超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析三聚氰胺和三聚氰酸的检测方法.docx

超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析三聚氰胺及三聚氰酸的检测方法米建秋，薄涛，冉小蓉，李建中三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革、电气、医药等行业，近年来三聚氰胺被非法添加到饲料、宠物食品及婴幼儿奶粉中，给广大消费者造成了严重的危害。三重串联四极杆质谱是复杂基质中痕量组分定量分析的重要手段，通过多重反应监控模式（MRM）能够提供高选择性和高灵敏度的检测。建立在亚二微米粒径填料基础上的超高效快速液相色谱（RRLC）已得到广泛的应用，和QQQ联用能够提供高通量和高灵敏度的分离分析。本文运用UHPLC-QQQ对食品中的三聚氰胺和三聚氰酸（三聚氰胺合成副产物）进行定量分析，通过对重复性、线形关系和回收率等方法学参数进行考察，所建立的方法能在6.0分钟内对2种目标化合物完成快速、高灵敏度的检测分析。本方法采用Agilent 6460 QQQ系统，利用Jet Stream鞘流气技术大大提高了去溶剂效果，同时减少了喷雾造成的离子扩散损失，显著的提高了离子化效率，从而大大提高了灵敏度。本方法完全满足了国内外对食品中被三聚氰胺和三聚氰酸污染水平的监测要求。1 实验部分1.1 仪器与试剂美国安捷伦公司6460 QQQ质谱仪；美国安捷伦公司1260 UHPLC。1.2 液相和质谱条件液相色谱柱为安捷伦Zobax Rx-SIL（2.1 x 150mm, 5.0 m）；流动相A为水（含10mM乙酸铵），B为乙腈，梯度（B%/min）：95/0，95/0.5，90/1.0，90/2.5，50/3.0，50/5.0，95/5.1；柱温40oC；进样量5L，流速为0.4 mL/min。QQQ质谱参数（ESI+/ESI-快速正负切换模式）：干燥气温度（Gas Temp）325 oC，干燥气流量（Gas Flow）5mL/min，雾化器压力（Nebulizer）50psi，鞘流气温度（Sheath Gas Temp）400 oC，鞘流气流量（Sheath Gas Flow）12mL/min，毛细管电压（Capillary）3500（）V，MRM条件：三聚氰胺12785（CE=14eV），12768（CE=31eV）；三聚氰酸12885（CE=6eV），12842（CE=14eV），安捷伦MassHunter软件用于定性（Qualitative）和定量（Quantitative）分析。2 结果与讨论图1为三聚氰胺和三聚氰酸的MRM谱图。本文对MS和LC条件进行优化，对线形关系（R2）、检测限（LOQ ）、峰面积重复性（RSD）等方法学进行了考察（见表1）。所建立的RRLC-QQQ能够对三聚氰胺和三聚氰酸进行高灵敏度和高通量的定量分析。图1. 三聚氰胺和三聚氰酸的MRM谱图 图2. 三聚氰酸标准曲线图 图3. 三聚氰胺标准曲线图 Linear range: 0.1 1000 ng/mL Linear range: 0.01 100 ng/mL 表1. 线性范围，相关系数，重复性及LOQCompoundLinear0.1ng/mL-1000ng/mLCorrelationR2ReproducibilityRSD(%)n=10LOQ（S/N=10）ng/mL三聚氰酸Y=108x+6030.999874.120.19CompoundLinear0.01ng/mL-100ng/mLCorrelationR2ReproducibilityRSD(%)n=10LOQ（S/N=10）pg/mL三聚氰胺Y=140657x+790930.999633.840.642