特发性膜性肾病转化为终末期...中药的生物信息学分析与验证_贾蒙.pdf

年 月第 卷第 期.，.，收稿日期 基金项目 国家重点研发计划项目（）通信作者王怡，主任医师，博士生导师，：作者简介 贾蒙，博士研究生，主要从事中医肾病临床研究，：特发性膜性肾病转化为终末期肾病的关键基因及防治中药的生物信息学分析与验证贾蒙，韩世盛，毛逸鸣，王怡（上海中医药大学 附属岳阳中西医结合医院，上海）摘要 该研究运用生物信息学分析筛选参与特发性膜性肾病转化为终末期肾病的关键基因，并预测具有防治作用的针对性中草药及有效成分。通过基因表达综合数据库中下载特发性膜性肾病微阵列数据 和终末期肾病微阵列数据，使用 软件筛选共同差异表达基因，得到 个特发性膜性肾病转化为终末期肾病的同向差异表达基因；利用 软件分别验证同向差异表达基因在特发性膜性肾病微阵列数据 和慢性肾脏病微阵列数据 中的表达，最终得到参与特发性膜性肾病转化为终末期肾病的 个关键基因（、），进行基因本体（）功能富集分析，编码蛋白的功能共有 个，主要涉及 （调节 剪接）、（细胞质应激颗粒）、（）聚（）结合等。数据库筛选得到纳入 年版中国药典中包括人参、泽兰、栀子在内的具有防治特发性膜性肾病转化为终末期肾病的中药共 味。中药系统药理学数据库与分析平台（）挖掘出有效成分槲皮素能与关键基因 编码蛋白分子对接，为相关中药新药开发提供靶标及研究思路。关键词 转化；关键基因；防治中药；生物信息学分析；人参；泽兰；栀子；槲皮素 ，（，），（，）（），（），年 月第 卷第 期.，.，（）（），；：.特 发 性 膜 性 肾 病（，）是非糖尿病成人肾病综合征最常见的病理类型，由自身免疫反应引起的弥漫性肾小球基底膜增厚伴上皮细胞下免疫复合物沉积、足细胞形态改变，导致蛋白尿进展、肾功能减退，发展为慢性肾脏病（，），最终导致终末期肾病（，）。目前我国膜性肾病的发病率逐年上升，约有 患者属于特发性。对于有进展性肾损伤风险（例如肾小球滤过率降低）或严重危及生命的肾病综合征 患者，建议针对不同风险采用糖皮质激素联合环磷酰胺、钙调神经磷酸酶抑制剂以及利妥昔单抗，同时也存在治疗成本高昂、毒性副作用、高复发率的问题。中草药在临床被广泛用于治疗 并取得较好疗效，多项前瞻性随机对照多中心临床试验证实了中医方案治疗 的有效性与安全性。本研究拟基于生物信息学分析获取 样本与 样本的转录组数据，提取同向差异表达基因（，），分析其中的关键基因，探究 转化为 的关键靶点，筛选具有防治作用的中草药，以期为后续临床应用及实验研究提供支持。资料与方法.数据库、软件、研究流程本研究所用数据库 软件、网址、功能注释见表，技术路线见图。表 数据库 软件、网址与功能注释 ，数据库 软件网址功能注释：下载实验集、验证集数据 在线平台：筛选差异基因.：统计分析、富集分析及可视化：注释编码蛋白功能 .：统计分析及结果可视化：筛选中药及可视化：筛选中药潜在活性成分和靶蛋白：靶蛋白的基因转化：获取目标蛋白：分子对接：分子对接可视化：临床相关性研究及验证.下载微阵列数据筛选微阵列数据时，注意测试集疾病组患者样本量需大于验证集疾病组患者样本量。筛选条件物种种类为“”。查阅文献，在基因表达综合数据库（，）中 以“”或“”为检索词，优先选择疾病组患者样本量大的数据集，下载 微阵列数据 作为测试集，下载 微阵列数据 作为验证集。查阅文献，在 数据库中以“”或“”为检索词，优先选择疾病组患者样本量大的数据集，下载 微阵列数据 作为测试集。筛选验证集时，未找到合适 微阵列数据，因本研究重点关注膜性肾病转化为 终 末 期 肾 病 的 过 程，遂 以“”或“”为检索词，下载 微阵列数据 作为验证集。贾蒙等：特发性膜性肾病转化为终末期肾病的关键基因及防治中药的生物信息学分析与验证 特发性膜性肾病；慢性肾脏病；终末期肾病；差异表达基因（图、，表 同）。图 技术路线 .筛选差异基因使用软件 .的 程序包筛选 微阵 列 数 据 和 微 阵 列 数 据 的差异表达基因，筛选标准为“调整后（）.且（倍数变化）或（倍数变化）”。使用软件 .中 程序包展示差异基因表达热图。.同向交集基因使用软件 .筛选 块微阵列数据差异基因的交集，必须满足表达上调、下调的方向一致。使用软件 .中 程序包展示同向交集基因。.验证关键基因通过探针技术及 数据库获取同向交集基因在验证集 微阵列数据 和 微阵列数据 中疾病样本与正常样本中的表达量。采用软件 .进行统计学分析并可视化，对疾病样本与正常样本中的表达量进行非配对样本 检验，不符合方差齐性的采用 检验，.表示差异有统计学意义，结果以箱线图形式展示。最后将在 个验证集中差异均具有统计学意义的“同向交集基因”作为本研究的筛选结果，认为这些关键基因可能参与了 转化为 的过程。.功能富集分析使用软件 .的 程序包等对关键基因进行基因本体（）富集分析，包括生物过程（，）、细 胞 组 分（，）、分子功能（，）个部分，设定 .，限定物种为“”，并设置筛选前 条富集度最高通路进行柱状图绘制。同时对交集基因进行 通路分析，并进行气泡图绘制，最后用软件 .的 程序包作出通路信号图。.筛选中药将.项下验证后的关键基因作为预测靶标，在 数据库中按照.且药物收录于 年版中国药典为条件，筛选对各预测靶标具有生物学效应的中药，统计频数。.筛选中药的潜在活性成分与靶标蛋白以临床常用的中药为关键词在中药系统药理学数据库与分析平台（）收集有效中药的化学成分及药动学等参数。以生物利用度（）和类药性（）.作为阈值，筛选能被较好地吸收入血的化学成分作为潜在活性成分。基于 查询潜在活性成分的靶标蛋白，并借助 数据库将靶标蛋白名称转换为对应的基因名称。.分子对接验证采用 软件绘制有效中药干预 个关键基因的中药化学成分靶点网络。在 数据库中获取靶蛋白及配体结构，利用、软件与中药化学成分进行分子对接，以最低结合效能评价中药化学成分与靶蛋白的结合活性。.关键基因与 临床特征的相关性应用 在线平台探索关键基因对 患者肾小球滤过率（，单 位 .）、血 肌 酐（，单位 ）和尿蛋白与尿肌酐比值（，）的影响。采用 .软件进行关键基因与 患者 相关分析及可视化，.表示差异有统计学意义，.表示两者有相关性，越大表示相关性越好，正数代表正相关，负数代表负相关。年 月第 卷第 期.，.，结果.微阵列数据测试集 微阵列数据 选取包含 个 患者和 个健康人群的肾小球和肾小管间质转录的共同分子靶点共同构成，平台文件号。测试集 微阵列数据 包含年龄在 岁、临床稳定等待肾移植、未接受免疫抑制药物治疗的 个 患者和 个健康人群外周血的基因微阵列数据共同构成，平台文件号。验证集 微阵列数据 包含 个 患者和 个健康人群的肾脏组织，平台文件号。验证集 微阵列数据 包含 个 患者和 个健康人群的肾脏组织，平台文件号。.差异基因通过与正常样本对比分析，微阵列数据获得 差异基因 个（上调基因 个，下调基因 个），微阵列数据获得 差异基因 个（上调基因 个，下调基因 个），见图、。数据标准化后箱线图（不同颜色代表不同数据集，横坐标轴代表样本，纵坐标轴代表样本中基因表达值）；差异基因火山图（使用 和校正后 绘制火山图，点表示显著差异上调基因，点表示显著差异下调基因）；差异基因表达热图（不同颜色代表在不同组织中的表达趋势，由于差异基因个数较多，此处分别展示差异改变最大的 个上调基因和 个下调基因）（图 同）。图 差异基因表达综合分析 .同向交集基因按照.项下方法筛选后最终得到差异同向交集基因 个，见图，其变化情况、功能注释等见表。.转化为 的关键基因 验证集微阵列数据 统计分析结果显示，个同向交集基因在 患者与健康人群肾组织间的差异具有统计学意义，见图。验证集微阵列数据 统计分析结果显示，个同向交集基因中除了 外，其余 个同向交集基因的表达量在 患者与健康人群的肾组织间的差异具有统计学意义，见图。因此，结合测试集和验证集统计分析结果，最终筛选出、作为特发性膜性肾病向终末期肾病转化的关键基因。.关键基因编码蛋白的 富集分析 富集分析通过鉴定高通量基因组或转录组贾蒙等：特发性膜性肾病转化为终末期肾病的关键基因及防治中药的生物信息学分析与验证 图 差异基因表达综合分析 图 同向交集基因的韦恩图 数据的特征生物学属性来注释基因和基因产物。本研究最终获得 个参与 转化为 的关键基因（、），按照编码蛋白的功能共有 个，其中生物过程 个，主要涉及 （调 节 剪 接）、（对 温 度 刺 激 的 反 应）、（大分子甲基化）；细胞组成 个，主要涉及 （细胞质应激颗粒）、（组蛋白乙 酰 转 移 酶 复 合 物）、（蛋白质乙酰转移酶复合物）；分子功能 个，主要涉及（）聚（）结合、（组蛋白乙酰转移酶活性）、（聚合酶核心启动子序列特异性 结合）。富集分析结果见图。同时绘制 通路中的相关通路图，见图，分 别 是，、。.抑制 转化为 的中药筛选基于.项下筛选条件，最终得到与 个 转化为 的关键基因相关的中草药 个，中药预测见表。其中在 年版中国药典能检索到的中草药共 种，结合临床实用性汇总预测中药药效见表，中药气味归经见图。.中药药效靶点整理及治疗调控网络构建在 数据库中按 和.筛选得到人参有效成分 个、葛根有效成分 个、栀子有效成分 个、番泻叶有效成分 个、泽兰有效成分 个、乳香有效成分 个、南沙参有效成分 个、红芪有效成分 个、人参叶有效成分 个，合并后去除重复项共获得包含（山柰酚）、（豆甾醇）、（苏齐内酯）等在内的有效成分 个。个有效成分匹配 个关键基因后得到关联度最高的是，对应的有效成分 年 月第 卷第 期.，.，表 同向交集基因信息 基因数据集编码蛋白功能美国国家生物技术信息中心库（）注释（）测试集.验证集.测试集.验证集.该基因编码 解旋酶死盒家族的一个成员，由于其作为衔接分子的作用，参与多种细胞过程，促进与大量其他因素的相互作用。该蛋白参与包括 结构改变的途径，作为转录的协同调节器、剪接的调节器，以及小的非编码 的加工。这个家族的成员包含 个保守基因序列，包括保守的（死亡）基因序列，对 结合和水解以及 结合和解旋活动非常重要。这种基因的失调可能在癌症的发展中发挥作用，选择性剪接导致多个转录变体（）测试集.验证集.测试集.验证集.该基因编码 样（或）双特异性蛋白激酶家族中单个成员。在细胞核中，编码的蛋白质磷酸化参与前 处理的丝氨酸 精氨酸含量很高的蛋白质，将其释放到核质中。前体加工过程中剪接位点的选择可能受转录因子浓度的调节，包括富含精氨酸 丝氨酸的蛋白质。因此，编码的蛋白质可能在控制剪接位点选择中起间接作用。目前已发现编码该基因不同亚型的多个转录变体（）测试集.验证集.测试集.验证集.该基因编码的产物是 结合蛋白家族的成员，对细胞毒性淋巴细胞（）靶细胞具有核溶解活性。有人认为，该蛋白可能参与诱导细胞凋亡，因为优先识别聚（）均聚物，并诱导 靶区的 断裂。主要的颗粒相关物种是一种 的蛋白质，被认为是通过蛋白水解过程从 产物的羧基末端衍生而来。目前已发现该基因存在导致不同亚型的选择性剪接（）测试集.验证集.测试集.验证集.基因家族由 个成员组成：、。基因家族编码亮氨酸拉链蛋白，与 家族蛋白质二聚化，形成转录因子复合物。所以，蛋白被认为是细胞增殖、分化、转化的调节因子。另外，基因的表达与凋亡细胞死亡具有相关性 （）测试集.验证集.测试集.验证集.该基因编码糖基转移酶，对 糖苷键中的单个 乙酰氨基葡萄糖与丝氨酸或苏氨酸残基的加成进行催化。由于磷酸化和糖基化都竞争相似的丝氨酸或苏氨酸残基，这 个过程可能竞争位点，或者可能通过空间或静电效应改变附近位点的底物特异性。该蛋白质含有多个四三肽重复序列，这是对底物进行最佳识别所必需的。目前已发现该基因编码不同亚型的选择性剪接转录变体（）测试集.验证集.测试集.验证集.（）测试集.验证集.测试集.验证集.（）测试集.验证集.测试集.验证集.注：基因的调节方向均为“下调”；无数据。为（槲皮素），为，来源中药为栀子（.，.），目标名称为。有效成分关系见图。其他关键基因由于与有效成分匹配度不高，故未进行后续分子对接。.分子对接选 取 （）与 槲 皮 素 利 用 软件进行分子对接，最低结合效能为.，利用 软件处理优化后可见二者结合模式，见图。.关键基因与 患者临床特征的关系通过 相关性分析发现，关键基因（.，.）、（.，.）的表达与 患者的肾小球滤过率（）呈正相关；关键基因（.，.）的表达与 患者的 呈负相关，见图。关键基因（.，.）的表达与 患者血肌酐（）呈负相关，见图。关键基因（.，.）的表达与 患者尿蛋白与尿肌酐比值（）呈正相关，见图。贾蒙等：特发性膜性肾病转化为终末期肾病的关键基因及防治中药的生物信息学分析与验证 健康人群；组比较.，.，.（图 同）。组样本量 例；组样本量 名。图 验证集同向交集基因表达差异（?）（?）组样本量 例；组样本量 名。图 验证集同向交集基因表达差异（?）（?）其他关键基因由于差异无统计学意义，故未列出。讨论 与 关键基因独立分析的相关研究已有报道，重视 转化为 的研究并未进行。本研究重点挖掘并验证了转化过程中的关键基因，同时挖掘并正、反验证潜在的中草药及其有效成分。中草药在治疗，延缓其进入 中具有多靶点、多途径、多成分的多层次特点。.转化为 的关键基因分析尽管本研究中部分潜在的 基因在既往 的相关文献中未被报道，但这些基因在足细胞损伤、肾纤维化等病理过程中的作用已被实验证实 年 月第 卷第 期.，.，图 关键基因的 富集分析 ；，。图 关键基因的 通路分析 贾蒙等：特发性膜性肾病转化为终末期肾病的关键基因及防治中药的生物信息学分析与验证表 基于 转化为 关键基因的中药预测 关键基因相关中药无、原蚕蛾（.）、蚕砂（.）白英（.）、葛花（.）、葛根（.）、蓖麻子（.）、曼陀罗叶（.）、紫花曼陀罗（.）、曼陀罗子（.）无商陆（.）天师栗（.）、栀子花（.）、南沙参（.）、番泻叶（.）、栀子（.）、地笋（.）、泽兰（.）、人参花（.）、人参叶（.）、人参（.）、猴头菌（.）、蜀漆（.）、常山（.）、红芪（.）、箭叶淫羊藿（.）、乳香（.）表 预测中药汇总 中药大分类小分类功能与主治性味与归经葛根（葛花）解表药发散风热 解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络，解酒毒。用于外感发热头痛，项背强痛，口渴，消渴，麻疹不透，热痢，泄泻，眩晕头痛，中风偏瘫，胸痹心痛，酒毒伤中甘、辛，凉。归脾、胃、肺经栀子清热药清热泻火 泻火除烦，清热利湿，凉血解毒；外用消肿止痛。用于热病心烦，湿热黄疸，淋证涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡；外治扭挫伤痛苦，寒。归心、肺、三焦经番泻叶泻下药攻下泻热行滞，通便，利水。用于热结积滞，便秘腹痛，水肿胀满甘、苦，寒。归大肠经商陆泻下药峻下逐水 逐水消肿，通利二便；外用解毒散结。用于水肿胀满，二便不通；外治痈肿疮毒苦，寒；有 毒。归 肺、脾、肾、大肠经泽兰活血化瘀药活血调经 活血调经，祛瘀消痈，利水消肿。用于月经不调，经闭，痛经，产后瘀血腹痛，疮痈肿毒，水肿腹水苦、辛，微温。归肝、脾经乳香活血化瘀药活血止痛 活血定痛，消肿生肌。用于胸痹心痛，胃脘疼痛，痛经经闭，产后瘀阻，癥瘕腹痛，风湿痹痛，筋脉拘挛，跌打损伤，痈肿疮疡辛、苦，温。归心、肝、脾经人参补虚药补气 大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智。用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，气血亏虚，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷甘、微苦，微温。归脾、肺、心、肾经人参叶补虚药补气 补气，益肺，祛暑，生津。用于气虚咳嗽，暑热烦躁，津伤口渴，头目不清，四肢倦乏苦、甘，寒。归肺、胃经南沙参补虚药补阴 养阴清肺，益胃生津，化痰，益气。用于肺热燥咳，阴虚劳嗽，干咳痰黏，胃阴不足，食少呕吐，气阴不足，烦热口干甘，微寒。归肺、胃经常山涌吐药涌吐痰涎，截疟。用于痰饮停聚，胸膈痞塞，疟疾苦、辛，寒；有 毒。归肺、肝、心经红芪 补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌。用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚萎黄，半身不遂，痹痛麻木，痈疽难溃，久溃不敛甘，微温。归肺、脾经蓖麻子泻下通滞，消肿拔毒。用于大便燥结，痈疽肿毒，喉痹，瘰疬甘、辛，平；有毒。归大肠、肺经蜀漆破瘀通经，消积杀虫。用于瘀血经闭，癥瘕积聚，虫积腹痛辛，温；有毒。归肝、脾经 注：资料均来源于中国药典 年版。四气；五味；归经。图 转化为 关键基因的预测中药四气五味归经统计 年 月第 卷第 期.，.，图 有效成分关系 图 槲皮素与 的分子对接 图 、基因表达与 的关系 ，图 基因表达与 的关系 图 基因表达与 的关系 可能在 的发病、进展中承担重要角色。.与急性肾脏损伤当人体细胞处于不利环境（如病毒感染、紫外线刺激、亚砷酸盐刺激、缺氧、热休克、饥饿），机体会出现暂时的蛋白质翻译停滞，翻译起始阶段 组成致密性颗粒状聚集 体 应 激 颗 粒。细 胞 胞 浆 内 抗 原（，）在应激颗粒的聚集中发挥重要作用。等研究发现 的表达在肾移植急性肾性排斥中明显升高，表明含有细胞毒性颗粒的活化 细胞浸润在急性肾移植损伤中发挥作用。.与特发性膜性肾病 家族成员包括 和，通过与 家族成员二聚化形成活化蛋白（，）转录因子复合物。益肾通络方（黄芪、炒白术、党参、淫羊藿、当归、莪术、水蛭、地龙、绞股蓝）能够抑制膜性肾病大鼠肾组织中足细胞、肾小管上皮细胞凋亡，蛋白表达水平显著升高，其机制可能与抑制 信号途径有关。.预测中药及有效成分分析基于关键基因预测得到的中药可能具有防治贾蒙等：特发性膜性肾病转化为终末期肾病的关键基因及防治中药的生物信息学分析与验证 转化为 的潜在功效。结合频数统计、药物归经、功效主治以及临床应用的实际情况，首先对结果中的葛根、栀子、番泻叶、泽兰、乳香、人参、人参叶、南沙参、红芪共 味临床常用中药进行分类分析。结果发现，所预测中药针对 转化为 的治法主要分为以下 类：清除热邪，即以苦寒之品表里双清热邪，药选葛根、栀子；通下逐水，即以通下之品从二便排泄水毒，药选番泻叶；活血化瘀，即以活血行气之品散瘀消肿，药选泽兰、乳香；补益扶正，即以补气、补阴之品化生正气以御病邪，药选人参、人参叶、南沙参、红芪。膜性肾病为病理诊断名称，临床症状多表现为明显水肿、大量泡沫尿等，多归属“水肿”“尿浊”“肾风”“虚劳”等病论治。黄帝内经 素问 水热穴论“肾者，至阴也，至阴者，盛水也，肺者，太阴也故其本在肾，其末在肺，皆积水也”。陈以平总结多年临床经验认为 中医病机是“热”“湿”“瘀”“虚”。杨乐等根据 的 种证型（湿热蕴结型、痰瘀互结型、肾阳虚衰型、脾肾气虚型），分别治以清热利湿法、化痰散瘀法、温补肾阳法、益气补肾法。故本研究最终筛选的中草药与 辨证分型紧密切合，具有临床价值。.人参 年版中国药典中记录“人参甘、微苦、微温，归脾、肺、心、肾经。大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智。用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，气血亏虚，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷”。神农本草经 中记录人参具有“主补五脏，安精神，定魂魄明目，开心益智”的功效。现代药理研究发现，人参能够提高免疫、改善内分泌功能、抗氧化应激等。人参中的疗效成分是人参皂苷，包括原人参二醇型、原人参三醇型、齐墩果酸型。张婕等研究发现人参皂苷 能保护多柔比星肾病综合征大鼠裂孔膜蛋白复合体的完整性、增加足细胞裂孔膜分子 表达、改善足突融合、逆转分布异常。张黎雯研究发现人参皂苷能改善肾气虚型膜性肾病大鼠的肾功能生化水平、肾足细胞病变，达到补益肾气、保护肾组织的功效。等研究发现人参皂苷衍生的纯化合物 能够降低肾脏组织中的、活性和 蛋白水平、尿液中 蛋白水平抑制 炎症体的激活，达到改善单侧输尿管闭塞小鼠的肾脏炎症和纤维化的目的。等研究发现人参皂苷、能够降低 水平，显著 减 轻 单 侧 输 尿 管 梗 阻（，）引起的肾小管间质损伤和胶原沉积，达到肾间质纤维化的目的。等研究发现人参皂苷 能够通过靶向 途径改善肾小管间质纤维化。等研究发现人参皂苷 和黄芪甲苷共同作用能够显著降低结缔组织生长因子（，）和 过表达。等研究发现（）人参皂苷 显著下调 、表达。.泽兰 年版中国药典中记录“泽兰苦、辛，微温。归肝、脾经。活血调经，祛瘀消痈，利水消肿。用于月经不调，经闭，痛经，产后瘀血腹痛，疮痈肿毒，水肿腹水”。得配本草云泽兰“苦、辛、温。入足厥阴，兼足太阴经血分。破宿血，去癥瘕，兼除痰癖、蛊虫，能疗目痛痈肿。配防己，治产后水肿。配当归，治月水不利”。现代药理研究发现泽兰能够利尿、抗凝、抗血小板、改善微循环。相关研究发现泽兰能下调 与腺嘌呤所致的慢性肾衰竭大鼠模型中、肝细胞生长因子（，）、肿瘤坏死因子（，）和 的表达，增加血管内皮生长因子（，）的表达。王硕朋等研究发现泽兰水提物能抑制 同工酶、。宋佰慧等研究发现泽兰乙醇提取物能改善肾小球基底膜增厚及细胞肿胀、系膜基质增生，减少肾组织、巨 噬 细 胞 趋 化 蛋 白 （，）、晚期糖基化终末化产物（，）表达。等研究发现泽兰水提取物能通过抑制 信号通路减少 表达量，从而抑制 活化、通路分子（、）表达、的磷酸化。等研究发现泽兰能上调足细胞 表达，抑制 信号通路，缓解糖足细胞损伤。.栀子 年版中国药典中记录“栀子苦，寒。归心、肺、三焦经。泻火除烦，清热利湿，凉血解毒；外用消肿止痛。用于热病心烦，湿热黄疸，淋证涩痛，血热吐衄，目赤肿痛，火毒疮疡；外治 年 月第 卷第 期.，.，扭挫伤痛”。名医别录 云栀子“大寒，无毒。主治目热赤痛，胸心大小肠大热，心中烦闷，胃中热气”。李时珍本草纲目提到栀子可“治吐血、衄血，血痢、下血、血淋，损伤瘀血，及伤寒劳复，热厥头痛，疝气，烫火伤”。现代药理研究发现栀子提取物及主要活性成分具有保肝、利胆、抗炎、抗氧化、神经保护、抗糖尿病、抗凋亡和抗肿瘤等药理活性。等研究发现栀子提取物山柰酚和槲皮素能够产生高尿酸血症大鼠的 种非侵入性氧化应激生物标志物（总抗氧化能力和丙二醛浓度）的改变，变现为总抗氧化能力的显著增加、丙二醛浓度的降低，与肾脏疾病氧化应激密切相关。等研究发现栀子提取物（、，连续）的抗三氧嘌呤作用可能与肾 表达下调有关，栀子提取物还可以通过调节有机离子转运蛋白和 改善氧酸诱导的高尿酸血症伴肾功能不全。.槲皮素槲皮素是一种各类植物中广泛存在的天然黄酮类有机化合物，较易从中草药中进行提取，具有抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抗炎和免疫调节等多种药理学活性，在触发与化学预防有关的多种细胞内途径（如凋亡、抗氧化、细胞侵袭、血管生成）中发挥多效作用。托马斯克里斯琴莱恩斯用含槲皮素的组合物改善肾功能。梁敏等研究发现槲皮素对大鼠相对间质容积和胶原含量 和 钙黏素的影响是其抗肾纤维化可能存在的机制之一。在肾脏纤维化病理状态下，则被大量分泌，钙黏素分泌失衡可破坏肾小球足细胞和基底膜之间的连接。等研究发现槲皮素可以通过抑制 信号通路的激活，在体外和体内减轻纤维化和肾小管系统上皮细胞向间质转化，并且可以作为多种肾脏纤维化疾病的治疗剂。等研究发现槲皮素可以通过抑制 的表达来减轻 诱导的 细胞纤维化，以此改善梗阻性肾病患者间质纤维化和巨噬细胞聚集。等研究发现槲皮素通过调节 巨噬细胞极化来改善肾脏损伤和纤维化。张明康等研究发现槲皮素（每日灌胃给予 ）可有效改善尿酸性肾病大鼠肾损伤，作用机制可能与其显著上调肾组织尿毒素转运蛋白有机阴离子转 运 蛋 白 （）、多 药 耐 药 相 关 蛋 白（）表达、促进血清硫酸吲哚酚、对甲酚硫酸盐排泄有关。等研究发现槲皮素通过靶向 通路缓解慢性肾功能衰竭。等槲皮素减轻环磷酰胺诱导的肝肾氧化 炎症应激加重雄性大鼠免疫抑制性吲哚胺，双加氧酶。等等研究发现槲皮素防止了高尿酸血症小鼠肾脏有机离子转运体和 的表达变化，具有尿素化和肾脏保护的作用。等研究发现槲皮素通过调节肠道微生物介导的色氨酸代谢和芳香烃受体激活，改善高尿酸血症所致的慢性肾脏病。等研究发现槲皮素通过 线粒体自噬轴减少肾小管上皮细胞的衰老减轻肾脏纤维化。等研究发现槲皮素负载的 纳米胶束具有抗氧化活性，对庆大霉素致大鼠肾损伤具有保护作用。等研究发现槲皮素对实验性大鼠高氧尿症模型氧化应激诱导的肾小管上皮细胞损伤具有保护作用。综上所述，本研究通过生物信息学分析初步预测导致 转化为 的关键基因，筛选了具有防治 转化为 的中药，并揭示潜在靶标及生物学过程，相关结果有待后续通过实验及临床研究加以验证，为加深 分子机制的理解提供科学可靠的数据，以期为相关中药新药开发提供参考。同时，本研究存在一定的局限性：微阵列数据来自 的不同阶段，不同阶段的某些基因表达水平可能不完全相同；来自 的临床资料并不适用于每个样本；这些潜在候选基因的详细分子机制、生物学功能仍有待进一步实验验证；目前很多佐证的理论只处于动物研究阶段，很少能够进入临床药物研究，并且应用于临床需要克服许多困难，比如慢性毒性、药代动力学、不良反应等问题。参考文献 ，：，：，（），（）：，（）：（），（）：，（），（）：贾蒙等：特发性膜性肾病转化为终末期肾病的关键基因及防治中药的生物信息学分析与验证 ，（）：，：窦涪琳，刘庆珍，徐巧莹，等 膜性肾病关键基因的生物信息学分析 山东医药，（）：高燕，李叶，段雪婷，等 基于 数据库挖掘与膜性肾病密切相关的关键基因 北京生物医学工程，（）：，：林帅军，杨忠杰，荣晓哲，等 基于生物信息学筛选尿毒症差异基因及中药预测 中医药信息，（）：，：，（）：国家药典委员会 中华人民共和国药典 一部 北京：中国医药科技出版社，：，（）：，（）：，（）：陈素枝，杨凤文，李永章，等 益肾通络方抑制 及下游信号途径对膜性肾病大鼠肾脏保护作用的研究 中草药，（）：陈以平 益气活血化湿方案治疗膜性肾病之研究 上海中医药大学学报，（）：杨乐，程小红 程小红主任医师运用姜黄和虎杖治疗特发性膜性肾病的经验 云南中医中药杂志，（）：冯彦 人参药理作用及临床应用研究进展 中医临床研究，（）：姚梦杰，吕金朋，张乔，等 人参化学成分及药理作用研究 吉林中医药，（）：张婕，张黎雯，梁亚浩，等 人参皂苷 对多柔比星肾病大鼠足细胞 的影响 医学研究生学报，（）：张黎雯 人参皂苷 减轻肾病综合征肾气虚模型大鼠肾损伤的作用及机制 南京：南京中医药大学，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（），：严洁，施雯，洪炜 得配本草 北京：中国中医药出版社，：刘君 泽兰的化学成分及药理研究进展 辽宁中医药大学学报，（）：李芳梅，宋恩峰 泽兰对 大鼠肾脏核转录因子及血管内皮生长因子的影响 湖北中医学院学报，（）：曹赛霞，赵直光，孙德珍 泽兰防治慢性肾衰竭的实验研究 中国中西医结合肾病杂志，（）：王硕朋，姚源璋，盖丰丰，等 泽兰水提物调节 同工酶治疗早期糖尿病肾病的研究 中医药导报，（）：宋佰慧，崔昊震，张默函 泽兰乙醇提取物对 诱导糖尿病小鼠肾脏的保护作用 中国生化药物杂志，（）：，（）：，（）：陶弘景 名医别录 尚志钧辑校 北京：人民卫生出版社，（），年 月第 卷第 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