化验室微生物理化指标检测项目操作步骤.pdf

化验室微生物化验室微生物/理化指标检测项目操作步骤理化指标检测项目操作步骤项目项目步骤步骤使用器具使用器具/药剂药剂酸度测定酸度测定1先取面包中间部分产品捣碎捣碎机2将捣碎的样品取25g万分一分析天平3移入容量瓶定容、摇匀、静置10min250ml容量瓶4过滤、滤取25ml快速滤纸/漏斗/200ml三角瓶5加酚酞2-8滴胶头滴管/酚酞指示剂6用氢氧化钠滴定至样品颜色微红在30秒不褪色氢氧化钠/碱管7直接读取滴定数据/记录计算酸度值面包比容面包比容1取一个面包样品称量质量（g）万分一分析天平2然后放入1000ml烧杯容器中1000ml烧杯3加黄小米进行填充完全覆盖，并将填充物摇实刮平，记录体积黄小米/刮板4刮平后取出黄小米倒入量筒中记录体积量筒5将面包体积计算：P=V/M大肠杆菌大肠杆菌（平板计数平板计数）1药品配制根据结晶紫中性红胆盐琼脂说明进行配制，配制药品的水使用无菌水（蒸馏水1000ml+氯化钠8.5g）结晶紫中性红胆盐琼脂无菌水2辅助器具：剪刀、镊子、移液管、空皿高压灭菌锅/器具灭菌3放入461水浴锅中保温水浴锅4进入无菌室操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒工作服/75%酒精5使用电子秤称量面包表面和中间部分样，样重：25g，电子秤表面需放一张滤纸0.1电子秤/滤纸/剪刀/镊子6将25g的面包放入225ml无菌水中，摇匀分解无菌水/三角瓶（10-1）7从步骤6中吸1ml到9ml的无菌水无菌水/三角瓶（10-2）8从步骤7中吸1ml到9ml的无菌水无菌水/三角瓶（10-3）9待沉淀后吸入1ml到培养皿中，（需要在酒精灯上操作）培养皿/酒精灯10平行四分做好记号（日期/样品名称/稀释倍数）可擦拭记号笔11倒入琼脂15-20ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀即可（需要在酒精灯上操作）琼脂/培养皿/酒精灯12待琼脂完全凝固后，翻过来放入361培养箱中，培养48小时361培养箱13培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数计算公式：两个培养皿菌群的生长个数之和，除以2乘以稀释倍数等于结果，并及时记录化验室微生物化验室微生物/理化指标检测项目操作步骤理化指标检测项目操作步骤项目项目步骤步骤使用器具使用器具/药剂药剂菌落总数菌落总数1药品配制根据平板计数琼脂说明进行配制，配制药品的水使用无菌水（蒸馏水1000ml+氯化钠8.5g）平板计数琼脂无菌水2使用高压灭菌锅进行杀菌处理，杀菌温度121，时间20分钟高压灭菌锅/药品灭菌3辅助器具：剪刀、镊子、移液管、空皿高压灭菌锅/器具灭菌4杀完菌后放入461水浴锅中保温水浴锅5进入无菌室操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒工作服/75%酒精6使用电子秤称量面包表面和中间部分样，样重：25g，电子秤表面需放一张滤纸0.1电子秤/滤纸/剪刀/镊子7将25g的面包放入225ml无菌水中，摇匀分解无菌水/三角瓶（10-1）8从步骤7中吸1ml到9ml的无菌水无菌水/三角瓶（10-2）9从步骤8中吸1ml到9ml的无菌水无菌水/三角瓶（10-3）10待沉淀后吸入1ml到培养皿中，（需要在酒精灯上操作）培养皿/酒精灯11平行四分做好记号（日期/样品名称/稀释倍数）可擦拭记号笔12倒入琼脂15-20ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀即可（需要在酒精灯上操作）琼脂/培养皿/酒精灯13待琼脂完全凝固后，翻过来放入361培养箱中，培养48小时361培养箱14培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数计算公式：两个培养皿菌群的生长个数之和，除以2乘以稀释倍数等于结果，并及时记录霉菌霉菌1药品配制根据马铃薯葡萄糖琼脂说明进行配制，配制药品的水使用无菌水（蒸馏水1000ml+氯化钠8.5g）马铃薯葡萄糖琼脂无菌水3辅助器具：剪刀、镊子、移液管、空皿高压灭菌锅/器具灭菌4杀完菌后放入461水浴锅中保温水浴锅5进入无菌室操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒工作服/75%酒精6使用电子秤称量面包表面和中间部分样，样重：25g，电子秤表面需放一张滤纸0.1电子秤/滤纸/剪刀/镊子7将25g的面包放入225ml无菌水中，摇匀分解无菌水/三角瓶（10-1）8从步骤7中吸1ml到9ml的无菌水无菌水/三角瓶（10-2）9从步骤8中吸1ml到9ml的无菌水无菌水/三角瓶（10-3）10待沉淀后吸入1ml到培养皿中，（需要在酒精灯上操作）培养皿/酒精灯11平行四分做好记号（日期/样品名称/稀释倍数）可擦拭记号笔12倒入琼脂15-20ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀即可（需要在酒精灯上操作）琼脂/培养皿/酒精灯13待琼脂完全凝固后，翻过来放入281霉菌培养箱中，培养120小时281霉菌培养箱14培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数计算公式：两个培养皿菌群的生长个数之和，除以2乘以稀释倍数等于结果，并及时记录化验室微生物化验室微生物/理化指标检测项目操作步骤理化指标检测项目操作步骤项目项目步骤步骤使用器具使用器具/药剂药剂水分测定水分测定（直接干燥直接干燥法法）1先取面包中间部分放入捣碎机进行捣碎/或者使用剪刀剪碎捣碎机/剪刀2取出捣碎的样品3-3.5g放入扁形称量瓶中，记录皿器加样品的重量万分一分析天平/扁形称量瓶3不需加盖，直接放入100-105恒温干燥箱内，干燥4小时取出100-105恒温干燥箱4再放干燥器内冷却30分钟，称量并记录万分一分析天平/干燥器5然后再放入100-105恒温干燥箱内，干燥1小时取出100-105恒温干燥箱6再放干燥器内冷却30分钟，称量并记录，两次记录误差不得超过2mg，如有超过继续干燥，直至结果不超过2mg万分一分析天平/干燥器100-105恒温干燥箱7确定干燥数据无偏差时，直接进行记录计算公式：皿+样重减去烘干后的重量除以干燥前的样重乘以100等于结果计算公式空气质量空气质量沉降沉降1药品配制根据结晶紫中性红胆盐琼脂和平板计数琼脂说明进行配制结晶紫中性红胆盐琼脂平板计数琼脂2使用高压灭菌锅进行杀菌处理，杀菌温度121，时间20分钟高压灭菌锅/药品灭菌3辅助器具：移液管、空皿高压灭菌锅/器具灭菌4进入生产车间操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒工作服/75%酒精5空皿打开后按照沉降点位置放置10-15分钟，然后按照先后顺序盖好皿器收起来，并做好沉降点位置标识在皿器上空皿/可擦拭记号笔6收起来后，放在杀菌好的储物箱内，避免污染到采样好的皿器储物箱7将取好的样带回化验室无菌室进行试验8倒入琼脂15-20ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀即可（需要在酒精灯上操作）琼脂/培养皿/酒精灯9待琼脂完全凝固后，翻过来放入361恒温培养箱中，培养120小时361培养箱10培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数及时记录，结果以每平方厘米含菌量计按内控标准执行手部手部/工作服工作服涂抹涂抹1药品配制根据结晶紫中性红胆盐琼脂和平板计数琼脂说明进行配制结晶紫中性红胆盐琼脂平板计数琼脂2使用高压灭菌锅进行杀菌处理，杀菌温度121，时间20分钟高压灭菌锅/药品灭菌3辅助器具：镊子、移液管、空皿、装有9ml无菌水和棉签的试管高压灭菌锅/器具灭菌/试管4进入生产车间操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒工作服/75%酒精5镊子将棉签取出，在操作人员手部（掌心/手指）/工作服/设备进行擦拭镊子/试管/棉签6范围尽量将手指/手掌工作服/设备部位都擦拭到位，擦拭完后将棉签塞回试管内7盖好橡胶塞前将手部接触部分的棉签棒折掉，把折掉不需要的棉签棒丢弃垃圾桶，做好涂抹人员姓名/工作服/设备部位标识在皿器上8将取好的样带回化验室无菌室进行试验9从取好样的试管中，吸1ml无菌水移入空皿中培养皿/移液管/吸头10倒入琼脂15-20ml在培养皿中，倒完后立即盖好稍微摇匀即可（需要在酒精灯上操作）琼脂/培养皿/酒精灯11待琼脂完全凝固后，翻过来放入361恒温培养箱中，培养120小时361培养箱12培养时间到了后取出，查看平板上的菌群数量并计数并及时记录结果以每只手含菌量计按内控标准执行化验室微生物化验室微生物/理化指标检测项目操作步骤理化指标检测项目操作步骤项目项目步骤步骤使用器具使用器具/药剂药剂大肠杆菌大肠杆菌（MPNMPN计数计数）1药品配制根据月桂基硫酸盐蛋白钛和煌绿乳糖胆盐说明进行配制，配制样品使用的水使用无菌水（蒸馏水1000ml+氯化钠8.5g）月桂基硫酸盐蛋白钛(LST）/煌绿乳糖胆盐（BGLB）/无菌水2辅助器具：剪刀、镊子、移液管、试管、试管架、橡胶塞、小捯管高压灭菌锅/器具灭菌3进入无菌室操作时，使用75%酒精对工作服/手部消毒工作服/75%酒精4使用电子秤称量样品表面的样，样重：25g，电子秤表面需放一张滤纸0.1电子秤/滤纸/剪刀/镊子5将25g的样品放入225ml无菌水中，摇匀分解无菌水/样品8吸入1ml到有9ml LST试管中，盖好塞子（需要在酒精灯上操作）LST的试管/酒精灯9做好记号（日期/样品名称/稀释倍数）可擦拭记号笔10放入361培养箱24h2h361培养箱11不产气继续培养至482h361培养箱12产气就从产气的LST中接种1环到BGLB中放入361培养482h，观察产气情况。接种棒/BGLB的试管/361培养箱13未产气阴性/产气阳性结果判定