同胞关系法医学鉴定1例_蒋欢畅.pdf

Journal of Forensic Medicine,February 2023,Vol.39,No.1Waike Zazhi，2019，27（17）：1589-1592.3王玉明，宫慧明，张俊义，等.脊髓灰质炎后综合征的临床表现及诊断J.中国康复理论与实践，2017，23（5）：501-504.doi：10.3969/j.issn.1006-9771.2017.05.002.WANG Y M，GONG H M，ZHANG J Y，et al.Clinical manifestations and diagnosis of post-polio syndrome（review）J.Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian，2017，23（5）：501-504.4李典，吴国华，周明霞，等.交通事故致脊髓灰质炎患者股骨颈骨折法医学鉴定 1例J.法医学杂志，2019，35（5）：636-637.doi：10.12116/j.issn.1004-5619.2019.05.027.LI D，WU G H，ZHOU M X，et al.Forensic identification of femoral neck fracture on poliomyelitis patients caused by traffic accident：A case reportJ.Fayixue Zazhi，2019，35（5）：636-637.（收稿日期：2022-06-23）（本文编辑：王亚辉）同胞关系法医学鉴定1例蒋欢畅1，蒋庆连2，梁瑛琦3，任苹3，林琳3，焦漫丽3，吴淑珍31.温州医科大学第一临床医学院，浙江 温州 325000；2.温州天正司法鉴定所，浙江 温州 325000；3.温州医科大学司法鉴定中心，浙江 温州 325000关键词：法医遗传学；同胞关系；半同胞关系；ITO法；状态一致性；家系重建法中图分类号：DF795.2 文献标志码：B doi：10.12116/j.issn.1004-5619.2022.520106文章编号：1004-5619（2023）01-0110-051案例1.1 简要案情因出国公证需要，古甲、古乙和古丙（均为化名）三姐妹要求对两两之间的同胞关系进行鉴定。1.2 检验方法采集古甲、古乙和古丙 3 人的血样，用 Chelex 法提取检材 DNA。采用 AGCU Expressmarker 22 荧光检测试剂盒、AGCU 21+1 STR 荧光检测试剂盒和AGCU X19 STR 荧光检测试剂盒（无锡中德美联生物技术有限公司）对检材 DNA 进行 PCR 复合扩增。扩 增 产 物 使 用 3500 型 基 因 分 析 仪（美 国 Thermo Fisher Scientific 公司）进行毛细管电泳和基因分型，采 用 GeneMapper ID-X v1.5 软 件（美 国 Thermo Fisher Scientific公司）对分型结果进行基因型分析。1.3 检验结果本案检验的常染色体 STR 基因座包括 AGCU Expressmarker 22 荧 光 检 测 试 剂 盒 的 21 个，增 加AGCU 21+1 STR荧光检测试剂盒后至 39个；检验的X-STR基因座为 AGCU X19 STR荧光检测试剂盒的19个。DNA 等位基因分型结果见表 1。所有样本分型图谱清晰，符合鉴定要求。基金项目：2022年温州市级基础性科研资助项目（N20220031）作者简介：蒋欢畅（2000），女，主要从事亲缘关系研究；E-mail：通信作者：吴淑珍，女，医学硕士，副主任法医师，主要从事法医物证鉴定；E-mail：引用格式：蒋欢畅，蒋庆连，梁瑛琦，等.同胞关系法医学鉴定1例J.法医学杂志，2023，39（1）：110-114.To cied：JANG H C，JIANG Q L，LIANG Y Q，et al.Forensic identification of sibling relationship：A case reportJ.Fayixue Zazhi，2023，39（1）：110-114.案例报道 表1 3个样本常染色体STR和X-STR基因分型结果Tab.1Autosomal STR and X-STR genotype results of 3 samples注：1）X-STR基因分型结果。1.4 结果分析1.4.1 状态一致性评分按照 生物学全同胞关系鉴定技术规范（SF/T 01172021）的方法，分别计算3个样本两两之间的状态一致性（identity by state，IBS）评分，结果见表2。其中古甲与古丙、古乙与古丙在 AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒检测的 21个基因座（19个必检基因座+2个补充基因座）和AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒与AGCU 21+1 STR荧光检测试剂盒检测的 39 个基因座（19 个必检基因座+20 个补充基因座）的累积状态一致性评分（cumulative identity by state，CIBS）均符合规范中关于生物学全同胞阈值（CIBS分别为大于 24和大于 40）的标准，各自满足作为生物学全同胞关系的条件。古甲与古乙在21个基因座的IBS值为22，小于全同胞关系阈值24，大于无关个体阈值14，无法给出倾向性意见；在39个基因座的IBS值为41，刚好大于全同胞关系阈值40。1.4.2 ITO法分析根据陆惠玲等1报道的方法，采用ITO法对古甲、古乙与古丙3人两两之间的全同胞关系指数（full sibling index，FSI）和半同胞关系指数（half sibling index，HSI）进行计算。在AGCU Expressmarker 22试剂盒的21个常染色体STR基因座和AGCU Expressmarker 22与AGCU 21+1 STR试剂盒的39个常染色体STR基因座的计算结果见表 3。所有累积全同胞关系指数（combined full sibling index，CFSI）和累积半同胞关表2 IBS评分结果Tab.2Results of the IBS method 110法 医 学 杂 志 2023年 2月 第39卷 第1期表1 3个样本常染色体STR和X-STR基因分型结果Tab.1Autosomal STR and X-STR genotype results of 3 samples基因座D3S1358D13S317D7S820D16S539Penta ED2S441TPOXTHO1D2S1338CSF1POPenta DD10S1248D19S433vWAD21S11D18S51D6S1043D8S1179D5S818D12S391FGAD6S474D12ATA63D22S1045D1S1677D11S4463D1S1627D3S4529D6S1017D4S2408古甲15/1610/128/11105/2310/118/116/917/2011/129/121412/1316/1829/3114/188/1811/1310/121822/2415/1616/1815/1614/1513/1610/13158/108/10古乙15/178/1011/1210/1112/2310/118/116/717/25129/1013/1515/15.216/1730/3113/1812/1811/1210/1218/192414/1512/1611/1614/1514/1610/1315/1810/138/10古丙15/1710/12111015/2311/1410/117/917/2511/129/101314/15.214/1629/3114/1814/1811/1310/1218/1922/2415/1616/1811/161412/1310/121510/1210/11基因座D17S1301D1GATA113D18S853D20S482D14S1434D9S1122D2S1776D10S1435D5S2500AmelogeninDXS83781）DXS74231）DXS101481）DXS101591）DXS101341）DXS74241）DXS101641）DXS101621）DXS71321）DXS100791）DXS67891）DXS1011）DXS101031）DXS101011）HPRTB1）DXS68091）DXS100751）DXS100741）DXS101351）古甲137/121114/1510/15131212/1314/20X1114/1518/23.124/2734/3814/1510/1116/1813/1520/2116/1725/2718/2032.2/3311/1333/3418/191723/31古乙1271115/1611/1411/129/1212/1317/18X101522.1/28.124/2537/3913/1511/1217/1813/1618/211726/2716/1832/32.21332/341917/1827/29古丙13/147/121114/1514/1511/12121317/18X1114/1518/23.124/2734/3814/1510/1116/1813/1520/2116/1725/2716/2029/3311/1233/3418/191723/31注：1）X-STR基因分型结果。1.4 结果分析1.4.1 状态一致性评分按照 生物学全同胞关系鉴定技术规范（SF/T 01172021）的方法，分别计算3个样本两两之间的状态一致性（identity by state，IBS）评分，结果见表2。其中古甲与古丙、古乙与古丙在 AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒检测的 21个基因座（19个必检基因座+2个补充基因座）和AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒与AGCU 21+1 STR荧光检测试剂盒检测的 39 个基因座（19 个必检基因座+20 个补充基因座）的累积状态一致性评分（cumulative identity by state，CIBS）均符合规范中关于生物学全同胞阈值（CIBS分别为大于 24和大于 40）的标准，各自满足作为生物学全同胞关系的条件。古甲与古乙在21个基因座的IBS值为22，小于全同胞关系阈值24，大于无关个体阈值14，无法给出倾向性意见；在39个基因座的IBS值为41，刚好大于全同胞关系阈值40。1.4.2 ITO法分析根据陆惠玲等1报道的方法，采用ITO法对古甲、古乙与古丙3人两两之间的全同胞关系指数（full sibling index，FSI）和半同胞关系指数（half sibling index，HSI）进行计算。在AGCU Expressmarker 22试剂盒的21个常染色体STR基因座和AGCU Expressmarker 22与AGCU 21+1 STR试剂盒的39个常染色体STR基因座的计算结果见表 3。所有累积全同胞关系指数（combined full sibling index，CFSI）和累积半同胞关表2 IBS评分结果Tab.2Results of the IBS method基因座个数21个39个古甲与古丙2750古乙与古丙2646古甲与古乙2241 111Journal of Forensic Medicine,February 2023,Vol.39,No.1系指数（combined half sibling index，CHSI）值均大于19。所有CFSI CHSI指标中，不论是21个基因座还是39个基因座，古甲与古丙之间的比值都是最大的。1.4.3 X-STR基因座检测分析分析古甲、古乙与古丙 3 人的 19 个 X-STR 等位基因数据（表1），古甲与古丙在每一个X-STR基因座都有相同的等位基因，故不排除两人来源于同一生物学 父 亲；而 古 乙 与 古 甲 在 DXS8378、DXS10148、DXS10134、DXS10135 没有相同的等位基因，古乙与古丙在 DXS8378、DXS10148、DXS10134、DXS10101、HPRTB和 DXS10135没有相同的等位基因。因此，排除古乙与古甲、古乙与古丙来源于同一生物学父亲。1.4.4 家系重建法分析综合 IBS 法、ITO 法及 X-STR 结果分析，可以确定古甲与古丙属于全同胞关系。在此基础上，推断古甲与古丙两人父母可能的基因型组合，进而将其基因型组合和古乙的基因型进行比较分析。古乙有 7个STR 基因座的等位基因不能从古甲与古丙的推断父母基因型组合中全部找到来源，见表4。由表4可见，根据古甲与古丙基因座推断其父母可能的基因型组合一般不止1个，而且其父母基因型中的个别等位基因可能并未出现在古甲与古丙的基因型中。1.4.5 鉴定意见综合以上分析，支持古甲和古丙为全同胞关系，支持古乙与古甲和古丙之间为同母异父的半同胞关系。2讨论复杂亲缘关系的鉴定是法医物证鉴定领域的难点之一2。在同胞关系鉴定案件中，由于各种原因，被鉴定人的父母往往未参与鉴定，因此其基因型未知，增加了同胞关系判断的难度，很多时候仅依靠 IBS法不足以完成鉴定过程，需要联合应用多种方法，相互印证3-6。在本案例中，鉴于古甲与古乙在 21个基因座的 IBS 值无法对两者之间是否全同胞关系给出倾向性意见，因此，有必要通过其他方法进行分析。陆惠玲等7以 CFSI19 与 CFSI1 分别作为全同胞和无关个体的判断标准；以 CHSI19与 CHSI1分别作为半同胞（叔侄）和无关个体的判断标准；以CFSI CHSI1 与 CFSI CHSI1 分别作为全同胞和半同胞的判断标准。根据该判断标准，古甲、古乙与古丙 3人两两之间的 CFSI值和 CHSI值均大于阈值 19，表明彼此之间存在亲缘关系，并不是无关个体。不论是 21个基因座还是 39个基因座，古甲与古丙之间的CFSI值和CFSI CHSI比值在三者间都是最大的，高于上述CFSI19与CFSI CHSI1的判断标准。结合IBS法计算结果，支持古甲与古丙之间为全同胞关系。不论是 21个基因座还是 39个基因座，古甲与古乙之间的 CFSI CHSI 比值显著低于 CFSI CHSI1 的半同胞判断标准。对于古乙与古丙之间，随着基因座数量从21 个增加到 39 个，其 CFSI：CHSI 比值均介于 1 和 19之间。根据陆惠玲等1报道，500对全同胞样本中，约有63对样本的CFSI CHSI比值小于1；50对半同胞样表3 ITO法计算结果Tab.3Results of the ITO method基因座个数21个39个古甲与古丙CFSI2.291 11061.263 41010CHSI1.571 41041.300 8107CFSI CHSI145.8971.3古乙与古丙CFSI1.474 91062.607 0106CHSI1.453 81051.349 4106CFSI CHSI10.11.9古甲与古乙CFSI655.91219.59CHSI7 416.3115 243.63CFSI CHSI0.090.01注：CFSI表示累积全同胞关系指数（combined full sibling index），CHSI表示累积半同胞关系指数（combined half sibling index）。表4 家系重建法推断父母基因型Tab.4Parent genotypes inferred by family reconstruction method基因座Penta ED10S1248D19S433vWAD6S1043D6S1017D17S1301古甲与古丙的推断父母基因型组合（父-母或母-父）23-5/15，5/23-15/23，5/23-5/15，15/23-5/15，5/15-23/M13/14-13/1412/14-13/15.2，12/15.2-13/1416-14/18，16/18-14/16，16/18-14/18，14/16-14/18，14/18-16/M18-8/14，8/18-14/18，8/18-8/14，8/14-14/18，8/14-18/M10-8/12，8/10-10/12，8/10-8/12，8/12-10/12，8/12-10/M13-13/14，13/14-13/14，13/14-13/M组合数5125553古乙的基因型12/2313/1515/15.216/1712/1810/1312注：M代表推断父母基因型组合中未通过遗传出现在古甲与古丙的基因型中的等位基因。以基因型组合23-5/15为例，表示父母中一方的基因型为纯合子即23，另外一方的基因型为杂合子即5/15。112法 医 学 杂 志 2023年 2月 第39卷 第1期本中，约有 4对样本的 CFSI CHSI比值介于 1和 19之间。因此，古乙与古甲和古丙之间可能为全同胞关系，也可能为半同胞关系。X 染色体属人类的性染色体，正常女性有两条，女性的 X染色体来自父母双方。正常男性只有一条X 染色体，来自母亲，并以单倍型形式存在且只能遗传给女儿。X-STR分型能够应用于有女性参与的鉴定。在同父姐妹关系的鉴定中，姐妹在每一个 X-STR 基因座上均应有一个相同的等位基因，否则，在排除突变的情况下，可以否定两人为同父所生8。本案例中，由于古乙与古甲、古乙与古丙之间在多个X-STR基因座没有相同的等位基因，因此排除古乙与古甲、古乙与古丙来源于同一生父。在本案家系重建法分析中，在 39 个 STR 基因座上，古乙有 32 个 STR 基因座的全部等位基因可以从古甲与古丙的推断父母基因型中找到来源，有 7 个STR 基因座的等位基因不能从古甲与古丙的推断父母基因型组合中全部找到来源。如在 Penta E 基因座，古甲与古丙的推断父母基因型有 5 种可能的组合，而古乙的基因型为12/23，等位基因23可以从5种组合中的某一方找到来源，而等位基因 12则从所有组合中均不能找到来源（组合5/15-23/M中的M，代表未出现在古甲与古丙的基因型中的等位基因；由于其和等位基因 23 同时属于父母基因型组合中的某一方，因此，不能作为等位基因12的来源）。因此，排除古乙与古甲和古丙之间为全同胞关系。再从半同胞的角度考察。如果古乙与古甲和古丙之间为半同胞关系，则该个体的每个基因座至少有1个等位基因可以从古甲和古丙两人父母可能的基因型组合中找到来源。在表 4的每个基因座中，古乙都有 1个等位基因能够从相应推断父母基因型组合中找到来源。因此，不排除古乙与古甲和古丙之间为半同胞关系。通过 IBS法和 ITO法计算并结合 X-STR结果，支持古甲和古丙为全同胞关系。通过 IBS法计算，对古乙与古甲和古丙之间是否为全同胞关系无法给出倾向性意见。通过ITO法计算结果，古乙与古甲和古丙之间不是无关个体，可能为全同胞关系，也可能为半同胞关系。结合 X-STR结果，排除古乙与古甲、古丙来自同一生父。通过家系重建法，排除古乙与古甲、古丙之间为全同胞关系，不排除古乙与古甲、古丙之间为半同胞关系。综合以上分析，获得本案例鉴定意见。ITO法是评估2个亲属之间具有各种血缘关系的常用方法，但是该方法在应用过程中仍然存在错判和漏判的现象。据陆惠玲等1报道，500对全同胞中，有63对被判为半同胞，占 12.6%；50对半同胞中，有 6对被判为全同胞，占 12.0%。因此，对于 ITO 法计算结果，最好结合其他方法综合分析。在多个成员参与的同胞关系鉴定中，与单纯在2 个体之间采用 ITO 法或 IBS 法鉴定相比，家系重建法能够充分利用被鉴定人的遗传信息，在数据分析环节获得更高的鉴定效能9。参与家系重建的成员越多，所推断出来的基因型组合就越接近真实亲缘关系。但是其难点在于推断家系基因型组合的过程比较烦琐9-10。在应用常染色体STR基因座进行亲缘关系鉴定的同时，结合性染色体X-STR或Y-STR基因座检测以及线粒体测序结果等辅助信息，能够更好地确保判断的准确性，如应用X-STR基因座检测2个或多个女儿是否来自同一生物学父亲，应用Y-STR基因座检测2个或多个男性个体是否来自同一父系祖先，应用线粒体测序结果判断两个或多个个体是否来自同一母系8。总之，对于包括同胞鉴定在内的复杂亲缘关系鉴定，最好联合应用多种方法，相互佐证，确保鉴定的科学性，减少误判。参考文献：1陆惠玲，杨庆恩.用 ITO法计算两个体间的血缘关系机会J.中国法医学杂志，2002，17（3）：188-191.doi：10.13618/j.issn.1001-5728.2002.03.039.LU H L，YANG Q G.Calculating kinship priority between two individuals by ITO method J.Zhongguo Fayixue Zazhi，2002，17（3）：188-191.2李梅，李诗莹，张倍倍，等.复杂亲缘关系鉴定的研究进展J.法医学杂志，2020，36（5）：691-698.doi：10.12116/j.issn.1004-5619.2020.05.016.LI M，LI S Y，ZHANG B B，et al.Research progress on complex kinship analysisJ.Fayixue Zazhi，2020，36（5）：691-698.3孙云龙，杨金龙，穆立伟，等.IBS法和 ITO 法应用于全同胞鉴定中的探讨J.中山大学学报（医学科学版），2014，35（3）：465-468.doi：10.13471/ki.j.sun.yat-sen.univ（med.sci）.2014.0077.SUN Y L，YANG J L，MU L W，et al.Discuss IBS and ITO methods using in full sibling identificationJ.Zhongshan Daxue Xuebao（Medical sciences），2014，35（3）：465-468.4谢波，杨平，余政梁，等.多系统联合分析在复杂亲缘关系鉴定中的应用评估J.中国法医学杂志，2021，36（2）：173-176，180.doi：10.13618/j.issn.1001-5728.2021.02.012.XIE B，YANG P，YU Z L，et al.Application evaluation of varied DNA-testing systems co-assessment in complex kinship samples testingJ.Zhongguo Fayi-xue Zazhi，2021，36（2）：173-176，180.5武红艳，张林，王克杰，等.多种判定方法在半同胞姐妹关系鉴定中的综合应用J.中国法医学杂志，2018，33（1）：55-57，61.doi：10.13618/j.issn.1001-5728.2018.113Journal of Forensic Medicine,February 2023,Vol.39,No.101.013.WU H Y，ZHANG L，WANG K J，et al.Comprehensive application of multiple methods in determination of half-sibling relationshipJ.Zhongguo Fayixue Zazhi，2018，33（1）：55-57，61.6陈婷婷，孙丽娟，马娅萍，等.多种遗传标记在一起同母异父半同胞关系鉴定中的综合应用J.中国生育健康 杂 志，2021，32（6）：577-580.doi：10.3969/j.issn.1671-878X.2021.06.015.CHEN T T，SUN L J，MA Y P，et al.Application of multiple polymorphism genetic markers in a case study of half sibling sharing a same motherJ.Zhongguo Shengyu Jiankang 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