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树突状细胞和VEGF在膀胱癌中的表达及其意义【摘要】 目的 探讨人类膀胱癌组织中树突状细胞(dendritic cell，DC)、血管内皮生长因子的表达及其意义。方法 应用免疫组化法，检测45例人类膀胱癌组织中DC和VEGF的表达情况。结果 膀胱癌的临床分期和病理分级与DC的浸润程度呈负相关；与VEGF的表达呈正相关。DC在癌组织中的表达与VEGF呈负相关。 结论 DC和VEGF的表达可以作为判断膀胱癌恶性程度和预后的参考指标，VEGF可以抑制DC在肿瘤组织中的浸润，从而导致肿瘤细胞逃脱机体的免疫监视。 【关键词】 膀胱肿瘤；树突状细胞；血管内皮生长因子 【Abstract】 Objective To study the expression and significance of dendritic cells and vascular endothelial growth factor (VEGF) in human bladderThe expressions of S-100+DC and VEGF in 45 cases of bladder cancer were detected by immunohistochemistry using streptavidin/peroxidase(SP).Results The clinical stage and histological grade of bladder cancer was inversely correlated with the number of S-100+DC；but positively correlated with the expression of VEGF； The expression of VEGF was significantly lower in samples with highly infiltrating S-100+DC.Conclusion The expression of DC and VEGF could be viewed as a valuable index in judging the malignant degree and prognosis of bladder cancer， VEGF could inhibit the infiltration of DC in bladder cancer. 【Key words】 bladder neoplasms； DC； VEGF VEGF可以由肿瘤细胞释放，在肿瘤血管生成过程中发挥着关键作用，近来有研究表明，VEGF可以抑制DC的抗原呈递功能，影响DC的成熟。DC是目前所知的机体内功能最为强大的抗原呈递细胞，在机体抗肿瘤免疫中起着重要作用。但目前国内外很少将研究集中在临床环境下VEGF对DC的抑制作用，笔者利用免疫组化的方法检测了45例人类膀胱癌组织中DC和VEGF的表达情况，并分析其临床意义。 1 材料与方法 标本来源 选择解放军第252医院泌尿外科19962004年有随访和完整资料的膀胱癌患者的手术标本45例，其中男34例，女11例，男：女3：1，年龄3578岁，平均岁。术前未经过任何特殊治疗，术后病理证实均为原发性膀胱移行细胞癌。病理学分级按1978年WHO分级标准：G1 10例，G2 20例，G3 15例。临床分期按世界抗癌联盟标准：TisT1 28例，T2T4 17例。 主要试剂 S-100蛋白兔抗人多克隆抗体(1：200)购于丹麦DAKO公司，VEGF兔抗人多克隆抗体(1：100)购于美国Santa Cruz公司，S-P超敏试剂盒购于福州迈新生物技术开发有限公司。 免疫组化染色 有标本均经10%的中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，取3m切片，分别加入抗S-100蛋白、抗VEGF，4过夜。用S-P染色法显色，操作严格按照产品说明书进行。用滴加PBS液代替一抗作阴性对照。 结果判断 2名病理科医师在不了解临床情况下独立观察，每张切片选取5个最具代表性的高倍视野。S-100蛋白阳性细胞以胞浆、胞核棕色染色为准，分别计数5个高倍视野内阳性细胞数目并以其平均值作为阳性细胞密度。VEGF染色阳性标准为细胞浆染色呈暗褐色或浅褐色，且着色细胞数大于25。 统计学方法 软件进行统计学处理，采用卡方检验、独立样本t检验、F检验及Q检验。 2 结果 S-100DC、VEGF的表达与膀胱癌临床分期、病理分级的关系 高倍光镜下，S-100DC的胞浆和胞核均染成棕色，细胞轮廓呈不规则状，其表面可见数目不等、长短不一的树突状突起，胞核亦成不规则形，S-100DC在癌组织中的浸润密度随着肿瘤临床分期和病理分级的升高而降低，差异有显着性。VEGF着色颗粒主要在癌细胞胞浆及胞膜上，部分癌细胞周围血管内皮细胞呈弱阳性表达，强阳性表达呈暗褐色，弱阳性表达呈浅褐色，VEGF在癌组织中的表达与肿瘤临床分期和病理分级呈正相关。 VEGF表达与S-100DC密度的关系 膀胱癌组织中VEGF阳性表达组的S-100DC浸润密度均值显着低于VEGF阴性表达组。表1 S-100+DC、VEGF的表达与膀胱癌临床病理的关系 表2 VEGF表达与S-100+DC密度的关系 (xs) 3 讨论 血管生成在实体肿瘤的生长、转移和进展中扮演着关键角色1，其发生是由一系列串联相继的过程组成的：突破血管基底膜、迁移、血管内皮细胞的增殖。研究表明，几乎所有实体瘤的生长和转移均依赖于肿瘤血管生成，新生的肿瘤血管不仅是癌细胞增殖、复发的内部条件，也是癌细胞浸润和血行转移的第一路径。血管生成的启动是肿瘤生长微环境中血管生成刺激因子和抑制因子平衡改变的结果，VEGF是主要的血管生成刺激因子，能够特异性刺激内皮细胞的增殖，与正常和异常的血管生成均密切相关2。本研究表明，VEGF主要表达于膀胱癌细胞的胞浆和胞膜上，部分癌细胞周围血管内皮细胞呈弱阳性表达，45例膀胱癌中31例VEGF阳性，阳性率高达%。随着肿瘤临床分期和病理分级的升高，VEGF的浸润程亦显着增多，经Logistic回归分析，差异有显着性，结果说明VEGF可以作为判断膀胱癌预后的一个独立的预后因子。 有研究报道，肿瘤组织中免疫细胞的数量与患者的预后密切相关3，4。树突状细胞是目前所知的机体内功能最为强大的抗原呈递细胞，高表达HLA-DR和S-100蛋白5，能够显着刺激初始T细胞进行增殖，在机体免疫应答的诱导中具有独特的地位。本研究表明，S-100DC的胞浆和胞核均染成棕色，细胞轮廓呈不规则状，其表面可见数目不等、长短不一的树突状突起，胞核亦成不规则形，S-100DC在癌组织中的浸润密度随着肿瘤临床分期和病理分级的升高而降低，差异有显着性，结果说明S-100DC在癌组织中的浸润程度可以作为判断膀胱癌生物学活性的一个重要指标。 VEGF可以抑制DC的成熟，阻断DC的生长过程，降低DC的数量6，7。VEGF可以通过抑制DC介导的免疫反应来促进肿瘤的生长、转移和侵袭。本研究探讨了膀胱癌组织中VEGF的表达与S-100DC浸润的相关性，结果显示癌组织中VEGF阳性表达组的S-100DC浸润密度均值显着低于VEGF阴性表达组，差异有显着性，说明VEGF是一种免疫抑制因子，可以降低肿瘤组织中DC的数量，从而抑制机体的抗肿瘤免疫。 综上所述，笔者认为：VEGF和S-100DC两个指标可以相互补充，均可用于判断膀胱癌恶性程度、估计预后、指导制定合理的个体化综合治疗方案，同时VEGF作为一种免疫抑制因子，可以抑制DC在肿瘤组织中的浸润，从而导致肿瘤细胞逃脱机体的免疫监视。 图1 S-100+DC在膀胱中的表达图2 VEGF在G1级、pTa期膀胱癌中的表达图3 VEGF在G3级、pT3期膀胱癌中的表达【参考文献】 1 Folkman J. Tumor angiogenesis. Adv Cancer Res， 1985，43：175-203. 2 Leung DW， Cachianes G，Kuang WJ，et al. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen. Science，1989，246：1306-1309. 3 Takanami I，Takeuchi K， Naruke M. Mast cell density is associated with angiogenesis and poor prognosis in pulmonary adenocarcinoma. Cancer，2000，88： 2686-2692. 4 Leek RD， Lewis CE， Whitehouse R， etof macrophage infiltration with angiogenesis and prognosis in invasive breast carcinoma. Cancer Res， 1996，56：4625-4629. 5 Banchereau J， Steinmen RM. Dendritic cells and the control of immunity. Nature，1998，392： 245-252. 6 Gabrilovich DI， Chen HL， Girgis K R，et al. Production of vascular endothelial growth factor by human tumors inhibits the functional maturation of dendritic cells. Nat Med， 1996，2： 1096-1103. 7 Gabrilovich D，Ishida T， Oyama T，et al. Vascular endothelial growth factor inhibits the development of dendritic cells and dramatically affects the differentiation of multiple hematopoietic lineages in vivo. Blood， 1998，92：4150-4166.