第八章-病原性球菌的检验.ppt

第一页，共四十五页。一、生物学特性一、生物学特性(txng)（一）形态与染色一）形态与染色：革兰氏阳性革兰氏阳性球型菌，排列球型菌，排列(pili)呈葡萄状。呈葡萄状。无芽胞、无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜。鞭毛，大多数无荚膜。致病性葡萄球菌（致病性葡萄球菌（金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌）菌体较）菌体较小、约小、约0.51um.,普通普通0.41.2um。第一节第一节 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)及其检及其检验验第二页，共四十五页。电镜照片(zhopin)第三页，共四十五页。（二）、葡萄球菌（二）、葡萄球菌(p to qi jn)的分类的分类金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)表面葡萄球菌表面葡萄球菌腐生葡萄球菌腐生葡萄球菌第四页，共四十五页。（三）、金黄色葡萄球菌（三）、金黄色葡萄球菌(p to qi jn)培养特性培养特性 1、需需氧氧或或兼兼性性厌厌氧氧，最最适适生生长长(shngzhng)(shngzhng)温温度度37、PH7.42、对对营营养养要要求求不不高高，在在普普通通培培养养基基中中生生长长良良好好，加加少少量量葡葡萄萄糖糖或或血血液液生生长长更更旺旺盛。盛。3、耐耐盐盐性性强强，在在含含7.515%培培养养基基中中能能生生长。长。第五页，共四十五页。4 4、在在肉肉汤汤中中是是混混浊浊生生长长，时时间间过过长长，有少量沉淀。有少量沉淀。5 5、在在普普通通培培养养基基上上生生长长，可可形形成成圆圆形形，凸凸起起，表表面面光光滑滑，边边缘缘整整齐齐，不不透透明明，直直径径1 12mm2mm的菌落能产生黄色的菌落能产生黄色(hungs)(hungs)色素。色素。第六页，共四十五页。第七页，共四十五页。（四）、金黄色葡萄球菌（四）、金黄色葡萄球菌(p to qi jn)生化特生化特性性 1 1、可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖(r tn)、蔗糖蔗糖，产酸不产气。，产酸不产气。第八页，共四十五页。（五）（五）金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌能产生能产生(chnshng)(chnshng)的毒素和酶的毒素和酶 1、溶血毒素、溶血毒素2、杀白细胞素、杀白细胞素3、血浆凝固、血浆凝固(nngg)酶酶：区分葡萄球菌是否具有致区分葡萄球菌是否具有致病性的重要标志。病性的重要标志。4、脱氧核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶：5、肠毒素、肠毒素6、溶纤维蛋白酶、溶纤维蛋白酶7、透明质酸酶、透明质酸酶第九页，共四十五页。二、二、金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)的致病的致病性性 金黄色葡萄球菌是人类化脓感染(gnrn)中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染(gnrn)，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染(gnrn)。附：附：金黄色葡萄球菌引起的下颚感染金黄色葡萄球菌引起的下颚感染金黄色葡萄球菌引起的须疮感染金黄色葡萄球菌引起的须疮感染葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片第十页，共四十五页。第十一页，共四十五页。金黄色葡萄球菌引起的须疮金黄色葡萄球菌引起的须疮(x chun)感染感染第十二页，共四十五页。葡萄球菌创口葡萄球菌创口(chungku)感染革兰氏染色涂感染革兰氏染色涂片片第十三页，共四十五页。（一）金黄色葡萄球菌（一）金黄色葡萄球菌(p to qi jn)的流行的流行病学病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。近年来，美国疾病(jbng)控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。附：附：美国美国FDA报告的由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的典报告的由金黄色葡萄球菌引起食物中毒的典型案例型案例。媒体关于日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道媒体关于日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道第十四页，共四十五页。媒体关于日本媒体关于日本(r bn)雪印牛奶金黄色葡萄雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道球菌中毒事件的报道日本因食用染菌乳制品中毒者已逾万人(7月6日12:39)大阪市政府日宣布的调查结果显示，因食用日本雪印乳业公司大阪工厂生产的乳制品而中毒者已逾万人。在大阪府和京都府以及附近县，因食用雪印乳业公司大阪工厂生产的乳制品而中毒发病者已达人，其中有人被送往医院，目前还有人在医院接受治疗。据化验，该工厂生产的一些乳制品中含有黄色葡萄球菌，这种细菌可产生使人出现腹泻、呕吐症状的型肠毒素。该厂乳制品染菌是生产设备没有按规定定期清洗而造成的。目前，日本各地超市和食品店都已停止销售(xioshu)雪印牌乳制品，一些地方政府已下令禁止食用雪印牌食品。大阪雪印厂已被当地政府勒令无期限停产，并且大规模回收月下旬出厂的几种染菌食品。总部设在北海道首府札幌市的雪印乳业公司是日本著名乳制食品厂家。该公司在全国共拥有家工厂，其中家工厂加工生产牛奶、牛奶饮料、酸奶等奶品。第十五页，共四十五页。流行病学一般流行病学一般(ybn)有如下特点有如下特点1.季节分布，多见于春夏季；季节分布，多见于春夏季；2.中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。3.此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染源。一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：1.食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；2.食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；中毒；3.熟食制品包装不严，运输过程受到污染；熟食制品包装不严，运输过程受到污染；4.奶牛患化脓奶牛患化脓(hu nng)性乳腺炎或禽畜局部化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓(hu nng)时，对肉体其他部位的污时，对肉体其他部位的污染染第十六页，共四十五页。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)肠毒素肠毒素金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生问题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。肠毒素形成条件：存放温度，在37C内，温度越高，产毒时间越短；存放地点，通风(tngfng)不良氧分压低易形成肠毒素；食物种类，含蛋白质丰富，水分多，同时含一定量淀粉的食物，肠毒素易生成。第十七页，共四十五页。（二）食物中毒(shwzhngd)的临床症状由肠毒素引起毒素进入人体后，潜伏期国1-5小时,最短15分钟,有发病快消失快的特点症状：先唾液分泌(fnm)亢进,恶心、反复呕吐、腹痛、水样腹泻等第十八页，共四十五页。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)污染的控制污染的控制防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮(jichung)、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。防止金黄色葡萄球菌肠毒素的生成 应在低温和通风良好的条件下贮藏食物，以防肠毒素形成；在气温高的春夏季，食物置冷藏或通风阴凉地方也不应超过6小时，并且食用前要彻底加热。第十九页，共四十五页。三、金黄色葡萄球菌三、金黄色葡萄球菌(p to qi jn)的检验的检验方法：增菌培养法、直接方法：增菌培养法、直接(zhji)(zhji)计算法计算法（一）增菌培养法的检验步骤（程序）（一）增菌培养法的检验步骤（程序）检样检样稀释稀释7.5%NaCl 7.5%NaCl 肉汤增菌培养肉汤增菌培养(piyng)(piyng)血平板、血平板、BPBP分离分离镜检、镜检、血浆凝固血浆凝固E试验试验报告结果报告结果 第二十页，共四十五页。（二）检验操作（二）检验操作(cozu)(cozu)要点要点 1：增增菌菌：7.5%Nacl肉肉汤汤，3724h，呈呈均均匀匀浑浑浊浊生生长长(shngzhng)(shngzhng)。2 2：平板分离：血平板：平板分离：血平板,37 2448h菌落成金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，菌落成金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有透明溶血圈（周围有透明溶血圈（型）型）第二十一页，共四十五页。BP平板平板：主要成分及作用主要成分及作用(zuyng)(zuyng)：氯化锂、甘氨酸氯化锂、甘氨酸:抑制非制病性葡萄球的生长抑制非制病性葡萄球的生长丙酮酸钠丙酮酸钠:促进葡萄球菌生长促进葡萄球菌生长亚碲酸钾亚碲酸钾:抑制抑制G G-杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为杆菌生长，可被金黄色葡萄球菌还原为碲盐呈黑色碲盐呈黑色卵黄卵黄:含蛋白质、卵磷、脂肪含蛋白质、卵磷、脂肪第二十二页，共四十五页。在在B-PB-P平板上的菌落特征平板上的菌落特征:为圆形，光滑凸起、湿润、为圆形，光滑凸起、湿润、2-3mm，呈灰色至黑色，边缘色淡周围呈灰色至黑色，边缘色淡周围(zhuwi)(zhuwi)为为浑浊带，在其外层有一透明带。浑浊带，在其外层有一透明带。第二十三页，共四十五页。金黄色葡萄球菌在金黄色葡萄球菌在BP平板平板(pngbn)上的菌落形态上的菌落形态金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)在甘露醇盐平板上的菌落在甘露醇盐平板上的菌落第二十四页，共四十五页。3：镜检与血浆：镜检与血浆(xujing)(xujing)凝固凝固E试验试验从从B-P平平板板上上挑挑取取金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌的的菌菌落落进进行镜检行镜检如发现葡萄球菌,再做血浆(xujing)凝固E试验做血浆凝固做血浆凝固E试验试验第二十五页，共四十五页。金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)血浆凝固酶血浆凝固酶实验实验第二十六页，共四十五页。4：结果：结果(ji gu)(ji gu)报告报告方式方式 （1）初初步步报报告告：根根据据血血平平板板培培养养计计数数和和镜镜检检，如如发发现现有有G+葡葡萄萄串串状状球球菌菌存存在在，且且有有溶溶血血性性，则则初初步步报报告告为为：“有有金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌存存在，在，1g样品约含多少。样品约含多少。”（2）结果报告：根据培养特性、镜检、生化试验）结果报告：根据培养特性、镜检、生化试验(shyn)(shyn)、动物试验、动物试验(shyn)(shyn)结果，可报告为：结果，可报告为：“是否是致病性葡萄球菌是否是致病性葡萄球菌”.第二十七页，共四十五页。思考题思考题1：金黄色葡萄球菌可产生哪些毒素和酶？：金黄色葡萄球菌可产生哪些毒素和酶？2：金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌在在B-P平平板板上上的的菌菌落落特特征征如如何何，说说明明其原理。其原理。3：金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌在在血血平平板板上上的的菌菌落落特特征征如如何何，说说明明其其原理。原理。4：确确认认(qurn)(qurn)葡葡萄萄球球菌菌为为金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌的的依依据据至至少少应包括哪几个试验？应包括哪几个试验？5：金黄色葡萄球菌的形态与染色、培养特征如何？：金黄色葡萄球菌的形态与染色、培养特征如何？第二十八页，共四十五页。第二节第二节 食品食品(shpn)(shpn)中溶血性链球菌的检验中溶血性链球菌的检验 一、概述一、概述 沙沙 志志 金金 链菌链菌二、二、生物学特性生物学特性(txng)(txng)（一）形态与染色：（一）形态与染色：1呈球形或卵圆形，直径呈球形或卵圆形，直径0.5um-1um 链状排列（长短不一）链状排列（长短不一）2 革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性革兰氏染色阳性，衰老培养物常成阴性3 无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜无芽孢、无鞭毛、多数无夹膜 第二十九页，共四十五页。（二）培养（二）培养(piyng)(piyng)特性特性 1、多多数数为为需需氧氧或或兼兼性性厌厌氧氧，少少数数为为微微需需氧氧或专性厌氧或专性厌氧 2、对对营营养养要要求求高高，普普通通培培养养基基不不能能良良好好生长，（需加血清液、腹水生长，（需加血清液、腹水(fshu)(fshu)等）等）3、最适温度最适温度37 PH7.47.6第三十页，共四十五页。4、在在液液体体培培养养基基中中，溶溶血血菌菌株株,呈呈絮絮状状或或颗颗粒粒状状沉沉淀淀生生长长(shngzhng)(shngzhng)（上上清清下下浊浊）；不不溶溶血血菌菌球球，均均匀匀浑浑浊浊生生长长(shngzhng)(shngzhng)，如粪链菌。，如粪链菌。5、在在血血平平板板上上，形形成成灰灰白白色色，半半透透明明、表表面面光光滑滑、有有乳乳光光圆圆形形突突起起的的细细小小菌菌落落，直直径径0.50.75mm，针针尖尖大大小小，菌菌落周围出现溶血环。落周围出现溶血环。链激酶：链激酶：四种溶血。四种溶血。第三十一页，共四十五页。(三三)生化生化(shn hu)(shn hu)特性特性1 1、均分糖葡萄糖产酸、均分糖葡萄糖产酸2 2、对对乳乳糖糖、甘甘露露醇醇、水水杨杨苷苷等等的的分分解解因因菌菌株株而异。而异。3 3、能能使使牛牛奶奶产产酸酸而而不不凝凝固固，不不液液化化明明胶胶(mn(mn jio)jio)、不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）不分解菊糖（肺炎球菌分解葡萄糖）4 4、A A群菌对杆菌肽敏感群菌对杆菌肽敏感第三十二页，共四十五页。（四）致病性链球菌可产生（四）致病性链球菌可产生(chnshng)的毒素和酶的毒素和酶1 1、溶血、溶血(rn xu)(rn xu)素素2 2、致热外毒素、致热外毒素3 3、透明质酸酶、透明质酸酶4 4、链激酶、链激酶5 5、链道酶链道酶6 6、杀白细胞素、杀白细胞素第三十三页，共四十五页。（五）、（五）、抵抗力抵抗力6030min6030min即被杀死，对常用消毒剂敏感即被杀死，对常用消毒剂敏感(mngn)(mngn)乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四乙型链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺均敏感。环素、磺胺均敏感。第三十四页，共四十五页。（六）、（六）、链球菌分类链球菌分类(fn li)(fn li)1 1、按溶血能力按溶血能力(nngl)(nngl)分类分类：（1）甲型（甲型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌（2 2）乙型（）乙型（）溶血性链球菌）溶血性链球菌 （3 3）丙型（丙型（）链球菌）链球菌第三十五页，共四十五页。2 2、按血清学分类、按血清学分类(fn li)(fn li)主要(zhyo)是根据链球菌细胞壁抗原进行公类，这种方法可靠，但工作复杂。组抗原：用英文字母区分，共分18群：A B C D E F G H K L M N O P Q R S T 型抗原：用阿拉伯数字表示，对人类致病的90%在A群中。第三十六页，共四十五页。(七七)流行病学流行病学(li xn bn xu)(li xn bn xu)与致病性与致病性溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品(shpn)如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品(shpn)污染的污染源。一般来说，溶血性链球菌常通过以下途径污染食品(shpn)：1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化脓性炎症时造成食品的污染；2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。化脓性链球菌)第三十七页，共四十五页。三、微生物检验三、微生物检验(jinyn)(jinyn)（一）检验程序（一）检验程序 液体检液体检(tjin)(tjin)样样 固固体体检检样样样样品品处处理理增增菌菌培培养养分分离离培培养养纯纯化化培培养养生生化化鉴鉴定定报告报告第三十八页，共四十五页。（二）检验操作（二）检验操作(cozu)(cozu)要点要点 1 1、采样：食品：按常规、采样：食品：按常规(chnggu)(chnggu)人体：咽拭人体：咽拭 、血、尿、血、尿2 2、增菌培养：、增菌培养：葡萄糖肉浸液肉汤葡萄糖肉浸液肉汤 一般情况一般情况 361 24h 361 24h 匹克氏肉汤：在污染严重时用匹克氏肉汤：在污染严重时用第三十九页，共四十五页。3 3、分分离离(fnl)(fnl)培培养养：血血平平板板，37 37 24h,24h,菌菌落落:灰灰白白色色，半半透透明明或或不不透透明明，表表面面光光滑滑，有透明溶血环有透明溶血环4 4、分纯培养：血平板、分纯培养：血平板 37 24h 37 24h5 5、镜检：革兰氏染色，阳性，、镜检：革兰氏染色，阳性，G G+链状排列，链状排列，符合者可做生化鉴定。符合者可做生化鉴定。第四十页，共四十五页。6 6、生化、生化(shn hu)(shn hu)鉴定：鉴定：（1 1）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）链激酶试验（溶纤维蛋白酶试验）吸取草酸钾血浆吸取草酸钾血浆0.2mL0.2mL，加加0.8mL0.8mL灭菌生理盐水，混匀，灭菌生理盐水，混匀，再再加加入入链链球球菌菌18-24h3618-24h36肉肉浸浸液液肉肉汤汤培培养养物物0.5mL0.5mL及及0.25%0.25%氯化钙氯化钙0.25mL0.25mL，混匀，置于，混匀，置于3636水浴水浴10min,10min,血血浆浆混混合合物物自自行行凝凝固固，观观察察凝凝块块重重新新完完全全溶溶解解的的时时间间，完完全全溶溶解解为为阳阳性性，如如24h24h后后不不溶溶解解即即为为阴阴性性(ynxng)(ynxng)。同同时时用用肉肉浸浸液液肉肉汤汤做做阴阴性性(ynxng)(ynxng)对对照照，用用已已知知的的链链激激酶酶阳阳性性的的菌菌株株做阳性对照。做阳性对照。第四十一页，共四十五页。（2 2）杆菌）杆菌(gnjn)(gnjn)肽敏感试验肽敏感试验 将将分分纯纯的的乙乙型型溶溶血血性性链链球球菌菌接接种种血血平平板板，在划线在划线(hu xin)(hu xin)处贴附杆菌肽纸片，处贴附杆菌肽纸片，3718h3718h，出现抑菌带为阳性，（可推测为乙型溶出现抑菌带为阳性，（可推测为乙型溶血性链球菌）血性链球菌）第四十二页，共四十五页。7 7、报告、报告(bogo)(bogo)：根据培养后的形态(xngti)，菌落特征及生化试验可报告：有乙型溶血性链球菌生长。第四十三页，共四十五页。思考题：思考题：1 1、链链球球菌菌的的溶溶血血现现象象有有哪哪几几个个类类型型(lixng)(lixng)，各各类类型型(lixng)(lixng)的溶血特征如何。的溶血特征如何。2 2、溶溶血血性性链链球球菌菌在在血血平平板板和和葡葡萄萄糖糖肉肉汤汤中中生生长长有有何何特征？特征？3 3、溶血性链球菌能产生什么毒素和酶？、溶血性链球菌能产生什么毒素和酶？4 4、写出链球菌的检验程序，并说明链激酶的反应原理。、写出链球菌的检验程序，并说明链激酶的反应原理。第四十四页，共四十五页。内容(nirng)总结第八章 病原性球菌的检验。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位常成为污染(wrn)源。毒素进入人体后，潜伏期国1-5小时,最短15分钟,有发病快消失快的特点。方法：增菌培养法、直接计算法。链激酶：四种溶血。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染(wrn)的污染(wrn)源。2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染(wrn)。3、溶血性链球菌能产生什么毒素和酶第四十五页，共四十五页。