IgM捕捉ELISA法(MacELISA)检测出血热IgM抗体.docx

附件1 IgM捕捉ELISA法〔MacELISA〕检测出血热IgM抗体
本试剂盒系采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物，用以检测出血热特异性IgM抗体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为96人份/包装。
试验材料：
〔1〕抗人IgM抗体〔μ链〕：用pH9.5的包被液包被酶标板
〔2〕冻干阳性血清/冻干阴性血清1支， 0.2ml/支，工作浓度为1：10；
〔3〕冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物1支， 0.5ml/支，工作浓度为1：20；
〔4〕冻干小牛血清1支，1ml/支；
〔5〕浓缩洗液〔10倍浓缩〕1瓶，50ml；〔标本稀释液为含5%小牛血清原倍洗液〕；
〔6〕A/B显色液和终止液各1瓶。
〔冻干试剂先用相应量的去离子水溶解，然后临用前根据所需按工作浓度稀释使用，余下的放-20℃保存〕
〔7〕终止液：4N H2SO4
〔8〕酶标仪。
检测步骤：
〔1〕将待检血清用稀释液100倍稀释，参加已包被抗人μ链抗体的酶标板一孔中，100μl/孔，同时参加已1：10稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔，100μl/孔，置37℃水浴孵育1小时。
〔2〕弃去血清，用PBS－T漂洗5遍，甩干。
〔3〕将冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物1：10稀释后，参加反响板相应孔内，100μl/孔，37℃水浴孵育1小时。
〔4〕弃去酶标抗体，用洗涤液洗涤6次，甩干。
〔5〕加显色液:于各反响孔内加A/B液各一滴，37℃，避光3～5分钟。
〔6〕加终止液〔4NH2SO4〕于每反响孔，一滴/孔。
结果判断：
〔1〕目测方法：
阳性对照孔呈明显蓝色，阴性对照孔呈无色，对照成立；假设待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色〔TMB〕，那么标本为出血热IgM抗体阳性，反之阴性。
〔2〕酶联免疫检测仪检测：
于450nm〔TMB〕阳性对照孔OD值/阴性对照孔OD值,即P/N≥2.1，对照成立；假设待检血清孔OD值与阴性对照孔OD比值≥2.1，那么标本为流行性出血热IgM抗体阳性，反之阴性。
〔阴性对照孔OD值小于0.05按0.05记，假设大于0.05按实际数值计算〕
意义：
阳性结果，说明患者新近汉坦病毒感染，用于出血热早期诊断。

内容总结

〔1〕附件1 IgM捕捉ELISA法〔MacELISA〕检测出血热IgM抗体
本试剂盒系采用抗人μ链捕获人血清IgM抗体，加辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物，用以检测出血热特异性IgM抗体
〔2〕〔3〕冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物1支， 0.5ml/支，工作浓度为1：20
〔3〕〔3〕将冻干辣根过氧化物酶－病毒抗原标记物1：10稀释后，参加反响板相应孔内，100μl/孔，37℃水浴孵育1小时