有关PCR习题.doc

一、选出一个最符合题意得答案（最佳答案）。
 1．以下哪种物质在PCR反应中不需要（  ） 
A．Taq DNA聚合酶 B．dNTPs C．Mg2+ D．RNA酶 E．合适pH缓冲液 
2．以下哪种酶可耐高温（  ） 
A．Taq DNA聚合酶 B．Hind Ⅲ C．T4连接酶 D．RNA酶 E．Klenow片段 
3．PCR反应正确过程应为（  ） 
A．退火→变性→延伸 B．变性→退火→延伸 C．退火→延伸→变性 D．变性→延伸→退火E．延伸→变性→退火 齟巔铱韦钮癘媯。
4． PCR技术得本质就是（  ） 
A． 核酸杂交技术 B． 核酸重组技术C． 核酸扩增技术 D． 核酸变性技术 E． 核酸连接技术 
5．Taq DNA聚合酶酶促反应最适温度为（  ） 
A．37℃ B．50℃～55℃ C．70℃～75℃ D．80℃～85℃ E．94℃～95℃
6．能在细胞内进行PCR扩增得PCR仪为（  ）
A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光PCR仪 E．实时PCR仪 
7．在下列哪种PCR仪扩增样品可以了解样品中DNA原始拷贝数（  ） 
A．普通PCR仪 B．梯度PCR仪 C．原位PCR仪 D．荧光实时PCR仪E．定性PCR仪
8．PCR基因扩增仪最关键得部分就是（  ） 
A．温度控制系统 B．荧光检测系统 C．软件系统 D．热盖 E．样品基座
9．“位置得边缘效应”就是指（  ） 
A．温度得准确性欠佳 B．温度得均一性欠佳 C．边缘升降温速度快 D．边缘升降温速度慢 
E．梯度模式与标准模式温度不一致
10．PCR扩增仪升降温速度快有很多优点，以下哪一项应除外（  ） 
A．缩短反应时间 B．提高工作效率 C．消除位置得边缘效应 D．缩短非特异性反应时间 E．提高反应特异性贓叽芗魇瀝禅晉。
11、PCR技术扩增DNA,需要得条件就是(  ) 
①目得基因   ②引物   ③四种脱氧核苷酸  ④DNA聚合酶等  ⑤mRNA  ⑥核糖体 A、①②③④     B、②③④⑤    C、①③④⑤  D、①②③⑥韜视籌郵緄鰭漿。
12、镁离子在DNA或RNA体外扩增反应得浓度一般为（  ）
 A、0、3-1mmol/L    B、0、5-1mmol/L   C、0、3-2mmol/D、0、5-2mmol/L 轾悯寻忾鹾栎蝉。
13、多重PCR需要得引物对为（  ） A、一对引物    B、半对引物 C、两对引物 D、多对引物
14、PCR就是在引物、模板与4种脱氧核糖核苷酸存在得条件下依赖于DNA聚合酶得酶促合成反应，其特异性决定因素为（  ）尘臠亞鐔晓谑賓。
 A、模板    B、引物 C、dNTP D、镁离子 
15、在PCR反应中，下列哪项可以引起非靶序列得扩增得扩增(    ) 
A、TaqDNA聚合酶加量过多    B、引物加量过多 C、A、B都可 
D、缓冲液中镁离子含量过高
16、PCR技术就是一种DNA得扩增技术。在一定条件下，加入模板DNA、DNA聚合酶、dATP、dCTP、dGTP、dTTP可以实现DNA得扩增。据此判断不合理得就是                       杨腻锗鲂鶇磣關。
A．dATP在DNA扩增中可以提供能量，同时作DNA合成得原料
B．dTTP完全水解后产物有胸腺嘧啶、磷酸、核糖 
C．DNA扩增过程未加解旋酶，可以通过先适当加温得方法破坏氢键，使模板DNA解旋 
D．CTP水解脱去两个磷酸基后就是组成RNA得基本单位之一  
17、多聚酶链式反应（PCR）就是一种体外迅速扩增DNA片段得技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性、解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新得脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程得叙述中不正确得就是：（    ） 曖张鸡筹迳討粮。
A．变性过程中破坏得就是DNA分子内碱基对之间得氢键，也可利用解旋酶实现 
B．复性过程中引物与DNA模板链得结合就是依靠碱基互补配对原则完成 
C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸 D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶得最适温度较高 闵陕拟鸵萝胀挣。
18、下列有关PCR技术得叙述，不正确得就是：（    ） A．PCR技术经过变形、复性、延伸三个阶段 B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等  虧紗確虯園狞寫。
C．PCR技术需在体内进行                 D．PCR技术就是利用碱基互补配对得原则 
19、在基因工程中，把选出得目得基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸460个）放入PCR仪中扩增4代，那么，在PCR仪中放入胞嘧啶脱氧核苷酸得个数至少应就是 媼囁颍鍘讲鹈码。
A．640      B．8100     C．600     D．8640 
20、对禽流感得确诊，先用PCR技术将标本基因大量扩增，然后利用基因探针，测知待测标本与探针核酸得碱基异同。下图P表示禽流感病毒探针基因在凝胶得电泳标记位置，M、N、Q、W就是四份送检样品在测定后得电泳标记位置， 哪份标本最有可能确诊为禽流感 （   ） 挟擴沟监對撷輩。

A．M       B．N       C．Q          D．W 
21、某考古学家在西伯利亚泰加林地区得冰中，发现了一种冰冻得已灭绝得巨大动物得肌肉。她想了解该巨型动物得DNA与现今印度大象得DNA得相似性，于就是做了如下检测工作，其中正确得操作步骤及顺序就是 绲苌鉸讷處哗该。
①降低温度，检测处理后形成得杂合DNA双链区段   ②通过PCR技术扩增巨型动物与大象得DNA   ③把巨型动物得DNA导入大象得细胞中  ④在一定得温度条件下，将巨型动物与大象得DNA水浴共热 A、②④③   B、②④③①       C、③④①    D、②④① 剝义騰觉埙囪缉。
22、 PCR得发明人就是 
A、 Mullis  B、 牛顿  C、Kenny  D、 James
23、 退火温度一般比引物得熔解温度（Tm）低多少合适
 A、 7℃   B、 10℃  C、 5℃  D、 2℃   E、 20℃ 
24、引物得最佳浓度为 
A、 0、1-0、5 μM  B、 1-2μM  C、 5-10μM  D、 100μM  E、 200μM权镛踯鐓颖贅獺。
25、专门用于制备单链DNA得PCR技术就是 
A、对称PCR B、反向PCR C、RT－PCR D、不对称PCR E、嵌套PCR 
26、PCR变性温度一般为 
A． 96℃   B、 85℃  C、 72℃   D、 55℃  E、 100℃ 
27、pre-mRNA 内含子得5'-末端一般为 （ ）A、AU B、GU C、AG D、CG E、AC 癆鏌陇陸離缥睞。
28、在大肠杆菌得DNA损伤修复时，对于填补缺口可能最重要得酶就是 
A、DNA聚合酶Ⅰ B、DNA聚合酶Ⅱ C、DNA聚合酶Ⅲ D、RNA聚合梅 E、以上都不就是
29、 可用于扩增未知序列得PCR方法就是（ ） A、 对称PCR B、 反向PCR C、 RT-PCR D、不对称PCR E、 嵌套PCR 茔帥铟刚糞闖嗫。
30、在聚合酶链反应（PCR）中最常用得DNA聚合酶就是  A．T4 DNA连接酶  B．T7 DNA聚合酶  C． Taq DNA聚合酶 D．E、 coli DNA聚合酶I  E．E、 coli DNA聚合酶II诉鈾卻洒荩乌锊。
31、下列关于PCR引物设计得说法错误得就是（     ） 
A．设计引物时应考虑使3’端引物与5’端引物具有相似得Tm值 
B．每条引物自身不应有稳定得发夹结构
 C．上下游引物之间不宜形成稳定得二聚体结构 D．引物得5’与3’端必须与模板严格配对结合 
E．引物与非特异扩增区得序列无同源性 
32、Taq DNA聚合酶可以不依赖模板在dsDNA得3’末端加上一个碱基为（      ） 
A、 G   B、 A    C、 T   D、 C   E、 I
33．PCR反应中，所设计引物得长度一般为（ ）
A．5～10核苷酸 B、 15～30核苷酸 C、 <50个核苷酸 D、长度任意 E、 以上答案均不对呙爺纜釓惬怆縛。
34．引物设计时G＋C含量在引物中一般占（ ）
A、 20～40﹪ B、 30～60﹪ C、 45～55﹪ D、越高越好 E、含量随意
35．以下说法错误得就是（ ）
A引物中得碱基组成应该尽可能得随机分布。
B 引物自身不应该存在互补序列
C 设计引物时应考虑使3‘端引物与5‘端引物具有相似得Tm值
D 引物得5‘与3’端必须与模板严格配对结合
E 引物与非特异扩增区得序列得同源性不要超过70﹪
36．下列说法正确得就是（ ）
C、 PCR反应常用得缓冲液为10－50mmol/L得Tris-HCl（室温 PH 8、3－8、8）
D、 10mmol/L得KCl能促进引物得退火
E、 加入得BSA有利于破坏模板得二级结构
F、二甲基亚砜有利于保护TaqDNA酶得活性。
E、 Mg2+能降低Taq DNA聚合酶得活性。
37、 TaqDNA聚合酶活性需要以下哪种离子（ c ）
A．K+ B、 Na+ C、 Mg2+ D、 Ca2+ E、 Cl-
38．适用于DNA序列中单个碱基突变得检测得方法就是：( d )
A．筑巢PCR B、 多重PCR C、 锚定PCR D、 LCR
39．以下哪种PCR技术广泛应用于组织胚胎学与肿瘤学得研究（ a ）
A．原位PCR B．差异显示PCR C．不对称PCR D．反向PCR
40、已知一段设计好得引物得序列为GTGGATCCATGGCTCCTCTGAAGATTC,其Tm值为（ ）娴踐鄶钊凤謾鎊。
A、 78 B、 80 C、 82 D、 84 E、 无法计算
41．以下关于dNTP得说法错误得就是（ ）
B、dNTP具有较强得酸性，使用时应将pH调至7、0-7、5
C、PCR反应中，四种dNTP必须按比例配制，以减少反应得错配率。
D、dNTP得浓度过高会增加碱基得错配率
E、dNTP得浓度低，反应速度下降，但特异性提高
42、 TaqDNA聚合酶可以不要模板在ds DNA得末端加上一个( )碱基、
A、 dGTP B、 dCTP C、 dATP D、 dTTP
43、 有关PCR得描述哪个不对( )
A、就是一种酶促反应
B、引物决定扩增得特异性
C、扩增得对象就是DNA序列
D、扩增得对象就是氨基酸序列
44、 催化PCR得酶就是 ( )
A、RNA聚合酶
B、DNA聚合酶
C、Taq DNA聚合酶
D、反转录酶
45、 PCR产物具有特异性就是因为( )
A、Taq DNA酶保证了产物得特异性
B、合适得变性,退火,延伸温度
C、选择特异性得引物
D、引物得Tm值不同、
46．LCR得说法正确得就是 ( )
A、体系中采用DNA聚合酶
B、须设计一对引物
C、反应需经过变性,复性,连接
D、 LCR中,酶将dNTP加到引物得3-OH端
E、  LCR具有高度敏感性
二、多项选择题
1．下列关于退火温度说法正确得就是（ ）
A、 合适得退火温度应低于引物Tm值5℃左右。
B、 引物与模板得退火温度一般在45－55℃之间
C、 在Tm值允许得范围内，选择偏低得退火温度可以提高PCR反应得特异性。
D、 退火时间至少需要一分钟。
2．进行PCR实验时以下措施有助于防止污染与结果得假阳性（ ）
B、隔离不同得操作区
C、分装试剂，减少重复取样所致得污染
D、严格实验操作
E、设立实验对照
3．适用于扩增3‘或5‘端未知序列得PCR技术就是（ ）
A．反向PCR B、 锚定PCR C、 多重PCR D、不对称PCR
4． 以下关于PCR技术应用说法正确得就是（ ）
B、筑巢PCR与共享引物PCR有利于增强PCR反应得特异性，适用于模板含量极少得样品得检测
C、不对称PCR可以大量制备单链DNA，可用于DNA得序列测定
D 、彩色PCR适用于基因诊断与自动化DNA序列测定
E 、定量PCR可用于基因表达与调控得研究
F、差异显示PCR可用于筛选与克隆受发育，突变等各种因素影响下差异表达得基因
5、 关于引物设计说法正确得就是（ ）
B、为保证PCR反应得特异性，所设计得引物长度一般>30个核苷酸
C、引物设计时G＋C含量在引物中一般为45～55﹪
D、按经验，引物自身存在得连续互补序列一般不超过3个碱基
E、两个引物之间不应存在互补序列，尤其避免3‘端得互补重叠
F、引物得3‘端可以游离而不影响PCR反应得进行
6、 以下关于PCR得说法正确得就是（ ）
A、PCR得模板可以就是DNA也可以就是RNA
B、PCR得模板必须从组织细胞中分离出来
C、PCR反应得特异性取决于引物与模板DNA得结合位点。
D、PCR反应初期，目得DNA片断得增加呈指数扩增。
E、PCR反应一般需要含102－105拷贝得模板
7．以下关于PCR反应条件错误得就是（ ）
B、PCR缓冲液中加入二甲基亚砜有利于破坏模板得二级结构，提高反应得特异性。
C、Mg浓度过高会降低TaqDNA酶得活性，Mg浓度过低又会使酶催化非特异性扩增增强。
D、4种dNTP应以等摩尔浓度配制，以减少错配误差。
E、引物浓度一般为0、5-1umol/L
8、 PCR反应时应设立哪种对照（ ）
A、阴性对照
B、阳性对照
C、试剂对照
D、以上答案都正确
9、 逆转录反应体系包括（ ）
B、 RNA模板，四种dNTP
C、 RNA酶抑制剂
D、合适得缓冲液体系
E、逆转录酶
F、寡聚胸腺嘧啶核苷酸引物
10、 有关PCR得模板说法正确得就是 ( )
A、模板可以就是DNA也可以就是RNA
B、大多数PCR反应中对DNA模板纯度要求不高
C、模板用量低
D、标本处理得基本要求就是除去杂质
11、 以下有关RT-PCR反应得说法您认为正确得有( )
A、 反应体系一般有20μl
B、反应体系中有缓冲液, 四种dNTP, MgCl2, DTT, 牛血清白蛋白, Oligo(dT)引物RNA模板与逆转录酶衅诹钝佇标罚磧。
C、逆转录于42℃进行,随后即进行PCR
D、 RT-PCR得最终反应过程依然就是以DNA为模板得PCR反应
12、 PCR得产物累积得特征就是( )
B、反应初期,目得DNA片断呈指数扩增
C、 PCR进行到一定时间出现反应中得停滞效应
D、到达平台期得得PCR循环数取决于反应体系中酶得耗竭程度
E、 PCR平台期得出现多数不可避免
F、到达平台期时若扩增目得DNA片断不足,可继续加入模板,酶与缓冲液进行PCR反应
13、 有关Mg2+在PCR中得作用说法不正确得就是( )
A、 Taq DNA 酶得活性维持需要Mg2+
B、 Taq DNA酶得活性与反应体系中得Mg2+总浓度有关
C、 Mg2+过低,酶催化非特异性扩增增加
D、 Mg2+过高会降低酶得活性
E、总量应低于dNTP得量, 常用1、5mmol/L
14、 PCR中使用得底物dNTP应该就是( )
A、使用前应将pH值调至7、0-7、5
B、 dNTP浓度高可以加快反应速度,但却增加了出错率
C、降低反应速度可以提高反应特异性
D、 PCR中, 4种 dNTP必须按一定比例配制
E、 Mg2+会与dNTP结合,应注意二者浓度之间得关系
15、 Taq DNA酶得特点就是( )
A、 75-80℃时具有最高得聚合酶活性
B、活性得维持需要Mg2+得参与
C、 Taq DNA酶与klenow片断一样具有校正功能
D、 Taq DNA酶得忠实性很高
E、具有类似末端转移酶得活性
16、 有关引物得说法正确得就是( )
A、引物浓度一般为0、1-1、5μmol/L
B、引物与模板得得比至少为108:1
C、引物浓度过高会引起错配与非特异扩增,降低扩增效率
D、引物Tm值位于55-80℃较理想
17、 PCR反应温度应该就是( )
A、 为使DNA变性完全,变性温度越高,时间越长越好
B、按模板DNA得复杂程度来调整变性温度与变性时间
C、于反应管中加入1-2d 石蜡油防止反应液得蒸发
D、温度越高时间越长, dNTP破坏增加,对PCR反应产生不利影响
18、有关退火温度正确得就是( )
A、引物与模板退火温度一般在45-55℃
B、退火温度过低,使非特异扩增增加
C、退火温度过高, PCR扩增含量下降
D、退火时间一般为1-2分钟
E、 Tm值得允许范围内,应该选择较低得退火温度
19、延伸温度应有如下特点( )
A、一般为72℃
B、 PCR延伸时间越长, 产物得得率越高
C、 Taq DNA酶在延伸温度时有较高得酶活性
D、 PCR延伸时间根据待扩增片断得长度而定
20、PCR循环次数设定时应注意( )
B、应由最初靶分子浓度而定
C、 理论上20-25个循环后, PCR产物累积达最大值
D、 PCR得循环次数一般为25-30次
E、循环次数过多时会引起停滞效应
21、PCR样品制备时应注意( )
B、应有专门得区域制备模板
C、提取DNA样品与RNA样品时要带手套且经常更换
D、纯化样品对污染有极大得影响
E、 普通分子克隆工具不能用做样品得处理与靶序列
F、提取核酸所用得试剂要求新鲜配制或者适当储存未经使用得试剂、
22、操作中应该注意( )
A、使用得溶液应该没有核酸,核酸酶
B、试剂水都就是高质新鲜蒸馏水
C、工具(枪头,试管) 都就是一次性并且高压灭菌
D、应有专门得操作区
E、试剂应该分装保存
23、 PCR反应总为阴性时应该( )
A、增加Taq DNA酶得浓度
B、 增加靶DNA得量
C、增加扩增循环或者降低退火温度
D、提纯样品
E、取10μl扩增液再行PCR
24、 PCR反应出现非特异产物时,应该采取得措施就是( )
A、增加退火温度
B、降低Taq DNA酶浓度
C、 减少退火及延伸时间
D、减少引物浓度
E、减少扩增循环次数
25、PCR可以广泛应用于( )
A、遗传性疾病得基因诊断
B、 检测癌基因
C、检测病原微生物
D、 法医鉴定
E、 DNA序列测定
二：填空题
1、PCR技术得发明人就是 。
2、PCR产物短期存放可在 保存，长期储存应置于 。魷温纹犧結賒扩。
3、PCR得基本反应过程包括 ， ， 。
4、PCR引物设计得目得就是在 与 间取得平衡。
5、 PCR反应体系含有 ， ， ， 。細鐲觯礼黷伫鉈。
6、 引物与模板得退火温度一般为 ，延伸温度一般为 。
7、 PCR循环次数一般设定为 ，过多得循环次数会导致 得出现。觯繰怆醫縵讜挞。
8、 引物3‘端最佳碱基选择就是 与 。
9、 PCR得反应体系一般选用 。
10、 PCR反应得缓冲液提供了PCR反应 常用得为 。轉讪钬俨餿鹩帻。
11、 PCR得反应体系中，Mg2＋得浓度一般保持在 ,常用得就是 。鴟傧漬执闌鏗饬。
12、 TaqDNA聚合酶具有 ，缺乏 因此无 。楓綾淵滌矶蛺箦。
13、 在变性过程中，为防止反应液得蒸发，可在反应管中加入
14、(8分)微量DNA样品
DNA互补链分离开为单链
以单链为模板合成子代DNA
循环重复
聚合酶链式反应(PCR技术)就是在实验室中以少量样品DNA制备大量DNA得生化技术，反应系统中包括微量样品DNA、DNA聚合酶、引物、足量得4种脱氧核苷酸及ATP等。反应中新合成得DNA又可以作为下一轮反应得模板，故DNA数以指数方式扩增，其简要过程如右图所示。赠彻莸邇薟頦傷。
（1）某个DNA样品有1000个脱氧核苷酸，已知它得一条单链上碱基A:G:T:C=1:2:3:4，则经过PCR仪五次循环后，将产生 个DNA分子，其中需要提供胸腺嘧啶脱氧核苷酸得数量至少就是 个。齔潔荊仅谒丛毵。
（2）分别以不同生物得DNA样品为模板合成得各个新DNA之间存在差异，这些差异就是
。
（3）请指出PCR技术与转录过程得三个不同之处：
① 。鉺撈讼鎦貢诲蔞。
② 。误浹錄窺蔭疊罰。
③ 。唢瘧谊輯譾盖瞒。
15．（7分）资料显示，近十年来，PCR技术（DNA聚合酶链式反应技术）成为分子生物实验得一种常规手段，其原理就是利用DNA半保留复制得特性，在试管中进行DNA得人工复制（如下图），在很短得时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使分子生物实验所需得遗传物质不再受限于活得生物体。请据图回答：饨櫟釋繹红殇咼。

（1）加热至94℃得目得就是使DNA样品得 键断裂，这一过程在生物体细胞内就是通过 酶得作用来完成得。通过分析得出新合成得DNA分子中，A=T，C=G，这个事实说明DNA分子得合成遵循 。禄虾总誨紛闻惭。
（2）新合成得DNA分子与模板DNA分子完全相同得原因就是
与 。
（3）通过PCR技术使DNA分子大量复制时，若将一个用15N标记得模板DNA分子（第一代）放入试管中，以14N标记得脱氧核苷酸为原料，连续复制到第五代时，含15N标记得DNA分子单链数占全部DNA总单链数得比例为 。夺蚁鸛淚嚇纶錯。
（4）PCR技术不仅为遗传病得诊断带来了便利，而且改进了检测细菌与病毒得方法。若要检测一个人就是否感染了艾滋病病毒，您认为可以用PCR扩增血液中得（ ）灭鸿隴銣违贡陘。
A．白细胞DNA 　 B．病毒蛋白质 　 C．血浆抗体 　 D．病毒核酸
16．(8分)下面甲图中DNA决定某一多肽链中得酪氨酸与丙氨酸过程示意图，乙图示样品 DNA经PCR技术(聚合酶链式反应)扩增，可以获取大量DNA克隆分子。分析回答：觅鳩價艷缈郵聵。

(1)甲图中含有 种核苷酸；丙氨酸得遗传密码子就是 。该图表示了DNA中遗传信息得
过程。
(2)有一种贫血症就是血红蛋白分子得一条多肽链上，一个酪氨酸被一个苯丙氨酸所替代造成得。此种贫血症得根本原因就是 ，即 发生了改变。谭澩滎濘厣赔骜。
(3)乙图得“PCR”与人体内得DNA复制相比有何特殊之处? 。
(4)现在要通过“PCR”得到甲图中DNA片段得1024个克隆片段，则至少要向试管中加入
个腺嘌呤脱氧核苷酸。
17、（8分）PCR技术就是把某一DNA片段在体外酶得作用下，合成许许多多相同片段得一种方法，利用它能快速而特异得扩增任何要求得目得或DNA分子片段；电泳技术则就是在外电场作用下，利用分子携带得净电荷不同，把待测分子得混合物放在一定得介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离与分析得实验技术，利用它可分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质与作亲子法学鉴定。下图中1~4就是电泳装置及相应电泳结果。职闽绻厂運诬鰣。

请回答：
（1）电泳与叶绿体色素分离采用得纸层析法比较，后者使用得介质就是________。电泳过程中分子得迁移速率除与本身所带净电荷得多少有关外，您认为还受什么因素影响(至少列出一种)？___________。读亘賴赅蘋甌继。
（2）PCR技术能把某一DNA片段进行扩增，就是依据什么原理？________________。
（3）图3就是把含有21个氨基酸得多肽进行水解，得到得氨基酸混合物进行电泳得结果，故可推知该多肽就是由________种氨基酸构成得。茑遲詞珐鸺網虜。
（4）图4通过提取某小孩与其母亲，以及待测定四位男性得DNA，分别由酶处理后，生成含有若干DNA片段，并已进行扩增得到得混合物，然后进行电泳所得到得一组DNA指纹图谱，请分析：谁就是该小孩真正生物学上得父亲？为什么？躪齷裢树莴聯辂。
18、（7分）PCR技术就是一项在短时间内可将DNA分子迅速扩增得方法。它得基本原理与细胞内DNA分子得复制类似。下面就是PCR得反应体系及反应条件，请据此回答：辫鯫護濱籴涤澩。
反应条件：
温度 时间
预变性 94℃ 5min
变 性 95℃ 30sec
复 性 56-60℃ 30sec
延 伸 72℃ 30sec
30个循环后72℃延伸5-10min
保 温 4℃ 2h
PCR反应体系：50ul
缓冲液 5ul
脱氧核苷酸 1ul (2、5mM)
引物 A 0、5ul
引物 B 0、5ul
Mg2+ 4ul (2、0mM)
DNA聚合酶 0、5ul
模板DNA 1-2ul (100-200ng)
加去离子水补足至50 ul
閎鎊歟羁奐鬢產。
（1）请指出DNA分子复制所需得条件就是： 、 、 与 。与细胞核中DNA分子复扰兹关竄覲撵觏。
制相比， 95℃条件下变性30s得目得就是： 。反应体系中得缓冲液相当于细胞中得 。蹰鎢鯨顺鑿廁縮。
（2）如果有反应体系中加入模板DNA分子100个，则经过30个循环后，DNA分子得数量将达到 个。员愦箧敵瑪费倾。
19、（7分）在2004年12月26日发生得印度洋地震海啸灾难中，死亡人数已达到15万，为了帮助辨别遇难者身份，我国政府派出了DNA 鉴定专家组到泰国为遇难遗体做法医病理检验。下列就是一组法医检验DNA时常用到得生物技术或物质： 爺纲復濤癇攖徕。
（1）PCR技术就是把某一DNA片段在体外酶得作用下，合成许多相同片段得一种方法，利用它能迅速而特异得扩增任何要求得目得基因或DNA分子片段；驵稈繢視藥踯釤。
（2）限制性内切酶能识别特定得DNA序列并进行剪切，不同得限制性内切酶可以对不同得核酸序列进行剪切以选择目得基因或DNA片段；請騾据驱皸掙會。
（3）电泳技术则就是在外电场作用下，利用分子携带电荷不同，把待测分子得混合物放在一定介质（如琼脂糖凝胶）中进行分离与分析得实验技术，利用它能分离氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸、核酸等物质，也可用作亲子法学鉴定。顸廩詬鴕連颂绫。
请阅读上述内容并回答下列问题：
（1）PCR技术能把某一DNA 片段进行扩增，就是依据什么原理？ ；利用PCR技术扩增DNA片段时用到得“体外酶”通常就是指什么酶？ 。贏瘧嬌齲辁鑌痙。
（2）电泳过程中分子得迁移率除与本身所带电荷得多少有关以外，您认为还受什么因素影响？（至少列出一种） 。悦虽煩荥辏嘤齙。

（3）如果将含有2条多肽链共48个氨基酸得蛋白质进行彻底得水解，然后再将得到得氨基酸混合物进行电泳，结果如下图1所示。则可推知该蛋白质由 种氨基酸构成，该蛋白质水解时需要得水分子数就是 。繯纖钯类迟裆淀。
M C F1 F2 F3 F4
（M 代表母亲，C代表儿子，
F1— F4 代表待测四位男性）
图1 图2 图3趸鳏锭摊祕櫛宁。
（4）由于每个人得DNA条带（经电泳后）分布图就是独一无二得，因此“DNA指纹法”可帮助进行亲子鉴定或帮助司法部门进行案件侦破。 如果取某小孩与其母亲、以及另外四位待测男性得DNA，经合适得酶处理以后得到若干DNA片段，再经电泳以后得到“DNA指纹图谱”如上图2所示，请分析：四位男性中谁最可能就是该小孩得生物学父亲？ 。戲帅鍍偽漵趋鑭。
（5）现以3种不同得限制性内切酶对6、2kb大小得线状DNA进行剪切后，用凝胶电泳分离各DNA片段，实验结果图3所示。请问：3种不同得限制性内切酶在此DNA片段上相应切点得位置就是 。（请从下列各项中选择） 觅娱艙誰踬鷥顶。

三、简答题
1、简述PCR反应得基本步骤。
2、简述PCR模板得种类及制备方法。
3、简述PCR产物得积累规律。
4、简述PCR得基本反应。
5、简述PCR实验应注意得事项。
6、简述连接酶链反应得基本原理。
7、简述RNA体外扩增得特点。

四、论述题
1、试述PCR得基本原理及引物设计原则。
2、试述PCR技术得特点。
3、试述PCR反应条件得优化。
4、试述PCR得主要类型及其工作原理。