Bt杀虫晶体蛋白-肠溶性微囊制备方法的初步研究.pdf

3 7 4 C h i n e s eA g r i c u l t u r a lS c i e n c eB u l l e t i nV 0 1 2 4N o 112 0 0 8N o v e m b e rh t t p：w w w c a s b o r g c r lB t 杀虫晶体蛋白一肠溶性微囊制备方法的初步研究阮传清1，刘芸1，张明政2，朱琳珊2，刘波1(1 福建省农业科学院农业生物资源研究所，福州3 5 0 0 0 3；2 福建农林大学，福州3 5 0 0 0 2)摘要：I 目的】研究B t(B a c i U u st h u r i n g e n s i s)晶体蛋白肠溶性微囊的削备方法，为进一步研究它对防止紫外线损伤晶体蛋白及促进晶体蛋白在害虫中肠快速释放等方面的作用奠定基础“方法】用复相乳液法制备肠溶性微囊，并应用L。6(4 5)正交试验设计研究相关因子对微胶囊包封率的影响；【结论】采用复相乳液法可以制备B t 晶体蛋白的肠溶性微囊。5 个因子对包封率有显著影响。影响大小依次为乳化转速H P M C P 浓度(壁材)B t 晶体蛋白含量(芯材)蓖麻油含量(助剂)甲基纤维素浓度(亲水胶体)。以5 0 0 m 1分散系为条件。筛选出的肠溶性微胶囊较佳工艺为：8 6 m g m L B t 晶体蛋白溶液l m l，2 0 m g m L H P M C P溶液5 0 m l 及蓖麻油2 m l，三者混合并在匀化器转速6 0 0 0 r m i n 下乳化，而后分散于2 1 或3 3 甲基纤维素钠溶液中成囊。关键词：苏云金芽孢杆茵(B a c i l l u st h u r i n g e n s i s)；肠溶性微胶囊；B t 伴孢晶体蛋白中图分类号：Q 9 3 9 9 5文献标识码：AE l e m e n t a r ys t u d i e so nt h ep r e p a r a t i o nt e c h n o l o g yo fe n t e r i cm i c r o c a p s u l eo fi n s e c t i c i d a lc r y s t a lp r o t e i n sf r o mB a c i l l u st h u r i n g e n s i sb yo r t h o g o n a lm a t r i xm e t h o dR u a nC h u a n q i n 9 1，L i uY u n l，Z h a n gM i n g z h e n 9 2,Z h uL i n s h a n 2,L i uB 0 1(1 I n s t i t u t eo f A g r o-b i o l o g i e a lR e s o u r c e s，F u j i a nAc a d e m yo f A g r i c u l t u r eS c i e n c e s，F u z h o u3 5 0 0 0 3；2 F u j i a nA g r i c u l t u r ea n dF o r e s t r yU n i e e 瑙U y,F u z h o u3 5 0 0 0 2)A b s t r a c t：O B J E C T I V E T h ep a p e ra i m e dt or e s e a r c ht h ep r e p a r a t i o nt e c h n o l o g yo fe n t e r i cm i c r o c a p s u l e so fi n s e c t i c i d a lc r y s t a lp r o t e i n s(I C P)o fB a c i l l u st h u r i n g e n s i s(s t)M e t h o d D o u b l ee m u l s i o nm e t h o dw a su s e df o rt h ee f f o r tt op r e p a r ee n t e r i cm i c m e a p s u l e sw i t hI C Pa sc o r em a t e r i a la n dh y d r o x y p r o p y lm e t h y l c e l l u l o s ep h t h a l a t e(H P M C P)a ss h e Hm a t e r i a l E x p e r i m e n ti no r t h o g o n a lm a t r i xd e s i g n L 1 6(4 5)】W i l l su s e dt ov a l u et h ei n f l u e n c eo ft h er e l e v a n te l e m e n t s R e s u l t s E n t e r i c。m i c r o c a p s u l e sw r a p p i n gI C Pc o u l db ep r e p a r e db yd o u-b l ee m u l s i o nm e t h o d T h ee n c a p s u l a t i o no fI C Pw a si n f l u e n c e db yf a c t o r ss u c ha se m u l s i f i c a t i o nr o t a t i o ns p e e d，c o n c e n t r a t i o no fs h e l la n dc o r em a t e r i a l s，e m u l s i f i c a t i o na g e n ta n dh y d r o c o l l o i d s，w h i c hw e r eh s t e di nap a t t e r no fd e c r e a s i n gi m p o r t a n c e I n5 0 0m la q u e o u sm e d i u mf o rf o r m a t i o no ft h em i c r o c a p s u l e s，t h eo p t i-m a lt e c h n o l o g yw a st oe m u l s i f y1m l8 6 m g m LI P C，5 0 m l2 0 m g m LH P M C Pa n d2m lc a s t o ro i la te m u l s i f i-c a t i o nr o t a t i o ns p e e do f6 0 0 0r m i n t h e nd i s p e r s et h ee m u l s i o ni n2 1 o r3 3 c a r b o x y m e t h y lc e H u l o s ef C M C-N a)K e yw o r d s：B a c i l l u st h u r i n g e n s i s，e n t e r i cm i c r o c a p s u l e，B tc r y s t a lp r o t e i n s基金项目：福建省自然科学基金项目(Z 0 5 1 6 0 5 7)；福建农业科学院创新基金(C 2 0 0 7 Q J 0 2)和国影8 6 3”计划(2 0 0 6 A A l 0 A 2 1 2)第一作者简介：阮传清，男，1 9 7 4 年出生，福建周宁人，主要从事生物农药研究。通信地址：3 5 0 0 0 3 福建省福州市五四路2 4 7 号农科院内生物技术研究所，T e l：0 5 9 1-8 7 8 4 8 9 3 3，E m a i l：r u a n国cq1 6 3c o m通讯作者：刘波，男，1 9 5 7 年出生，福建惠安人，研究员，博士，主要从事生物技术和生物防治研究。通信地址：3 5 0 0 0 3 福州市五四路2 4 7 号福建省农业科学院，T c l：0 5 9 1 8 7 8 4 8 9 3 3，E-r e a l h l a e p t b 1 6 3 c o m。收穑日期：2 0 0 8-0 8-0 4，修回日期：2 0 0 8 0 8 2 7。万方数据中国摩擘礓撮第2 4 卷第1 1 期2 0 0 8 年1 1 月h t t p：l l w w w e a s b o r g c n3 7 5 苏云金芽孢杆菌(B a c i l l u st h u r i n g i e n s i s，简称B t)因具有绿色、环保等优点而倍受青睐，成为了目前研究最深，应用最广的一种微生物类杀虫剂【1 1。分离的B t 菌种已达7 0 个H 血清型，8 3 个亚种，B t 制剂产量占所有活体微生物杀虫剂的比例达9 0 以上 2 1。但是现有的B t制剂仍存在单种制剂杀虫谱较窄、杀虫速率慢、易受紫外线损伤而迅速失效等问题，田间杀虫效果仍不如化学农药理想。如何提高田间杀虫效果一直是应用B t 防治害虫的工作重点【3】。微胶囊技术是用成膜材料把药物包裹形成微小粒子的一种技术，由此形成的微胶囊可以有效防止环境因素对有效药物的损伤，是农药剂型的主要发展方向之一闱。肠溶性微胶囊是近年发展起来的一种可控释放药物的微胶囊类型。它不仅可以保护被包裹的药物免受紫外线及酸性环境的损伤，而且可以在人或动物肠道定位溶解、释放药物，达到充分发挥药物活性的目的。肠溶性成膜材料工业的发展及微胶囊制各技术的成熟大大降低了肠溶性微胶囊剂的生产成本，促进了肠溶性微胶囊的推广应用嘲。目前肠溶性微胶囊的应用研究主要集中在医药行业方面，市上已出现了多种商品化产品嗍。肠溶性微胶囊在杀虫剂中的研究尚无报道。笔者根据鳞翅目中肠环境为碱性，p H显著高于田间环境的特点 9 1，选用p H 依赖型高分子物质羟丙基甲基纤维素苯二甲酸酯(H P M C P)为囊壁材料，以B t 的活性杀虫物质伴孢晶体蛋白为囊芯，研究该种肠溶性微胶囊的基本制备工艺，为应用肠溶性微胶囊保护B t 免受紫外线损伤、提高B t 杀虫效果开辟新途径。同时也为其它生物农药剂型的研究提供参考。1 材料与方法1 1 试验时间、地点试验于2 0 0 8 年3 月3 日至5 月9 日在福建省农业科学院农业生物资源研究所完成。1 2 试验材料试验采用的B t 晶体产生菌为该研究所保存的菌株B tL S Z 9 4 0 8。参考朱育菁(2 0 0 5)的方法【l O l 生产B t 发酵液。伴孢晶体通过液体双相法 1 1 1 分离提取，再碱裂解获得B t 晶体蛋白溶液，蛋白含量为8 6 m g m L。其它试剂为：羟丙基甲基纤维素苯二甲酸酯(H P M C P)、甲基纤维素钠(C M C-N a)、蓖麻油等。主要仪器有F S H 2 A 匀浆机(江苏金伟试验仪器厂)、7 8 1 磁力搅拌器(国华电器有限公司)、S i g m a 高速冷冻离心机(德国)、岛津U V 2 5 5 0 型紫外分光光度计(日本)、S I M S 5 0 0 0 0 M i l l i p o r e 超纯水系统(法国)等。1 3 试验方法1 3 1 肠溶性微胶囊基本制备方法以H P M C P 为壁材，按以下步聚制备B t 晶体蛋白的肠溶性微胶囊：(1)称取H P M C P，溶于丙酮乙醇(1：1v v)混合液中，配成溶液I。(2)将B t 晶体蛋白溶液、蓖麻油与溶液I 混合，采用匀浆机进行搅拌使其分散均匀，由此得到w o 的乳液I I。(3)配制亲水胶体溶液，在磁力搅拌器搅拌下将乳液缓慢分散于其中，得到w o w 的双乳液。将其置于磁力搅拌器上，温度3 0 低速搅拌，让溶剂丙酮慢速蒸发，同时微胶囊生成。(4)2 0 m i n 后静止混合液，待沉淀出现时弃去上清，沉淀即是肠溶性微胶囊。1 3 2 微胶囊配方的正交试验设计采用L l。(4 5)正交设计表，对搅拌速度、芯材含量、囊壁材料浓度、乳化剂含量、亲水胶体浓度等5 个因素进行研究，每个因素设4个水平，因素与水平列于表l。试验共1 6 个处理，试验设计参见表2，制备方法如1 1 2 所述。试验设3 次重复。表1 正交试验因素及水平1 3 3B t 晶体蛋白含量的测定与包封率计算将通过不同处理制得的微胶囊离心、洗涤数次后，在抽真空条件下干燥，称重。称取一定量的微胶囊，经p H 8 5 碱性缓冲液裂解，然后采用f o l i l l 酚法测定吸收值。另采用牛血清白蛋白制定f o l i n 酚标准曲线。由此各处理得微胶囊的B t 晶体蛋白含量，计算包封率。包封率=微胶囊B t 蛋白总含量B t 蛋白加入量。2 结果与分析2 1 正交试验结果以H P M C P 为壁材、B t 晶体蛋白为芯材，对乳化转速、芯材含量、囊壁材料浓度、乳化剂含量、亲水胶体浓度等5 个因素，分别设定4 个水平，进行L。(4 5)微胶囊化正交试验。结果，不同组合制备的微胶囊对B t 晶体蛋白的包封率如表2 所示。5 号配方的包封率最高，为8 9 4；其次为1、6、7、8 号配方，包封率为4 9 6-5 8 3；万方数据C h i n e s eA g r i c u l t u r a lS c i e n c eB u l l e t i nV 0 1 2 4N o 112 0 0 8N o v e m b e r3 7 6 h t t p：w w w c 础。唱舳翟幽匿硼圜注：A、B、c、D、E 分别代表乳化转速、芯材含量、囊壁材料浓度、乳化剂含量、亲水胶体浓度等5 个因素，因素列中的l、2、3、4 代表四个不同的因素水平。各处理后含相同大字母，表示差异不显著Q 0 o D 表3 为各因子对微胶囊包封率影响的极差分析注；“”表示差异极显著(p O 0 1)，不同小字母表示同一因素不同水平间的显著性差异(p O 0 5)，大字母表示同一因素不同水平间的极显著性差异0 O o D最低为3、4 号配方，包封率为3 6 3 3 6 6。2 2 正交试验的极差分析表3 是各因子不同水平对微胶囊包封率的极差分析，由极差R 值可得出，各因素对微胶囊包封率影响作用的大小顺序依次为：乳化转速 壁材浓度 芯材含量 乳化剂含量 亲水胶体浓度。2 3 正交试验结果的方差分析以上极差分析虽然简便，但不能给出误差的估计量，需要对试验结果做进一步方差分析，才能正确估计各因素各水平的差异来源。表4 为正交试验方差分析结果，从中可以看出，各因素对微胶囊包封率均有显著影响。从同一因素不同水平的差异显著性分析结果表 万方数据中回麈掌通报第2 4 卷第1 1 期2 0 0 8 年1 1 月h t t p：w w w e a s b o r g e n3 7 7 明，乳化转速不同水平下的微胶囊包封率依次为：水平2 水平3 水平l、4；而芯材含量不同水平的包封率依次为：水平1 水平3、4 水平2；壁材浓度：水平2 水平l 水平3、4；乳化剂含量：水平3 水平l、2 水平4；亲水胶体浓度：水平l、4 水平2 水平3。为便于直观分析，将以上5 因素的4 个水平为横坐标，以各因素i 水平下的包封率平均值为纵坐标，作正交试验5 因素与B t 晶体蛋白包封率关系图(图1)。由图l 可得出5 个因素的最优水平组合为A 2 8 1 C 2 D 3 E l 或A 2 8 1 C 2 D 3 E 4(5 号配方)，即8 6 m g m LB t 晶体蛋白l m l，2 0 m g m L 壁材溶液5 0 m l及乳化剂2 m l，在匀化器转速6 0 0 0 r r a i n 下乳化，而后分散于3 3 或2 1 亲水胶体(C M C-N a 溶液)中。A 1A 2A 3A 4B lB 2B 3B 4C l C 2 C 3 C 4D 1D 2 D 3 D 4E 1 E 2 E 3 E 4图l 正交试验5 因素与微胶囊对B t 晶体蛋白包封率的关系图注：A、B、C、D、E 分别代表乳化转速、芯材含量、囊壁材料浓度、乳化剂含量、亲水胶体浓度等5 个因素；l、2、3、4 分别代表各因素的4 个水平图2 配方5 制备的肠溶性微胶囊表5 较佳配方的包封率图3 配方1 7 制备的肠溶性微胶囊注：A、B、C、D、E 分别代表乳化转速、芯材含量、囊壁材料浓度、乳化剂含量、亲水胶体浓度等5 个因素：l、2、3、4 分别代表各因素的4 个水平2 4 微胶囊化较佳配方的验证按以上分析得到的配方制备微胶囊，观察微胶囊形态，并测定包封率。结果如下图2、3，及表5 所示。所制得的微胶囊为球形，但直径大小不一致，在p H8 5的缓冲液中几分钟内可完全崩解。5 号配方与1 7 号配方在包封率上无显著差异，都在8 5 左右。3 讨论B t 伴孢晶体是生物农药B t 最主要的杀虫活性物质同。其杀虫活性的发挥受多种因子的影响【1 2 1。在害虫吞食B t 之前，紫外线损伤是B t 迅速失效的主要原因之一【”l。在B t 被吞食进入害虫体内后，伴孢晶体在害虫中肠的溶解速度、杀虫毒性肽的释放效率等都可影响B t 的杀虫效果0 2,1 4 1。因此B t 剂型的研究不仅要考虑B t 制剂在害虫吞食之前免受紫外线损伤，而且要注意B t 制剂在害虫吞食之后能够快速释放活性物质和增效剂。现在在生产上应用的B t 制剂仍存在田间应用效果不够理想、残效期短、防效不稳定、杀虫速度慢等问题。产生这些问题的主要原因就是现有剂型仍不能加翮加mo 万方数据3 7 8 C h i n e s eA g r i c u l t u r a lS c i e n c eB u l l e t i nV 0 1 2 4N o 112 0 0 8N o v e m b e rh t t p：w w w c a s b o r g c n对影响B t 杀虫效果的因子进行很好地控制，使B t 的杀虫活性得以最大限度地发挥，如不能防止紫外线对B t 杀虫物质的损伤，不能促进B t 杀虫蛋白在体内的迅速释放等。在B t 剂型改进方面，微胶囊剂(包括纳米微粒)是一新的发展方向4 。美国科学家的系列研究表明，用淀粉制成的B t 微胶囊能提高B t 在田间条件下使用的稳定性，延长残效期【1 6 1。中国1 9 9 5 年试制出B t微胶囊原粉。此后，朱丽云等采用明胶、阿拉伯胶、海藻胶、果胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、B 环糊精、麦芽糊精、改性淀粉等天然材料为壁材，对B t 微囊剂进行了更进一步的研究，结果表明微囊化技术可延长B t 残效期，提高杀虫效果旧。这些研究只关注保护B t 的杀虫活性，对于B t 杀虫物质在害虫体内的快速释放却未预注意。为了在保护B t 不受环境中紫外线辐射的同时，加速B t 杀虫物质在害虫体内的释放，笔者采用p H 依赖型材料H P M C P 作包衣，通过复相乳液法将B t 晶体蛋白包裹成了肠溶性微胶囊。该微囊在p H 8 5 环境下可快速崩解。正交试验分析结果表明，乳化转速、芯材含量、囊壁材料浓度、乳化剂含量、亲水胶体浓度等均可影响微胶囊对B t 晶体蛋白的包封率。其中乳化器的乳化转速影响最大，当乳化转速过低时，壁材不能很好分散而在后续工艺中形成絮状物，不生成微胶囊，因此包封率低；乳化转速过高时，虽然形成的微胶囊直径小，但亦不利于包封率的提高。其次选择合适的壁材浓度也有利于提高包封率：含量太低，无法充分包裹B t 晶体蛋白，而太高时，高浓度的壁材乳液不能及时分散在亲水性胶体溶液中，而结合形成大量的絮状物。而亲水胶体的使用有利于促进w o w 乳液在分散系中的稳定性，从而提高成囊效果。目前，肠溶性微胶囊在农药中的应用尚未见报道。B t 晶体蛋白肠溶性微胶囊制备的初步成功，为考察肠溶性微囊在改进B t 剂型，提高杀虫效果方面的作用奠定了基础。然而，在提高B t 杀虫效果方面，肠溶性微囊是否比普通微胶囊有更多的优点，有待进行研究。4 结论试验通过复相乳液法，首次应用p H 依赖型材料H P M C P 将B t 晶体蛋白制成了肠溶性微胶囊。正交试验表明，在微囊制备过程中，B t 晶体蛋白溶液与H P M C P 溶液的混合比例、乳化程度，以及H P M C P 溶液自身的浓度、蓖麻油用量和亲水胶体浓度均对B t 晶体蛋的包封率有显著影响。对以上相关因素的正交试验结果是：在2 0 m g m LH P M C P 溶液5 0 m l 中加入8 6 m g m LB t 晶体蛋白溶液I m l 及2 m l 蓖麻油，以6 0 0 0 r m i n 速度进行乳化形成w o 悬浮液。将此悬浮液在磁力搅拌下分散于5 0 0 m l 含有2 1 或3 3 C M C-N a 的亲水胶体中，可制得肠溶性微囊，并且对B t 晶体蛋白的包封率较高。参考文献【l】张中社，赵俊侠苏云金杆菌的研究进展陕西林业科技,2 0 0 1,4：6 5-6 8【2】朱玮，赵兵，王晓东，等生物农药苏云金芽孢杆菌的研究进展过程工程学报,2 0 0 4,4(3)：2 8 2-2 8 8【3】祁红兵，刘铭，李红，等产几丁质酶苏云金芽孢杆菌的筛选及其对甜菜夜蛾高毒菌株的增效活性江苏农业科学,2 0 0 3,6：6 1-6 3【4】朱丽云，孙培龙，张立钦，等微生物农药微胶囊技术及其应用前景浙江林学院学报,2 0 0 2，1 9(1)：1 0 9 11 2【5】曹永梅，许时婴肠溶性双歧杆菌微胶囊的制备适用技术市场，2 0 0 0 3：1 9-2 0【6】陈挺，张焱，陈庆华，等水性包衣工艺制备红霉素肠溶微丸的石耳究中国药学杂志,2 0 0 2，3 7(6)：4 3 3-4 3 5【7】何风慈，陈亮罗红霉素肠溶微囊研制中国药房，2 0 0 0，11(1)：2 1 2 1【8】郭圣荣，黄惠琼新型丙烯酸树脂肠溶包衣材料的合成与应用药学学报，1 9 9 8，3 3(1I)：8 6 0 8 6 3【9】邵宗泽，喻予牛昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体毒力的影响昆虫学报，2 0 0 2，4 5(3)：3 8 4-3 9 0【1 0 3 朱育菁，刘波，C S e n g o n e a 苏云金芽孢杆菌L S Z 9 4 0 8 虫体复壮的研究昆虫天敌,2 0 0 5，2 7(2)：6 3-6 7【l1】P 髓d l 郇o nI M o r r i s o nRB S e p a r a t i o no f t h es p o r e sa n dc r y s t a l so f B a c i l l u st h u r i n g i c a s i s N a t u r e，1 9 6 6，2 1 2：7 2 8-7 2 9 1 2】王明道，尹新明无机盐对B t 制剂防治棉铃虫的增效作用研究河南农业大学学报，1 9 9 9，3 3(2)：1 8 6-1 8 9【1 3】王碧琴，闵炜苏云金杆菌菌体保护剂和增效剂的筛选江西科学，1 9 9 6，1 4(3)：1 6 7 1 7 1 1 4】徐健，殷向东，朱锦磊，等苏云金杆菌毒力活性影响因子研究江苏农业科学 2 0 0 3，(3)：4 1 4 2 4 3【1 5】彭可凡苏云金芽孢杆菌杀虫剂的剂型加工研究进展微生物学杂志2 0 0 0,2 0(1)：3 5-3 7【1 6】E l q i nYM，0 l【t e m e r 九L a r v i c i d a la n d 删b e h a v i o u ro fB a c i l l u ss p h a e r i c u s2 3 6 2i n 翻唧丑目咒n 弛m i c r o c a p s u l e s【J】J o u r n a lo fC o n-t r o l l e dR e l e a s e，(3 3)：2 4 5-2 5 1【1 7】朱丽云，马良进，孙培龙，等苏云金杆菌微胶囊剂的研制农业环境科学学报，2 0 0 5，2 4(5)：9 6 6 9 6 9 万方数据Bt杀虫晶体蛋白-肠溶性微囊制备方法的初步研究Bt杀虫晶体蛋白-肠溶性微囊制备方法的初步研究作者：阮传清，刘芸，张明政，朱琳珊，刘波，Ruan Chuanqing，Liu Yun，ZhangMingzheng，Zhu Linshan，Liu Bo作者单位：阮传清,刘芸,刘波,Ruan Chuanqing,Liu Yun,Liu Bo(福建省农业科学院农业生物资源研究所,福州,350003)，张明政,朱琳珊,Zhang Mingzheng,Zhu Linshan(福建农林大学,福州,350002)刊名：中国农学通报英文刊名：CHINESE AGRICULTURAL SCIENCE BULLETIN年，卷(期)：2008,24(11)参考文献(17条)参考文献(17条)1.张中社;赵俊侠 苏云金杆菌的研究进展期刊论文-陕西林业科技 2001(4)2.朱玮;赵兵;王晓东 生物农药苏云金芽孢杆菌的研究进展期刊论文-过程工程学报 2004(03)3.祁红兵;刘铭;李红 产几丁质酶苏云金芽孢杆菌的筛选及其对甜菜夜蛾高毒菌株的增效活性期刊论文-江苏农业科学 2003(6)4.朱丽云;孙培龙;张立钦 微生物农药微胶囊技术及其应用前景期刊论文-浙江林学院学报 2002(01)5.曹永梅;许时婴 肠溶性双歧杆菌微胶囊的制备 20006.陈挺;张焱;陈庆华 水性包衣工艺制备红霉素肠溶微丸的研究期刊论文-中国药学杂志 2002(06)7.何风慈;陈亮 罗红霉素肠溶微囊研制期刊论文-中国药房 2000(01)8.郭圣荣;黄惠琼 新型丙烯酸树脂肠溶包衣材料的合成与应用 1998(11)9.邵宗泽;喻子牛 昆虫中肠液性质对苏云金芽孢杆菌伴孢晶体毒力的影响期刊论文-昆虫学报 2002(03)10.朱育菁;刘波;C.Sengonca 苏云金芽孢杆菌LSZ9408虫体复壮的研究期刊论文-昆虫天敌 2005(02)11.Pendleton I R;Morrison R B Separation of the spores and crystals of Bacillus thuringicnsis 196612.王明道;尹新明 无机盐对Bt制剂防治棉铃虫的增效作用研究 1999(02)13.王碧琴;闵炜 苏云金杆菌菌体保护剂和增效剂的筛选期刊论文-江西科学 1996(03)14.徐健;殷向东;朱锦磊 苏云金杆菌毒力活性影响因子研究期刊论文-江苏农业科学 2003(03)15.彭可凡 苏云金芽孢杆菌杀虫剂的剂型加工研究进展 2000(01)16.Elcin Y M;Oktemer A Larvicidal and sporal behaviour of Bacillus sphaericus 2362 in carrageenanmicrocapsules17.朱丽云;马良进;孙培龙 苏云金杆菌微胶囊剂的研制期刊论文-农业环境科学学报 2005(05)本文读者也读过(10条)本文读者也读过(10条)1.阮传清.林营志.黄素芳.刘芸.朱育菁.刘波 肠溶性微胶囊技术在Bt剂型中的应用前景会议论文-20052.黄序.戚薇.王建玲.杜连祥 肠溶性双歧杆菌微胶囊的初步研究期刊论文-药物生物技术2002,9(2)3.蒋爱民.阳晖.曹稳.Jiang Aimin.Yang Hui.Cao Wen 肠溶性嗜酸乳杆菌微胶囊工艺研究期刊论文-中国食品学报2006,6(1)4.王陆军.邱瑞桂.李建宇.张媛媛.王琪.袁海龙.WANG Lu-Jun.QIU Rui-Gui.LI Jian-Yu.ZHANG Yuan-Yuan.WANGQi.YUAN Hai-Long 葛根素肠溶纳米粒的制备及体外释放度研究期刊论文-解放军药学学报2009,25(6)5.翟兴礼.ZHAI Xing-li 紫外线对 4 个 Bt 亚种活性的影响期刊论文-河南农业科学2009(7)6.杨汝德.张丽君.陈惠音.郭勇 双歧联菌株微胶囊的制备条件期刊论文-华南理工大学学报(自然科学版)2001,29(10)7.双歧联菌耐酸肠溶性微囊混饮口服液的研制期刊论文-现代食品科技2005,21(4)8.黄家宇.李莉.HUANG Jia-yu.LI Li 甲醛浸渍法制备肠溶软胶囊的条件优化期刊论文-贵阳医学院学报2001,26(2)9.雒春辉 药用肠溶包衣材料的合成研究学位论文200610.阳晖.蒋爱民.YANG Hui.JIANG Ai-min 内源乳化法制备肠溶性嗜酸乳杆菌微胶囊的研究期刊论文-食品研究与开发2008,29(6)本文链接：http:/