产品初始污染菌测试规程.doc

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版本： A/0
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产品初始污染菌测试规程
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1 目的
对产品初始污染菌检测的方法做出指导，正确操作以保证实验结果的可靠性和准确性。
2 范围
本规程适用于检测产品的成品、半成品、部件、原材料及其内包装袋上的菌落总数。
3 职责
3.1实验室检验员负责对菌落总数进行测试并予以记录。
3.2品管部主管负责对测试结果进行审核。
4 内容
4.1操作条件
4.1.1 无菌检测在洁净度为100级单向流空气区域内进行，严格遵守无菌操作，避免污染。
4.1.2 超净台及工作台面，必须进行洁净度验证。
4.2操作步骤
4.2.1制作营养琼脂培养基（按说明书方法保存配制），培养基需按要求培养16-18H后，检查无菌生长方可使用。
4.2.2 无菌室洁净度验证
取3只培养皿在超净工作台平均位置打开上盖，暴露30min后盖好置30～35℃培养48h后检查，3只培养皿上生长的菌落数平均应不超过1个
4.2.3 产品采集与样品处理（制备供试液）
4.2.3.1 用无菌手续称取10g可以破坏性类供试品,放入100ml灭菌生理盐水中充分振荡，保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。作为1：10供试液。
4.2.3.2 对供试品不能采用破坏性取样可用浸有无菌生理盐水拭子涂抹采样，被采表面积100cm2.加入灭菌生理盐水100ml。保温于45℃水浴中5～10min，不时振摇。作为1：10的供试液。
4.2.3.3 采样数量：各类产品每批随机抽取10件样品。
4.2.3.4 供试液10倍递减稀释
4.2.3.5 待上述供试液自然沉降后取上清液1ml，加入9ml生理盐水，制备1：100的供试液。
制备过程中尽量避免碎片等杂物的混入。
4.2.4 接种、检验
4.2.4.1 取上述供试液上清液作初始污染菌数检测，取4个培养皿，每个稀释级各吸取1ml至每个灭菌平皿，每个稀释级注2个平皿。
4.2.4.2 经灭菌完毕的营养琼脂培养基冷却至45-50 ℃时，倾注上述各个平皿15ml，另倾注一个不加样品灭菌空平皿作空白对照。以顺时针或逆时针方向快速转动平皿，使供试液与培养基充分混匀。
4.2.5 培养
将已经凝固的平板倒置于37℃培养箱中，一般培养48±2h。计算平板上的菌落数。
4.2.6 结果与判定
4.2.6.1 计数方法：将平板置菌落计数器或从平板的背面直接以肉眼用标记笔点计，以投射光衬以暗色背景，仔细观察，计数。必要时可以借助于放大镜、菌落计数器。
4.2.6.2 计数
菌落层片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按下式计算结果

平均菌落数×稀释倍数菌数
菌数/每件次（或g） =——————————————————
件次或重量（g）
4.2.6.3 菌落计数基本规则
4.2.6.3.1 选取平均菌落数在30～300之间的稀释级作为报告菌落数测定范围。
a)如只有1个稀释级平均菌落数在30～300之间，则将稀释级的菌落数乘以稀
释倍数报告。
b) 如有两个相邻稀释级的平均菌落数在30～300之间，则先计算两稀释级菌落数的比值。
高稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数
比值=————————————————————
低稀释级的平均平板菌落数×稀释倍数
当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。当比值>2时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。
c)如各稀释级平均菌落数均在300以上，则按最高平均菌落数乘以稀释倍数报告；如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低平均菌落数乘以稀释倍数报告。
d)如各稀释级平均菌落数均不在30～300之间，则以最
接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。
e)如各稀释级平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平
均菌落数小于1时，应报告菌数为<10个/g或ml。
f) 如有3个稀释级平均菌落数均在30～300之间，则以后2级计算级间比值报告。
g) 菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告。大于100时，采用二位有效数字，在两位有效数值后面，应以四舍五入法计算。在报告菌落数为“不可计”时，应表明样品的稀释度。
4.2.6.4 如果样品菌落总数超过标准的规定，按（4.2.4复检方法）进行复检和撰写结果报告。
4.2.6.5 复检方法
将留存的复检样品依前法稀释复测两次，两次结果平均值都达到标准的规定，则判定检验样品合格；其中有任何一次结果平均值超过标准规定，则判定被检样品不合格。
5.相关文件
GB15979—2002  GB15980-1995一次性使用医疗用品卫生标准
6. 相关记录
6.1《产品初始污染菌原始检验记录》......
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