生物科学毕业论文-土荆芥三种提取方法的粗提物对谷蠹和赤拟谷盗的触杀和熏蒸活性.doc

生物科学毕业论文-土荆芥三种提取方法的粗提物对谷蠹和赤拟谷盗的触杀和熏蒸活性学号: 200724140208本 科 生 毕 业 论 文（设 计）题 目:土荆芥三种提取方法的粗提物对谷蠹和赤拟谷盗的触杀和熏蒸活性作者姓名:专业班级:生物科学2007级02班指导教师:化学与生命科学学院二零一一年五月郑重声明本人的毕业论文 (设计) 是在 老师的指导下独立撰写并完成的。毕业论文（设计）没有剽窃、抄袭、造假等违反学术道德、学术规范和侵权行为，本人愿意承担由此产生的各种后果，直至法律责任；并可通过网络受公众的查询，特此郑重声明！ 毕业论文作者（签名）： 2011年5月 日 目 录中文摘要1英文摘要(Abstract) 21 选题背景31.1 谷蠹和赤拟谷盗的研究概况31.1.1谷蠹的研究概况31.1.2赤拟谷盗的研究概况31.2 植物源杀虫剂的研究概况41.3 土荆芥的研究概况51.3.1 土荆芥的形态特征51.3.2 土荆芥的化学成分研究51.3.3 土荆芥的生物活性研究51.4 本研究的思路及基本意义62 实验过程62.1材料与方法72.1.1 供试谷蠹和赤拟谷盗72.1.2 供试植物和制备72.2 实验方法82.2.1 触杀活性82.2.2 熏蒸活性83 结果与分析93.1 三种提取方法对土荆芥萃取结果比较93.2 土荆芥三种提取方法对谷蠹和赤拟谷盗成虫的触杀作用93.3 土荆芥三种提取方法对谷蠹和赤拟谷盗成虫的熏蒸作用104 小结与讨论114.1 小结114.2 讨论12参考文献13致谢14土荆芥三种提取方法的粗提物对谷蠹和赤拟谷盗的触杀和熏蒸活性土荆芥三种提取方法的粗提物对谷蠹和赤拟谷盗的触杀和熏蒸活性化学与生命科学学院 生物科学专业 200702班摘要：本文以谷蠹和赤拟谷盗为供试昆虫，研究了土荆芥粗提物对谷蠹和赤拟谷盗常用杀虫剂触杀作用和熏蒸作用的影响。分别采用三种方法：冷浸法、索氏提取法、超声波提取法并用有机极性溶剂-石油醚对土荆芥活性成分进行粗提，比较三种方法的土荆芥粗提物对储粮害虫-谷蠹（Rhizopertha dominica）和赤拟谷盗(Tribolium castaneum)的触杀和熏蒸作用。研究结果表明，土荆芥的活性成分的提取效果为超声波提取率索氏提取率冷浸法提取率，分别为8.6%、4.5%、4.3%。三种提取方法在浓度为6.494mg/cm2对谷蠹的触杀效果显著，6.494mg/cm2剂量处理48h后索氏提取和超声波提取法石油醚提取物对谷蠹成虫的校正死亡率均达到70%以上，72h后冷浸法提取物的校正死亡率也高达60%以上，但对赤拟谷盗几乎没有触杀作用，3d后最高校正死亡率只有16.12%。三种提取方法在最高浓度为6.494 mg/cm2对谷蠹的熏蒸作用也明显比赤拟谷盗的效果好，5d后谷蠹的熏蒸校正死亡率均达到了80%以上，而赤拟谷盗的校正死亡率最高只15.90%。此研究有望为土荆芥资源的合理利用以及储粮害虫植物型杀虫剂的开发提供一定参考依据。关键词：粗提方法；土荆芥；谷蠹；赤拟谷盗；触杀作用；熏蒸作用 Control Effect on contact and fumigation activities fromthree ways of extracts from Chenopodiumambrosioides L. against R. dominica and Tribolium朗读显示对应的拉丁字符的字典Tao XingxingClass200702, Biology, College of Chemistry and Life Science, HNUAbstract: In this paper, Rhizopertha dominica and Tribolium castaneum were as test insects to study the crude extracts of Chenopodium ambrosioides L, which might have toxic and fumigation effects of insecticides.Polar solvents- petroleum ether were used to get the extracts of Chenopodium ambrosioides L. by three methods-cold soaking method Soxhletextraction method and U ltrasonic extraction method. The repellence and contact toxicity activities of the extracts were tested against Rhizopertha dominica and Tribolium castaneum .The results showed that the extraction efficiency of C. ambrosioides L. was in sequence U ltrasonic extraction method Soxhletextraction method cold soaking method, the extraction rates were 8.6%, 4.5%,and 4.3%. Three different methods in the concentration of R. dominica contacting 6.494mg/cm2 was of great significance, at the 6.494mg/cm2 dose after 48h, Soxhlet extraction and ultrasonic extraction of petroleum ether extract of R. dominica adults were 70% corrected mortality above, 72h after the cold soak method extracts the corrected mortality rate was as high as 60%, but almost no castaneum contact action, after three days, the highest corrected mortality was only 16.12%. Three different methods at the highest concentration of 6.494 mg/cm2 on the role of R. dominica were significantly higher than the fumigation Tribolium good effect, after 5 days R. dominica fumigation corrected mortality reached 80%, while the maximum corrected mortality of Tribolium castaneum was only 15.90%. This study will wormseed rational use of resources and the type of plant pests in stored grain insecticides developed to provide a reference.Keywords: Crud extracts; Chenopoidium ambrosioides L.; Rhizopertha dominica ; Tribolium castaneum; contact toxicity; fumigation toxicity1 选题背景1.1 谷蠹和赤拟谷盗的研究概况1.1.1 谷蠹（Rhizopertha dominica）也叫“米长蠹”，贮藏谷物的重要害虫，长蠹科。成虫体长约2.6毫米 ，暗褐色，头部隐藏于前胸下面与胸部垂直，触角末端三节膨大呈片状；前胸圆筒形，背面有小刺。幼虫体形弯曲，头部细小，胸部肥大，全体疏生淡黄色微毛。一般年生2代。成虫及幼虫为害谷粒、豆类、面粉等。防治法：降低贮粮水分及温度，进行粮食贮藏的科学管理，必要时用氰酸气、氯化苦、溴甲烷二氯乙烷等药熏蒸。生活习性 华中年生2代，华南25代，多以成虫在发热的粮谷中或粮粒内越冬，少数以幼虫越冬。气温28，相对湿度70，完成1代历时40天，寒冷地区则需6个月。成虫飞翔力强，常钻入粮堆里温度最高的地方或聚集在距粮面67100cm处为害。气温高于37成虫常钻出在仓库内飞翔。每雌产卵200500粒，把卵产在粮粒蛀孔处或粉屑中，初孵幼虫钻入粮粒中蛀食，直到羽化成虫，该虫抗热抗旱性强，粮食含水8时还能发育或繁殖。每年4月成虫开始活动交配产卵，7月中旬第1代成虫出现，8月下旬一9月上旬第2代成虫为害严重。一直持续到9月份，气温下降后，开始进入越冬处，全世代历期4391天，卵期1113天，幼虫期2867天，蛹期34天，成虫寿命1年。1.1.2 赤拟谷盗(Tribolium castaneum Herbst)属鞘翅目，拟步甲科。分布在我国大部分省区，世界热带与较温暖地区。寄主食用菌、玉米、小麦、稻、高粱、油料、干果、豆类、中药材。为害特点：主要为害面粉，该虫有臭腺，分泌臭液，使面粉发生霉腥味，其分泌物还含有致癌物苯醌。形态特征：成虫长椭圆形，体长345mm，赤褐色至褐色，体上密布小刻点，背面光滑，具光泽，头扁阔；触角锤状11节，锤端3节膨大，复眼黑色，两复眼腹面距离约与复眼的横径等长，前胸背板呈矩形，两侧稍圆，前角钝圆，有刻点；小盾片小，略呈矩形，鞘翅长达腹末，与前胸背板同宽，上具10条纵刻点行。前、中、后足5R节分别为5、5、4节。幼虫细长圆筒形，长68mm，有胸足3对，头浅褐色，口器黑褐色，触角3节，长为头长之半，胸、腹部12节，各节前半 部骨化区浅褐色，后半部黄白色。臀叉向上翘。腹末具1对伪足状突起。 生活习性：年生45代，以成虫在包装物、苇席、杂物及各种缝隙中越冬，雄虫寿命547天，雌虫226天，把卵产在仓库缝隙处，卵粒上附有粉末碎屑一般不易看清，每雌产卵327956粒。最适发育温度2730。相对湿度70，30完成一代27天左右。把气温调到44，相对湿度77，幼虫10小时、成虫7小时即死亡；501小时即死亡；低于-1.1各虫态17天即死亡；-6.7-3.95天全死亡。1.2 植物源杀虫剂的研究概况目前在国家粮库和地方粮库主要采用熏蒸剂和化学防护剂防治玉米象、谷蠹等储粮害虫，由此产生的3R问题已经很明显1,2，为此，亟待寻找更安全、高效的方法来控制储粮害虫的危害。而植物源杀虫剂是一类利用具有杀虫活性植物的某些部分或提取的有效成分而制成的杀虫剂。从植物中提取高效低毒或无毒活性成分用于防治储粮害虫，既能达到防治目的，又具有不影响粮食品质、不污染环境、对人畜安全、无残留、易降解、作用机理复杂、不易产生抗药性、经济方便等优点3,4,5。为了保护生态环境，减少粮食污染，降低防治成本，且能有效防治储粮害虫，增强粮食的市场竞争力，植物杀虫剂的使用是十分必要的，植物性杀虫剂的研究和开发已成为当今热点6,7。植物源农药在储粮害虫防治上的应用，国内外有很多相关的研究和报道。国内研究的植物有竹子、黄杜鹃、紫茎泽兰、大蒜、石菖蒲、苦杏仁、肉桂、留兰香、柠檬果、八角、茴香、细叶桉树，花椒、银杏、苦楝、蓖麻、柑桔等8。国外研究的有酸橙油、棕榈玫瑰油、杉木油、黑胡椒籽油、蓝桉叶油、印楝、芥子油、辣薄荷、黑胡椒、灌木洋葱、加纳植物、几内亚植物甜罗勒精油、非洲罗勒精油、西非植物万寿菊、山香、樟脑罗勒、罗勒、胡椒、姜黄叶、辣根油等9,10。迄今为止，茴香、八角、黑胡椒粉、红桔油、金桔油、薄荷脑、樟脑、桉叶油、除虫菊等数十种植物性物质已被证明对玉米象均有不同程度的防治效果2,11。目前对于植物源农药的研究应用主要有以下几种方式：直接应用。活性成分的分离与应用。植物源农药之间的复配或者与化学农药之间的复配。研究活性物质的结构、作用机理、结构与活性间的关系，以植物中的活性成分为先导，合成新型植物源农药制剂7。直接应用的主要优点是能够发挥粗提物中的各种成分的协同作用，投资少，开发周期短。而活性成分的分离与应用是将粗提物中的活性成分分离出来加以应用，对其中的化学成分往往比较清楚。植物源农药之间的复配或者与化学农药之间的复配可以通过不同的农药杀虫机理，互相补充提高药效。另外植物源农药与化学农药的混配，可以大大减少化学农药的用量7，因此可以减缓害虫抗药性的产生。姚英娟、薛东等以几种植物性杀虫物质与防虫磷混配剂在实验室的条件下，对玉米象的防治作用进行试验，结果表明，供试的几种植物性杀虫物质和防虫磷混合后，防治效果高于防虫磷单独处理，且防虫磷的用量减少50%12。1.3 土荆芥研究概况土荆芥(Chenopoidium ambrosioides L.)为藜科植物带有果穗的全草，为一年生或多年生草本，始载于生草药性备要，多作民间用药。原产于热带美洲，现广泛分布于全世界温带至热带地区。我国主要分布在福建、江西、浙江、江苏、广东、广西、台湾等南方省份通常生长在路边、河岸等处的荒地中以及农田中。具祛风、除湿、杀虫、通经、止痛功效，用于治疗皮肤风湿痹痛、钩虫、蛔虫、痛经、闭经、皮肤湿疹和蛇虫咬伤等症13,14。1.3.1 土荆芥的形态特征土荆芥，高50-80cm，茎直立，有棱，多分枝：分枝细弱，有腺毛或无毛：叶长圆状披针形至披钎形，长达15cm，宽约5cm，顶端渐尖，基部渐狭成短叶柄，边缘具不整齐的锯齿，下面有黄色腺点，沿脉疏生柔毛；花序穗状，腋生，分枝或不分枝：花两性或雌性，通常3-5朵簇生于苞腋，花被裂；雄蕊5枚，胞果扁球形：种子横生或斜生，红褐色，光亮，直径0.7mm。花期8-9月，果期9-10月14。1.3.2 土荆芥的化学成分研究国内外学者对土荆芥化学成分进行了多年的研究。但主要是针对其挥发油成分，对非挥发油成分的研究报道较少。岩左准三等报道其果实中含挥发油可高达4%，驱虫土荆芥挥发油中的驱虫有效成分为驱蛔脑，含量约40%-70%，此外还含有一些萜类包括-松油烯，柠檬烯，2,8-对二烯等27。Sagrero-Nieves等报道土荆芥叶挥发油中含有49种挥发性化学成分，其中含柠檬烯(32.5%)和反式松香芹醇(26.7%)等15,16。熊秀芳张银华等用色谱-质谱联用技术对湖北产土荆芥挥发油的化学成分进行了分析。鉴定了80种组分。其中主要组分是：薄荷醇(31.331%)、-松油烯(13.210%)、香芹烯醇(8.526%)、对伞花烃(8.343%)、1,8-桉叶油素(7.417%)等5种化合物。被鉴定的80种成分，共占挥发油总含量的99.112%15。黄雪峰、李凡等为全面了解土荆芥的化学组成，阐明其化学成分与药理作用的关系，对荆芥非挥发油成分进行了研究，从中分离得到7种化合物，经光谱解析，确定了它们的结构。这7种化合物分别是(1R, 2S, 3S, 4S)-1, 2, 3, 4-tetrahy -dtmxy pmenthene，-谷甾醇，a-菠菜甾醇，4-isopropyl-me-thyl-4-cyclohexene，1, 2, 3-triol，槲皮素，反式桂皮酸，L-鼠李糖17。1.3.3 土荆芥的生物活性研究土荆芥分布广泛，不同产地的土荆芥，其挥发油组成有较大的区别。但其主要成分为单萜烯类、倍半萜烯类及其含氧衍生物等。由于土荆芥富含各种挥发性油，而许多挥发性油又是植物对环境适应过程中产生的次生代谢产物，因而多具有明显的药理作用，如对真菌如发癣菌有良好的抑制作用，并有显著的抗溃疡及抑制幽门螺旋杆菌的作用18。除此之外，许多研究表明土荆芥还有重要的杀虫作用，如土荆芥及其精油对贮粮害虫绿豆象(Calloso bruchus chinensis)，四纹豆象(C. maculates)，菜豆象(Acanthoscelides obtectus)，谷象(Sitophilus granaries)和大谷蠹(Prostephanus truncates)有熏杀作用，对家蝇、黄曲条跳甲也具有毒杀作用19,20，对菜青虫和小菜蛾具有触杀、熏蒸、拒食和生长抑制作用20,21；土荆芥生物总碱也对家蝇有毒杀效果，处理后能提高家蝇对杀虫剂的敏感性，而且能抑制家蝇体内解毒酶系活性22。1.4 本研究的基本思路及意义我国的土荆芥资源丰富，在部分地区甚至成为有害植物，如果能充分挖掘出土荆芥的生物活性，变废为宝，一定会带来潜在的经济价值。介于此，本研究旨在对土荆芥粗提物对储粮害虫防治效果进行初步探究，分别采用冷浸法，索氏提取法，及超声波震荡法，以石油醚有机溶剂制备土荆芥的粗提物并通过室内试验，研究同种溶剂不同浓度的土荆芥粗提物对谷蠹和赤拟谷盗的触杀和熏蒸作用。通过触杀校正死亡率和熏蒸校正死亡率来综合评价三种提取方法土荆芥粗提物对谷蠹和赤拟谷盗的防治效果，所运用的测定方法是滤纸药膜法。这些研究结果可为评价土荆芥粗提物的生物活性和制备、合理利用杂草资源、研究开发植物杀虫剂以及促进害虫持续控制等提供理论依据。2 实验过程2.1 材料与方法2.1.1 供试谷蠹和赤拟谷盗所用谷蠹和赤拟谷盗源于2009年8月份采自国家直属粮库麻城英山分库，在温度(271)C，相对湿度75%5%条件下，以半碎小麦饲养。小麦使用前放入烘箱(60C)中消毒2h，调整小麦含水量调为13%1%，分装于罐头瓶中。接入贮粮成虫后置于27C恒温培养箱饲养，7d后筛去成虫，待新一代成虫大量出现后约5-7d，筛出成虫供试验用。2.1.2 供试植物所用植物土荆芥于2010年6月份采自黄州，为带有果实和叶子的植株。2.1.3 植物提取物的制备将从野外采集的土荆芥的果实、叶片和幼嫩茎清洗干净，放在60C烘箱中烘干，然后用植物粉碎机粉碎，过40目筛。(1) 提取：冷浸方法：以分析纯溶剂石油醚 (沸程60-90)提取。洗净一个10L的玻璃瓶，烘干，放入100 g烘干的土荆芥粉末。再在瓶中加入相应的溶剂500mL置于避光处(20-25)浸提48h(浸提过程中可以用玻璃棒搅拌使萃取更充分)，将上层澄清的液体转入棕色的试剂瓶中避光保存，再在玻璃瓶瓶中分别加入250mL的石油醚浸提48h(同上，间隔一段时间用玻璃棒搅拌一下，这样浸提的更彻底)，然后将上清液转移到试剂瓶中，在玻璃瓶中加入250mL石油醚浸提24h，最后集合三次所得溶液用减压抽滤法进行抽滤，收集滤液。超声波提取法：以分析纯溶剂石油醚 (沸程60C-90C)提取。洗净3个广口瓶，将100g烘干的土荆芥粉末分装与3个瓶中，再将1000mL石油醚分装于广口瓶中，用玻璃棒搅拌均匀，置于超声波发生器中进行超声萃取，考察了萃取时间、萃取剂浓度、料液比、萃取温度和超声萃取次数对提取率的影响，确定了最佳提取条件：料液比1：10(gmL)，在40超声萃取40 min，萃取2次即可得到较为满意的效果10。最后所得溶液用减压抽滤法进行抽滤，收集滤液。索氏提取法：准确称取5000g土荆芥干粉，以500mL石油醚(1：10)为萃取溶剂，抽提6-8h。由于一个虹吸管一次只能萃取最多5.00g土荆芥，一台脂肪测定仪最多能萃取6瓶，一天可以萃取30.00g，分两天萃取完毕后，滤液用减压抽滤法进行抽滤，收集滤液。具体方法称取5g土荆芥粉状物装入滤纸筒内 ,用脱脂棉塞住筒的上部 ,以压住试样为度，后将滤纸筒放入干燥的浸提管内，高度不能超过虹吸管顶部，向抽提瓶中加入25mL石油醚，用脱脂棉塞住冷凝管上口 ,连接好装置 ,进行加热抽提，水浴温度为60，约16min虹吸1次，待提取器支管流下的液体为无色时抽提停止，真空过滤20。(2) 浓缩：将所得滤液用旋转蒸发仪在50C-60C下进行浓缩，浓缩至再无溶剂滴出，表观上看为粘稠状的膏状物，放入通风橱中通风至恒重后，再用丙酮将浓缩物溶解至0.5g/mL的粗提物，装入棕色试剂瓶中，置于4C冰箱中备用。并在试剂瓶上标明植物名称、所用的提取溶剂、溶解的试剂以及浓缩日期和提取方法。三种方法的提取率不同(表1)提取率(%)=浓缩后提取物重/植物干粉重100%。2.2 试验方法2.2.1 触杀活性滤纸药膜法：提取物先用丙酮配成所需浓度，在直径为7cm的滤纸上滴加稀释液0.5ml，使药液均匀地展布在滤纸上，同直径滤纸滴加0.5ml纯丙酮作为空白对照。待溶剂挥发后，将滤纸放入直径为7cm的培养皿内，滤纸上放置玻璃环，玻璃环内壁涂上超细滑石粉防止试虫上爬。每处理设3个重复。每皿投入谷蠹和赤拟谷盗成虫各30头，分别于24h、48h、72h后，检查触杀效果，计算校正死亡率。死亡标准：以拨针触及成虫尾部、触角及足不动者为死亡。(表2和表3)校正死亡率(%)=(处理组死亡率-对照组死亡率)/(1-对照组死亡率)100%。2.2.2 熏蒸活性广口瓶密闭熏蒸法：将昆虫针尖端弯曲做成小钩，用透明胶将针帽端粘贴在广口瓶盖内壁上。在溶剂为500ml的广口瓶内装入小麦20克，接入谷蠹和赤拟谷盗成虫各30头。将直径为7cm的滤纸，每滤纸上滴加提取物丙酮稀释液0.5ml，使药液均匀地展布在滤纸上，同面积滤纸滴加0.5ml纯丙酮作为空白对照。待溶剂挥发后，将滤纸悬挂于粘贴在广口瓶盖内壁的昆虫钩上，将广口瓶盖扣在装有试虫的广口瓶上，并用塑料膜包好瓶口，再将广口瓶置于温度(271)C、相对湿度75%5%全黑暗养虫室内进行熏蒸。每个处理设3次重复。120h后散气检查熏蒸情况，记录死亡虫数，计算校正死亡率。死亡标准：以拨针触及成虫尾部、触角及足不动者为死亡。(表4)校正死亡率(%) = (处理组死亡率-对照组死亡率) / (1-对照组死亡率)100%。3 结果与分析3.1 三种提取方法对土荆芥萃取结果比较表1不同方法提取土荆芥活性物质结果的比较Table 1 Ambrosioides different active substances extracted from the comparison results萃取方法色泽外观 萃取 /min 萃取率 %冷浸法提取黄色膏状半固体57604.3索氏提取法提取棕色膏状半固体3604.5超声波提取棕黄色油状液体408.6从表1可以看出，三种土荆芥提取方法中传统的冷浸法和索氏提取法提取率都没有现代提取法中超声波提取法的提取率高。其中冷浸法耗时最长，提取率最低；索氏提取法操作麻烦、消耗有机溶剂多，而且耗时长，提取效率不高；超声提取法操作简单、省时、回收率高于索氏提取法，有逐步取代索氏提取法的趋势。因此综合评定认为土荆芥的石油醚萃取以超声波提取法最佳。3.2 土荆芥三种提取方法对谷蠹和赤拟谷盗成虫的触杀作用以供试提取物3种不同浓度0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.50mg/ml，分别相当于1.623mg/cm2、3.247mg/cm2、6.494mg/cm2，对谷蠹和赤拟谷盗成虫的触杀活性进行了初步测试。结果表2：3种方法提取物对谷蠹成虫均具有较强的触杀作用，并且触杀效果随着提取物浓度的升高而增加。6.494mg/cm2剂量处理48h后索氏提取和超声波提取法石油醚提取物对谷蠹成虫的校正死亡率均达到70%以上，72h后冷浸法提取物的校正死亡率也高达60%以上。不过，每种溶剂提取物随着处理浓度的降低，校正死亡率随之降低，触杀效果明显减弱。结果表3：三种方法的土荆芥粗提物对赤拟谷盗成虫的触杀效果都不显著。即使在浓度6.494mg/cm2，72h后三种方法中最高的校正死亡率也只有16.12%，,说明在这个浓度梯度范围内，土荆芥粗提物对赤拟谷盗成虫的触杀效果不明显。这在一定程度上可以参考吕建华（2006）的结果：大蒜，辣椒粉，柑橘皮，臭椿树皮4种精油对赤拟谷盗成虫触杀和熏蒸作用都很弱，而对赤拟谷盗幼虫的熏蒸效果显著。表2 土荆芥3种提取方法提取物对谷蠹成虫的触杀活性Tab. 2 The contact toxicity of the extracts from Chenopodium ambrosioides L. against Rhizopertha dominica提取方法Extracts处理浓度(mg/cm2)Concentration校正死亡率(%)Corrected mortalily rate24h48h72h冷浸法cold soaking method1.6231.184.212.563.2472.4812.4325.316.4949.3049.8663.33索氏提取法Soxhletextraction method1.6234.439.213.963.24742.2144.9357.536.49423.3270.3380.54超声波提取法UltraSonic AssistedExtraction1.6234.4111.5212.623.24714.4148.7458.126.49413.3273.3277.12表3 土荆芥3种提取方法提取物对赤拟谷盗成虫的触杀活性Tab. 3 The contact toxicity of the extracts from Chenopodium ambrosioides L. against Tribolium castaneum提取方法Extracts处理浓度(mg/cm2)Concentration校正死亡率(%)Corrected mortalily rate24h48h72h冷浸法cold soaking method1.6230.000.003.403.2470.002.229.216.4943.418.4116.12索氏提取法Soxhletextraction method1.623-1.111.321.323.2470.001.322.436.494-1.112.415.96超声波提取法UltraSonic AssistedExtraction1.6230.000.002.433.2470.001.116.876.4943.327.8312.753.3 土荆芥三种方法提取物对谷蠹和赤拟谷盗成虫的熏蒸作用以供试提取物3种不同浓度0.125mg/ml、0.25mg/ml、0.50mg/ml，分别相当于1.623mg/cm2、3.247mg/cm2、6.494mg/cm2，对谷蠹和赤拟谷盗成虫的熏蒸活性进行了初步测试，结果如表4：3种提取方法提取物对谷蠹成虫有明显的熏蒸效果，而对赤拟谷盗成虫却不具有很强的熏蒸活性。120h后谷蠹成虫的熏蒸校正死亡率均达到了80%以上，其中索氏提取法最高，超声波的其次，冷浸法效果也不错，并且随着浓度的升高死亡率越高。相反，对于赤拟谷盗，熏蒸效果同样不明显，120h后最高的校正死亡率也不过15.90%。表4 土荆芥3种不同提取方法对谷蠹和赤拟谷盗的熏蒸活性Tab. 4 The fumigant toxicity of the extracts from Chenopodium ambrosioides L. against Rhizopertha dominica and Tribolium castaneum处理浓度(mg/ml)Concentration120h后校正死亡率Corrected mortalily rate 72h after treatment谷蠹赤拟谷盗提取方法冷浸法cold soaking method索氏提取法Soxhletextraction method超声波提取法UltraSonic AssistedExtraction冷浸法cold soaking method索氏提取法Soxhletextraction method超声波提取法UltraSonic AssistedExtraction0.12512.3115.2616.411.215.104.710.25043.6260.1146.4112.3112.4310.710.50081.2286.9384.127.1215.7215.904 小结与讨论4.1 小结(1) 3种方法对土荆芥活性成分的提取效果为超声波提取率索氏提取率冷浸法提取率，提取率分别为8.6%、4.5%、4.3%，这表明超声波的提取效果最好。综合比较2种试虫三种方法的触杀和熏蒸结果，索氏提取法的效果最好，超声波提取法其次，但是差异不大，冷浸法最差，差距较大。因此综合比较，采用省时，操作简单，提取率最高的超声波提取法，研究土荆芥粗提物的触杀和熏蒸活性最具有参考价值。 (2) 在触杀实验过程中，土荆芥的3种方法提取物对谷蠹成虫的触杀效果总体表现在6.494mg/cm2浓度时对谷蠹成虫均有明显的触杀作用，2-3d后校正死亡率均达60%以上，但在1.623 mg/cm2浓度时即使3d后校正死亡率不到20，说明土荆芥中活性成分在适宜浓度时对谷蠹成虫的触杀效果很好。相反，土荆芥的3种方法提取物在不同浓度梯度对赤拟谷盗成虫的触杀效果均不明显，说明土荆芥对赤拟谷盗成虫的触杀浓度过低。(3) 在熏蒸实验过程中，土荆芥的3种方法提取物对谷蠹成虫熏蒸效果也比赤拟谷盗成虫的明显，造成这种现象的原因，可能与试虫的活动性以及土荆芥对于不同试虫的作用机理不同有着密切联系。赤拟谷盗的活动性相对于其他种试虫较差，可能在一定程度上降低了熏蒸效果，此结果与水菖蒲乙醇提取物对不同试虫的活性结果是一致的(延静等，2006)。4.2讨论(1)在触杀和熏蒸实验过程中，赤拟谷盗成虫的效果都没有谷蠹成虫的效果的好。可能是由于赤拟谷盗成虫的生理特征原因，姚英娟等在研究水菖蒲生物活性物质-细辛醚对谷蠹和赤拟谷盗的熏蒸和触杀作用时也发现以50uLL的浓度处理120 h后，对玉米象、谷蠢和四纹豆象的击倒作用均达到100，而对赤拟谷盗击倒率为50；玉米象、谷蠹和四纹豆象的死亡率分别为8123，9778和100，而赤拟谷盗死亡率仅为88926。为能较好的了解土荆芥提取物对赤拟谷盗的触杀和熏蒸效果，建议后续研究者在做土荆芥提取物对储粮害虫的触杀和熏蒸实验时，浓度应该适当增加，或者研究赤拟谷盗成虫和幼虫对土荆芥粗提物的作用。(2)在实验中发现，处理重复间存在差异，造成这种现象的原因可能是供试谷蠹和赤拟谷盗的雌雄性别比没有进行严格控制25。 (3)一般说来，使用点滴法测试药剂对试虫的触杀效果是比较准确可靠的。由于本研究所用供试害虫均属鞘翅目昆虫，且为成虫，药剂不易经体壁进入试虫体内，采用点滴法操作难度较大，因此点滴法难以达到预期目的，因而采用滤纸药膜法。此外，由于土荆芥粗提物为油状液体，溶剂挥发后，在滤纸上不易均匀分布，对于活动性强的试虫则可接触更多的药剂，因此本试验所测标准差有所偏大。所以，今后应进一步增加重复次数，或通过加入乳化剂后改进药剂在皿上的均匀性，以此降低试验误差。由于土荆芥粗提物具有一定的挥发性，溶剂挥干后药剂在皿上的实际载药量是随着时间的延长而逐渐降低的，因此各时段药剂在皿上的浓度仅能代表各处理之间的相对浓度。因此，了解土荆芥粗提物杀虫活性和作用对象方面的差异，可为正确推广使用提供依据。此外，土荆芥的粗提物对储粮害虫的作用机理方面研究有待进一步研究。参考文献1 曾伶. 植物次生物质对有机稻谷储藏主要害虫控制作用D. 华南农业大学博士论文, 广东:华南农业大学,2007.2 刘道富, 梁庆文. 不同引诱剂对不同储粮害虫虫种的诱捕试验J. 粮油仓储科技通讯, 2007, 12(4)15: 37-42.3 梁权. 关于目前谷蠢防治问题的讨论. 粮食储藏J, 1995, 24(1):3-8.4 姚英娟, 薛东, 杨长举. 21种植物提取物对玉米象生物活性的初步研究J. 昆虫学报, 2005(05)5 延静, 谢令德, 杨长举等. 水菖蒲提取物对4种储粮害虫的生物活性J. 华中农业大学学报, 2006(05).6 姚英娟, 杨长举, 薛东等. 植物源农药在储粮害虫防治中的应用J. 粮食储藏, 2004, 32(2): 6-9.7 Berger, B. M., Tunc, J., Erler, F. Ovicidal activity of essential oils from five plants against two stored-product insectsJ. Journal of Stored Products Research, 2000, 36(2): 161-168.8 AKHTAR Y, lSMAN M B Comparative growth inhibitorynd antifecdant effects of pIant extracts and pure allelochemicals on four phytophagous insect speciesJ. Appl Ent, 2004, 12(8)32-38.9 黄衍章, 杨长举, 薛东等. 20种药用植物乙醇提取物对谷蠹的触杀和驱避活性J. 昆虫学报, 2008, 12(1):132-138.10 刘春娟. 超声、微波及其协同萃取技术性能评价研究D. 广东:中山大学,2008 . 11 梁正芬, 王茂媛, 王小华等. 毛老虎种籽挥发油气相色谱-质谱联用的研究J. 时珍国医国药. 2010（6）.12 汪河滨, 白红进, 王金等. 超声-微波协同萃取法提取黑果枸杞多糖的研究J. 西北农业学报, 2007, 16(1): 157-158.13 T APO