学术讨论—第六章-兽药残留检测技术2011.ppt

第六章 兽药残留(cnli)检测技术第一节第一节 兽药残留兽药残留(cnli)第一页，共一百二十一页。使用使用(shyng)兽药的目的兽药的目的l防治食品动物防治食品动物(dngw)疾病疾病l促进生长促进生长l提高饲料利用率提高饲料利用率第二页，共一百二十一页。兽药的使用兽药的使用(shyng)情况情况l据据19661974年统计年统计,美国大约美国大约(dyu)已有已有78%80%的的食品动物食品动物,在其一生中或多或少服用过药物。在其一生中或多或少服用过药物。第三页，共一百二十一页。兽药的残留兽药的残留(cnli)l兽药残留兽药残留是指动物性产品的任何可食部分含有兽药是指动物性产品的任何可食部分含有兽药母化合物或其代谢物。母化合物或其代谢物。l兽药最高残留限量兽药最高残留限量（MRL）：是指某种兽药而在食物）：是指某种兽药而在食物中或食物表面产生的的最高允许兽药残留量（单位中或食物表面产生的的最高允许兽药残留量（单位g/kg,以鲜重计）。以鲜重计）。l兽药残留主要是由于各种正常用药和药物滥用造成兽药残留主要是由于各种正常用药和药物滥用造成的的,另外另外,休药期过短休药期过短,是造成动物性食品兽药残留过是造成动物性食品兽药残留过量的另一个量的另一个(y)重要原因。重要原因。l休药期休药期：是指自末次给药到动物允许屠宰或其动物性产：是指自末次给药到动物允许屠宰或其动物性产品（乳、蛋等）获准上市的间隔时间。品（乳、蛋等）获准上市的间隔时间。第四页，共一百二十一页。兽药的危害兽药的危害(wihi)l引起引起(ynq)过敏、致畸、致突变过敏、致畸、致突变及及致癌致癌等不等不良反应。良反应。第五页，共一百二十一页。立法立法(l f)l为防止动物性食品中可能出现的药物残留损害人体健康为防止动物性食品中可能出现的药物残留损害人体健康,1984年在年在CAC的倡导下由联合国粮农组织的倡导下由联合国粮农组织(FAO)和世界卫生组织和世界卫生组织(WHO)联合发起组织了联合发起组织了食品中兽药残留立法委员会食品中兽药残留立法委员会(CCRVDF)。lCCRVDF的主要宗旨是的主要宗旨是:为控制食品中的兽药残留为控制食品中的兽药残留,筛选并建立筛选并建立适用适用(shyng)于全球的兽药及其他化学物残留的分析方法和取样于全球的兽药及其他化学物残留的分析方法和取样方法方法;对兽药残留进行毒理学评价对兽药残留进行毒理学评价;按制订世界或地区性法规按制订世界或地区性法规标准标准(Codex Standart)的的8个步骤个步骤,制定动物组织及产品中制定动物组织及产品中兽药兽药最高残留限量最高残留限量(MRL)法规及休药期法规法规及休药期法规。第六页，共一百二十一页。一、常见一、常见(chn jin)兽药兽药按用途按用途(yngt)分类分类抗微生物药抗微生物药抗寄生虫药抗寄生虫药激素类药物激素类药物(yow)生长促进剂生长促进剂抗菌药：抗菌药：磺胺药、呋喃类药、喹诺酮类磺胺药、呋喃类药、喹诺酮类抗病毒药：抗病毒药：干扰素干扰素抗蠕虫药抗蠕虫药抗原虫药抗原虫药杀虫药杀虫药抗生素：抗生素：青霉素、链霉素、氯霉素青霉素、链霉素、氯霉素第七页，共一百二十一页。1 1、抗微生物药、抗微生物药l抗微生物药是指对病原微生物抗微生物药是指对病原微生物(细菌、真细菌、真菌、支原体、病毒等菌、支原体、病毒等)具抑制或杀灭作用具抑制或杀灭作用,主要有用于全身主要有用于全身(qun shn)感染的抗生素、磺感染的抗生素、磺胺药及其他化学合成抗菌药。胺药及其他化学合成抗菌药。第八页，共一百二十一页。根据根据(gnj)(gnj)化学结构可分类为化学结构可分类为:l(1)氨基糖苷氨基糖苷(tnggn)类：类：链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新链霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、大观霉素、安普霉素等。霉素、大观霉素、安普霉素等。l(2)-内酰胺类：内酰胺类：青霉素、头孢菌素等。青霉素、头孢菌素等。l(3)四环素类：四环素类：土霉素、金霉素、多西环素等。土霉素、金霉素、多西环素等。l(4)氯霉素类：氯霉素类：氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考等。l(5)大环内酯类：大环内酯类：红霉素、吉他霉素、泰乐菌素等。红霉素、吉他霉素、泰乐菌素等。l(6)林可胺类：林可胺类：林可霉素、克林霉素。林可霉素、克林霉素。l(7)多肽类：多肽类：杆菌肽、黏菌素等。杆菌肽、黏菌素等。第九页，共一百二十一页。l(8)多烯类：两性霉素、制霉菌素等。多烯类：两性霉素、制霉菌素等。l(9)磺胺类及抗菌增效剂：磺胺类及抗菌增效剂：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺异磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺异唑、磺胺甲基异唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶等。唑、磺胺甲基异唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶等。l(10)硝基硝基(xio j)呋喃类：呋喃西林、呋喃他酮、呋喃要因、呋喃唑呋喃类：呋喃西林、呋喃他酮、呋喃要因、呋喃唑酮等。酮等。l(11)喹诺酮类：萘啶酸、吡哌酸、嗯喹酸、诺氟沙星、环丙沙星、喹诺酮类：萘啶酸、吡哌酸、嗯喹酸、诺氟沙星、环丙沙星、奥比沙星、沙拉沙星、马波沙星等。奥比沙星、沙拉沙星、马波沙星等。第十页，共一百二十一页。2 2、抗寄生虫药、抗寄生虫药l抗寄生虫药是指能杀灭或驱除动物体内外寄生虫的药物。抗寄生虫药是指能杀灭或驱除动物体内外寄生虫的药物。l畜禽寄生虫病的危害性极大畜禽寄生虫病的危害性极大,会给国民经济造成无法估量的巨大会给国民经济造成无法估量的巨大(jd)(jd)经济损失。经济损失。l寄生虫病不仅引起大批畜禽死亡寄生虫病不仅引起大批畜禽死亡,而且严重影响动物生长率而且严重影响动物生长率,使使乳、肉、蛋、毛、革等畜产品质量下降乳、肉、蛋、毛、革等畜产品质量下降,数量减少。数量减少。l某些人畜共患寄生虫病某些人畜共患寄生虫病,还能直接威胁人类的健康和生命安全。还能直接威胁人类的健康和生命安全。第十一页，共一百二十一页。根据药物根据药物(yow)(yow)作用的特点，抗寄生虫药可分为作用的特点，抗寄生虫药可分为:l(1)抗蠕虫药：抗蠕虫药：苯并咪唑苯并咪唑(m zu)类、咪唑类、咪唑(m zu)并噻唑类、有并噻唑类、有机磷酸酯类、四氢嘧啶类、水杨酰苯胺类、阿维菌素类、哌机磷酸酯类、四氢嘧啶类、水杨酰苯胺类、阿维菌素类、哌嗪衍生物等。嗪衍生物等。l(2)抗原虫药：抗原虫药：聚醚类离子载体抗生素、三嗪类、二硝聚醚类离子载体抗生素、三嗪类、二硝基类、氯羟吡啶。基类、氯羟吡啶。l(3)杀虫药：杀虫药：有机磷化合物、拟除虫菊酯类化合物等。有机磷化合物、拟除虫菊酯类化合物等。第十二页，共一百二十一页。3 3、激素与其他、激素与其他(qt)(qt)生长促进剂生长促进剂(1)性激素性激素l动物生产中使用的性激素动物生产中使用的性激素,包括雌性激素包括雌性激素(如如:雌二醇、己烯雌雌二醇、己烯雌酚酚(己烷雌酚、甲地孕酮、雌烯酮等己烷雌酚、甲地孕酮、雌烯酮等)和雄性激素和雄性激素(如如:甲基睾丸甲基睾丸酮、丙酸睾酮、氯睾酮酮、丙酸睾酮、氯睾酮)。(2)生长激素生长激素 l是由动物脑垂体分泌的天然蛋白质激素是由动物脑垂体分泌的天然蛋白质激素,主要通过促进蛋白质主要通过促进蛋白质合成和脂肪分解来促进动物生长合成和脂肪分解来促进动物生长,增加瘦肉率增加瘦肉率,提高饲料提高饲料(slio)转转化率。目前在畜牧业生产中使用的主要有牛生长激素化率。目前在畜牧业生产中使用的主要有牛生长激素(BST)和猪生长激素和猪生长激素(PST)。第十三页，共一百二十一页。(3)甲状腺素甲状腺素,类甲状腺素及抗甲状腺素。类甲状腺素及抗甲状腺素。(4)人工合成的蛋白质同化激素人工合成的蛋白质同化激素 l人工合成的蛋白质同化激素可促进动物脑下垂体生长激素的人工合成的蛋白质同化激素可促进动物脑下垂体生长激素的分泌。与抗生素一样分泌。与抗生素一样,伴随着激素活性物质在畜禽生产中的使用伴随着激素活性物质在畜禽生产中的使用种类和数量的不断增加种类和数量的不断增加,反对使用的呼声也越来越高。反对使用的呼声也越来越高。(5)镇静剂和镇静剂和-肾上腺素阻断剂肾上腺素阻断剂 l为了控制被运输及等待屠宰的动物的紧张为了控制被运输及等待屠宰的动物的紧张,有些畜牧业会非法使有些畜牧业会非法使用镇静剂和肾上腺素阻滞剂。因为猪对于它们所处环境的用镇静剂和肾上腺素阻滞剂。因为猪对于它们所处环境的突然变化特别敏感突然变化特别敏感,随之产生随之产生(chnshng)的新陈代谢和紧张会影的新陈代谢和紧张会影响肉的质量。响肉的质量。第十四页，共一百二十一页。二、常见兽药残留的种类二、常见兽药残留的种类(zhngli)(zhngli)与危害与危害 1.1.抗生素类药物抗生素类药物l多为天然发酵产物多为天然发酵产物(chnw),是临床应用最多是临床应用最多的一类抗菌药物的一类抗菌药物,如青霉素类、氨基糖苷如青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、螺旋霉素、类、大环内酯类、四环素类、螺旋霉素、链霉素、土霉素、金霉素等。链霉素、土霉素、金霉素等。第十五页，共一百二十一页。2.2.磺胺类药物磺胺类药物(yow)(yow)l主用于抗菌消炎主用于抗菌消炎,如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶啶,磺胺眯磺胺眯,菌得清、新诺明等。菌得清、新诺明等。l近年来近年来,磺胺类药物在动物性食品中的残留磺胺类药物在动物性食品中的残留超标现象超标现象,在所有在所有(suyu)兽药当中是最严重的。兽药当中是最严重的。第十六页，共一百二十一页。3.3.硝基硝基(xio j)(xio j)呋喃类药物呋喃类药物l主用于抗菌消炎主用于抗菌消炎,如呋喃唑酮、呋喃西林如呋喃唑酮、呋喃西林(fnnxln)、呋喃妥因、呋喃妥因等。等。第十七页，共一百二十一页。4.4.抗寄生虫类药物抗寄生虫类药物l主要用于驱虫或杀虫主要用于驱虫或杀虫,如苯并咪唑、左旋咪如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。唑、克球酚、吡喹酮等。l而常用而常用(chn yn)的苯并咪唑类抗寄生虫药物的苯并咪唑类抗寄生虫药物有丙硫苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲有丙硫苯咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑、丁苯咪唑等。苯咪唑、丁苯咪唑等。第十八页，共一百二十一页。5.5.激素类药物激素类药物(yow)(yow)l主要用于提高主要用于提高(t go)动物的繁殖和加快生长发动物的繁殖和加快生长发育速度育速度,使用于动物的激素有性激素和皮质使用于动物的激素有性激素和皮质激素。而以性激素激素。而以性激素(包括多种内源性性激素、包括多种内源性性激素、人工合成的类似性激素的类固醇化合物、人工合成的类似性激素的类固醇化合物、人工合成的具有性激素某些特性的非类固人工合成的具有性激素某些特性的非类固醇化合物醇化合物)最常用最常用,如孕酮、睾酮、雌二醇、如孕酮、睾酮、雌二醇、甲基睾酮甲基睾酮,丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇、己烯丙酸睾酮、苯甲酸雌二醇、己烯孕酮等。孕酮等。第十九页，共一百二十一页。二、食物二、食物(shw)(shw)中兽药残留中兽药残留(1)兽药残留兽药残留l兽药残留兽药残留是指是指动物产品的任何食用部分所动物产品的任何食用部分所含兽药的母体含兽药的母体(mt)化合物及其代谢物，以化合物及其代谢物，以及与兽药有关的杂质的残留及与兽药有关的杂质的残留。第二十页，共一百二十一页。(2)兽药残留兽药残留(cnli)的来源的来源l在食品动物体内或动物性食品中发现的违章残留在食品动物体内或动物性食品中发现的违章残留,大都是由用药错误造成的大都是由用药错误造成的,其原因主要有其原因主要有:不正确地应用药物不正确地应用药物,如用药剂量、给药途径、用药部位和如用药剂量、给药途径、用药部位和用药动物的种类等不符合用药指示用药动物的种类等不符合用药指示,这些因素有可能延这些因素有可能延长药物残留在体内的时间长药物残留在体内的时间,从而需要增加休药的天数从而需要增加休药的天数;在休药期结束前屠宰动物在休药期结束前屠宰动物;屠宰前用药掩饰临床症状屠宰前用药掩饰临床症状,以逃避屠宰前检查以逃避屠宰前检查;以未经批准以未经批准(p zhn)药物作为添加剂饲喂动物药物作为添加剂饲喂动物;第二十一页，共一百二十一页。药物标签上的用法指示不当药物标签上的用法指示不当,造成违章残留物造成违章残留物;饲料粉碎设备受污染饲料粉碎设备受污染或将盛过抗菌药物的容器或将盛过抗菌药物的容器(rngq)用于用于贮藏饲料贮藏饲料;接触接触厩舍粪尿池中含有抗生素等药物的厩舍粪尿池中含有抗生素等药物的废水和排放废水和排放的污水的污水(如猪经常摄入这种污水如猪经常摄入这种污水);任意以抗生素药渣喂猪或其他食品动物等滥用抗生素任意以抗生素药渣喂猪或其他食品动物等滥用抗生素,是出现抗生素残留的主要原因。是出现抗生素残留的主要原因。第二十二页，共一百二十一页。(3)兽药残留的种类兽药残留的种类(zhngli)(形式形式)l第一类是以第一类是以游离或结合形式存在的原药及其主要代谢物游离或结合形式存在的原药及其主要代谢物(除高除高亲脂性化合物外亲脂性化合物外),因代谢和排泄迅速因代谢和排泄迅速,不会在动物体内蓄积。但这不会在动物体内蓄积。但这些物质可能具有毒性作用些物质可能具有毒性作用,而且被人摄入后在体内可生成高度而且被人摄入后在体内可生成高度活化的中间产物活化的中间产物(亲电子基团、自由基等亲电子基团、自由基等),因而对消费者具有因而对消费者具有潜在的危害性。潜在的危害性。l第二类是第二类是共价结合代谢物共价结合代谢物,因其从机体排出相对较慢因其从机体排出相对较慢,它们的存它们的存在对于靶动物有潜在的毒性作用在对于靶动物有潜在的毒性作用,而对于消费者而对于消费者,由于结合残留由于结合残留在人体内不可能再活化在人体内不可能再活化,其生物其生物(shngw)利用率和含量均低利用率和含量均低,可能可能只显示很低的毒性。只显示很低的毒性。第二十三页，共一百二十一页。l残留毒理学意义较大的兽药按其用途分类残留毒理学意义较大的兽药按其用途分类(fn li)主要包括主要包括:l抗生素类、合成抗菌素类、抗寄生虫类药、生长促进剂和抗生素类、合成抗菌素类、抗寄生虫类药、生长促进剂和杀虫剂等。杀虫剂等。l抗生素和抗菌素统称抗微生物药物抗生素和抗菌素统称抗微生物药物,是最主要的兽药添加剂和兽是最主要的兽药添加剂和兽药残留药残留,约占药物添加剂的约占药物添加剂的60%。第二十四页，共一百二十一页。(4)影响食品动物组织影响食品动物组织(zzh)中药物残留的因素中药物残留的因素l经内服或注射给药的动物经内服或注射给药的动物,其组织中存在的药物及其代谢物或其组织中存在的药物及其代谢物或降解产物的残留。降解产物的残留。l组织中药物残留随药物种类组织中药物残留随药物种类(zhngli)、剂量、给药途径、药物及其、剂量、给药途径、药物及其代谢物特性的不同而异。代谢物特性的不同而异。l在有些情况下在有些情况下,饲料也会影响动物组织中的药物残留饲料也会影响动物组织中的药物残留,但但药物休药药物休药期的执行情况期的执行情况是影响组织残留的最重要因素。是影响组织残留的最重要因素。l屠宰后胴体加工过程也是影响药物残留检出率的因素之一。屠宰后胴体加工过程也是影响药物残留检出率的因素之一。l烹调和贮藏温度亦影响残留药物在组织中的稳定性。烹调和贮藏温度亦影响残留药物在组织中的稳定性。第二十五页，共一百二十一页。l对于对于(duy)大多数抗微生物药来说大多数抗微生物药来说,药物从动物体内消除属药物从动物体内消除属一级动力学一级动力学,而大多数组织中药物残留抗微生物活性的丧失而大多数组织中药物残留抗微生物活性的丧失是一个零级动力学过程。这表示药物残留量越多是一个零级动力学过程。这表示药物残留量越多,它们从食它们从食用组织中消除所需的时间就越长。用组织中消除所需的时间就越长。l如果药物添加剂是亲脂性的如果药物添加剂是亲脂性的,那么它们会蓄积在脂肪组织中那么它们会蓄积在脂肪组织中,而且其消除速度明显比亲水性药物慢。而且其消除速度明显比亲水性药物慢。l实际上实际上,存在于家禽食用组织、牛肉、羊肉、乳和蛋中的药存在于家禽食用组织、牛肉、羊肉、乳和蛋中的药物残留的种类和发生率差异较大。物残留的种类和发生率差异较大。这是动物屠宰前或其乳这是动物屠宰前或其乳和蛋上市前停止用药时间长短的一种反映。和蛋上市前停止用药时间长短的一种反映。第二十六页，共一百二十一页。四、兽药残留四、兽药残留(cnli)的现状与法规的现状与法规l兽药残留主要是由于兽药残留主要是由于不合理使用药物治疗动物疾病不合理使用药物治疗动物疾病和作为和作为饲饲料料(slio)药物添加剂药物添加剂而引起的。而引起的。l1990年出口日本的年出口日本的1万吨肉鸡万吨肉鸡,由于检测出抗球虫药氯羟吡啶的残由于检测出抗球虫药氯羟吡啶的残留量超标留量超标,要求我国政府销毁所有产品要求我国政府销毁所有产品,给我国造成很大经济损失。给我国造成很大经济损失。l出口到德国的蜂蜜由于农药出口到德国的蜂蜜由于农药“杀虫脒杀虫脒”残留超标而被退货残留超标而被退货,接着接着欧共体、美国、日本也相继拒绝进口我国蜂蜜欧共体、美国、日本也相继拒绝进口我国蜂蜜,使我国蜂蜜在使我国蜂蜜在世界市场上的销售发生严重因难。世界市场上的销售发生严重因难。l1998年年4月月,从内地出口到香港的生猪从内地出口到香港的生猪,其内脏食后导致其内脏食后导致17人中毒。人中毒。其原因是内脏中含有违禁药其原因是内脏中含有违禁药“盐酸克仑特罗盐酸克仑特罗”。l此外此外,我国出口的畜禽产品还多次出现安眠酮类、雌性激素、抗生素我国出口的畜禽产品还多次出现安眠酮类、雌性激素、抗生素等药物残留超标而被取消出口的事件。等药物残留超标而被取消出口的事件。第二十七页，共一百二十一页。l1995年、年、1996年年,欧盟兽医委员会派员对我国进行了考察和评估欧盟兽医委员会派员对我国进行了考察和评估,认为我国的兽医卫生状况达不到欧盟的要求认为我国的兽医卫生状况达不到欧盟的要求,于是做出了从于是做出了从1996年年8月月1日起日起,禁止从我国进口禽肉的决定。禁止从我国进口禽肉的决定。l1997年、年、1998年欧盟又派员来华考察年欧盟又派员来华考察,结果仍达不到其要求。结果仍达不到其要求。目前目前,我国肉、蛋、奶的出口形势仍相当严峻。我国肉、蛋、奶的出口形势仍相当严峻。l我国已开始重视动物性食品中的兽药残留问题我国已开始重视动物性食品中的兽药残留问题,制订了各种制订了各种(zhn)兽药残留的法律和法规兽药残留的法律和法规,修订了修订了动物性食品中兽药残留动物性食品中兽药残留最高限量标准最高限量标准,并开始建立了全国范围的兽药残留监控体系。并开始建立了全国范围的兽药残留监控体系。第二十八页，共一百二十一页。第二十九页，共一百二十一页。第六章 兽药残留检测(jin c)技术第二节第二节 样品样品(yngpn)前处理前处理第三十页，共一百二十一页。l样品前处理样品前处理是指样品的是指样品的制备制备和对样品中的待测组分进行和对样品中的待测组分进行(jnxng)提取、净化、浓缩提取、净化、浓缩的过程。的过程。l样品前处理的样品前处理的目的目的是消除基质干扰、保护仪器、提高检测方是消除基质干扰、保护仪器、提高检测方法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。法的灵敏度、选择性、准确度、精密度。l不同样品前处理方法的选择，需要根据样品中危害残留物质不同样品前处理方法的选择，需要根据样品中危害残留物质的特点。的特点。l残留分析中的样品主要是各种食用组织残留分析中的样品主要是各种食用组织(肌肉、脂肪、肝、肌肉、脂肪、肝、肾、皮、血液、蛋、奶及其加工食品肾、皮、血液、蛋、奶及其加工食品)。l活体检测中一般采集血浆、尿液和粪便活体检测中一般采集血浆、尿液和粪便;l屠宰场主要采集某种药物的靶组织及其他高浓度的样本屠宰场主要采集某种药物的靶组织及其他高浓度的样本,如如肝、肾、胆汁、注射部位的组织等。肝、肾、胆汁、注射部位的组织等。第三十一页，共一百二十一页。一、生物一、生物(shngw)样品的类型样品的类型l兽药残留分析中兽药残留分析中,最常用的生物样品是最常用的生物样品是组织样品组织样品,其次是其次是奶、血液奶、血液和尿液样品和尿液样品。(1)动物组织动物组织 l肌肉肌肉(除去可见的脂肪除去可见的脂肪)中水分约占中水分约占75%,蛋白质蛋白质(肌浆蛋白、肌原肌浆蛋白、肌原蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白蛋白、胶原蛋白和弹性蛋白)占占19.0%、脂肪、脂肪(中性脂肪、脂肪酸中性脂肪、脂肪酸和磷脂和磷脂)占占2.5%、糖类、糖类1.2%,以及一些以及一些(yxi)无机盐、维生素和酶类。无机盐、维生素和酶类。l肌浆蛋白肌浆蛋白(肌红蛋白、糖解酶肌红蛋白、糖解酶)可溶于水可溶于水,肌原蛋白肌原蛋白(肌球蛋白、肌肌球蛋白、肌动蛋白动蛋白)溶于浓盐水溶于浓盐水,胶原蛋白和弹性蛋白胶原蛋白和弹性蛋白(结缔组织结缔组织)在上述溶剂在上述溶剂中均不溶。中均不溶。第三十二页，共一百二十一页。l不同种类动物的食物构成和肌肉的成分不同种类动物的食物构成和肌肉的成分,如家禽和牛的肌红蛋白如家禽和牛的肌红蛋白和脂肪含量存在差异和脂肪含量存在差异,这些变化会影响这些变化会影响分析方法分析方法的的回收率回收率或或干干扰扰(gnro)检测检测,因此因此一种动物组织的残留分析方法对其他动一种动物组织的残留分析方法对其他动物组织样品不一定适用物组织样品不一定适用。l例如例如,用水提取鸡肉和牛肉组织中呋喃唑酮用水提取鸡肉和牛肉组织中呋喃唑酮,回收率在回收率在75%以上以上;同样的方法提取猪肌肉样品同样的方法提取猪肌肉样品,回收率仅为回收率仅为10%,改用改用25%乙腈乙腈提取时回收率明显提高提取时回收率明显提高,推测呋喃唑酮与猪肉中某种蛋白质结推测呋喃唑酮与猪肉中某种蛋白质结合较强。合较强。l肝或肾肝或肾组织为代谢或排泄器官组织为代谢或排泄器官,残留物浓度高残留物浓度高,消除缓慢消除缓慢,因此因此常常被作为残留检测的靶组织被作为残留检测的靶组织。第三十三页，共一百二十一页。(2)尿样尿样l尿液的主要成分是水、尿素及盐类。它是一种良好的细菌培养尿液的主要成分是水、尿素及盐类。它是一种良好的细菌培养基基,因而需立即因而需立即冷藏冷藏或或防腐防腐处理。处理。l冷藏条件一般可置冷藏条件一般可置4 冰箱内。冰箱内。l若欲在室温下保存若欲在室温下保存,应在收集尿样后应在收集尿样后,立即加入防腐剂。常用的立即加入防腐剂。常用的防防腐剂腐剂有甲苯、氯仿或改变尿液的酸碱性有甲苯、氯仿或改变尿液的酸碱性,以抑制以抑制(yzh)细菌的繁殖。细菌的繁殖。l加入的防腐剂是否干扰测定或与被测组分发生化学反应加入的防腐剂是否干扰测定或与被测组分发生化学反应,应由应由实验验证实验验证,以便选取合适的防腐措施。以便选取合适的防腐措施。第三十四页，共一百二十一页。l在所有体液样品在所有体液样品(yngpn)中中,尿样最容易获得尿样最容易获得,并且样品量多并且样品量多,内内含药物含药物(母体药物及代谢物母体药物及代谢物)浓度高浓度高;正常尿液中仅含微量蛋白正常尿液中仅含微量蛋白质质,不需去蛋白不需去蛋白处理。处理。l尿中药物大多呈尿中药物大多呈结合状态结合状态,主要以主要以葡萄苷酸葡萄苷酸和和硫酸酯硫酸酯结合物存结合物存在在,因此无论直接测定或萃取分离之前因此无论直接测定或萃取分离之前,都必须将都必须将结合态的药结合态的药物水解物水解,使药物游离出来。使药物游离出来。l尿样尿样pH变化范围大变化范围大,分析前需分析前需调节调节到一致的到一致的pH值值。第三十五页，共一百二十一页。(3)血样血样l血液采集好之后血液采集好之后,由于激活了一系列凝血因子由于激活了一系列凝血因子,血中血中的的纤维蛋白原纤维蛋白原形成形成纤维蛋白纤维蛋白,血液逐渐凝固血液逐渐凝固,上层析出上层析出澄清的黄色澄清的黄色(hungs)液体称为液体称为血清血清(serum)。l分离血清时分离血清时,可将凝结后的血液置离心机中离心可将凝结后的血液置离心机中离心,将将上层血清转入另外容器中保存上层血清转入另外容器中保存,得到的血清得到的血清,一般可占一般可占全血量的全血量的40%左右。左右。第三十六页，共一百二十一页。l若采血后立即将血液转入有抗凝剂若采血后立即将血液转入有抗凝剂(常用常用肝素肝素)的容器的容器中中,并轻轻摇匀并轻轻摇匀,则血液不再凝结则血液不再凝结,放置放置(fngzh)后血细胞会后血细胞会缓缓沉降缓缓沉降,12h沉降完全沉降完全,上层的黄色液体称为上层的黄色液体称为血浆血浆(plasma)。l离心使上层血浆与下层血细胞充分分离离心使上层血浆与下层血细胞充分分离,将血浆转移将血浆转移至另一容器内供分析。至另一容器内供分析。l血液通过抗凝获得的血浆量血液通过抗凝获得的血浆量,一般比血清稍多一般比血清稍多,接近全接近全血量的血量的50%。第三十七页，共一百二十一页。第三十八页，共一百二十一页。l若抗凝血不离心若抗凝血不离心,保持血浆和血细胞混合在一起保持血浆和血细胞混合在一起,则称为则称为全血全血(whole blood)。l全血样品可冷冻贮存或直接供分析。全血样品可冷冻贮存或直接供分析。l全血样品放置或自贮存处取出解冻之后全血样品放置或自贮存处取出解冻之后,可明显分为上、下两层可明显分为上、下两层,上上层层为为血浆血浆,下层下层为为血细胞血细胞,但轻微摇动但轻微摇动(yo dng)即可混匀。即可混匀。l血浆和血清的化学成分与组织液相近血浆和血清的化学成分与组织液相近,测定血浆或血清中药物浓度测定血浆或血清中药物浓度,比全血更能反映作用部位药浓的变化比全血更能反映作用部位药浓的变化,测定方法一般也可互相通测定方法一般也可互相通用。因为从抗凝血制备血浆的速度较快用。因为从抗凝血制备血浆的速度较快,并且分离出的血浆量比并且分离出的血浆量比血清多血清多,所以应用血浆比较方便所以应用血浆比较方便;若血浆中含有抗凝剂对测定有影若血浆中含有抗凝剂对测定有影响响,则应使用血清样品。则应使用血清样品。第三十九页，共一百二十一页。l通常通常药物药物在血浆中均与血浆蛋白在血浆中均与血浆蛋白(白蛋白、球蛋白、糖蛋白、白蛋白、球蛋白、糖蛋白、脂蛋白脂蛋白)发生一定发生一定(ydng)程度的程度的结合结合,一些药物甚至蛋白结合率一些药物甚至蛋白结合率可达可达90%以上。因此以上。因此在萃取之前在萃取之前,必须将结合态的药物游离出必须将结合态的药物游离出来来。第四十页，共一百二十一页。(4)奶样奶样l牛奶牛奶(ni ni)的含水量约的含水量约87%,蛋白质蛋白质(以酪蛋白为主以酪蛋白为主)为为3.3%,脂肪脂肪(甘甘油三酯油三酯)为为3.7%,糖类糖类(乳糖乳糖)为为4.7%,以及一些无机盐、维生素以及一些无机盐、维生素和酶类和酶类(过氧化物酶、脂肪酶等过氧化物酶、脂肪酶等)。l奶是一种复杂的非均相体系。奶是一种复杂的非均相体系。l乳脂球的主要成分为乳脂乳脂球的主要成分为乳脂,表面包以由酪蛋白、类脂、酶、无机表面包以由酪蛋白、类脂、酶、无机盐和水分构成膜盐和水分构成膜,使乳球能稳定地悬浮在奶中并保护内部的乳脂免使乳球能稳定地悬浮在奶中并保护内部的乳脂免遭脂肪酶的水解遭脂肪酶的水解,当剧烈振荡时球膜被破坏当剧烈振荡时球膜被破坏,脂肪球即相互黏脂肪球即相互黏合析出。合析出。l奶中还含有大量由酪蛋白或脂蛋白构成的胶束体系奶中还含有大量由酪蛋白或脂蛋白构成的胶束体系,当酸化或当酸化或加热时加热时,胶束结构解体胶束结构解体,蛋白质沉淀析出。蛋白质沉淀析出。第四十一页，共一百二十一页。l非解离性的或极性较低的药物非解离性的或极性较低的药物易由血浆向奶中扩散易由血浆向奶中扩散,导致奶中残导致奶中残留。留。l与血浆样品类似与血浆样品类似,奶中的药物可与蛋白质结合奶中的药物可与蛋白质结合。l因此在萃取之前因此在萃取之前,必须必须将结合态的药物游离将结合态的药物游离(yul)出来出来。第四十二页，共一百二十一页。(5)蛋蛋l禽蛋包括蛋黄和蛋清。禽蛋包括蛋黄和蛋清。l蛋黄的含水量约蛋黄的含水量约50%、蛋白质、蛋白质16.5%、脂肪、脂肪33%、糖类、糖类0.2%,以及一些无机盐、维生素和酶类以及一些无机盐、维生素和酶类(淀粉酶、脂肪酶、磷酸酶、肽酶淀粉酶、脂肪酶、磷酸酶、肽酶和过氧化氢酶和过氧化氢酶)l蛋清含水量达蛋清含水量达88%,蛋白质蛋白质10.5%和极少量的碳水化合物和脂肪。和极少量的碳水化合物和脂肪。l与蛋清相比较与蛋清相比较,蛋黄基本上为疏水性环境蛋黄基本上为疏水性环境,低极性药物低极性药物(yow)的的残留较多残留较多。第四十三页，共一百二十一页。l如果需要分别测定蛋黄和蛋清中的残留如果需要分别测定蛋黄和蛋清中的残留,最好将刚产出后的最好将刚产出后的蛋分离蛋黄和蛋清蛋分离蛋黄和蛋清,避免药物避免药物(yow)由蛋黄向蛋清扩散。由蛋黄向蛋清扩散。l与尿液类似与尿液类似,蛋成分的蛋成分的pH变化范围大变化范围大,分析前需分析前需调节调节pH值值。第四十四页，共一百二十一页。二、样品制备二、样品制备(zhbi)和贮存和贮存l样品的制备方法，依据样品的制备方法，依据(yj)法规要求法规要求的不同的不同和和食品本身特性食品本身特性的差异而不同。的差异而不同。l有的要以全样计有的要以全样计,有的以脂肪计。一般来说有的以脂肪计。一般来说是取是取可食部分可食部分制备样品制备样品(除非有其他要求除非有其他要求)。l如对于肉类有的国家法枧规定要如对于肉类有的国家法枧规定要以脂肪计以脂肪计算算食品安全危害物的量食品安全危害物的量,有的要求以有的要求以全样全样来计算。来计算。第四十五页，共一百二十一页。l为保证取样的准确性、减少污染和便于保存为保证取样的准确性、减少污染和便于保存,对对组织样品组织样品宜宜分取一个分取一个完整解剖部分完整解剖部分,如一个肝叶或一侧完整的肾如一个肝叶或一侧完整的肾,小动物小动物应应摘取摘取完整的脏器完整的脏器,并立即密封。样品被绞碎或匀浆并立即密封。样品被绞碎或匀浆(yn jin)后进行后进行缩分。缩分。l生物样品采样后除立即分析外生物样品采样后除立即分析外,都需要在适当条件下保存都需要在适当条件下保存,目目的是避免被测组分发生分解或产生其他化学变化。的是避免被测组分发生分解或产生其他化学变化。第四十六页，共一百二十一页。贮存贮存(zhcn)l冷冻保存冷冻保存是最常用的方法是最常用的方法,一般冷冻温度一般冷冻温度为为-20,此时生物样品如血浆、尿液和组此时生物样品如血浆、尿液和组织样品均被冻凝织样品均被冻凝,可以终止样品中酶的活可以终止样品中酶的活性性,又可以贮存样品。又可以贮存样品。l在某些情况下若收集在某些情况下若收集(shuj)的样品来不及冷冻的样品来不及冷冻处理处理,可先将其可先将其置冰屑置冰屑中中,然后再行然后再行冷冻冷冻贮贮存存,临用前再临用前再融化融化并放至室温后供测定。并放至室温后供测定。第四十七页，共一百二十一页。l对于一些对于一些易代谢的药物易代谢的药物,如磺胺类、聚醚类、同化激素如磺胺类、聚醚类、同化激素,它们的它们的肝和肾脏样品不宜长期存放肝和肾脏样品不宜长期存放,理想的冷冻温度理想的冷冻温度应为应为-40-80。l为防止含酶样品中被测组分进一步代谢为防止含酶样品中被测组分进一步代谢,采样后必须立即采样后必须立即终终止酶的活性止酶的活性。常采用的。常采用的方法方法有有:液氮中快速液氮中快速(kui s)冷冻冷冻、微波照微波照射射、匀浆及沉淀匀浆及沉淀、加入酶活性阻断剂加入酶活性阻断剂(通常加入氟化钠通常加入氟化钠)等。等。l某些生物样品中的药物易被空气某些生物样品中的药物易被空气氧化氧化,如儿茶酚类中的阿朴吗如儿茶酚类中的阿朴吗啡啡,具有具有邻苯二酚邻苯二酚结构结构,易被空气氧化产生易被空气氧化产生醌类醌类杂质杂质,若收集的若收集的血浆样品血浆样品不加抗氧剂不加抗氧剂直接在直接在-15 冷藏冷藏,仅能稳定仅能稳定4周周;但加入但加入抗抗坏血酸坏血酸后后,则可稳定则可稳定10周。周。第四十八页，共一百二十一页。l冷冻时冷冻时,若使用若使用玻璃容器玻璃容器(rngq)贮存样品贮存样品,需注意防止温度骤需注意防止温度骤降使容器降使容器破裂破裂,造成样品损失或污染。而造成样品损失或污染。而塑料容器塑料容器常含有高常含有高沸点的增塑剂沸点的增塑剂,可能释放到样品中造成可能释放到样品中造成污染污染,而且还会而且还会吸留吸留某些某些药物药物,引起分析误差。引起分析误差。l某些药物特别是某些药物特别是碱性药物碱性药物还会还会被玻璃容器表面吸附被玻璃容器表面吸附,影响样品影响样品中药物的定量回收中药物的定量回收,因此因此,必要时应将玻璃容器进行必要时应将玻璃容器进行硅烷化硅烷化处理。处理。第四十九页，共一百二十一页。三、样品三、样品(yngpn)均匀化均匀化l对于血浆、奶、尿液样品对于血浆、奶、尿液样品,可置可置涡旋混合器涡旋混合器上混匀上混匀,以免造成测定误以免造成测定误差。差。l对于肌肉、组织、粪便等对于肌肉、组织、粪便等半固体样品半固体样品都存在均匀化这一问题。都存在均匀化这一问题。l其中肌肉和组织样品可置其中肌肉和组织样品可置匀浆机匀浆机中均质中均质,粪便样品可加入少量粪便样品可加入少量甲醇或其他液体搅匀。甲醇或其他液体搅匀。l同时同时(tngsh)还应注意还应注意取样取样的的代表性代表性问题。问题。第五十页，共一百二十一页。四、去蛋白四、去蛋白(dnbi)处理处理l生物样品如肝脏、肾脏、血浆等含有大量的蛋白质生物样品如肝脏、肾脏、血浆等含有大量的蛋白质,它们能结合药物它们能结合药物,因此对于某些药物的测定因此对于某些药物的测定,必须先将与蛋白结合的药物游离之后必须先将与蛋白结合的药物游离之后(zhhu)再作进一步处理。再作进一步处理。为什么要除去蛋白？为什么要除去蛋白？l因为生物样品含有大量的蛋白质因为生物样品含有大量的蛋白质,蛋白质在测定过程中会形成蛋白质在测定过程中会形成泡沫泡沫、浑浊浑浊或出现或出现沉淀沉淀而干扰测定。蛋白质还会而干扰测定。蛋白质还会污染仪器污染仪器或或恶化测定恶化测定条件条件,如直接进样用液相色谱分析含蛋白质的体液样品时如直接进样用液相色谱分析含蛋白质的体液样品时,蛋白质会沉蛋白质会沉积在色谱柱上积在色谱柱上,这不仅影响柱效这不仅影响柱效,而且大大缩短色谱柱的使用寿命。而且大大缩短色谱柱的使用寿命。l目前已有很多去蛋白方法可供使用目前已有很多去蛋白方法可供使用,但使用各种方法之前应了但使用各种方法之前应了解该方法是否会导致生物样品中的解该方法是否会导致生物样品中的药物发生分解药物发生分解或或影响药物的影响药物的提取提取等。等。注意方法注意方法(fngf)(fngf)选择选择第五十一页，共一百二十一页。l通常去蛋白过程是将通常去蛋白过程是将蛋白质变性处理蛋白质变性处理后后,把与蛋白结合的药物把与蛋白结合的药物解离出来解离出来,离心分离离心分离以除去蛋白。以除去蛋白。l通常除蛋白的方法是在含蛋白样品中加入适当通常除蛋白的方法是在含蛋白样品中加入适当(shdng)的的沉淀剂沉淀剂或或变性剂变性剂,使使蛋白质脱水蛋白质脱水而沉淀而沉淀(如有机溶剂、中性盐如有机溶剂、中性盐),有的是由有的是由于蛋白质形成于蛋白质形成不溶性盐不溶性盐而析出而析出(如一些酸类如一些酸类:三氯醋酸、高氯酸、三氯醋酸、高氯酸、磷酸、苦味酸磷酸、苦味酸),离心后取上清液用于分析。离心后取上清液用于分析。第五十二页，共一百二十一页。1、有机溶剂沉淀、有机溶剂沉淀(chndin)l甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂,尤以尤以甲醇甲醇和和乙腈乙腈为最常用。为最常用。l甲醇与蛋白形成甲醇与蛋白形成絮状沉淀絮状沉淀易于离心分离易于离心分离,得到澄清的上清液得到澄清的上清液;l乙腈与蛋白形成乙腈与蛋白形成致密沉淀致密沉淀,易离心除去易离心除去,沉淀效率较甲醇高。沉淀效率较甲醇高。l使用时应加入足量的沉淀剂使用时应加入足