SN∕T 2775-2023 （代替 SN∕T 2775-2011）商品化食品检测试剂盒评价方法.pdf

I C S6 7.0 5 0C C SX0 4中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T2 7 7 52 0 2 3代替S N/T 2 7 7 52 0 1 1 商品化食品检测试剂盒评价方法 E v a l u a t i o n m e t h o d s f o r c o mm e r c i a l k i t s o f f o o d t e s t i n g 2 0 2 3-0 5-0 5发布2 0 2 3-1 2-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布前 言本文件按照G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草。本文件代替S N/T 2 7 7 52 0 1 1 商品化食品检测试剂盒评价方法,与S N/T 2 7 7 52 0 1 1相比,除结构调整和编辑性修改外,主要技术变化如下:增加了评价参数(见4.3)与评价样品的选择与制备(见4.4);将检测试剂盒根据结果判定方式分为定性检测试剂盒(含半定量检测试剂盒)和定量检测试剂盒两类并分别给出相应的评价方法(见5.2、5.3);增加了对记录和报告的要求(见6);增加了检测试剂盒与参考方法一致性分析的统计学方法与实例(见附录A);增加了对批间(不同生产批号检测试剂盒)差异的要求,并在附录B、附录C中分别给出了定性检测试剂盒、定量检测试剂盒的评价方法与实例。请注意本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国福州海关、深圳职业技术学院、中华人民共和国广州海关、中国检验检疫科学研究院、福建省粮油质量监测所。本文件主要起草人:杨方、岳振峰、席静、郑晶、柯秋璇、郑香平、郑洁、陈冬东、黄建立、张青龄。本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为:2 0 1 1年首次发布为S N/T 2 7 7 52 0 1 1;本次为第一次修订。S N/T2 7 7 52 0 2 商品化食品检测试剂盒评价方法 1 范围本文件规定了用于食品检测的商品化检测试剂盒的术语与定义、通用要求、评价指标、数据统计和结果评判的方法等。本文件适用于食品检测用试剂盒生产者、采购者及使用者在生产或使用商品化试剂盒时对相关指标进行评价以及检测质量控制。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 4 8 8 9 数据的统计处理和解释 正态分布均值和方差的估计与检验G B/T 6 3 7 9.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精确度)第1部分:总则与定义G B/T 1 9 4 8 9 实验室生物安全通用要求G B/T 2 7 0 2 5 检测和校准实验室能力的通用要求G B/T 2 7 4 0 3 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测G B/T 2 7 4 0 4 实验室质量控制规范 食品理化检测G B/T 2 7 4 0 5 实验室质量控制规范 食品微生物检测J J F 1 0 0 52 0 1 6 标准物质常用术语和定义S N/T 0 0 0 1 出口食品、化妆品理化测定方法标准编写的基本规定S N/T 3 2 6 6 食品微生物检验方法确认技术规范3 术语和定义G B/T 6 3 7 9.1、J J F 1 0 0 52 0 1 6界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1商品化食品检测试剂盒 c o mm e r c i a l k i t s o f f o o d t e s t i n g 指对一种分析方法的主要或关键组成进行了商品化包装并可供销售的检测体系,用以确定一种或多种食品基体中目标分析物的存在或含量。3.2基质 m a t r i x指样本中除目标分析物以外的一切组成。3.3参考方法 r e f e r e n c e m e t h o d经过全面研究,清楚而严密地描述所需条件和程序,用于对目标分析物一种或多种特性值进行测量的方法。该方法已经证明具有与预期用途相称的准确度及其他性能,参考方法可以用来评价对同一测量过程所使用的其他方法。1S N/T2 7 7 52 0 2 3.4特异性 s p e c i f i c i t y指商品化食品检测试剂盒区分目标分析物与其他化合物或基质的能力。3.5检出限 l i m i t o f d e t e c t i o n指在给定的置信水平上,样品中目标分析物能被可靠地与基质干扰区分的最低浓度或含量。3.6定量限 l i m i t o f q u a n t i t a t i o n指样品中目标物在一个可接受的精密度与正确度水平上能被定量检测的最低浓度或含量。3.7假阴性率 f a l s e n e g a t i v e r a t e将阳性结果判断为阴性的比率。3.8假阳性率 f a l s e p o s i t i v e r a t e将阴性结果判断为阳性的比率。3.9耐变性 r o b u s t n e s s指商品化食品检测试剂盒不受环境等条件的微小变化而影响检测结论的能力。3.1 0关注含量水平 l e v e l o f i n t e r e s t判断样品中分析物是否符合法规规定和要求的有决定性意义的含量水平(如:对某一定量特性规定和要求的物质限值,包括最大残留限量或其他最大容许量等)。4 通用要求4.1 商品化食品检测试剂盒检测试剂盒必须包装完整,组成各部分外观符合要求;标签、标识清晰、规范;带有使用说明书或等同指导性文件,文件内容应包括但不限于以下部分:a)明确该检测试剂盒的名称及规格、生产批号、产品主要组成成分。b)检测试剂盒的应用范围:包括检测的目标物和适用的基质范围。c)对检测原理、技术参数及结果的表述与解释。d)操作指南:明确检测所要求的样本缩分、分析物提取等步骤,包括完整的检测操作程序和质控手段。e)有效期:明确检测试剂盒的保存时间与保存条件。f)环境要求:明确使用检测试剂盒时是否有环境温度与湿度、实验操作场所等的要求。g)交叉反应:明确检测试剂盒对目标分析物的类似特征化合物、代谢产物或可能出现在基质里的非目标化合物的响应情况。h)抽样原则:说明实验室检测需要的样本量,明确在进行分析前需进行的采样、处理、混合及二次抽样步骤。i)注意事项:包括安全提示、废弃物处理、可能存在危害的操作步骤。j)技术支持:提供用户可获得技术支持的联系人、电话或传真、邮箱地址。k)质量合格证书。l)其它应告知用户的事项。2S N/T2 7 7 52 0 2 4.2 评价实验室若评价结果用于商品化食品检测试剂盒的上市流通或需要对此检测试剂盒做出评价结论,则参与评价的实验室至少需要3家,每个结果至少重复测定2次。评价实验室开展检测试剂盒评价工作时,应符合G B/T 1 9 4 8 9和G B/T 2 7 0 2 5 相关实验室的安全规定和操作要求,质量控制参照G B/T 2 7 4 0 3、G B/T 2 7 4 0 4、G B/T 2 7 4 0 5中的有关规定执行。4.3 评价参数评价实验室应根据所评价的检测试剂盒的预期用途选择合适的验证参数,并形成评价方案。对于定性(含半定量)检测试剂盒,典型的评价参数包括方法的检出限、特异性、假阴性率、假阳性率、相对准确度(或与参考方法的一致性)、批间差异;必要时进行耐变性评价。对于定量检测试剂盒,典型的评价参数包括方法的定量限、线性和范围、特异性、准确度(正确度和精密度)、批间差异;必要时进行耐变性评价。4.4 评价样品的选择及制备评价样品包括阴性质控样品与阳性质控样品。阴性质控样品为经参考方法确认未检出目标分析物的样品。阳性质控样品为具有确定含量目标分析物的样品,包括基质标准样品与采用添加方式制备的样品,也可采用参考方法进行分析从而得到样品中目标分析物的含量。阳性质控样品中目标分析物含量为指定值。采用添加方式制备阳性质控样品时目标分析物或干扰化合物的添加体积应尽可能少,以不影响样品的组成,添加体积应不大于样品体积的1/1 0 0。用于评价准确度的阳性质控样品宜与分析样品一致。进行实验室内评价的实验样品种类应涵盖分析方法的适用范围,实验室间评价的实验样品应至少选择3种代表性样品(不同种类或不同来源)。食品理化项目检测试剂盒评价样品可参考S N/T 0 0 0 1的食品分类进行选择,食品微生物项目检测试剂盒评价样品可参考S N/T 3 2 6 6的食品分类进行选择。当检测试剂盒的适用范围仅为某种样品时,可选择不同来源的样品制备验证样品。4.5 参考方法的选择参考方法优先采用国家标准方法、国际标准化组织标准方法、国际分析家协会方法,若以上方法均不能获得,则可采用行业标准或其他经验证的方法。5 技术指标与评价方法5.1 总则本文件将商品化食品检测试剂盒按检测结果判定方式分为定性检测试剂盒(含半定量检测试剂盒)和定量检测试剂盒两类。定性检测试剂盒仅报告阴性/阳性的判断结果,不报送具体检测数值;半定量检测试剂盒一般用于判断目标分析物含量是否符合关注限量水平,可报告为大于关注含量水平或小于等于关注含量水平;定量检测试剂盒报告定量限(含)以上的检测数值。3S N/T2 7 7 52 0 2 5.2 定性(含半定量)检测试剂盒的评价指标5.2.1 评价要求采用阴性质控样品添加的方式制备评价样品,添加水平至少包括检测试剂盒标称检出限的0.5倍、1倍及5倍水平。每种空白样品及每个含量水平评价样品不得少于4 0例。对于非法添加等重点项目的检测,可考虑在检出限水平设置8 0例,以便更好地评价假阳性率和假阴性率。若无法获得阴性质控样品,可选择含有可区分水平(不少于3个)目标化合物的样品、采用与参考方法比较的方式进行评价。5.2.2 性能指标及计算5.2.2.1 性能指标对检出限、特异性、假阴性率、假阳性率、相对准确度等参数进行评价时,可根据检测试剂盒使用说明书进行测试并获得测试结果,统计针对每个食品类型和每个含量水平得到的检验结果,将试验数据按表1填入,计算各性能指标。表1 性能指标的计算样品情况a检验结果b阳性阴性总数阳性aba+b阴性cdc+d总数a+cb+da+b+c+d灵敏度(p+)p+=a/(a+b),当p+0.9 5时的含量水平设为检出限特异性(p-)p-=d/(c+d)假阴性率(p f-)p f-=a/(a+c)=1-灵敏度假阳性率(p f+)p f+=d/(b+d)=1-特异性相对准确度(a+d)/(a+b+c+d)a由参考方法检验得到的结果或者样品中实际的公议值结果;b检测试剂盒测定的结果。灵敏度的计算使用阳性质控样品的实际的公议值结果或由参考方法检验得到的结果。5.2.2.2 灵敏度和检出限检测试剂盒测定结果为阳样的样品数量除以实际样品(或参考方法确认)为阳性的样品总数为灵敏度;当灵敏度0.9 5时样品中所含目标分析物的含量水平即为检出限。5.2.2.3 特异性检测试剂盒测定结果为阴性的样品数量除以实际样品(或参考方法确认)为阴性的样品总数。5.2.2.4 假阴性率检测试剂盒测定为阴性而实际样品为阳性(或参考方法确认为阳性)的样品数量除以实际样品为阳4S N/T2 7 7 52 0 2 性(或参考方法确认为阳性)的样品总数,假阴性率=1 0 0-灵敏度。5.2.2.5 假阳性率检测试剂盒测定为阳性而实际样品为阴性(或参考方法确认为阴性)的数量除以实际样品为阴性(或参考方法确认为阴性)的样品总数,假阳性率=1 0 0-特异性。5.2.2.6 相对准确度(或与参考方法的一致性)检测试剂盒对某个样品的测定结果与样品真实结果或与参考方法测试结果的一致程度。即检测试剂盒检测结果和样品实际结果(或参考方法确证)均为阳性的数量与均为阴性的数量之和除以用于确证的样品总数。检测试剂盒与参考方法在检测某种样品中目标分析物时,其测定结果之间在统计学上若不存在显著性差异,则可认为是一致的。一致性检验采用卡方检验进行分析,以公式计算、E X C E L计算或如S P S S等统计软件计算获得结果。采用公式计算的定性(含半定量)检测试剂盒与参考方法的一致性检验见附录A。5.2.3 批间(不同生产批号检测试剂盒)差异 选取不同批号的检测试剂盒,根据检测试剂盒适用样品选择代表性样品,制备目标分析物含量为检测试剂盒检出限或关注浓度水平的评价样品。针对每个批号试剂盒应分析的样本数不少于4 0例。可采用卡方检验方法评价定性(半定量)检测试剂盒的批间差异。卡方检验结果可通过多种方式获得,如采用公式计算、采用E X C E L计算或采用如S P S S等统计软件计算等。采用公式计算的检测试剂盒批间差异的卡方检验方法见附录A。5.3 定量检测试剂盒的评价指标5.3.1 定量限制备具有一定含量目标分析物的阳性质控样品,在给定的分析条件下进行至少2 0次重复测试,方法定量限水平应至少有9 5%测试结果的响应信号是空白样本响应信号的5倍,且其正确度与精密度应满足方法和法规的要求。5.3.2 线性和线性范围以标准溶液考察线性和线性范围。标准浓度应包括一定梯度的至少5个浓度(非线性者如免疫分析可适当增加)和零点;标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围。线性要求可由根据检测试剂盒给出的指标制定,一般不低于0.9 9 0。5.3.3 特异性制备或选择目标分析物含量为定量限与关注含量水平近的阳性质控样品,选择至少3种与目标分析物相关或相似的干扰物质(内源性物质、异构体、或物理化学性质类似化合物等)或干扰菌株,在各2 0份阳性质控样品中分别加入含量为定量限1 0倍、定量限1 0 0倍或更高的干扰化合物,采用检测试剂盒测定目标分析物含量,并与样品指定值进行比较,以相对误差表示。相对误差的计算公式见式(1),一般相对误差应在2 5%以内。相对误差(%)=(测定值-指定值)/指定值1 0 0%(1)5S N/T2 7 7 52 0 2 5.3.4 准确度(正确度和精密度)5.3.4.1 正确度针对检测试剂盒适用范围的所有样品基质,分别采用阴性质控样品制备定量限、关注含量水平与检测试剂盒测定范围最高含量水平。每种样品的每个含量水平至少平行测定5次。按式(2)计算正确度:正确度(%)=检测值/指定值 1 0 0(2)也可采用与参考方法比较的方式评价检测试剂盒正确度。选择3个可区分含量(应涵盖定量范围的高、中、低水平)的样品,采用检测试剂盒与参考方法分别对同一份样品进行至少5次测试。可采用t检验法进行统计分析以证明两种检测方法结果之间是否存在显著性差异,t检验结果可通过多种方式获得,如采用公式计算、采用E X C E L计算或采用如S P S S等统计软件计算等。检测试剂盒与参考方法比较的t检验方法可参考附录B。5.3.4.2 精密度实验过程可与5.3.4.1合并,计算每一种样品基质每一浓度水平的相对标准偏差。5.3.5 批间(不同产品批号的检测试剂盒)差异选取不同批号的试剂盒进行测试。根据检测试剂盒适用样品范围选择代表性样品,制备目标分析物含量位于检测试剂盒定量范围的高、中、低水平(含关注含量水平)的评价样品。每批检测试剂盒对每种样品的每个含量水平进行至少5次重复测试。可采用单因素方差分析方法评价定量检测试剂盒的批间差异。单因素方差分析可通过多种方式获得,如采用公式计算、采用E X C E L计算或采用如S P S S等统计软件计算等。单因素方差分析过程及采用E X C E L分析步骤见附录C。6 耐变性若拟确定环境条件变化或检测条件(如取样量、培养基配比、缓冲液p H值等)的微小变化是否会对检测结果产生显著影响,可进行耐变性评价。耐变性评价由以下步骤组成:确定可能影响检测结果的因素、对每一种因素稍作改变、采用合适的方法进行耐变性检验、若发现某种因素可显著影响检测结果,应进一步实验以确定该因素可接受的水平、在检测方法中应清楚说明可显著影响检测结果的因素。耐变性检验方法见附录D。7 记录和报告7.1 评价记录商品化食品检测试剂盒评价记录至少包括:a)评价方案;b)评价用样品制备记录;c)样品测试记录;d)统计评价过程记录。6S N/T2 7 7 52 0 2 7.2 评价报告商品化食品检测试剂盒评价结束后,应撰写评价报告,评价报告内容包括但不限于:a)被评价试剂盒、参考方法以及其他参考资料;b)样品类型;c)样品制备方法,包括人工污染时的相关信息;d)测试流程;e)测试结果统计分析;f)等效性声明;g)其他重要信息。7S N/T2 7 7 52 0 2 附 录 A(资料性)采用卡方检验进行样本之间显著性差异评价A.1 卡方检验方法A.1.1 卡方检验的实验设计卡方检验是以x2分布为基础的一种常用假设检验方法,主要用于检验两个或多个样本之间差别的显著性以及检验两个双向无序分类变量是否存在关联。卡方检验采用x2值表示观察值与理论值之间的偏离程度,x2=(A-T)2T,其中A为实际频数(a c t u a l f r e q u e n c y),T为理论频数(t h e o r e t i c a l f r e q u e n c y)。A.1.2 卡方检验的数据收集与计算可采用行(R)列(C)的列表形式收集数据资料。理论频数TR C=nRnCn,其中TR C为第R行C列的理论频数,nR为相应的行和,nC为相应的列和。RC表的x2检验公式见公式A.1。x2=n(A2nRnC-1),自由度d f=(行数R-1)(列数C-1)(A.1)由卡方计算值可知,当实际频数与理论频数一致时,x2值为0;实际频数与理论频数越接近,两者之间差异越小,x2值越小;反之,当实际频数与理论频数相差越大时,x2值越大。以卡方分布求出所对应的P值(P v a l u e,指当原假设为真时,比所得到的样本观察结果更极端的结果出现的概率)来确定是否存在显著性差异。对于仅给出阴性、阳性结果的检测试剂盒,可采用独立样本四格表进行分析(自由度d f=1),将检测试剂盒和参考方法针对每种食品和每个含量水平得到的检验结果列入表A 1中,按公式A.2进行计算,采用卡方检验(x2检验)来比较两种方法。表A.1 独立样本四格表检验参考方法测试结果检测试剂盒测试结果阳性阴性总数阳性aba+b阴性cdc+d总数a+cb+da+b+c+dx2=(a d)-(bc)2(a+b+c+d)(a+b)(c+d)(a+c)(b+d)(A.2)如果x23.8 4,表示检测试剂盒方法与参考方法的阳性检出率在9 5%的置信区间内没有统计学差异。每一类适用食品基质的各含量水平均应满足此要求。如果x23.8 4,表示两种方法的阳性检出比率在9 5%的置信区间内有统计学差异,在此情况下仅允许检测试剂盒方法比参考方法的阳性检出率更高,否则应从适用范围中删除该种食品基质,或者对试剂盒进行改进,重新进行验证,以证明该结果可接受。8S N/T2 7 7 52 0 2 若在对某一食品基质的分析中发现不明原因错误,可先假定为随机错误。这种情况下,可根据上述方案对该食品基质再检测3批样品,若能够证实检测试剂盒方法灵敏度优于参考方法,则两种方法阳性比例的显著性差异可以接受。x2分布临界值表(卡方分布)可参考G B/T 4 8 8 9获得或使用统计软件得到。A.2 在商品化食品检测试剂盒评价中应用卡方检验的实例A.2.1 采用卡方检验法评价检测试剂盒与参考方法测定结果之间的一致性例1:采用卡方检验法(独立样本四格表)评价检测试剂盒与参考方法检测结果在9 5%置信区间(a=0.0 5)的显著性差异。结果汇总见表A.2。表A.2 检测试剂盒与参考方法的显著性差异比较结果汇总表参考方法测试结果检测试剂盒测试结果阳性阴性总数阳性2 42 34 7阴性2 61 94 5总数5 04 29 2 x2=(2 41 9)-(2 32 6)2(2 4+2 3+2 6+1 9)(2 4+2 3)(2 6+1 9)(2 4+2 6)(2 3+1 9)=0.4 1 7 73.8 4,表示检测试剂盒方法与参考方法的阳性检出率在9 5%的置信区间内没有统计学差异。例2:采用卡方检验法(多个值比较)评价检测试剂盒与参考方法检测结果在9 5%置信区间(a=0.0 5)的显著性差异。分别采用检测试剂盒与参考方法对7 2份样品进行检测,未检出记为“-”,阳性结果记为“+”,强阳性结果记为“+”,结果汇总见表A.3。表A.3 检测试剂盒与参考方法的显著性差异比较结果汇总表测定-+合计检测试剂盒3 42 997 2参考方法2 93 587 2合计6 36 41 71 4 4 x2=1 4 4(3 427 26 3+2 927 26 4+927 21 7+2 927 26 3+3 527 26 4+827 21 7-1)=1.0 2d f=(2-1)(3-1)=2在查x2分布临界值表(卡方分布)表时,表中所给值直接只能查单侧重概率值,双侧概率可以这样考虑:双侧概率指的是上端和下端各划出概率相等的一部分,两概率之和为给定的概率值,若a=0.0 5,则实际上端点以上以下的概率为0.0 5/2=0.0 2 5,记为x20.0 5/2(2)=2.7 7,下端点以下的概率也为0.0 2 5,因此可以用0.9 7 5查得下端为,记为x21-0.0 5/2(2)=0.0 2,0.0 21.0 22.7 7,不能认为二者有显著差异。A.2.2 采用卡方检验法评价不同批号检测试剂盒之间的显著性差异实例例:采用卡方检验法评价三个不同批号的定性检测试剂盒在在9 5%置信区间是否存在批间差异。分别采用批号A、B、C等三个不同批号的定性检测试剂盒检测目标分析物含量为检出限水平的9S N/T2 7 7 52 0 2 1 0 0份样品,将检测结果见表A.4。表A.4 三个批号定性检测试剂盒检测结果汇总表试剂盒批号阳性阴性合计A7 62 41 0 0B5 74 31 0 0C6 13 91 0 0合计1 9 41 0 63 0 0 x2=3 0 0(7 621 0 01 9 4+2 421 0 01 0 6+5 721 0 01 9 4+4 321 0 01 0 6+6 121 0 01 9 4+3 921 0 01 0 6-1)=8.7 6d f=(3-1)(2-1)=2查x2分布临界值表(卡方分布),x20.0 5(2)=5.9 98.7 6,三个批号的试剂盒之间存在显著性差异。01S N/T2 7 7 52 0 2 附 录 B(资料性)采用t检验方法进行样本之间显著性差异评价B.1 t检验方法t检验,主要用于样本含量较小(例如n0.0 5,则表示在9 5%置信水平上,被评估的样本间无统计学差异。t检验临界值表可参考G B/T 4 8 8 9获得或使用统计软件得到。B.2 采用t检验方法评价定量检测试剂盒与参考方法检测结果的显著性差异例:采用t检验方法对采用参考方法(G B 4 7 8 9)与定量检测试剂盒测定大肠菌群的结果进行比较,每种样品、每个水平重复测定5次(n=5),自由度f=4,将检测结果转化为对数(L o g1 0)汇总表B。计算公式按式(B.1),其中X为测试片检测结果,Y为参考方法检测结果;S1和S2分别为测试片和参考方法检测结果的标准偏差;n1和n2分别为测试片和参考方法的平行检测次数。在9 5%置信水平上t0.0 5(8)=2.3 0 6,鸡肉的低、高水平验证所得t值 t0.0 5(8)=2.3 0 6,表明存在显著性差异中水平验证所得t值Fa,表明均值之间的差异是显著的,所检验的因素对观察值有显著影响。若FFa,不能认为所检验的因素对观察值有显著影响。C.2 采用方差分析方法评价不同批号定量检测试剂盒的批间差异实例C.2.1 数据检测与汇总分别采用3个不同批号甲醛定量检测试剂盒对同一份泡发鱿鱼样品进行5次平行测定,结果汇总于E X C E L中。其中第B、C、C列分别为3个不同批号定量试剂盒的5次平行测定结果。21S N/T2 7 7 52 0 2 C.2.2 统计描述选择E X C E L中的“数据”-“数据分析”-“描述统计”。在“描述统计”对话框中输入统计量并选择“确定”。描述统计的结果:C.2.3 方差分析结果因仅试剂盒批号这一个因素变化,因此为单因素方差分析。在“数据分析”对话框中选择“方差分析”-“单因素方差分析”,然后在“单因素方差分析”对话框中选择数据,最终得到结果。31S N/T2 7 7 52 0 2 在9 5%置信水平,F=0.1 0 3 9,Fa=3.8 8 5,F0.0 5,表明3个批号的定量检测试剂盒测定结果之间无显著性差异。41S N/T2 7 7 52 0 2 附 录 D(资料性)耐变性检验方法D.1 耐变性检验的实验设计假设以A、B、C、D、E、F和G表示7种不同因素,当这些因素轻微变化时可能影响检测结果,以a、b、c、d、e、f和g表示这7种因素的替代。上述因素共有27即1 2 8种组合方式,出于实际操作的考虑,选择一种有8个组合的子集(表A.1),以代表可能出现的情况。表D.1 耐变性检验的实验设计影响因素测定次数12345678A或aAAAAaaaAB或bBBbbBBbbC或cCcCcCcCcD或dDDddddDDE或eEeEeeEeEF或fFffFFffFG或gGggGgGGg获得的结果stuvwxyzD.2 平均值(A)间的比较比较大写字母(AA至AG)的平均值与小写字母(Aa至Ag)的平均值。如果某个因素对检测结果有影响,那么其差异比其它因素要大。AA=(Ai)/4 AB=(Bi)/4 AC=(Ci)/4 AD=(Di)/4 AE=(Ei)/4AF=(Fi)/4 AG=(Gi)/4 Aa=(ai)/4 Ab=(bi)/4 Ac=(ci)/4 Ad=(di)/4 Ae=(ei)/4 Af=(fi)/4 Ag=(gi)/4差异(Di)差异的平方(Di2)Da=A-a=(Ai)-(ai)Da2=值aDb=B-b=(Bi)-(bi)Db2=值bDc=C-c=(Ci)-(ci)Dc2=值cDd=D-d=(Di)-(di)Dd2=值dDe=E-e=(Ei)-(ei)De2=值eDf=F-f=(Fi)-(fi)Df2=值fDg=G-g=(Gi)-(gi)Dg2=值g51S N/T2 7 7 52 0 2 差异Di的标准偏差的计算见式(D.1)。S Di=2(Di2/7)(D.1)若S Di值明显比实验室内重复性条件下得到的标准偏差大,那么即使单个因素并不表现对结果有影响,也可以认为所有因素加合起来对结果有影响,该检测试剂盒对于所选择参数的变化并无足够的耐变性。D.3 耐变性检验实例耐变性检验由以下步骤组成:确定可能影响检测结果的因素、对每一种因素稍作改变、采用合适的方法进行耐变性检验、若发现某种因素可显著影响检测结果,应进一步实验以确定该因素可接受的水平、在检测方法中应清楚说明可显著影响检测结果的因素。例:采用链霉素检测试剂盒检测牛奶中链霉素含量的耐变性检验。耐变性试验的第一步,确定需要评价的变量。这些变量可以是:取样量、反应温度、反应时间等等。每个变量取两个不同的水平,如试样量选取推荐试样量的1 0%,培养时间选取推荐时间的1 0%等。两个水平应具有方法常规使用的类型和大小的代表性。如若只需5个因素,可删去表D.1中F行和G行。链霉素检测试剂盒检测牛奶中链霉素含量的耐变性检验结果汇总于表D.2。表D.2 链霉素检测试剂盒检测牛奶中链霉素含量的耐变性检验结果汇总表五因素值实验次数(二种水平)12345678取样量AAAAaaaa反应温度BBbbBBbb反应时间CcCcCcCc洗板次数DDddddDD底物作用时间EeEeeEeE测定结果(g/L)0.7 74.6 60.3 32.7 31.8 10.5 24.9 90.9 2 其中:A1.1 m L,4.4 m L S D Ba 0.9 m L,3.6 m L S D BB6.5 b 9 C6 5 m i nc 5 5 m i nD4次d 2次E2 0 m i ne 1 0 m i n将8个测定值按因素字母的大写和小写分成两组,计算各个因素的影响。各因素的影响结果如下:d1=1/4(s+t+u+v)-1/4(w+x+y+z)=0.0 5 9d2=1/4(s+t+w+x)-1/4(u+v+y+z)=-0.3 0 4d3=1/4(s+u+w+y)-1/4(t+v+x+z)=-0.2 3 1d4=1/4(s+t+y+z)-1/4(u+v+w+x)=1.4 9d5=1/4(s+u+x+z)-1/4(t+v+w+y)=-2.9 1通过将差值d i与该检测试剂盒的实验室内重复性标准偏差相比较(在该试剂盒说明书操作条件下的1 0次测定重复性标准偏差为0.7 7),可判断因素的影响是否显著。如果差值大于2倍标准偏差,则该因素的影响是显著的,对影响显著的因素,应当特别引起注意。根据结果可知,第5个因素即底物作61S N/T2 7 7 52 0 2 用时间所得到的差值大于2倍的标准偏差,表明底物作用时间对结果有显著影响,应小心进行控制。另外,洗板次数的差值近于实验室内重复性条件下得到的2倍标准偏差,也应引起注意。此外,根据式(D.1)得到的S D=1.7 6,明显比实验室内重复性条件下得到的标准偏差大,也说明了该检测试剂盒对所选择参数的变化并无足够的耐变性,在操作过程中应予以控制。对于定性检测试剂盒,可以关注含量水平的阳性检出率作为检测结果进行耐变性分析。71S N/T2 7 7 52 0 2 32025772 T/NS中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准商品化食品检测试剂盒评价方法 S N/T 2 7 7 52 0 2 3*中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(1 0 0 0 2 3)编辑部:(0 1 0)6 5 1 9 4 2 4 2-7 5 3 0网址 www.c u s t o m s k b.c o m/b o o k中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本8 8 01 2 3 0 1/1 6 印张1.5 字数4 2千字2 0 2 3年1 1月第一版 2 0 2 3年1 1月第一次印刷印数 15 0 0*书号:1 5 5 1 7 59 8 5 定价2 4.0 0元