免疫学实验1.pptx

免疫学实验免疫学实验白细胞计数及白细胞分类白细胞计数及白细胞分类实验一实验一 白细胞计数方法白细胞计数方法 n原理：用稀乙酸将血液稀释倍，使红原理：用稀乙酸将血液稀释倍，使红细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在细胞全部溶解，滴入白细胞计数池中，在显微镜下计数，求得每立方毫米血液或每显微镜下计数，求得每立方毫米血液或每升中的白细胞数。升中的白细胞数。血细胞计数板n通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，每个大方格面积为分九个大方格，每个大方格面积为1mm1mm2 2，四角上，四角上的大方格用于计算白细胞，中央大方格用于红细的大方格用于计算白细胞，中央大方格用于红细胞计数，被双线等分成胞计数，被双线等分成2525个中方格，每个中方格个中方格，每个中方格又划分为又划分为1616个小方格。计数板与盖玻片组成计数个小方格。计数板与盖玻片组成计数池，计数池深度为池，计数池深度为0.1mm0.1mm。血细胞计数板方法方法1 1、加白细胞稀释液、加白细胞稀释液0.38ml0.38ml于一小试管中。于一小试管中。2 2、用、用75%75%酒精棉球消毒指端，等干，针刺皮肤酒精棉球消毒指端，等干，针刺皮肤深约深约2 23mm3mm，出现绿豆大小血滴，微量吸管取，出现绿豆大小血滴，微量吸管取血血20ul20ul。3 3、擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底、擦去微量吸管外余血，将其插入稀释液底部，轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸部，轻轻将血放出，并吸取上清液洗涤微量吸管管3 3次，混匀。次，混匀。4 4、擦净计数板和盖玻片，将盖玻片平放在计、擦净计数板和盖玻片，将盖玻片平放在计数板上数板上 。方法方法5 5、重新摇匀白细胞混悬液，用吸管取该液一、重新摇匀白细胞混悬液，用吸管取该液一滴，使之接触盖玻片边缘和计数板空隙处，悬滴，使之接触盖玻片边缘和计数板空隙处，悬液即藉毛细管作用自然引入，充满计数室，静液即藉毛细管作用自然引入，充满计数室，静置置2-3min2-3min，使白细胞下沉。，使白细胞下沉。6 6、低倍镜计数四角、低倍镜计数四角4 4个大方格内白细胞总数。个大方格内白细胞总数。7 7、结果计算：、结果计算：/4102010/41020106 6/L=/L=白细胞白细胞/L/L（或者（或者50=50=白细胞白细胞/mm/mm3 3）注意n不能在水肿、炎症部位采血。不能在水肿、炎症部位采血。n采血时不能挤压过度，因此针刺深度必须适当。采血时不能挤压过度，因此针刺深度必须适当。n在大方格内压线细胞应按计数原则计数，即数上在大方格内压线细胞应按计数原则计数，即数上不数下，数左不数右。不数下，数左不数右。n充池前的摇匀要注意，气泡不能太多。充池前的摇匀要注意，气泡不能太多。n每个大方格内计得的白细胞数相差超过每个大方格内计得的白细胞数相差超过1010个，表个，表示悬液未摇匀结果不可靠。示悬液未摇匀结果不可靠。临床意义n1 1、白细胞数变动大，正常成人为、白细胞数变动大，正常成人为4 4101010109 9/L/L（4000400010000/mm10000/mm3 3）。）。n2 2、白细胞总数的增减主要受中性粒细胞数、白细胞总数的增减主要受中性粒细胞数量的影响。量的影响。n3 3、急性化脓性感染、体内组织坏死，急性、急性化脓性感染、体内组织坏死，急性失血和中毒（代谢性中毒、急性铅、汞中失血和中毒（代谢性中毒、急性铅、汞中毒）、白血病等。病毒感染、伤寒、脾功毒）、白血病等。病毒感染、伤寒、脾功能亢进、再生障碍性贫血以及某些药物能亢进、再生障碍性贫血以及某些药物（如氯霉素）所致的骨髓抑制，可使白细（如氯霉素）所致的骨髓抑制，可使白细胞减少。胞减少。实验二实验二 白细胞分类白细胞分类 n原理：根据白细胞内颗粒对酸碱性染料的易染程原理：根据白细胞内颗粒对酸碱性染料的易染程度的不同而区分出不同种类的白细胞。度的不同而区分出不同种类的白细胞。n瑞氏染料（由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成瑞氏染料（由酸性染料伊红和碱性染料美蓝组成的复合染料）的复合染料）方法n1 1、指端消毒，穿刺，出现绿豆大小血滴。、指端消毒，穿刺，出现绿豆大小血滴。n2 2、在载玻片的左端沾取一滴血，沾取时勿使玻片、在载玻片的左端沾取一滴血，沾取时勿使玻片触及皮肤，把推玻片的一端放在血滴右侧，将推触及皮肤，把推玻片的一端放在血滴右侧，将推片略向左移触及血滴，血液即均匀附着于二片之片略向左移触及血滴，血液即均匀附着于二片之间。间。n3 3、使推片与载玻片中间形成、使推片与载玻片中间形成3030度夹角，平衡地向度夹角，平衡地向前推进，制成血涂片后，放在空气中待其自干，前推进，制成血涂片后，放在空气中待其自干，切勿加热干燥。切勿加热干燥。方法n4 4、用玻璃蜡笔在涂片两端各划一线（从上至下），、用玻璃蜡笔在涂片两端各划一线（从上至下），以防染液外溢。以防染液外溢。n5 5、加瑞氏染液，直至血片被盖满为止，计算染液、加瑞氏染液，直至血片被盖满为止，计算染液滴数。滴数。n6 6、一分钟后，滴加等量缓冲液，同时轻轻振动血、一分钟后，滴加等量缓冲液，同时轻轻振动血涂片，使之与染液混匀。涂片，使之与染液混匀。n再染再染5 51010分钟后，用水缓慢将染液冲去，冲洗前分钟后，用水缓慢将染液冲去，冲洗前切勿将染液倾倒。切勿将染液倾倒。方法n7、空气中自然干燥后镜检，先用低倍镜观、空气中自然干燥后镜检，先用低倍镜观察血涂片染色是否良好，厚薄是否适宜，察血涂片染色是否良好，厚薄是否适宜，选择涂片的中部及细胞分布均匀处，转油选择涂片的中部及细胞分布均匀处，转油镜按一定顺序检查。镜按一定顺序检查。n中性粒细胞：细胞核淡紫红色，分25叶，或呈杵状。细胞浆淡红色浆，均匀布满浅紫红色细小颗粒。占有5070%.n嗜酸性粒细胞：细胞核深紫红色，二叶核，呈眼镜样。淡红色浆，布满粗大，圆形而均匀一致红的桔红色颗粒。占有0.55%.n嗜碱性粒细胞：细胞核核结构不清，分叶不明显。细胞浆淡红色浆中有大小不等、分布不匀的蓝黑色颗粒，并常覆盖核上。占有01%.n淋巴细胞:细胞核深紫红色，圆或椭圆，染色质致密成团块样。细胞浆浆少，透明蓝色，一般无颗粒，大淋巴细胞浆较多，可含有少量淡紫红色颗粒。占有2040%.n单核细胞：细胞核深紫红色，肾形，马蹄形或不规则形，有扭曲拆叠感，染色质呈粗网状。细胞浆浆多，淡灰蓝色，有细小紫红色颗粒，似灰尘样弥散分布于浆中。占有38%.注意事项 n1 1、血涂片的厚薄与下列因素有关：血滴大则厚，、血涂片的厚薄与下列因素有关：血滴大则厚，小则薄；推片与载玻片之间的角度大则厚，小则小则薄；推片与载玻片之间的角度大则厚，小则薄；推抹涂片之速度快则厚、慢则薄。薄；推抹涂片之速度快则厚、慢则薄。n2 2、推片时用力要平衡，否则血膜出现厚薄不匀现、推片时用力要平衡，否则血膜出现厚薄不匀现象。象。n3 3、染色时应防止染色液干而出现沉淀物，冲洗时、染色时应防止染色液干而出现沉淀物，冲洗时不能先倾倒染液应缓缓加水，使沉渣浮起溢去。不能先倾倒染液应缓缓加水，使沉渣浮起溢去。临床意义 n1 1各种白细胞所占的百分比随年龄而有所变化。各种白细胞所占的百分比随年龄而有所变化。成人的正常值为中性分叶核成人的正常值为中性分叶核505070%70%，中性杆状核，中性杆状核1 15%5%，嗜酸性，嗜酸性0.50.55%5%，嗜碱性，嗜碱性0 01%1%，淋巴细胞，淋巴细胞202040%40%，单核细胞，单核细胞1 18%8%。n2 2、各种白细胞增多和减少常与某种感染、自身免、各种白细胞增多和减少常与某种感染、自身免疫性疾病等有关。疫性疾病等有关。油镜的使用n原理：油镜的透镜很小原理：油镜的透镜很小,光线通过玻片与油镜头之光线通过玻片与油镜头之间的空气时间的空气时,因介质密度不同因介质密度不同,发生折射或全反射发生折射或全反射,使射入透镜的光线减少使射入透镜的光线减少,物象显现不清物象显现不清.若在油镜若在油镜与载玻片之间加入和玻璃折射率（与载玻片之间加入和玻璃折射率（n=1.52n=1.52）相近）相近的香柏油（的香柏油（n=1.515n=1.515）,则使进入透镜的光线增多则使进入透镜的光线增多,视野亮度增强视野亮度增强,使物象明亮清晰。使物象明亮清晰。油镜的使用 n 1 1、使用显微镜油镜时、使用显微镜油镜时,必须将显微镜端正必须将显微镜端正直立桌上直立桌上,不得将镜臂弯曲不得将镜臂弯曲,使载物台倾斜使载物台倾斜,以免香柏油流溢以免香柏油流溢,影响观察影响观察,污染台面。污染台面。油镜的使用n2 2、将标本片放载物台上、将标本片放载物台上,用标本推进器固用标本推进器固定定,将欲检部分移至物镜下将欲检部分移至物镜下.先用低倍镜找先用低倍镜找出标本的位置出标本的位置,然后提高镜筒然后提高镜筒,在标本的待在标本的待检部位滴镜油一滴检部位滴镜油一滴,再换油镜观察。再换油镜观察。油镜的使用n3 3、观察完毕、观察完毕,应先提高镜筒应先提高镜筒,并将油镜头扭并将油镜头扭向一侧向一侧,再取下标本片。油镜头使用后再取下标本片。油镜头使用后,应应立即用擦镜纸擦净镜头上的油，擦拭时要立即用擦镜纸擦净镜头上的油，擦拭时要顺镜头的直径方向顺镜头的直径方向,不要沿镜头的圆周方向不要沿镜头的圆周方向擦。若镜油粘稠干结于镜头上擦。若镜油粘稠干结于镜头上,可用擦镜纸可用擦镜纸蘸少许乙醚和乙醇的混合液（蘸少许乙醚和乙醇的混合液（7:27:2）擦拭镜）擦拭镜头头,并随即用干的镜纸擦去。并随即用干的镜纸擦去。下周实验内容补体的溶血实验补体的溶血实验