1、如何撰写如何撰写“申请科研基金标书申请科研基金标书”安徽中医学院第一附属医院普外科安徽中医学院第一附属医院普外科 于庆生于庆生 教授教授 2011年年5月月一、如何书写标书的题目一、如何书写标书的题目 1 规范规范2 具体具体3 新颖新颖1 规范规范(1)干预方式)干预方式 药物,方剂,治法,材料等药物,方剂,治法,材料等内内服,静脉注射,介入,体腔注射,外用等均可。服,静脉注射,介入,体腔注射,外用等均可。(2)干预对象)干预对象 动物,人。如果在人体能做,最动物,人。如果在人体能做,最好是人;如果人体不能完成,选择动物。好是人;如果人体不能完成,选择动物。(3)干预和研究的靶点(观察指标)
2、干预和研究的靶点(观察指标)组织水平,组织水平,细胞水平,基因和分子水平。细胞水平,基因和分子水平。2 具体具体(1)干预方式要具体)干预方式要具体 举例:如生黄芪口服,生黄举例:如生黄芪口服,生黄芪小肠内滴注,生大黄灌肠,芒硝敷脐,丹参注芪小肠内滴注,生大黄灌肠,芒硝敷脐,丹参注射液静脉滴注,丹参注射液腹腔注射等。射液静脉滴注,丹参注射液腹腔注射等。(2)干预对象要具体)干预对象要具体 如小鼠、大鼠、狗、患者等。如小鼠、大鼠、狗、患者等。(3)干预和研究的靶点要具体)干预和研究的靶点要具体 举例:肠黏膜固举例:肠黏膜固有层淋巴细胞有层淋巴细胞(lamina propria lymphocyt
3、e,LPL),凋亡基因等。,凋亡基因等。3 新颖新颖(1)干预方式新颖)干预方式新颖 选用的药物或治疗方法新选用的药物或治疗方法新(别人没有用过的药物或治法):例如中药砒(别人没有用过的药物或治法):例如中药砒霜(三氧化二砷),水飞蓟宾等。霜(三氧化二砷),水飞蓟宾等。干预途径干预途径和技术新(别人没有用过的技术):关节注射,和技术新(别人没有用过的技术):关节注射,动脉或静脉介入,敷脐小肠内滴注等。动脉或静脉介入,敷脐小肠内滴注等。(2)研究的靶点新)研究的靶点新 在这个领域,别人没有观察在这个领域,别人没有观察过该指标。举例:肠黏膜固有层淋巴细胞过该指标。举例:肠黏膜固有层淋巴细胞(lam
4、ina propria lymphocyte,LPL),基因表,基因表达,信号通路等。达,信号通路等。实例实例 1 健脾通里中药对大鼠肠上皮缺血再灌注损伤细胞凋亡及其信号转导的调控2 芪黄煎剂小肠内滴注对大鼠胃切除后肠黏膜肠黏膜固有层淋巴细胞的影响3 丹参联合抗癌剂腹腔注射对大鼠胃肿瘤耐药基因的影响4 芪黄煎剂小肠内滴注对大鼠胃切除后肠黏膜肠黏膜淋巴细胞归巢通路的影响 二、如何书写二、如何书写400字的摘要字的摘要 摘要包含的内容摘要包含的内容(1)研究的背景和意义(2)研究的内容(3)达到的目的(解决的关键问题)(1)研究的背景和意义)研究的背景和意义4050字字 通常包含通常包含2句话:句
5、话:研究课题社会意义重大,如肿瘤、肝炎、艾滋等。但这类疾病现在还没有好的方法治疗和攻克。因此必须研究。目前你研究的内容已经有了好的苗头或前期基础,但还未被研究。因此必须研究。(2)研究的内容)研究的内容 重点书写内容,通常重点书写内容,通常250300字字 干预对象干预对象干预方法干预方法采用何种方法技术观察采用何种方法技术观察何种指标。何种指标。例如:通过建立胃切除手术创伤大鼠模型例如:通过建立胃切除手术创伤大鼠模型芪黄煎剂肠内芪黄煎剂肠内滴注滴注通过化学消化与机械振荡相结合方法,分离出小肠通过化学消化与机械振荡相结合方法,分离出小肠PP结、上皮内、固有层淋巴细胞和肠腔黏膜表面结、上皮内、固
6、有层淋巴细胞和肠腔黏膜表面sIgA,应用流式细胞、免疫组织化学、双抗体应用流式细胞、免疫组织化学、双抗体-PEG放射免疫等放射免疫等技术技术检测肠黏膜不同解剖部位检测肠黏膜不同解剖部位TCR-CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞、淋巴细胞、IgA+B淋巴细胞、淋巴细胞、sIgA等指标。等指标。(3)达到的目的)达到的目的(解决的关键问题)(解决的关键问题)4050字字 通常包含两层含义:通常包含两层含义:具有学术意义和社会意义,又称理论意义和临床意义。具有创新性。实例一实例一(340字字)l手术创伤可以引起肠黏膜免疫异常和屏障功能障碍,导致细菌移位、SIRS和MODS发生,严重影响疾病预后和
7、转归。l我们以往的临床和动物实验证实,胃切除手术创伤可引起肠屏障功能障碍和细菌移位,而健脾通里中药芪黄煎剂具有调节机体免疫功能和保护肠屏障功能的作用,但是否通过对肠黏膜免疫调节实现尚不清楚。l本项目拟在我们前期研究基础上,建立胃切除手术创伤大鼠模型,芪黄煎剂肠内滴注,通过化学消化与机械振荡相结合方法,分离出小肠PP结、上皮内、固有层淋巴细胞和肠腔黏膜表面sIgA,应用流式细胞、免疫组织化学、双抗体-PEG放射免疫等技术,检测肠黏膜不同解剖部位TCR-CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞、IgA+B淋巴细胞、sIgA等指标,多层次观察芪黄煎剂对手术应激后肠黏膜免疫的调节作用,揭示其保护肠黏膜免
8、疫屏障功能机制,为中药保护肠黏膜屏障功能及其危重病的防治奠定基础,并丰富这一领域学术研究内容。实例二实例二(345字字)l严重应激可引起肠黏膜上皮缺血-再灌注(I/R)损伤,导致肠屏障功能障碍、细菌移位、SIRS和MODS发生,严重影响疾病预后和转归。研究表明,I/R损伤引起的肠屏障功能障碍与肠黏膜上皮细胞凋亡有关,而细胞凋亡的发生又是多基因调控和多信号转导的结果。l我们前期临床和动物实验研究确证了,健脾通里中药具有保护肠屏障功能的作用,但其作用机制尚未深入研究。l 本项目将在前期研究的基础上,从“肠黏膜屏障-肠上皮I/R损伤-上皮细胞凋亡-细胞多基因表达/多信号转导”这一关键环节入手,发挥传
9、统复方中药“多靶作用”的优势,通过建立I/R损伤大鼠模型,健脾通里中药芪黄煎剂肠内滴注,切取末端回肠标本,应用TUNEL方法和RT-PCR技术,多途径、多层次观察健脾通里中药对肠黏膜细胞凋亡及其凋亡基因Bcl-2、Bax表达和Caspase-3,9信号转导的调控作用,揭示其保护肠黏膜屏障功能机制,为临床应用提供科学依据,并丰富这一领域学术研究内容。三、如何书写项目的立项依据三、如何书写项目的立项依据(3部分部分内容)内容)1 研究意义研究意义 2 国内外研究现状及发展动态分析国内外研究现状及发展动态分析3 参考文献参考文献1 研究意义研究意义 包括包括2个方面:个方面:(1)社会的迫切需要(即
10、医学临床的需要)该病严重威胁人类的健康和生命。(2)先前没有研究 包括:别人未研究;我们有基础,但尚未深入进行这个研究。实例实例 社会的迫切需要:社会的迫切需要:肝癌严重威胁着人类健康和生命,但自今无控制肝炎发展的有效药物。先前没有研究:先前没有研究:(1)他人未进行研究 不少学者研究发现,中药对控制肝炎病毒和延缓肝硬化疗效确切。但对赤芍的研究未有发现。(2)我们未研究 我们前期的研究发现,赤芍能够控制肝炎病毒,但对其是否能够控制肝硬化发展尚未进行探索。2 国内外研究现状国内外研究现状2.1 包含的内容包含的内容 5个方面个方面2.2 国内和国外研究所占的比例问题国内和国外研究所占的比例问题2
11、.3 层次和逻辑感层次和逻辑感2.1 包含的内容包含的内容 包括包括5个方面个方面(1)解剖和生理功能研究现状(2)病理机制和病理危害研究现状(3)病理干预研究现状(4)观察指标和检测方法的研究现状(5)我们自己的研究基础和现状(1)解剖和生理功能研究现状)解剖和生理功能研究现状 举例:中药对肠黏膜免疫屏障保护举例:中药对肠黏膜免疫屏障保护肠黏膜解剖构成:肠黏膜解剖构成:黏膜上皮层、粘膜下层、固有层、肌层。各层含有的淋巴细胞。生理功能:免疫生理功能:免疫屏障功能。综述的意义:为你的研究内容服务。综述的意义:为你的研究内容服务。(2)病理机制和危害研究现状)病理机制和危害研究现状 肠黏膜的解剖结
12、构和生理功能异常(免疫屏障功能异常)病理生理(肠屏障功能障碍和细菌移位发生)病理表现和人类造成的危害(SIRS和MODS发生)。综述的目的:为你的研究内容服务。综述的目的:为你的研究内容服务。(3)病理的干预研究现状)病理的干预研究现状 西医治疗现状西医治疗现状(疗效不佳和没有找到有效途径,毒副作用大,价格贵);中医治疗现状中医治疗现状(尚未探索或初步探索)。得出总结性结论:得出总结性结论:本研究具有创新性,还未被研究和探索。为你的研究内容服务,强烈的表明:你的研究非常必要和具有鲜明的为你的研究内容服务,强烈的表明:你的研究非常必要和具有鲜明的创新性。创新性。(4)观察指标和检测方法现状)观察
13、指标和检测方法现状 你观测的指标是否满足项目的研究需要?你观察的指标和采用的检测技术是否先进?你观测指标的检测方法是否可行?l得出结论:得出结论:你所选用的指标和采用的检测技术方法具有完全的可行性、先进性。除此以外,没有更好的指标及其检测方法和技术。(5)我们自己的研究基础和现状)我们自己的研究基础和现状 我们已经做过哪些与本课题有关的研究积累我们已经做过哪些与本课题有关的研究积累1 临床方面临床方面 是在中医辨证施治的原则下组方用药吗?疗效观察?2 动物实验方面动物实验方面 结论:结论:为了攻克人类疾病和难题,迫切需要进行本研究本研究目的和解决的问题。2.2 国内和国外研究所占的比例国内和国
14、外研究所占的比例 各占50%为宜。不能只写国外,也不能只写国内。而且,写国内的必须写自己的研究和先前所做的工作。凸显你申请此项目的优势。2.3 一定要有层次和逻辑感一定要有层次和逻辑感 层层推进,通常的顺序是:解剖和生理功能研究现状病理机制和病理危害研究现状病理的干预研究现状(中西医)病理干预后观察指标和检测方法现状我们自己的研究基础和现状为了攻克人类疾病和难题,迫切需要进行本研究。3 参考文献参考文献(1)参考文献必须明确标记和列出 在论述中标出,并把所有的引文附于论述后。(2)参考文献书写必须规范 按照论文格式,作者最好全部引出。(3)中文和英文的比例 通常中文和英文各占50%为宜。(4)
15、必须具有时间性 通常必须有近5年的,最好是近13年的,有当年的更好。但是,经典的也可以是510年以前的,因为现在还没有替代者。(5)参考文献引用技巧 1个论点引用引文国内文献12篇,国外12篇,不需要多引文,除非都是新的。关键部位引文,不是最新的、关键的论点可以不引文。通常的公认的可以不引文。自己不清楚的或者是间接的不要引文。自己的文献一定要引。四、如何书写项目的研究内容四、如何书写项目的研究内容(4部分部分内容)内容)1 研究对象 2 干预方法3 观察指标和指标的检测方法和技术4 资料的收集、统计和评价1 研究对象研究对象(1)人类 什么样的疾病人群,分组方法。举例:20112012胃癌手术
16、后的病人60例,随机分为3组:腹腔化疗组、静脉化疗组、未化疗组。(2)动物 建立何种动物模型,分组方法。举例:建立大鼠胃切除创伤模型,随机分为丹参+5-FU腹腔化疗组、单纯5-FU腹腔化疗组、单纯丹参腹腔注射组、对照组生理盐水腹腔注射组。2 干预方法干预方法 包括:包括:通过什么途径?实施什么样的药物或治疗方法?举例:举例:给予丹参+5-FU腹腔注射;给予健脾通里中药小肠内滴注。3 观察指标和指标的检测方法和观察指标和指标的检测方法和技术技术 举例:举例:化学消化与机械振荡结合的方法分离出IEL,流式细胞术检测TCR-CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞。五、研究目标五、研究目标 1
17、 目标必须明确 举例:举例:探讨健脾通里中药芪黄煎剂对胃癌手术创伤后肠黏膜免疫屏障的保护作用,为危重病的防治奠定基础。2 目标不能过大 要在课题中能够实现。3 字数不宜太多 3050字左右。六、拟解决的关键科学问题六、拟解决的关键科学问题 l一般13个,不能过多,通过一个项目的研究,也不可能实现太多。l举例:举例:1 健脾通里中药芪黄煎剂对胃癌手术创伤后肠黏膜免疫屏障是否具有保护作用?2 对肠黏膜免疫屏障的保护作用是否通过调节IEL和LPL免疫效应而实现?七、拟采取的研究方案及可行性七、拟采取的研究方案及可行性分析分析(一)研究方案 研究方案的含义 围绕研究内容展开(具体化),实现研究目标和解
18、决关键问题。研究方案的内容和步骤(和研究内容对应,4部分内容)(二)可行性分析 通常包括3个方面(一)研究方案(一)研究方案 1 研究对象研究对象 人类人类 包括时间段、单位、病种、分组。举例:举例:选择20112012安徽中医学院第一附属医院收治的胃癌病人60例,随机分为3组:腹腔化疗组、静脉化疗组、未化疗组。1 研究对象研究对象 动物动物 包括动物种类、级别、造模、分组。举例:举例:清洁型Wistar大鼠,参照Gryglewski1方法,麻醉后消毒进腹,给予胃体部大小弯之间的前壁部分切除,1-0丝线作间断全层和浆肌层2层缝合。同时,在距Treitz 韧带15cm 处空肠前壁,用12号注射器
19、针头戳孔,将直径1.0mm硅胶导管置入空肠内,作双层荷包缝合固定,导管尾端经腹壁戳口引出,通过皮下隧道潜行由颈背部双侧肩胛区皮肤引出,外套弹簧保护装置固定。造模后随机分为3组:中药芪黄煎剂+肠内营养组、单纯肠内营养支持组、空白对照组。2 干预方法干预方法 人类 要求:具体,可实现。实例实例 说明胃癌术后小肠内滴注中药芪黄煎剂 术后早期中药应用途径技术的解决:术前将一根空肠营养管和胃管系在一起,经鼻孔置入胃腔,术中在吻合口吻合完成之前将两管分开,胃管留在胃腔,空肠营养管放在吻合口以远的空肠内(远离吻合口3040cm)2 干预方法干预方法 人类人类 中医证型的确立:长期临床实践中观察到,遭受胃癌根
20、治手术创伤的病人,主要有两组典型的临床表现,一组是神疲、气短、乏力、懒言、面色苍白、舌淡、苔白、脉细弱等“气血虚弱”之表现;另一组是腹胀、腹痛、呕吐、肛门停止排气排便“腑实气滞”之表现。故中医证型为虚实夹杂,即气血虚弱与腑实气滞并存。2 干预方法干预方法 人类人类 中医治法的拟定:根据上述中医辨证结果,临床施治当攻补兼施。补则重点放在中焦脾胃,因为祖国医学认为“脾为后天之本”和“气血生化之源”;攻则重在荡涤六腑积秽,因为祖国医学认为“六腑以通为用”。据此立法:健脾通里。2 干预方法干预方法 人类人类 方剂和药物的选择:在上述中医治疗原则的指导下,健脾益气药物的选用参考李东垣李东垣脾胃论脾胃论中
21、补中益气汤的组方思想,选用黄芪、白术、党参为主药;通里攻下药物的选用吸收张仲景张仲景伤寒论伤寒论中大承气汤的组方思想,选用大黄、枳实、厚朴为主药。从而组成方剂“芪黄煎剂”。2 干预方法干预方法 人类人类 术后早期中药小肠内滴注方法:芪黄煎剂(黄芪20g,大黄10g(后下),白术20g,党参20g,枳实10g,厚朴10g,丹参15g,黄芩12g)煎汤药300ml,从术后第1天开始,分两次上午9时和下午3时经营养管滴入小肠,每次150ml,温度3839,速度3040ml/min,疗程7d。2 干预方法干预方法 动物动物 实例实例 说明胃癌术后小肠内滴注中药芪黄煎剂 芪黄煎剂的制备:单位制剂中心协助
22、完成。将方中药物黄芪、大黄、白术、党参、枳实、厚朴、丹参、黄芩按20.10.20.20.10.10.15.12质量比混合,量取按此比例混合的生药重234g,加水500ml,煎30分钟(其中大黄后下),过滤浓缩至1.0g/ml的生药煎剂,4保存,给药前复温。2 干预方法干预方法 动物动物术后早期中药小肠内滴注方法:大鼠胃切除手术创伤模型建立后,置于代谢笼内,清醒后笼内自由活动,手术当天禁食,术后第1天起,通过微量注射泵予以肠内滴注6ml芪黄煎剂,10ml注射器通过肠内输液泵从硅胶管匀速持续注入小肠内,持续1周。3 观察指标及其检测方法和技术观察指标及其检测方法和技术 3.1 观察指标 指标的选择
23、要先进,要丰富。3.2 指标的检测方法和技术 方法可行,技术先进,要点明晰。3.1 观察指标观察指标 先进,丰富。先进,丰富。(1)先进性体现 目前在国内外普遍采用,且最先进。最好在分子和基因水平上反映。3.1 观察指标观察指标 先进,丰富。先进,丰富。(2)丰富性体现 具有层次感:如从组织细胞分子和基因具有立体感:既有血液成分指标检测,又有内脏成分检测,还有分泌物成分检测如胆汁、肠液、关节液等。3.2 指标的检测方法和技术指标的检测方法和技术 方法方法可行,技术先进,要点明晰可行,技术先进,要点明晰(1)方法可行 有文献支撑和参考;我们自己以前用过。(2)技术先进 你所选择的指标必须是用当今
24、公认的最先进的技术检测。(3)要点明晰(1)方法可行)方法可行 l实例实例 有文献支撑和参考 处死大鼠,剖腹切取各组大鼠小肠全长,用生理盐水洗净血渍及粪便,按照文献方法3,以10%醋酸溶液冲洗肠腔并收集灌洗液,离心,收集上清液-70保存。参考文献4,双抗体-PEG放射免疫分析法测定sIgA含量。我们自己以前用过 按照我们以往方法6,用机械挤压的方式分离出淋巴细胞,过滤、离心制成PP结的单细胞悬液,再加入ficoll淋巴细胞分离液,制成纯化淋巴细胞悬液。按照我们以往流式细胞术检测6。(2)技术先进)技术先进 你所选择的指标必须是用当今公认的最先进的你所选择的指标必须是用当今公认的最先进的技术检测
25、。技术检测。举例:举例:如用流式细胞术检测T淋巴细胞;用western blot 检测基因蛋白表达;PCR检测基因mRNA表达。(3)要点明晰)要点明晰 按照我们以往流式细胞术检测6。操作关键点是:取分离出的PP结淋巴细胞悬液100L,参照产品说明书配好三色标记的抗大鼠单抗(FITC标记CD3单克隆抗体、PE标记CD4单克隆抗体、PE-Cy5标记CD8单克隆抗体,Serotec公司产品),室温避光反应0.5 h,上流式细胞仪检测。(二)可行性分析(二)可行性分析1 学术假设提出的可行性 2 采用技术和方法的可行性 3 研究条件的可行性 1 学术假设提出的可行性学术假设提出的可行性 为什么要研究
26、这个课题,它的理论根据是什么?要通过别人先前研究的成果和我们自己已经取得的成果进行论证,得出结论:这个研究从理论上来说是完全可行的(因为这个项目没有进行研究),能够得出预期结果。1 学术假设提出的可行性学术假设提出的可行性l实例实例 已有的研究表明,胃、肠等手术创伤可引起肠黏膜免疫功能障碍,并且肠黏膜免疫功能障碍与肠屏障功能障碍和细菌移位密切关联1,8-9。我们的临床和动物实验发现2,10,健脾通里中药芪黄煎剂可以保护肠黏膜屏障功能和减少细菌移位的发生,但这种作用是否通过调节肠黏膜淋巴细胞免疫功能的机制实现尚不清楚。我们先前的研究证实11-12,芪黄煎剂具有调节全身细胞免疫和体液免疫的作用;同
27、时我们及他人的研究发现6,13,健脾类药物和通里类药物具有调节肠黏膜免疫功能的作用。因此,可以设想:健脾通里中药芪黄煎剂对肠黏膜免疫屏障的保护,具有较大的可能性和可行性。2 采用技术和方法的可行性采用技术和方法的可行性 2.1 造模可行性l实例实例 通过胃、肠切除制造大鼠肠黏膜免疫屏障功能障碍模型已被国内外学者采用 1,8,14。我们也积累了此方面的经验2。手术后由于大鼠不能正常进食,肠腔内置管滴注营养是常用的干预方法14-15,我们已积累了治疗上的经验2。2 采用技术和方法的可行性采用技术和方法的可行性2.2 标本、组织获取和分离的可行性l实例实例lIEL和LPL的分离是本实验的技术难点之一
28、。解离不足或解离过度,均对最终的实验结果产生影响。我们通过以往反复实践6,较好地把握了分离中的两个关键技术:一是把化学消化与机械振荡相结合;二是消化时间的把握。2 采用技术和方法的可行性采用技术和方法的可行性2.3 指标检测采用的技术和方法的可行性l实例实例l荧光素标记单抗、流式细胞术检测T细胞是目前国内外公认方法。我们先前较好地掌握了该项技术6。而IgA+B细胞和sIgA的检测,目前已有成熟的方法4,7,16-17。3 研究条件的可行性研究条件的可行性 3.1 基础条件(硬件)可行性 实验室等级;仪器是否具有。l实例实例l项目依托高校,具有良好的科研场所和实验设施;单位拥有本研究IEL和LP
29、L测定所需要的流式细胞仪;sIgA测定所需要的多探头-计数器和分光度计;以及用于本项目研究的常用仪器和设备。3 研究条件的可行性研究条件的可行性 3.2 研究人员条件(软件)可行性 人员素质,研究时间,以往研究经验。l实例实例 l研究团队主要为中青年学科带头人,具有多学科工作和科研经验;有着以往与本项目研究密切关系的工作经验。八、项目的特色与创新之处八、项目的特色与创新之处1 项目的特色(不同的项目有不同的特色)2 项目的创新(通常从3个方面论述)1 项目的特色项目的特色(1)学术思想的特色 基于临床的中医辨证思想应用这一辨证思想组方用药解决现代外科复杂疑难问题。(2)研究方法和技术特色 多层
30、次,多角度。取材的丰富性和观察方法的立体感。使得研究结果更客观和可靠。(3)基础研究与临床实践和密切结合 学术思想的火花产生于临床进行基础研究再服务于临床需要,解决复杂的社会问题。(4)传统中医中药与现代外科学、黏膜免疫学多学科结合 1 项目的特色项目的特色(4)传统中医中药与现代外科学、黏膜免疫学多学科结合 l实例实例l该项目把传统中医中药和现代外科大手术术后的治疗、肠黏膜免疫屏障的保护较好的结合起来,不仅拓展了中医中药的应用范围,也为肠黏膜免疫功能的调节、大手术后并发症的防治开启了一条新途径。2 项目的创新项目的创新(1)学术思想的创新 采用中医中药保护创伤后(尤其是大手术后)肠黏膜免疫屏
31、障的思想是创新的。(2)研究内容的创新 学会挖掘,多角度多层次分析:中医中药保护创伤后肠黏膜免疫屏障功能有无?健脾通里方法保护创伤后肠黏膜免疫屏障功能有无?芪黄煎剂保护创伤后肠黏膜免疫屏障功能有无?中医中药、健脾通里方法、芪黄煎剂对IEL和LPL等不同层次影响的研究有无?中医中药、健脾通里方法、芪黄煎剂对肠黏膜T和B淋巴细胞等不同层次影响的研究有无?(3)采用技术和方法的创新 用流式细胞术检测T淋巴细胞、用western blot 检测基因蛋白表达、PCR检测基因mRNA表达来观察和研究中药对肠黏膜屏障的影响,以前没有用过。九、年度研究计划及预期结果九、年度研究计划及预期结果1 年度研究计划1
32、.1 年度划分 按照6个月一个计划。1.2 计划内容(1)研究前的准备 实验室、仪器、药品、动物、试剂、材料等的落实;人员对研究方案的熟悉和思想统一。(2)研究内容的计划和实施 造模时间;干预时间;标本采集时间;指标检测时间;实验数据和资料收集和统计学处理时间。(3)研究报告、成果鉴定和研究论文书写和发表(4)组织的学术会议和参加的学术会议(5)国际合作与交流 邀请来国内讲学与到国外参加。九、年度研究计划及预期结果九、年度研究计划及预期结果2 预期成果(1)揭示中药芪黄煎剂保护肠黏膜免疫屏障的机制,为广泛开展临床应用提供科学依据。(2)促进中医中药和外科学、免疫学相互融合和发展,丰富这一领域学
33、术研究内容。(3)提供研究报告、发表学术论文。(4)项目的完成,可以培养多名科研骨干和研究生,形成一个更加成熟的研究团队。十、研究工作基础(与本项目相关的十、研究工作基础(与本项目相关的研究工作积累和已取得的研究成绩)研究工作积累和已取得的研究成绩)1 与本项目相关的研究工作积累1.1 干预对象(动物造模)方法的积累 1.2 干预方法的积累1.3 组织和标本采集、整理和留取经验的积累1.4 指标检测技术和方法经验的积累1.5 中医中药研究经验的积累1 与本项目相关的研究工作积累与本项目相关的研究工作积累1.1 干预对象(动物造模)方法的积累 l举例:通过对安徽省人才开发资金资助项目“中医药对胃
34、癌手术后早期免疫调控和肠屏障保护(2006Z040)”的研究,制造了大鼠胃切除创伤肠黏膜屏障功能障碍模型,并积累了经验11。1 与本项目相关的研究工作积累与本项目相关的研究工作积累1.2 干预方法的积累干预方法的积累 药物滴注技术和方法的积累 用量、疗程、温度、速度等。1 与本项目相关的研究工作积累与本项目相关的研究工作积累1.3 组织和标本采集、整理和留取经验的积累组织和标本采集、整理和留取经验的积累 举例:项目组主要成员参与国家自然科学基金项目“桂枝汤调和营卫与黏膜免疫关系的基础研究(30171133)”,以及通过博士论文“雷公藤甲素配伍甘草酸对胶原诱导性关节炎大鼠肠黏膜免疫的影响”的研究
35、,掌握了PP结淋巴细胞、IEL和LPL的分离,尤其是关键技术的把握 12-13。1 与本项目相关的研究工作积累与本项目相关的研究工作积累1.4 指标检测技术和方法经验的积累 1.5 中医中药研究经验的积累 举例:临床辨证施治的经验理法方药的经验临床疗效观察的经验动物研究疗效观察经验。2 已取得的研究工作成绩已取得的研究工作成绩(1)已经主持的有关科研项目(2)已经获得的奖励(3)已经发表的论文(4)以往参加的学术会议和大会演讲十一、研究工作条件(已具备的条件,十一、研究工作条件(已具备的条件,尚缺少的条件和拟解决的途径)尚缺少的条件和拟解决的途径)1 已具备的实验条件(1)基础设施 实验室条件(2)本项目研究所需要仪器和设备(3)中药制剂设备和条件十一、研究工作条件(已具备的条件,十一、研究工作条件(已具备的条件,尚缺少的条件和拟解决的途径)尚缺少的条件和拟解决的途径)2 尚缺少的实验条件和拟解决的途径(1)动物(2)药物(3)试剂(4)材料十二、申请人简介十二、申请人简介l数量 简介3人(前3位)l内容 (1)学历学位和研究工作简介;(2)近期发表与本项目有关的论文;(3)获得的学术奖励和科研业绩;(4)在本项目中承担的任务。