GBZ_T 300.160—2017 工作场所空气有毒物质测定第 160 部分：洗衣粉酶.pdf

ICS 13.100 C 52 中华人民共和国国家职业卫生标准 GBZ/T 300.1602017 代替 GBZ/T 160.812004 工作场所空气有毒物质测定 第 160 部分：洗衣粉酶 Determination of toxic substances in workplace air Part 160:Enzymes in washing powder 2017-11-09 发布 2018-05-01 实施 GBZ/T 300.1602017 I 前 言 本部分为GBZ/T 300的第160部分。本部分按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本部分代替GBZ/T 160.812004工作场所空气有毒物质测定 生物类化合物。本部分与GBZ/T 160.812004相比，主要修改如下：修改了标准名称；增加了待测物的基本信息；改进了空气采样和标准系列浓度的表达；补充了样品空白要求和方法性能指标。本部分中的主要起草单位和主要起草人：洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法 主要起草单位：复旦大学医学院公共卫生学院。主要起草人：梁友信。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GBZ/T 160.812004。GBZ/T 300.1602017 1 工作场所空气有毒物质测定 第 160 部分：洗衣粉酶 1 范围 GBZ/T 300的本部分规定了工作场所空气中洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法。本部分适用于工作场所空气中气溶胶态洗衣粉酶浓度的检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GBZ 159 工作场所空气中有害物质监测的采样规范 GBZ/T 210.4 职业卫生标准制定指南 第4部分：工作场所空气中化学物质的测定方法 3 洗衣粉酶的溶剂洗脱-抗体结合-比色法 3.1 原理 空气中气溶胶态含酶洗衣粉用超细玻璃纤维滤纸采集，洗脱后，与包被在酶标板上的特异性抗体（Ab1）结合，然后加入特异性抗体（Ab2），最后与一连有标记物的抗体（Ab3）结合，再与显色剂反应生成有色化合物，用酶标仪测量吸光度，测定酶的浓度。3.2 仪器 3.2.1 超细玻璃纤维滤纸。3.2.2 大采样夹，滤料直径为 37mm 或 40mm。3.2.3 小采样夹，滤料直径为 25mm。3.2.4 空气采样器，流量 0L/min2L/min 和 0L/min10L/min。3.2.5 烧杯，50mL。3.2.6 酶标板和酶标板盖。3.2.7 多孔道微量加样器。3.2.8 可调微量加样器。3.2.9 恒温箱。3.2.10 离心管，25mL。3.2.11 具塞试管，10mL。3.2.12 酶标仪。3.3 试剂 3.3.1 实验用水为去离子水，试剂为分析纯，于 4冰箱保存。GBZ/T 300.1602017 2 3.3.2 抗体包被缓冲液，pH9.60.2：0.151g 碳酸钠和 0.293g 碳酸氢钠溶于 100mL 水中，可保存 2个月。3.3.3 洗板液：29.22g 氯化钠、0.186gTris 和 0.1g 牛血清白蛋白(BSA)溶于 100mL 水中，用 6mol/L盐酸溶液调 pH 至 8.0，加入 0.05mL 吐温 20，混匀，可保存 7d。3.3.4 枸橼酸-磷酸缓冲液，pH5.00.2：0.730g 枸橼酸和 2.387g 磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O)溶于100mL 水中，可保存 1 个月。3.3.5 BSA 封闭液：2.0g BSA 溶于 100mL 洗板液中。3.3.6 洗脱液：2.922g 氯化钠、0.093g Tris、0.496g 硫代硫酸钠(Na2S2O35H2O)和 0.0147g 氯化钙(CaCl22H2O)溶于约 80mL 水中，加入 0.1g BSA，溶解后，用 6mol/L 盐酸溶液调 pH 至 8.0，转移到 100mL 容量瓶中，定容后加入 0.10mL 吐温 20，混匀，可保存 7d。3.3.7 邻苯二胺（OPD）溶液，pH5.0：8.0mg OPD 置于 50mL 棕色瓶中，加入 15mL 枸橼酸-磷酸缓冲液，溶解后，加入 5L 过氧化氢(30)，混匀。临用前配制。若溶液变黄，应重新配制。3.3.8 兔抗体包被溶液：用 10mL 抗体包被缓冲液稀释 10L 兔抗血清，混匀。3.3.9 豚鼠抗体：用 10mL 洗板液稀释 10L 豚鼠抗体，混匀。3.3.10 标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体：用 10mL 洗板液稀释 10L 标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体，混匀。3.3.11 硫酸溶液，1mol/L。3.3.12 标准酶，用国家认可的洗衣粉酶。3.4 样品的采集、运输和保存 3.4.1 现场采样按照 GBZ 159 执行。3.4.2 短时间采样：在采样点，用装好超细玻璃纤维滤纸的大采样夹，以 5.0L/min 流量采集 15min空气样品。3.4.3 长时间采样：在采样点，用装好超细玻璃纤维滤纸的小采样夹，以 1.0L/min 流量采集 2h8h空气样品。3.4.4 采样后，打开采样夹，取出滤纸，接尘面朝里对折两次，放入清洁的塑料袋或纸袋中，置清洁容器内运输和保存。样品宜尽快测定。3.4.5 样品空白：在采样点，打开装好超细玻璃纤维滤纸的采样夹，立即取出滤纸，放入清洁的塑料袋或纸袋中，然后同样品一起运输、保存和测定。每批次样品不少于 2 个样品空白。3.5 分析步骤 3.5.1 样品处理：将超细玻璃纤维滤纸放入烧杯内，加 25.0mL 洗脱液，洗脱 20min，不时振摇。样品溶液用滤纸过滤或离心后供测定。3.5.2 标准曲线的制备：在 8 支容量瓶中，用标准酶配制成 0.0ng/mL6.0ng/mL 标准系列。于酶标板的每个孔中加 100L 兔抗体包被溶液，置 4冰箱内放置过夜。加样时，加样头不可接触酶标板底部，不容许冰冻。第二天，从冰箱内取出酶标板，翻转，弃去兔抗体包被溶液，在数层纸上拍打，甩尽孔中的兔抗体包被溶液。每个孔用洗板液洗涤 3 次，每次约 250L。然后加 200L BSA 封闭液，加样头不能接触酶标板。盖上酶标板盖，放置 1h 以上。甩尽孔中液体。若不立即使用，可用酶标板膜封好，可储存 2 个月。向每个孔中加入 50L 标准酶溶液，全部加平行样。加入 50L 豚鼠抗体。将酶标板放入 37恒温箱内，反应 90min。取出，每个孔用洗板液洗涤 3 次，每次约 250L。各加入 100L 标有过氧化物酶的兔抗豚鼠抗体，再置 37恒温箱内，反应 90min。取出，每个孔用洗板液洗涤 3 次，每次约 250L。用枸橼酸-磷酸缓冲液冲洗 3 次。以保持同一时间间隔，向每个孔加入 100L OPD 溶液；放入 37恒温箱内，反应至有合适的黄色生成；向每个孔以保持同一时间间隔，加入 150L 硫酸溶液，以终止显色反GBZ/T 300.1602017 3 应。擦净酶标板底部，用酶标仪测定每个孔的吸光度（双波长法的波长为 492nm 和 620nm）。以测得的吸光度值对相应的酶浓度（ng/mL）绘制标准曲线或计算回归方程。3.5.3 样品测定：用测定标准系列的操作条件测定样品溶液和样品空白溶液，测得的吸光度值由标准曲线或回归方程得样品溶液中酶浓度(ng/mL)。若样品溶液中酶的浓度超过测定范围，用洗脱液稀释后测定，计算时乘以稀释倍数。3.6 计算 3.6.1 按 GBZ 159 的方法和要求将采样体积换算成标准采样体积。3.6.2 按式（1）计算空气中酶的浓度：0025VCC.(1)式中：C 空气中酶的浓度，单位为微克每立方米（g/m3）；25样品溶液的体积，单位为毫升（mL)；C0 测得的样品溶液中酶的浓度（减去样品空白），单位为纳克每毫升（ng/mL）；V0标准采样体积，单位为升（L）。3.6.3 空气中的时间加权平均接触浓度（CTWA）按 GBZ 159 规定计算。3.7 说明 3.7.1 本法按照 GBZ/T 210.4 的方法和要求进行研制。本法的定量下限为 0.05ng/mL，定量测定范围为 0.05 ng/mL6ng/mL；以采集 75L 空气样品计，最低定量浓度为 0.017 g/m3；相对标准偏差为 28，采样效率为 95以上，洗脱回收率为 90以上。3.7.2 空气中共存物不干扰测定。_