免疫组化抗原修复简介.pptx

l为何要进行抗原修复l抗原修复的种类l抗原修复的原理l抗原修复的操作l抗原操作的应用为何要进行抗原修复为何要进行抗原修复l常规的石蜡切片的组织要经过福尔马林固定和石蜡包埋，虽然上述过程能良好的保存标本在光镜下的形态，但是会不同程度地破坏组织的抗原，降低组织的抗原与抗体的免疫反应率。抗原修复的种类抗原修复的种类l热修复（HIER）l蛋白酶修复（PIER）l双修复（特殊抗原和双染）l不修复抗原修复的原理抗原修复的原理l抗原修复目前常用的有热修复（HIER），蛋白酶修复（PIER）和不修复。不同的修复的原理不同。l热修复的原理l蛋白酶修复原理热修复热修复(HIER)的原理的原理l“石说”：固定通过改变蛋白结构降低免疫反应性，AR逆转大部分福尔马林导致的蛋白修饰，冷却后，会重建“近天然”的结构，免疫反应的恢复是通过蛋白表位的复性。热修复的特点热修复的特点l易于施行l易于标准化蛋白酶修复蛋白酶修复(PIER)原理原理l蛋白酶的消化通过破坏福尔马林造成的蛋白交联，实现抗原的修复。l该方法的缺点是：破坏组织的完整性，会破坏抗原，而且酶的浓度，反应时间，反应温度造成很大的差异，标准化难度较大。抗原修复的操作抗原修复的操作l热修复（HIER）l蛋白酶修复（PIER）l双重修复热修复（热修复（HIER）l高压修复l煮沸法修复l微波修复l水浴加热高压修复高压修复l切片先脱蜡水化l将修复液注入高压锅，将液体煮沸l放入切片（甩开水分）l盖上盖子，等喷气，计时1.52分钟（800W1000W）l冷却，冲洗玻片上的修复液 1.5-2min 10min高压锅直接修复高压锅隔水间接修复煮沸法修复煮沸法修复l将修复液注入不锈钢锅中l煮沸后，加入切片（甩干水分）l用保温档，处理20分钟左右l冷却，冲洗玻片上的修复液蛋白酶修复（蛋白酶修复（PIER）l切片脱蜡水化l切片上滴加酶，放入孵育盒，处理一定时间l时间到，取出切片，冲洗。双重修复双重修复l脱蜡水化后，对切片进行胰酶消化l然后，对切片进行热修复抗原操作的应用抗原操作的应用l时间l温度l冷却l细节MOC31（上皮糖蛋白-2，EGP-2)EGFR(CLONE:EGFR.113)HBcAg(兔多抗兔多抗)C/HNO结论结论l正确的修复对抗体的表达十分重要l抗原修复是一个个性化的方法，由抗体的克隆号，病理标本的类型等决定。l合适的修复方法才能获得最佳的修复效果。谢谢！谢谢！