度为MIC。1.7大鼠大鼠度烫伤度烫伤 S.aureus 感染大鼠模型的构感染大鼠模型的构建建、分组和用药方法分组和用药方法清洁级 SD 大鼠 24 只，体质量 190210 g，实验前 1 d，所有大鼠采用 6%硫化钠进行背部脱毛，面积约 2.5 cm2。烫伤感染前，采用戊巴比妥钠进行腹腔注射麻醉（40 mg kg1），将脱毛部位皮肤消毒后，于自制烫伤仪（底部开口50 mL 离心管）内注入 100 沸水，贴于大鼠背部脱毛部位并固定 10 s，以干纱布拭去多余水分，裸眼观其皮肤发红，局部水肿，出现散在水疱，即可证明大鼠度烫伤模型造模成功。将模型大鼠随机分为生理盐水对照组、NaBP 对 照 组 和 乌 拉 草CM-70 提取物治疗组，每组 8 只。3 组大鼠创面皮内 多 点 注 射 接 种 20 L（1.0108 CFU mL 1）S.aureus。次日给药治疗，生理盐水对照组大鼠烫伤创面涂抹无菌生理盐水（0.5 g 无菌脱脂棉吸附生理盐水 0.5 mL cm2），NaBP对照组大鼠烫伤创面涂抹 NaBP（0.5 g 无菌脱脂棉吸附 NaBP，按体质量 5 000 U kg1），乌拉草 CM-70 提取物治疗组大鼠烫伤创面涂抹 10 g L1乌拉草供试品稀释液（0.5 g 无菌脱脂棉吸附，0.5 mL cm2）。3 组大鼠烫伤创面均以无菌纱布包扎，每 24 h换药 1次，连续 14 d。观察各组大鼠一般情况、皮肤创面感染和创面愈合情况。1.8各组大鼠创面痂下细菌定量各组大鼠创面痂下细菌定量各组大鼠分别于接种细菌后第 1、2、3、4、5、6 和 7 天取创面中心少许组织，称定质量后放 入 匀 浆 仪 中，加入1 mL 生理盐水，电动搅拌器充分匀浆，分别稀释至 1104、1103、1102和 1101，最后3个浓度各取 100 L稀释液接种于琼脂平板13，每个稀释度做 3个重复，37 温箱孵育 24 h后进行菌落 计 数。细 菌 数（CFU g1）=平 均 菌 落 数 1010n/组织质量（g）。1.9ELISA 法检测各组大鼠法检测各组大鼠血清中血清中炎性因子水炎性因子水平平各组大鼠分别于烫 伤 前 及 烫 伤 后 第 1、3和7 天，尾部取血，室温放置 20 min，3 000 r min1离心 15 min，收集血清，保存于20 备用。采用ELISA 试剂盒测定各组大 鼠 血 清 中 炎 性 因 子IL-1、IL-10和 TNF-水平，实验方法严格按照试剂盒说明书进行。1.10统计学分析统计学分析采用 SPSS 26.0统计软件进行统计学分析。不同稀释浓度 供 试 品 溶 液 针 对S.aureus、E.coli、M.albican 的 DIZ，各组大鼠不同时间创面痂下细菌数，各组大鼠血清中 IL-10、IL-1 和 TNF-水平均服从正态分布，以 xs 表示，多组间样本均数比较采用单因素方差分析，组间均数两两比较采用 LSD-t检验，不同时间点多组间样本均数比较采用重复测量方差分析，方差不齐采用 Tamhane s T2 检验。以 P中剂量低剂量。2.3乌拉草有效成分的乌拉草有效成分的 MIC试管稀释法测定乌拉草有效成分的 MIC，肉眼观察无细菌生长的试管所含的最低供试品浓度为 2.5 g L1，即为乌拉草有效成分对 S.aureus的 MIC值。2.4各组大鼠烫伤创面感染和愈合情况各组大鼠烫伤创面感染和愈合情况分别记录大鼠度烫伤 S.aureus感染模型给药后第3、7和14 天烫伤伤口情况。与生理盐水对照组比较，感染后第 3天，乌拉草 CM-70提取物治疗组大鼠伤口浆液渗出较少，感染后第 7 天，伤口浆液渗出减少，红肿减轻，伤口面积缩小，感染后第 14 天，伤口创面已完全干燥，无浆液渗出，表面形成痂皮，伤口愈合良好，与青霉素 G 钠对照组相近。见图 1。2.5各组大鼠烫伤创面痂下细菌数各组大鼠烫伤创面痂下细菌数各组大鼠烫伤创面痂下细菌数组间两两比较差异均有统计学意义（P0.01）。与生理盐水对照组比较，同一时间乌拉草 CM-70 提取物治疗组大鼠烫伤创面痂下细菌数明显减少（P0.01）。见表 2。2.6 各 组 大 鼠 血 清 中各 组 大 鼠 血 清 中 IL-10、IL-1 和和 TNF-水水平平不同时间点各组大鼠血清中炎性因子 IL-10 水平比较差异有统计学意义（P0.05）。与生理盐水对照组比较，NaBP 对照组和乌拉草 CM-70提取物治疗组大鼠 IL-10 水平在烫伤后第 1 和 3 天明显升高（P0.01），在第 7天明显降低；在烫伤后第14 天，与生理盐水对照组比较，乌拉草 CM-70 提取物治疗组大鼠 IL-10 水平明显降低（P0.05）。不同时间点各组大鼠血清中炎性因子 IL-1 水平比较差异有统计学意义（P0.05）。与生理盐水对照组比较，在烫伤后第 1、3、7和 14天，乌拉草 CM-70 提取物治疗组大鼠 IL-1 水平显著降低（P0.05）；与 NaBP 对照组比较，在烫伤后第 3、7 和 14 天，乌拉草 CM-70 提取物治疗组大鼠 IL-1水平明显升高（P0.05）。不同时间点各组大鼠血清中炎性因子 TNF-水平比较差异有统计学意义（P0.01）。与生理盐水对照组比较，在烫伤后第 1、3、7和 14天，乌拉草 CM-70 提取物治疗组大鼠 TNF-水平明显降低（P0.05）；与 NaBP 对 照 组 比 较，乌 拉 草CM-70 提取 物 治 疗 组 大 鼠 TNF-水 平 明 显 升 高（P0.05）。见表 3。3 讨 论 S.aureus是引起人类化脓性感染最常见的病原菌，随着 MRSA的出现，S.aureus的致病性已成为卫生机构和社区环境中的一个重大问题14。研究15表明：预计到 2050年，耐药细菌导致的死亡人数将超过癌症。因此，研发抑菌机制独特、不易产生耐药性的抗菌药势在必行。余克娇16研究表明：通过对乌拉草提取液进行浓缩提纯，确定纯化后的黄酮类抗菌物质为木犀草素。苏婷9研究表明：通过对乌拉草组分分析，黄酮类化合物有 20 种，其中包括木犀草素、棕矢车菊素和汉黄芩苷等抗炎抑菌成分。本研究结果表明：乌拉草有效成分在体外对 S.aureus具有明显的抗菌活性；乌拉草 CM-70 提取物对度烫伤大鼠感染 S.aureus具有一定的抑制作用，同时可有效促进创口愈合，具有抗感染作用。表表 1不同稀释浓度乌拉草不同稀释浓度乌拉草 CM-70 提取物对各种细菌的抑提取物对各种细菌的抑菌效果菌效果TabTab.1 1 Becteriostatic effects of Carex meyeriana CM-70 extract with different dilution concentrations on various bacteria(n=3，xs，d/mm）Carex meyeriana CM-70(g L1)0.312 50.625 01.250 02.500 05.000 010.000 0DIZS.aureus4.760.355.460.15*5.930.11*11.890.2012.750.37#15.070.28E.coliM.albican*P0.05 compared with 0.312 5 g L1 Carex meyeriana CM-70 group；P0.05 compared with 1.250 0 gL 1 Carex meyeriana CM-70 group；#P0.05 compared with 2.500 0 g L1 Carex meyeriana CM-70 group；P0.05 compared with 5.000 0 g L1 Carex meyeriana CM-70 group；“”：No bacteriostatic circle.381第 49 卷 第 2 期 2023 年 3 月吉林大学学报（医学版）研究17-19显示：烫伤后创面由于机体应激及细菌感染等因素，引发全身炎症反应，刺激炎症因子的分泌，其中 TNF-、IL-1 和 IL-10 等重要炎性因子水平升高，从而引发并加重全身炎症反应。IL-10 是一种强大的抗炎因子，可 抑 制 促 炎 因 子IL-1 和 TNF-的作用产物前列腺素的分泌，还可A-C：3 d；D-F：7 d；G-I：14 d；A，D，G：Normal saline control group；B，E，H：NaBP control group；C，F，I：Carex meyeriana Kunth extract CM-70 treatment group.图图 1不同时间点各组大鼠皮肤不同时间点各组大鼠皮肤度烫伤后度烫伤后 S.aureus感染模型大鼠体内抑菌实验结果感染模型大鼠体内抑菌实验结果Fig.1Results of in vivo becteriostatic experiment of S.aureus infection model rats in various groups after degree skin scalding at different time points表表 2不同治疗时间点各组大鼠烫伤创面痂下细菌数不同治疗时间点各组大鼠烫伤创面痂下细菌数Tab.2 Number of bacteria under scalding wound scab of rats in various groups at different time points （n=8，xs，108 CFU g1）GroupNormal control NaBP control Carex meyeriana Kunth extract CM-70 treatment Number of bacteria(t/d)15.890.262.150.21*3.980.21*28.850.361.980.29*3.410.18*311.330.241.930.02*3.280.15*48.630.211.870.10*2.940.26*57.580.281.820.08*2.810.29*66.850.221.780.11*2.660.28*75.860.311.560.10*2.520.10*P0.01 compared with normal control group；P0.01 compared with NaBP control group.382孙宏宇，等.乌拉草提取物对大鼠皮肤烫伤后金黄色葡萄球菌感染的抑菌作用抑制损伤引起的继发炎性反应和细胞因子表达，在烫伤后抗感染和 抑制 炎性 反应 方面 发挥 关键 作用20-21。TNF-是创伤、感染后机体最早出现的促炎因子之一，可刺激单核巨噬细胞合成和分泌 IL-1及 IL-8 等 炎 症 介 质，并 能 协 同 扩 大 其 生 物 学效应22-23。综上所述，在大鼠烫伤初期，乌拉草 CM-70提取物可刺激免疫细胞产生 IL-10，且可将 IL-10水平峰值提前，调控促炎因子 IL-1和 TNF-水平下降，表明乌拉草可通过调节炎性因子的释放，进而发挥抗炎作用，有效减轻炎症反应，发挥抑菌抗炎作用，促进创面愈合。本研究为进一步乌拉草抗感染机制的研究奠定了基础，为开发乌拉草的现代药用价值提供了理论依据和新思路。参考文献1 许素琪，李高峰.耐药金黄色葡萄球菌感染抗菌药物替代疗法的研究进展 J.中 国 感 染 控 制 杂 志，2021，20（4）：381-386.2 KWIECINSKI J M，HORSWILL A 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