恶性血液病伴有Y染色体缺失患者的临床分析.pdf

中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 收稿日期：2023 年 12 月 21 日 作者简介：姜文勇（1974），男，汉族，河北唐山人，滦南县医院，研究方向为临床内科方向。-56-恶性血液病伴有 Y 染色体缺失患者的临床分析 姜文勇 滦南县医院，河北 唐山 063500 摘要：摘要：目的 讨论具有 Y 染色体缺失的恶性血液病患者临床方面各项特点，做好记录、比对工作。方法 样本数量共计 9 例，均系我院恶性血液病病患，选用常规遗传法执行程序操作，对骨髓细胞进行收集，展开培养工作，时间是 24 小时，然后得到染色体标本，利用 R 技术进行显带，再对核型进一步研究；遴选荧光原位杂交法，在着丝粒探针 CSP X/CSP Y(绿/红)的支持下，测定 Y 染色体缺失情况；针对白细胞表面抗原的化验工作，则择选流式细胞仪间接免疫荧光法，对患者临床方面特点、实验室报告进行深层次研究。结果 出现 Y 染色体缺失患者的数量是 9 例，其平均年龄为（50.452.37）（27-77）岁，其中急性髓细胞性白血病（AML）有 5 例，以贫血、轻度出血为主要表现；4 例存在异常附加染色体。患者完全缓解率均比较低，且生命周期特别短。结论 AML 患者多数存在 Y 染色体缺失状况，可以在每个年龄段发生，从临床特征方面看，十分与众不同，预后成效未达到预期。关键词：关键词：恶性血液病；Y 染色体；缺失；临床分析 中图分类号：中图分类号：R733 0 引言 染色体属于遗传物质载体，能够呈现出脱氧核糖核酸与核蛋白细胞分裂状况。恶性血液病是一种克隆性疾病，发生部位是造血干细胞，克隆记号是染色体畸变。Y 染色体缺失在临床上具有极低的发生率，然而，却会经常出现在以下疾病中：急性髓细胞性白血病（AML）、骨髓增生异常综合症（MDS）、慢性粒细胞白血病（CML）、骨髓增殖性疾病（MPD）、多发性骨髓瘤（MM）、淋巴瘤1-2。需要注意的是身体没有任务疾病的男性同样存在产生 Y 染色体缺失的可能，从病理学角度看，Y 染色体缺失实际上是一种细胞遗传学异常，特性是独一无二的，但是会产生继发性改革，其中存在异常附加染色体的 AML 患者最容易发生。这些年，研究人员意识到 Y 染色体缺失紧密关联一些疾病的发生与发展，当然，不排除可能是关联年龄的生理现象3-4。因此，文章将 9 例恶性血液病患者纳入研究范围，对其临床表现特点进行回顾性分析，现概括总结如下。1 资料与方法 1.1 一般资料 纳入我院收治的 150 例恶性血液病患者，治疗时间段是 2021 年 1 月至 2022 年 2 月，对其实施染色体检查后发现，Y 染色体缺失患者有 9 例，占比达到（6.00%）。回顾性分析 9 例患者临床资料，其中，年龄最小值是 28 岁，最大值是 76 岁，中位值是 52 岁。经过细胞形态学、遗传学、免疫表型的分析，能够确定 AML、CML、慢性粒单核细胞白血病、淋巴瘤分别有5 例、2 例、1 例、1 例。本次研究经医学伦理委员会批准，合法合规，可以放心参与。1.2 方法 1.2.1 染色体标本制备 抽取肝素抗凝骨髓液 5 毫升，放到培养基中，置于 37的条件下，培养时间是 24 小时，之后放入 5L秋水酰胺，培养时间为 50 分钟。离心处理骨髓液 10分钟，调节转速在每分钟2000转，将上层清液去掉后，放入 8 毫升氯化钾，浓度是 0.075mmolL-1，摇匀之后，放在 37的条件下，培养时间是 35 分钟，再添加1ml 甲醇：冰醋酸溶液之比为 3：1，反复摇晃后，待液体混合均匀，使用同一转速离心仪中展开离心操作，时间维持在10min，将顶层清液除掉，增添固定液8ml，多次摇晃混合均匀后，静止放置约 25min，选用同一转速离心仪离心，控制时间是 10 分钟，除掉顶层清液，增加规定量的固定液，获取细胞悬液，同时完成制片工作。1.2.2 染色体核型分析 在显带液中放入染色体标本，执行 R 显带程序，一小时 30 分钟后，能够领到标本，这时应该第一时间展开染色工作，在显微镜助力下，积极探索中期分裂中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-57-像。1.2.3 Y 染色体缺失的检测 为了使老化价值得以发挥，需要将染色体标本隔夜放置，再将柠檬酸盐的温度调到标准范围，放置其中，先脱水 5min，后实施梯度脱水，具体是在 70%、85%、100%的室温乙醇中操作 2 分钟，晾干。避光环境中，拿出 CSP X 或者 CSP Y（红绿）探针进行处置，1份标本探针 1L，同时添加 4L 杂交稀释液，反复多次摇晃，当其混合均匀后，放到玻片待杂交区，拿来拨片并且盖好。找到最新型探针测量 Y 染色体缺失。有一红一绿显现出来，象征细胞正常，假如有绿色显现出来，那么就提醒红色没有出现，能够对 Y 染色体缺失进行确定。多于 10%的细胞信号不正常后，都警示阳性。1.2.4 抗原检测 在检测白细胞表面抗原时，选用流式细胞仪间接免疫荧光法。1.2.5 治疗方案和随访 针对 AML 患者，选用柔红霉素 DA、阿糖胞苷 MA计划进行化疗。1 例病人完成化疗后（4 个疗程），移植自体造血干细胞。2 例慢性粒细胞血病疾病病人用AML 计划。慢性粒单核细胞白血病、淋巴瘤各有 1 例，药物是环磷酰胺氟达拉滨。与此同时，结合患者病情变化运用对症支持治疗。随访病例到 2023 年 8 月 30日，生存期根据确诊到死亡的时间或者确诊到 2023 年8 月 30 日计算。2 结果 2.1 患者临床特征 如表 1 所示，此次研究目标中，患有 AML、CML、慢性粒单核细胞白血病、淋巴瘤的数量各是 5 例、2例、1 例、1 例。从骨髓象上看，所有患者的核细胞增生均十分显著，以原始细胞居多。临床表现：出血很少、贫血等。2.2 染色体核型研究结果 5 例单 Y 染色体纯缺失，4 例伴有附加染色体异常。见表 1。2.3 染色体缺失检测结果 经测定，计算出来的间期细胞总和 235 个，绿信号细胞比率 60%-85%，象征红信号不见了，如此，则缺少 Y 染色体。2.4 白细胞表面抗原检测结果 髓系表达中，AML、CML 病患是 5 例、2 例。淋系表达中，慢性粒单核细胞白血病、淋巴瘤患者各 1 例。见表 2。2.5 临床疗效 本次化疗后，患者完全缓解、未缓解数量分别是 3例、6 例，达到 CR 的数量是 3 例（2 例 M2 和 1 例 M3），计算得出缓解率 33.33%。1 例 M2 结束化疗后（化疗周期是 4 疗程），收集自体造血干细胞进行移植，其并没有再次发病。1 例 M2 经过三个化疗疗程后，疾病再次发作，1例 M3 经过四个化疗疗程后，疾病再次发作，复发率达到 66.7%。随访 9 例患者，8 例死亡，生存期分别是 1、6、9、10、2、6、7 个月。3 讨论 经过研究者长期对细胞遗传学的研究，促进了其发展和进步，染色体分析在诊治 CML、AL、MDS 等方面发挥重大价值。尤其是对形态学检查不典型患者而言，借助特征性染色体可以检出，有利于科学指导诊断和治疗工作5-6。表 1 9 例染色体缺少者资料和染色体核型结果 编号 年龄 诊断 WBC（109/L）Hb（g/L）PLT（109/L）LDH（U、L）原始细胞（%）染色体核型 1 32 AML-M1 3.1 56.8 38 170 92.0 46，XY8/45,X,-Y12 2 28 AML-M2 40.1 91.7 132 561 80.6 46，XY10/45,X,-Y,t（8；21）20 3 35 AML-M2 35.1 80.1 124 431 85.1 46，XY15/45,X,-Y,（8；21）5 4 46 AML-M2 59.8 73.1 227 673 82.6 46，XY13/45,X,-Y1 5 74 AML-M2 2.3 57.1 18 861 91.6 46，XY8/45,X,-Y,t（15；17）17 6 60 AML-M3 2.4 57.2 19 862 91.4 46，XY8/45,X,-Y12 7 59 CML 急变 84.5 86.8 391 976 70.4 46，XY10/45,X,-Y,t（9；22）5 8 54 CMML 22.8 116.3 111 139 89.6 46，XY12/45,X,-Y20 9 76 CLL/SLL 18.4 112.5 101 254 64.6 46，XY20/45,X,-Y8 中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生-58-表 2 9 例染色体缺失患者白细胞表面抗原（%）编号 诊断 CD2 CD5 CD7 CD10 CD13 CD14 CD19 CD22 CD33 CD34 1 AML-M1 10.28 81.34 97.80 3.59 88.46 3.70 3.17 96.83 77.88 64.51 2 AML-M2 0.77 0.76 20.01 11.63 97.51 3.04 0.87 3.75 96.31 25.01 3 AML-M2 16.44 2.38 5.37 2.52 71.55 3.65 15.31 11.54 90.81 89.68 4 AML-M2 0.88 0.81 18.01 10.53 98.62 2.18 0.99 2.46 98.86 13.71 5 AML-M2 4.50 1.55 18.02 1.57 98.87 33.45 2.16 0.86 99.88 1.23 6 AML-M3 4.53 1.58 2.43 1.59 98.86 33.47 2.15 0.88 99.89 1.25 7 CML 急变 1.27 1.71 1.70 1.26 80.31 7.16 2.10 1.90 88.09 7.25 8 CMML 46.53 55.16 0.61 12.88 9.96 6.04 12.88 16.65 10.41 1.61 9 CLL/SLL 40.27 94.17 17.75 0.91 2.65 0.88 60.69 69.73 2.36 0.43 人类 Y 染色体属于近端着丝粒染色体，全长在60Mb。AML与MDS患者发生Y染色体缺失的概率特别高，但是，很少发生于急性淋巴细胞白血病患者（ALL)中。大量资料证实，正常男性都存在 Y 染色体缺失情况，这与年龄有关系，70 岁以上的男性发生率比较高。除此之外，13 至 60 岁的急性早幼粒细胞白血病（APL)患者也特别容易发生 Y 染色体缺失，还有病例证实 1例 70 岁 APL 患者伴随 Y 染色体缺失与 t(15:17)。在此次实验中，9 例患者的年龄区间是 28 至 76 岁，包括 5例 AML 患者，说明 Y 染色体缺失在 AML 中比较普遍，与年龄不产生关联性，上到 80 岁老人，下到几岁小孩都存在发生可能。关键是此实验中，Y 染色体缺失病患贫血极度严重，致使 WBC、LDH、骨髓原始细胞大幅度提高，然而，出血量并不严重，比较少，想要佐证 Y染色体缺失病患特点，必须将样本数量增加到一定程度后才能实现7-8。Y 染色体缺失病患有 t(8；21)AML、t(15;17)或t(11;17)APL。其中 4 例具有非正常的附加染色体，2例 M2 病患有 t(8;21)，1 例 M3 有 t(15;17)，1 例急变患者有 t(9;22)，有 t(8;22)AML 病患极易存在 Y 染色体缺失，这与染色体位置不正常有着巨大的联系，然而，具体原因尚且还不能知晓，有待深层次的探讨9-10。限制常规染色体核型分析检查的因素是具有较少的可识别中期分裂相，然运用 FISH 技术分析 Y 染色体缺失细胞率，可以保证高度准确性、灵敏性，现阶段，临床上已经确定了其重要地位，并作为检测方法进行细胞遗传学分析11-12。多种抗原会在造血干细胞分化、发育、成熟中出现，细胞发育决定表达增多、减少或消失，与此同时，有细胞特性被展示出来。这样看来，是否表达抗原的作用至关重要，能够识别出来血细胞，且可视作关键的鉴定依据。该实验的 AML 病患，计算髓系表达人数，统计出来 5 个，CLL 或 SLL 患者，计算淋系表达人数是1 例13-14。实验人员认为 Y 染色体缺失说明存活期很短。化疗后，CR 中再次发病的有 2 例，随访后，死亡人数是8 例，仅仅有不到 11 个月的生命周期，得出以下结论，即 Y 染色体缺失后病患的预后较差，缓解率偏低，复发率、病死率值高，生存周期短。本次研究样本数量过少，无法将其他因素对预后的影响排除，比如年龄、疾病种类等，这要求在扩大样本数量后，深入研究 Y染色体缺失对预后的影响15。综上所述，Y 染色体缺失多发生于 AML 患者中，存在附加染色体异常 AML 患者尤其突出，所有年龄均可患有恶性血液疾病，特征与众不同，预后较好。FISH技术的实施，有利于深入分析和研究染色体核型，从而掌握 Y 染色体缺失细胞率，一方面，促进临床诊断敏感度的提升，另一方面，能够确保可靠性和准确性。现阶段，通常将其作为恶性血液病诊断的关键手段。参考文献 1黄瑞杰.Y 染色体缺失在恶性血液病诊断中的应用J.深圳中西医结合杂志,2019,29(18):60-61.2赵永强,宋艳智,李智慧,等.减低强度预处理并更换供者二次异基因造血干细胞移植治疗移植后复发恶性血液病 44 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