二细菌的生长繁殖消毒与灭菌.ppt

细细菌菌感感染染的的检检测测(jin c)第一页，共四十七页。实验二实验二 细菌的生长繁殖细菌的生长繁殖(fnzh)、消毒与灭消毒与灭菌菌一、讨论：一、讨论：o1 1、消毒灭菌的方法、实验室生物安全、消毒灭菌的方法、实验室生物安全o2 2、细菌的人工培养、细菌的人工培养(piyng)(piyng)：培养：培养(piyng)(piyng)基、细菌培养基、细菌培养(piyng)(piyng)技术、细技术、细菌生长现象菌生长现象二、示教：二、示教：o1 1、消毒灭菌的常用方法、消毒灭菌的常用方法o2 2、药敏实验、药敏实验o3 3、培养基制备、种类、用途、培养基制备、种类、用途o4 4、细菌生长现象观察、细菌生长现象观察三、操作：细菌的接种（液体、半固体、固体培养基）三、操作：细菌的接种（液体、半固体、固体培养基）第二页，共四十七页。(一）消毒灭菌方法、实验室生物一）消毒灭菌方法、实验室生物(shngw)(shngw)安全安全1.1.常用术语常用术语o消毒消毒(disinfection)(disinfection)：利用理化因素杀死物体或环境中病原利用理化因素杀死物体或环境中病原(bngyun)(bngyun)微微生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原生物的措施。并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原(bngyun)(bngyun)微生物微生物o灭菌灭菌(sterilization)(sterilization)：利用理化因素杀死物体上所有微生物的过利用理化因素杀死物体上所有微生物的过程，包括芽胞。程，包括芽胞。o无菌操作（无菌操作（aseptic technique)aseptic technique)：防止细菌进入人体或其他物品防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。的操作技术。第三页，共四十七页。（2 2）常用）常用(chn yn)(chn yn)方法方法o物理物理消毒消毒(xio d)(xio d)灭菌法：灭菌法：热力灭菌法：干热灭菌法、湿热灭菌法热力灭菌法：干热灭菌法、湿热灭菌法 辐射杀菌法：电离辐射辐射杀菌法：电离辐射-X-X、射线射线 非电离辐射非电离辐射-紫外线、日光、微波紫外线、日光、微波 滤过除菌法：滤过除菌法滤过除菌法：滤过除菌法 干燥低温抑菌法：抑菌和灭菌干燥低温抑菌法：抑菌和灭菌o化学化学消毒灭菌法：消毒灭菌法：o生物消毒灭菌法生物消毒灭菌法第四页，共四十七页。热力(rl)灭菌法o干热灭菌干热灭菌(mi jn)(mi jn)n焚烧、烧灼、焚烧、烧灼、红外线红外线n干烤（干烤（160170/2h160170/2h）第五页，共四十七页。热力(rl)灭菌法o湿热灭菌湿热灭菌n巴氏消毒法：巴氏消毒法：6230min 6230min 或或72 30sec72 30secn煮沸法煮沸法 30min 30minn流动流动(lidng)(lidng)蒸气消毒法蒸气消毒法n间歇蒸气灭菌法间歇蒸气灭菌法 n高压蒸气灭菌法：高压蒸气灭菌法：121,1.05Kg/cm121,1.05Kg/cm2 2(15(15个大个大气压气压),20min),20min第六页，共四十七页。辐射辐射(fsh)杀菌法杀菌法电离辐射：电离辐射：X X、射线射线n原理原理:通过产生通过产生OHOH、O O2 2等活性游离基进行杀菌等活性游离基进行杀菌(sh jn)(sh jn)；通过破坏；通过破坏DNADNA的结构导致菌体死亡的结构导致菌体死亡非电离辐射：非电离辐射：紫外线紫外线、微波、超声波、日光、微波、超声波、日光第七页，共四十七页。辐射辐射(fsh)杀菌法杀菌法：非电离辐射：非电离辐射.紫外线：紫外线：200 200 300nm 300nm日光日光(最佳：最佳：265265266nm)266nm)n原理：导致原理：导致DNADNA分子构型改变分子构型改变DNADNA复制出现差错复制出现差错n用途：只用于空气和物品表面用途：只用于空气和物品表面(biomin)(biomin)的消毒（注意防护）的消毒（注意防护）.微波：细菌体内的蛋白质、核酸等分子在微波场下高速旋转、振微波：细菌体内的蛋白质、核酸等分子在微波场下高速旋转、振动，细菌蛋白质凝固、核酸变性而死亡。动，细菌蛋白质凝固、核酸变性而死亡。n常用于对非金属器械的消毒，优点是无污染而且迅速常用于对非金属器械的消毒，优点是无污染而且迅速 。.超声波是指频率大于超声波是指频率大于20kHz20kHz的声波，其频率高，波长短，定向性的声波，其频率高，波长短，定向性好，穿透力强。好，穿透力强。n原理：空化作用原理：空化作用n用途：液体或可放置液体中不影响其性能的物品用途：液体或可放置液体中不影响其性能的物品 第八页，共四十七页。滤过(l u)除菌法o贝克菲滤器贝克菲滤器 o蔡氏滤器蔡氏滤器 o玻璃滤器玻璃滤器 o膜滤器膜滤器n孔径孔径 0.22um-0.45um 0.22um-0.45um除菌除菌n空气过滤器空气过滤器:无菌棉花、活性炭及细玻无菌棉花、活性炭及细玻璃纤维等璃纤维等n可对空气进行可对空气进行(jnxng)(jnxng)过滤除菌过滤除菌第九页，共四十七页。2、化学(huxu)消毒灭菌法o常用消毒剂常用消毒剂(disinfectants)(disinfectants)的杀菌机制的杀菌机制n使菌体蛋白变性或凝固使菌体蛋白变性或凝固n干扰微生物酶系统和影响其代谢干扰微生物酶系统和影响其代谢(dixi)(dixi)n损伤细胞壁、细胞膜损伤细胞壁、细胞膜环氧乙烷消毒环氧乙烷消毒(xio d)设备设备第十页，共四十七页。化学化学(huxu)(huxu)消毒灭菌法消毒灭菌法高效消毒剂高效消毒剂high-level high-level 中效消毒剂中效消毒剂intermediate-levelintermediate-level低效消毒剂低效消毒剂 low-levellow-level可杀死包括细菌芽胞可杀死包括细菌芽胞在内所有微生物在内所有微生物不能杀死芽胞，可杀不能杀死芽胞，可杀死细菌繁殖体、真菌、死细菌繁殖体、真菌、大多数病毒大多数病毒可杀死大多数细菌繁可杀死大多数细菌繁殖体，对真菌、病毒殖体，对真菌、病毒杀灭力弱杀灭力弱1.1.含氯消毒剂含氯消毒剂2.2.过氧化物消毒剂过氧化物消毒剂3.3.醛类消毒剂醛类消毒剂4.4.环氧乙烷环氧乙烷1.1.含碘消毒剂含碘消毒剂2.2.醇类消毒剂醇类消毒剂1.1.季铵盐类季铵盐类2.2.氯已定氯已定3.3.高锰酸钾高锰酸钾第十二页，共四十七页。医疗器械物品的消毒医疗器械物品的消毒(xio d)灭菌灭菌o高危器械物品高危器械物品 n需进入无菌组织的物品。需进入无菌组织的物品。所有这些物品都应该灭菌所有这些物品都应该灭菌。o中危器械物品中危器械物品 n不进入无菌组织但接触黏膜的器械。不进入无菌组织但接触黏膜的器械。采用消毒采用消毒(xio d)(xio d)即可即可。o低危器械物品低危器械物品 n只只接接触触未未损损伤伤皮皮肤肤但但不不进进入入无无菌菌组组织织和和不不接接触触黏黏膜膜的的物物品品。一一般般用用后后清清洗洗、消消毒即可。毒即可。o快速周转的医疗器械快速周转的医疗器械第十三页，共四十七页。室内空气消毒室内空气消毒(xio d)灭菌灭菌a.物理消毒法物理消毒法 n紫外线照射（紫外线照射（1.5W/m3，1h）最常用；）最常用；n滤滤过过除除菌菌：空空气气通通过过孔孔径径小小于于0.2 m的的高高效效过过滤滤装装置置以以除去细菌和带菌尘埃除去细菌和带菌尘埃(chn i)b化学消毒法化学消毒法 包括化学消毒剂喷雾和熏蒸包括化学消毒剂喷雾和熏蒸n过氧乙酸喷雾、熏蒸；过氧乙酸喷雾、熏蒸；n过氧化氢喷雾；过氧化氢喷雾；n二氧化氯溶液喷洒；二氧化氯溶液喷洒；n中草药点燃烟熏中草药点燃烟熏第十四页，共四十七页。手和皮肤手和皮肤(p f)的消毒的消毒o用肥皂用肥皂(fizo)(fizo)和流动水经常并正确洗手和流动水经常并正确洗手o病原微生物污染时应用消毒剂消毒病原微生物污染时应用消毒剂消毒 第十五页，共四十七页。消毒灭菌消毒灭菌(mi jn)(mi jn)的方法的方法热力热力(rl)(rl)灭菌法灭菌法辐射辐射(fsh)(fsh)杀菌法杀菌法滤过除菌法滤过除菌法干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法湿热灭菌法物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法 化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法 高效消毒剂高效消毒剂中效消毒剂中效消毒剂低效消毒剂低效消毒剂第十六页，共四十七页。3 3、实验室生物、实验室生物(shngw)(shngw)安全安全o生物安全（生物安全（biosafetybiosafety）是生物技术安全的简称）是生物技术安全的简称o狭狭义义的的指指现现代代生生物物技技术术的的研研究究、开开发发、应应用用及及转转基基因因生生物物可可能能对对生生物物多多样样性性、生生态态环环境境和和人人类类健健康康产产生潜在的危害。生潜在的危害。o广义的指与生物有关的各种因素广义的指与生物有关的各种因素 对社会、经济、人类健康及生态对社会、经济、人类健康及生态(shngti)(shngti)环境所产生的危害或潜在风险。环境所产生的危害或潜在风险。第十七页，共四十七页。（1）生物）生物(shngw)安全的内容安全的内容o转基因生物、外来入侵转基因生物、外来入侵(rqn)物种、环境污染物种、环境污染o病原微生物（感染性疾病、人畜共患疾病、动物病原微生物（感染性疾病、人畜共患疾病、动物疾病、食源性疾病、医院感染）疾病、食源性疾病、医院感染）o实验室泄漏：实验室泄漏：o生物武器、生物恐怖生物武器、生物恐怖o遗传资源保护遗传资源保护o合成生物技术合成生物技术o转基因及其它新型生物技术转基因及其它新型生物技术第十八页，共四十七页。事故引发事故引发(yn f)的的生物危害生物危害 o是是由由进进行行病病原原体体研研究究、教教学学、诊诊断断、治治疗疗、生生物物制制品品研研发发和和生生产产等等机机构构的的事事故故导导致致病病原原体体泄泄漏漏，引引发发了了传传染染病病暴暴发发的的生生物物灾灾害害。这这类类生生物物灾灾害害往往往往影响较大，危害范围小，造成局部灾害大，持续短影响较大，危害范围小，造成局部灾害大，持续短n19791979年年，苏苏联联国国防防微微生生物物与与病病毒毒研研究究所所炭炭疽疽芽芽孢孢(y(y bo)bo)干干粉粉制制剂剂车车间间的的加加压压系系统统爆爆炸炸，约约1010公公斤斤芽芽孢孢(y(y bo)bo)粉粉剂剂泄泄漏漏，造造成成斯斯维维尔尔德德洛洛夫夫斯克城数百人伤亡。斯克城数百人伤亡。n20032003年年9 9月月新新加加坡坡国国立立卫卫生生研研究究院院BSLBSL3 3实实验验室室发发生生研研究究人人员员感感染染SRASSRAS病毒的事故。病毒的事故。n20032003年年1212月月我我国国台台湾湾省省一一实实验验室室也也发发生生了了研研究究人人员员感感染染SRASSRAS病病毒毒的的事故，事故，n20042004年年4 4月我国国家月我国国家CDCCDC的专业实验室发生了的专业实验室发生了SARSSARS的实验室人员感染。的实验室人员感染。第十九页，共四十七页。（2）如何实现）如何实现(shxin)实验室生物安全？实验室生物安全？加强管理，规范行为，消除隐患，确保安全加强管理，规范行为，消除隐患，确保安全 如何管？如何管？依法、规范管理依法、规范管理 管那些？管那些？病原微生物、实验室设立、病原微生物、实验室设立、风险评估、实验活动风险评估、实验活动(hu dng)(hu dng)、实验、实验 装备、废弃物、人员装备、废弃物、人员第二十页，共四十七页。类类 别别根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，第一类第一类能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物发现或者已经宣布消灭的微生物 。第二第二类类能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。第三第三类类能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物并且具备有效治疗和预防措施的微生物第四第四类类在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等病毒等病原病原(bngyun)微生物分类管理微生物分类管理第二十一页，共四十七页。病原病原(bngyun)微生物实验室的分级管理微生物实验室的分级管理第二十二页，共四十七页。（二）细菌的人工（二）细菌的人工(rngng)(rngng)培养：培养：o培养基的概念、种类培养基的概念、种类(zhngli)(zhngli)、用途、用途o细菌培养技术细菌培养技术o细菌生长现象细菌生长现象第二十三页，共四十七页。1.1.培养基的概念培养基的概念(ginin)(ginin)、种类、用途、制备、种类、用途、制备培养基培养基（culture medium)culture medium):是由人工方法配制而成的，专供微生物是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合生长繁殖使用的混合(hnh)(hnh)营养物制品。营养物制品。基础培养基基础培养基 增菌培养基增菌培养基 选择培养基选择培养基 鉴别培养基鉴别培养基 厌氧培养基厌氧培养基 根据物理性状：根据物理性状：液体、固态、半固体液体、固态、半固体根据(gnj)用途第二十四页，共四十七页。牛肉膏牛肉膏 3.0g 3.0g 蛋白胨蛋白胨 10.0g 10.0g氯化氯化钠（氯化氯化钠（NaCLNaCL）5.0g 5.0g磷酸二氢钾（磷酸二氢钾（KH2PO4KH2PO4）1.0g 1.0g琼脂琼脂 15.0g 15.0g蒸馏水蒸馏水 1000mL 1000mL混匀，加热溶解，调混匀，加热溶解，调PHPH至至7.67.6分装，分装，112kPa112kPa高压灭菌高压灭菌(mi jn)(mi jn)15min15min，冷却至，冷却至4545倾注灭菌倾注灭菌(mi jn)(mi jn)平板。平板。普通普通(ptng)琼脂平板制备琼脂平板制备第二十五页，共四十七页。2.2.细菌的培养细菌的培养(piyng)(piyng)方法方法o分离培养：划线接种在固体培养基的表面分离培养：划线接种在固体培养基的表面(biomin)(biomin)，因划线的分，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面(biomin)(biomin)上散开。上散开。o纯培养：挑取一个菌落，移种到另一培养基中，可生长出来的大量的纯培养：挑取一个菌落，移种到另一培养基中，可生长出来的大量的纯种细菌。纯种细菌。o发酵培养：在适宜的条件下，发酵罐中大量培养微生物（细菌、真菌发酵培养：在适宜的条件下，发酵罐中大量培养微生物（细菌、真菌等）细胞和生产代谢产物的工艺过程。等）细胞和生产代谢产物的工艺过程。第二十六页，共四十七页。分离分离(fnl)(fnl)培养：培养：第二十七页，共四十七页。纯培养纯培养(pure culture)(pure culture)液体液体培养基培养基斜面斜面培养基培养基菌落菌落(jnlu)(jnlu)(colony)(colony)纯培养纯培养(piyng)：第二十八页，共四十七页。菌种筛选筛选(shixun)(shixun)摇瓶试验(shyn)发酵罐中试验中试验(shyn)(shyn)发酵培养发酵培养由实验室研究到产业化的过程由实验室研究到产业化的过程发酵生产第二十九页，共四十七页。3 3 3 3.培养基中生长现象培养基中生长现象培养基中生长现象培养基中生长现象(xinxing)(xinxing)(xinxing)(xinxing)(xinxing)(xinxing)：液体培养基：液体培养基：液体培养基：液体培养基菌膜生长(s sh h n ng gz zh h n ng g)沉淀(c ch h n nd di i n n)生长 混浊生长 混浊：大多数细菌混浊：大多数细菌 沉淀：链状生长的细菌沉淀：链状生长的细菌菌膜：专性需氧菌，菌膜：专性需氧菌，如如结结核核杆杆菌菌、枯枯草草杆菌。杆菌。第三十页，共四十七页。o有鞭毛的细菌有鞭毛的细菌：试管中沿穿刺线呈羽毛状或云雾状混浊生长；：试管中沿穿刺线呈羽毛状或云雾状混浊生长；平皿中迁徙平皿中迁徙(qinx)样生长样生长o无鞭毛细菌：沿穿刺线线状生长或无扩散生长现象无鞭毛细菌：沿穿刺线线状生长或无扩散生长现象o用于细菌的动力试验用于细菌的动力试验无无动动力力(d d n ng gl l)有动力(d d n ng gl l)迁徙生长迁徙生长3 3 3 3.培养基中生长现象：培养基中生长现象：培养基中生长现象：培养基中生长现象：半固体培养基半固体培养基半固体培养基半固体培养基第三十一页，共四十七页。o菌落菌落colonycolony：在固体培养基上，一般经在固体培养基上，一般经18182424小时培养后，小时培养后，单个细菌即可繁殖成一堆肉眼可见单个细菌即可繁殖成一堆肉眼可见(kjin)(kjin)的细菌集团。的细菌集团。o不同细菌菌落在大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑不同细菌菌落在大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑/粗糙、粗糙、湿润湿润/干燥、边缘整齐、溶血性不同干燥、边缘整齐、溶血性不同3 3 3 3.培养基中生长现象培养基中生长现象培养基中生长现象培养基中生长现象(xinxing)(xinxing)(xinxing)(xinxing)(xinxing)(xinxing)：固体培养基固体培养基固体培养基固体培养基第三十二页，共四十七页。细菌的菌落一般细菌的菌落一般细菌的菌落一般细菌的菌落一般(ybn)(ybn)(ybn)(ybn)可分为三种可分为三种可分为三种可分为三种：o光滑型菌落光滑型菌落(smooth colony(smooth colony，S S型菌落）型菌落）：新分离的细菌大多呈光滑型菌落，表面光滑、：新分离的细菌大多呈光滑型菌落，表面光滑、湿润、边缘整齐。湿润、边缘整齐。o粗糙型菌落粗糙型菌落(rough colony(rough colony，R R型菌落）：型菌落）：菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹菌落表面粗糙、干燥、呈皱纹(zhuwn)(zhuwn)或颗粒状，边缘或颗粒状，边缘大多不整齐。大多不整齐。o黏液型菌落（黏液型菌落（mucoid colonymucoid colony，M M型菌落）：型菌落）：菌落黏稠、有光泽，似水珠样。细菌多有厚菌落黏稠、有光泽，似水珠样。细菌多有厚荚膜或丰富粘液层。荚膜或丰富粘液层。粗粗粗粗糙糙糙糙型型型型菌菌菌菌落落落落黏黏黏黏液液液液型型型型菌菌菌菌落落落落光光光光滑滑滑滑型型型型菌菌菌菌落落落落第三十三页，共四十七页。o水溶性色素水溶性色素(s s)(s s)（如铜绿假单胞菌）（如铜绿假单胞菌）o脂溶性色素（如金黄色葡萄球菌）脂溶性色素（如金黄色葡萄球菌）铜绿铜绿(tngl)(tngl)假单胞菌假单胞菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(p to qi jn)(p to qi jn)第三十四页，共四十七页。4.4.人工培养细菌人工培养细菌(xjn)(xjn)的用途的用途o医学医学n感染性疾病的病原学诊断感染性疾病的病原学诊断 n细菌学研究细菌学研究(ynji)(ynji)n生物制品的制备生物制品的制备o工农业生产工农业生产o基因工程中应用基因工程中应用第三十五页，共四十七页。二、示教：二、示教：1 1、消毒灭菌的常用方法、消毒灭菌的常用方法:物理物理-热力（干、湿热各两个）过滤器（热力（干、湿热各两个）过滤器（3-43-4种）、种）、冰箱、紫外线（两个）、超生波冰箱、紫外线（两个）、超生波 化学化学(huxu)(huxu)-高、中、低效消毒剂各类型高、中、低效消毒剂各类型2-32-3个代个代表；表；2 2、药敏实验：纸片法、药敏实验：纸片法3 3、培养基的种类：见前解释、观察实物、培养基的种类：见前解释、观察实物4 4、细菌生长现象观察：见前、观察实物、细菌生长现象观察：见前、观察实物第三十六页，共四十七页。药敏实验药敏实验(shyn)(shyn)：纸片法：纸片法第三十七页，共四十七页。Zone Interpretive Criteria(mm)DrugDisk content(ug)ResIntSusccefazolin30 1415-17 18gentamicin10 1213-14 15第三十八页，共四十七页。三、操作：细菌三、操作：细菌(xjn)的接种培的接种培养养 液体液体液体液体(yt)(yt)(yt)(yt)培养基培养基培养基培养基 固体斜面培养基固体斜面培养基固体斜面培养基固体斜面培养基 半固体培养基半固体培养基半固体培养基半固体培养基固体固体(gt)(gt)平皿培养基平皿培养基第三十九页，共四十七页。1.固体固体(gt)平皿培养基分离接种方法平皿培养基分离接种方法o右手执笔式握持接种环，在酒精灯火焰上烧灼接种环，待冷，取待右手执笔式握持接种环，在酒精灯火焰上烧灼接种环，待冷，取待测菌液一环。测菌液一环。o左手抓握琼脂培养基平皿，用手掌将平皿的底固定，用手指将平皿左手抓握琼脂培养基平皿，用手掌将平皿的底固定，用手指将平皿的盖略抬起一些，进行接种。的盖略抬起一些，进行接种。o持接种环在琼脂表面的持接种环在琼脂表面的1 1区涂布，划线时接种环与琼脂表面呈区涂布，划线时接种环与琼脂表面呈 30304040的角度轻轻接触，利用腕力，切忌的角度轻轻接触，利用腕力，切忌(qij)(qij)划破琼脂表面。划破琼脂表面。o烧灼接种环，待冷后，将接种环在烧灼接种环，待冷后，将接种环在2 2区、区、3 3区划线数次，各线条间隔要小，区划线数次，各线条间隔要小，但不能重叠。但不能重叠。o划完划完3 3区不需烧灼接种环，在区不需烧灼接种环，在4 4区作连续划线，如此反复至划完整区作连续划线，如此反复至划完整个平皿（如图个平皿（如图3 3）。）。第四十页，共四十七页。图1 接种环的握持方法图2 平皿的握持方法1区4区3区2区图3 划线分离的方法 左：分区 右：培养后的结果第四十一页，共四十七页。o接种完毕，盖好平皿盖，在平皿底玻璃上用记号笔注明标本接种完毕，盖好平皿盖，在平皿底玻璃上用记号笔注明标本名称、接种时间名称、接种时间(shjin)(shjin)、接种者等。、接种者等。o然后将平皿的底朝上，放置在然后将平皿的底朝上，放置在3737孵箱内孵育孵箱内孵育24h24h。o取出后观察琼脂表面的菌落分布情况，注意观察最后取出后观察琼脂表面的菌落分布情况，注意观察最后1 12 2区内是否分离出单个菌落，并观察记录菌落特征区内是否分离出单个菌落，并观察记录菌落特征（如菌落大小、形状、透明度、色素等情况）。（如菌落大小、形状、透明度、色素等情况）。第四十二页，共四十七页。2.固体斜面培养基接种固体斜面培养基接种(jizhng)方法方法第四十三页，共四十七页。3.半固体培养基接种半固体培养基接种(jizhng)方法方法右手持接种右手持接种(jizhng)针，灭菌冷却针，灭菌冷却以接种针挑取菌种垂直刺入半固体培以接种针挑取菌种垂直刺入半固体培养基的中心，养基的中心，然后循原路退出。然后循原路退出。半固体琼脂培养基穿刺接种：主半固体琼脂培养基穿刺接种：主要是观察细菌有无动力。要是观察细菌有无动力。第四十四页，共四十七页。4.液体液体(yt)培养基接种方法培养基接种方法 挑取少量菌苔或菌液，伸入待接种的培养基管内，在挑取少量菌苔或菌液，伸入待接种的培养基管内，在接近液面的管壁接近液面的管壁(un b)(un b)上轻轻研磨，并沾取少许培养液调和，上轻轻研磨，并沾取少许培养液调和，使菌混合于其中使菌混合于其中 第四十五页，共四十七页。【思考题】oo一、细菌的生长繁殖与人工培养在医疗实践中有何意义一、细菌的生长繁殖与人工培养在医疗实践中有何意义？oo二、临床常用化学消毒剂的种类、作用机制与用途？二、临床常用化学消毒剂的种类、作用机制与用途？二、临床常用化学消毒剂的种类、作用机制与用途？二、临床常用化学消毒剂的种类、作用机制与用途？oo三、以实验小组为单位，预习化脓性球菌分离鉴定并设计三、以实验小组为单位，预习化脓性球菌分离鉴定并设计三、以实验小组为单位，预习化脓性球菌分离鉴定并设计三、以实验小组为单位，预习化脓性球菌分离鉴定并设计“化化化化脓性球菌分离鉴定脓性球菌分离鉴定脓性球菌分离鉴定脓性球菌分离鉴定”方案（要求小组长切实负责，小组成员分方案（要求小组长切实负责，小组成员分方案（要求小组长切实负责，小组成员分方案（要求小组长切实负责，小组成员分工进行文献及相关资料查阅收集工进行文献及相关资料查阅收集工进行文献及相关资料查阅收集工进行文献及相关资料查阅收集(shuj)(shuj)、最后归纳总结。）、最后归纳总结。）、最后归纳总结。）、最后归纳总结。）第四十六页，共四十七页。内容(nirng)总结细菌感染的检测。细菌感染的检测。无菌操作（aseptic technique)：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。滤过除菌法：滤过除菌法。干燥低温抑菌法：抑菌和灭菌。高压蒸气灭菌法：121,1.05Kg/cm2(15个大气压),20min。原理：导致DNA分子(fnz)构型改变DNA复制出现差错。用途：液体或可放置液体中不影响其性能的物品。只接触未损伤皮肤但不进入无菌组织和不接触黏膜的物品。）第四十七页，共四十七页。