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HBV相关肝细胞癌患者乙型肝炎病毒基因分型
【摘要】 　　目的了解HBV相关肝细胞癌患者乙型肝炎病毒基因型别及分布特点。方法　采用聚合酶链式反应结合Taqman MGB探针技术对70例HCC患者和57例CHB患者进行HBV基因分型检测和分析。结果HCC患者中C基因型占%，B基因型占%%，BC基因型占%。HCC患者C基因型所占比例显着高于CHB患者()。HCC(40～50)岁年龄组和50岁以上年龄组患者中B基因型分别占%、%;C基因型分别占%、%，两年龄组患者B、C基因型分布均无明显差异(P均)。HCC B、C基因型患者的血清HBeAg阳性率、HBeAb阳性率、e系统(HBeAg HBeAb)阴性率及HBVDNA水平差异均无显着性(P均)。结论南京地区HBV相关HCC患者HBV基因型以C型为主，其次为B型，少量为BC混合型。HCC患者的基因型与发病年龄之间无明显相关性。HCC B、C基因型患者的HBeAg表达状态以及HBVDNA复制水平均无明显差异。
【关键词】 肝细胞癌 乙型肝炎病毒 基因型
　　乙型肝炎病毒(HBV)为环状部分双股DNA病毒，是引起乙型肝炎的病原体。急性HBV感染者中有80%-90%发展为慢性乙型肝炎，其中20%-30%发展为肝硬化、肝癌。在我国约90%的肝细胞癌(HCC)患者均合并HBV感染[1]。目前，根据HBV全基因序列差异≥8%，或S区基因序列差异≥4%，分为A-H 8个基因型。为探讨HBV基因型与HCC的关系，我们对本地区70例HBV相关肝细胞癌患者的HBV基因型进行了分析。
　　1 材料和方法
　　病例选择 70例患者为2004年5月至2006年10月本肝病研究所和本院肿瘤中心收治的HCC患者，其中男性60例，女性10 例，年龄(31～77)岁，平均年龄(±)岁，诊断均符合1999年修订的原发性肝癌诊断标准;另选择同期入院与HCC患者年龄相匹配的57例慢性乙型肝炎(CHB)患者作为对照组，其中男性 51例，女性6例，年龄(20～69)岁，平均年龄(±)岁，诊断均符合2000年中华医学会西安会议修订的《病毒性肝炎诊断标准》。所有患者血清HBsAg和HBVDNA检测均为阳性。
　　试剂和仪器 HBV基因分型采用聚合酶链式反应结合Taqman MGB探针技术，试剂盒由杭州博赛基因诊断技术公司提供。HBV血清标志物检测采用酶联免疫吸附法[ELISA]，HBVDNA 检测采用荧光定量PCR法，试剂盒分别为万泰生物工程公司和深圳匹基生物工程公司产品。
　　统计学方法 采用x2检验和t检验。
　　2 结果
　　HCC和CHB患者HBV基因型分布比较 本组70例HCC和57例CHB患者中共检出B型、C型、BC混合型三种基因型，未发现A、D、E、F、G基因型。见表1。BC混合型例数较少未作比较。
　　表1 HCC患者HBV基因型分布情况[例数注：HCC B基因型与CHB B基因型比较x2=,;HCC C基因型与CHB C基因型比较x2=
　　不同年龄组HCC患者基因型分布情况见表2。
　　表2 不同年龄HCC患者HBV基因型分布情况[例数　注：(40～50)岁年龄组与50岁年龄组B基因型比较x2 =，P值);(40～50)岁年龄组与50岁年龄组C基因型比较x2 =,P值)
　　HCC B基因型与C基因型患者血清HBeAg阳性率、HBeAb阳性率、e系统(HBeAg、HBeAb)阴性率、HBVDNA含量比较 见表3。表3 HCC B、C基因型患者血清HBeAg和HBV复制程度比较[例数注：B基因型与C基因型HBeAg+比较x2=,;B基因型与C基因型HBeAb+比较x2=,;B基因型与C基因型HBeAg- HbeAb-比较x2=,;B基因型与C基因型HBVDNA载量比较t=,
　　3 讨论
　　HBV基因型存在明显的地域性差异。在我国主要以B、C型为主，D型仅见于少数民族地区，A型偶有发现。近年来，关于基因型与肝病严重程度有密切关系的报道较多，许多研究提示，HBV C基因型患者比B基因型患者有更严重的肝损害。Ding等发现在慢性携带者、慢性肝炎、肝纤维化、肝细胞癌患者中C基因型者占有比例逐渐增加，而B基因型者占有比例逐渐减少，认为C基因型与HCC发生有密切相关性。本研究采用聚合酶链式反应结合Taqman MGB探针技术对本地区70例伴HBV感染的HCC患者和57例CHB患者进行了HBV基因分型和比较。结果显示，本地区HCC患者HBV基因型主要以C型为主占%，B型仅占%，少数为BC混合型(%);CHB患者中C型占%，B型占% ，BC混合型占%。统计学结果显示，HCC患者中C型所占比例明显高于CHB患者()，本研究的结果支持C基因型与HCC的发生可能有一定的相关性的观点。C基因型导致更严重肝病的发病机制尚不明确。乙肝病毒主要是通过宿主的免疫机制引起肝损害，由于病毒的基因控制着抗原的表达，不同基因型可能影响抗原的表达以及不同病毒株对免疫清除抵抗力的不同可引起HBV致病性的改变，可能与HCC的发生相关。Kao等报道，在台湾地区，绝大部分HCC患者感染的HBV基因型为B型或C型，其中50岁以下的肝癌与B基因型相关性最大。而60岁以上且伴有肝硬化、肝癌者与C基因型有关。本研究通过对不同年龄组HCC患者基因型分布情况比较，结果显示，(40～50)岁年龄组HCC患者中C基因型所占比例明显高于50岁以上年龄组(%：%)，但两年龄组基因型分布未达到统计学意义。提示基因型别与发病年龄之间似无明显相关性。本研究结果与Kao等的研究结论有一定出入，是否与HBV基因型分布的地域性差异或研究样本量有关有待今后进一步研究。目前，对于HBV复制与其基因型之间的关系尚存在争议。Lindh等分析了48例东亚地区的慢性乙型肝炎携带者基因型与HBeAg和HBVDNA水平的关系，结果显示B、C两基因型患者HBeAg阳性率差异有统计学意义，C型患者的HBVDNA水平较高但未达到统计学意义，认为HBeAg阳性率和HBVDNA水平与基因型相关;谢琴秀等研究了127例不同临床类型HBV感染者的基因型与HBeAg和HBVDNA水平的关系，结果显示B、C两基因型患者HBeAg阳性率、HBeAb阳性率和HBVDNA水平差异均无统计学意义。本次研究结果表明，HCC B基因型和C基因型患者的HBeAg阳性率、HBeAb抗体阳性率、HBeAg阴性率和血清HBVDNA含量差异亦均无统计学意义，与谢琴秀等人的结论基本相同。
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