DB3301_T 1119—2023 杂交兰种苗组培快繁技术规程.pdf

ICS 65.020.20 CCS B 05 3301 浙江省杭州市地方标准 DB3301/T 11192023 杂交兰种苗组培快繁技术规程 2023-02-28 发布 2023-03-28 实施 杭州市市场监督管理局 发 布 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由杭州市农业农村局提出、归口并组织实施。本文件起草单位：杭州市农业科学研究院。本文件主要起草人：李春楠、傅巧娟、张晓莹、赵福康、钱丽华、阮若昕、沈国正。杂交兰种苗组培快繁技术规程 1 范围 本文件规定了杂交兰种苗组培扩繁的组培苗培养、组培苗驯化移栽、质量等级、包装、标签和运输的要求。本文件适用于杂交兰种苗组培扩繁至驯化栽培的生产过程。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 8321（所有部分）农药合理使用准则 NY/T 4962010 肥料合理使用准则 通则 NY/T 12762007 农药安全使用规范 总则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。杂交兰 Cymbidium hybrid 由国兰和大花蕙兰种间杂交选育的一类兰花杂交种。类原球茎 protocorm-like bodies 兰花外植体诱导培养时，茎尖生长点组织逐渐膨大形成的、可发育成完整试管苗的扁形球状物。4 组培苗培养 外植体的选择和处理 4.1.1 母株的预处理 于春秋季，宜使用 50%多菌灵可湿性粉剂 800 倍液等广谱杀菌剂，对长势均匀、无病虫害且带有新生芽的健康母株进行灌根处理，每隔 3 天 1 次，连续处理 2 次3 次，放置于通风良好、清洁、干燥的环境，温度宜 15 25，光照宜 8000 lux12000 lux。4.1.2 外植体的选取 母株基质干透后，选择苞叶尚未展开、露出基质表面 2 cm6 cm 的新生芽，从基部切断取下，置于无菌样品袋中带回实验室。4.1.3 外植体消毒 4.1.3.1 用洁净的软毛刷轻刷外植体表面，去除表面污垢，浸入洗洁精等清洁剂中震荡清洗 50 min80 min，再流水充分冲洗，置于超净工作台上。4.1.3.2 剥去 1 片2 片外苞叶，75%酒精浸泡消毒 90 s，无菌水清洗 2 次3 次。4.1.3.3 再剥去 1 片2 片外苞叶，浸入 10%NaClO 溶液，加入 2 滴3 滴吐温 20，处理 10 min，无菌水清洗 3 次4 次。4.1.3.4 浸入 0.1%HgCl2溶液，加入 2 滴3 滴吐温 20，根据芽的大小灭菌 15 min17 min，无菌水清洗 5 次6 次。4.1.3.5 再剥去 1 片2 片外苞叶，将剥离的芽浸入 0.05%HgCl2溶液中消毒 60 s，无菌水清洗 5 次6 次。初代培养 4.2.1 接种 取消毒后的芽，剥离 0.3 cm0.5 cm 的茎尖组织接种于初代培养基诱导类原球茎。4.2.2 培养基 培养基配方宜为：1/2MS+1 mg/L 6-BA+1 mg/L IBA+1 g/L 活性炭+30 g/L 蔗糖+5 g/L 琼脂，pH 值 5.65.8。4.2.3 培养条件 光照 16 h/d，光照强度 500 lux1000 lux，温度（251）；暗培养时温度为（201）。继代培养 4.3.1 转接 初代培养 60 d 后，将诱导形成的类原球茎分割为体积约 0.4 cm 0.4 cm 0.4 cm 的团块，接种于继代培养基上，每隔 60 d75 d 继代一次，分割时去除类原球茎上分化的芽和根，继代次数不宜超过 12 代。4.3.2 培养基 培养基配方宜为：Hyponex 1（花宝 1 号）+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+50 g/L 香蕉泥+2 g/L 水解酪蛋白+1 g/L 活性炭+30 g/L 蔗糖+5 g/L 琼脂，pH 值 5.65.8。4.3.3 培养条件 光照 16 h/d，光照强度 500 lux1000 lux，温度（251）；暗培养时温度为（201）。分化培养 4.4.1 转接 将增殖的类原球茎分割为体积约 0.4 cm 0.4 cm 0.4 cm 的团块，转接至分化培养基上分化成芽，类原球茎之间的距离不宜少于 1.5 cm。4.4.2 培养基 培养基配方宜为：1/2MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+10%椰汁+0.2 g/L 活性炭+20 g/L蔗糖+6 g/L 琼脂，pH 值 5.65.8。4.4.3 培养条件 光照 16 h/d，光照强度 1200 lux2000 lux，温度（251）；暗培养时温度为（201）。生根培养 4.5.1 转接 待芽长至 3 cm5 cm 时，将其切下接种于生根培养基培养 50 d70 d。4.5.2 培养基 培养基配方宜为：Hyponex 1（花宝 1 号）+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+100 g/L 香蕉泥+2 g/L 水解酪蛋白+1 g/L 活性炭+30 g/L 蔗糖+7 g/L 琼脂，pH 值 5.65.8。4.5.3 培养条件 光照 16 h/d，光照强度 2000 lux2500 lux，温度（251）；暗培养时温度为（201）。5 组培苗驯化移栽 瓶苗驯化 当苗高长至 8 cm12 cm、根数达到 3 条5 条、根长 3 cm5 cm 时，将瓶苗转移至温室驯化培养，覆盖 70%遮阳率的遮阳网 5 d7 d，而后揭去遮阳网继续培养 10 d20 d，移栽前，打开瓶口放置 2 d3 d。光照强度宜 4000 lux5000 lux，白天温度宜 25 30，夜间温度不宜低于 20，宜春、秋两季驯化。瓶苗移栽 取出幼苗，洗净根部培养基，宜用 50%多菌灵可湿性粉剂 1000 倍液等广谱杀菌剂浸泡 15 min，晾干至根变白后移栽至营养钵。宜选用经消毒的基质，体积比为松鳞、鹿沼土与仙土=1:1:1。幼苗栽培管理 栽后具体管理措施详见附录 A。6 质量等级 组培苗质量等级见附录 B。7 包装、标签和运输 包装 7.1.1 组培瓶苗 将符合质量标准的组培瓶苗用封口膜封住瓶口，整齐排列装于纸箱中，瓶与纸箱之间用海绵等缓冲物隔离填充。7.1.2 营养钵苗 将营养钵苗整齐排列于纸箱中，缝隙用海绵等缓冲物隔离填充。幼苗在包装前应根据运输时间和环境控制基质水分含量，一般包装时栽培基质含水量根据包装方式及贮运时间控制，通常应控制在 50%以内，外观为表面基质较干，盆内基质湿润。密封的包装箱箱侧应设通风孔。标签 每箱应贴上标签，标明品种名称、等级、数量、产地、出苗日期等，并在纸箱上做好“请勿倒置”的明显标志。运输 运输时选择整洁的保温车辆，车厢内温度保持在 15 25 之间，车辆行驶过程中避免剧烈颠簸以防组培瓶破碎或幼苗脱落，并应在 5 h 以内到达目的地。此外，不宜在严寒、酷热天气运输。8 模式图 杂交兰种苗生产模式图见附录 C。A A 附录A （资料性）杂交兰组培苗栽后管理 杂交兰组培苗栽后管理措施参见表A.1。表A.1 杂交兰组培苗栽后管理措施 光照 根据实际环境调节光照，加强通风，栽后 15 d 内弱光照，遮阳 70%80%，光照强度不超过 3000 lux；15 d30 d 可适当增加光照强度，一般不超过 5000 lux；30 d 后进一步增加光照，但不宜超过 8000 lux。温度 幼苗最适温度为 15 30，早晚温差 5 15。浇水 幼苗移栽后第一次浇水浇透，之后视天气情况，基质见干即浇。一般春秋季每 5 d7 d 浇一次，夏季每 2 d4 d 浇一次，冬季每 7 d10 d 浇一次。施肥 幼苗定植缓苗 15 d 后，施一次时效 180 d、N：P：K 比例为 13：13：13 的颗粒缓释肥 1 g3 g，或每周施一次 1500 倍 N：P：K 比例为 20：20：20 的水溶性肥料。肥料使用应按照 NY/T 4962010 的要求执行。病虫害预防 缓苗 15 d30 d 后，每隔 15 d 喷施杀菌剂，杀菌剂可选择戊唑醇、多菌灵、可杀得 3000 或咪鲜胺；根据虫害发生情况，杀虫剂可选用阿维菌素、爱卡螨或哒螨灵防治红蜘蛛，速勒马与盈辉优玛复配剂防治蓟马，吡虫噻嗪酮防治蚧壳虫，吡虫啉防治蚜虫。施药防治应按照 GB/T 8321（所有部分）和 NY/T 12762007 的要求执行。B B 附录B （资料性）杂交兰组培苗产品质量等级 杂交兰组培苗产品质量等级参见表B.1。表B.1 组培苗产品质量等级 评级项目 等级 一级 二级 整体特征 幼苗生长旺盛，粗壮，挺拔，有活力，色泽正常，与原品种保持一致。幼苗生长正常，符合原品种特征。苗高 8 cm12 cm。低于 8 cm 或高于 12 cm。叶片数 5 片及以上。少于 5 片。根系 根系粗壮结实，具有 3 条5 条根，最长根长5 cm8 cm。具有 2 条3 条或5 条根，最长根长5 cm 或8 cm。整齐度 整齐一致，同一批次 90%以上的苗高达标。整齐一致，同一批次 80%以上的苗高达标。有无污染 无污染。无污染或有轻微污染。