微生物的纯种分离培养及接种技术.pptx

微生物的纯种分离培养微生物的纯种分离培养及接种技术及接种技术实验四实验四第1页/共10页一实验目的一实验目的n n通过学习学习微生物的纯通过学习学习微生物的纯种分离，培养和接种技术，种分离，培养和接种技术，进而学会微生物生理生化进而学会微生物生理生化反应的实验，为废水处理反应的实验，为废水处理服务。在水处理的细菌检服务。在水处理的细菌检查中，细菌的分离，培养查中，细菌的分离，培养和接种也是一个重要的环和接种也是一个重要的环节。微生物的纯种分离的节。微生物的纯种分离的方法有两种：稀释平板法方法有两种：稀释平板法和平板划线法。和平板划线法。第2页/共10页 二.实验器材n n1.无菌培养皿（直径无菌培养皿（直径90mm），无菌吸管，），无菌吸管，无菌锥形瓶，无菌试管，无菌锥形瓶，无菌试管，5管无菌水（每管管无菌水（每管有有9ml灭菌过的自来水）。灭菌过的自来水）。n n2.营养琼脂培养基（已灭菌的），活性污泥。营养琼脂培养基（已灭菌的），活性污泥。n n3,接种环，酒精灯，恒温箱，等。接种环，酒精灯，恒温箱，等。第3页/共10页 三.实验内容 （一）培养基的制备及灭菌（一）培养基的制备及灭菌（一）培养基的制备及灭菌（一）培养基的制备及灭菌1.1.玻璃器皿的包扎与灭菌玻璃器皿的包扎与灭菌玻璃器皿的包扎与灭菌玻璃器皿的包扎与灭菌 （1 1）六套培养皿一组六套培养皿一组六套培养皿一组六套培养皿一组,用报纸包装。用报纸包装。用报纸包装。用报纸包装。（2 2）取四支吸量管，在其吸端塞少许棉花后用取四支吸量管，在其吸端塞少许棉花后用取四支吸量管，在其吸端塞少许棉花后用取四支吸量管，在其吸端塞少许棉花后用长报纸条包扎。长报纸条包扎。长报纸条包扎。长报纸条包扎。（3 3）干热灭菌干热灭菌干热灭菌干热灭菌:上述玻璃器皿在上述玻璃器皿在上述玻璃器皿在上述玻璃器皿在160160 C C烘箱内烘箱内烘箱内烘箱内2 2小小小小时。时。时。时。2.2.无菌水的制备无菌水的制备无菌水的制备无菌水的制备 在在在在3 3支试管中各装入支试管中各装入支试管中各装入支试管中各装入9 9mlml自来水，塞上硅胶塞自来水，塞上硅胶塞自来水，塞上硅胶塞自来水，塞上硅胶塞,同下同下同下同下述培养基一起用高压蒸汽灭菌。述培养基一起用高压蒸汽灭菌。述培养基一起用高压蒸汽灭菌。述培养基一起用高压蒸汽灭菌。第4页/共10页3.培养基的制备 称量：称量：称量：称量：牛肉膏牛肉膏牛肉膏牛肉膏 蛋白胨蛋白胨蛋白胨蛋白胨 NaCl NaCl 琼脂琼脂琼脂琼脂 自来水自来水自来水自来水 0.750.75g 1.5g 0.75g 3g 150mlg 1.5g 0.75g 3g 150ml 溶化：溶化：溶化：溶化：用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解，注意补充水用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解，注意补充水用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解，注意补充水用烧杯在电炉上将上述各物依次溶解，注意补充水。调调调调pHpH值：值：值：值：溶液稍冷后用溶液稍冷后用溶液稍冷后用溶液稍冷后用pHpH试纸、试纸、试纸、试纸、10%10%NaOHNaOH或或或或10%10%HClHCl 调整溶液调整溶液调整溶液调整溶液 的的的的 pHpH在在在在7.67.6左右左右左右左右。分装：分装：分装：分装：试管试管试管试管4 4支各装其高度支各装其高度支各装其高度支各装其高度1/51/5的溶液，其余溶液装锥形瓶。的溶液，其余溶液装锥形瓶。的溶液，其余溶液装锥形瓶。的溶液，其余溶液装锥形瓶。加塞包扎加塞包扎加塞包扎加塞包扎 ：锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。锥形瓶加棉塞并用牛皮纸包扎。湿热灭菌湿热灭菌湿热灭菌湿热灭菌 ：（高压蒸汽灭菌）（高压蒸汽灭菌）（高压蒸汽灭菌）（高压蒸汽灭菌）1.051.05kg/cmkg/cm2 2(103kPa)(103kPa)、121121灭菌灭菌灭菌灭菌 2020minmin。搁置斜面：搁置斜面：搁置斜面：搁置斜面：试管培养基冷至试管培养基冷至试管培养基冷至试管培养基冷至5050时斜搁使斜面长度不时斜搁使斜面长度不时斜搁使斜面长度不时斜搁使斜面长度不 超过试管一半超过试管一半超过试管一半超过试管一半。第5页/共10页（二）微生物的分离、培养及形态观察1.平板划线分离法平板划线分离法 (1)(1)倒平板倒平板倒平板倒平板:将融化并冷至将融化并冷至将融化并冷至将融化并冷至5050的细菌培养基倒约的细菌培养基倒约的细菌培养基倒约的细菌培养基倒约1520ml1520ml于无菌培养皿中，立即放在桌上轻轻转动使之于无菌培养皿中，立即放在桌上轻轻转动使之于无菌培养皿中，立即放在桌上轻轻转动使之于无菌培养皿中，立即放在桌上轻轻转动使之均匀。冷后成平板。（均匀。冷后成平板。（均匀。冷后成平板。（均匀。冷后成平板。（3 3个）个）个）个）(2)(2)划线：划线：划线：划线：在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环，取在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环，取在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环，取在火焰旁，左手拿平板，右手拿接种环，取一环菌液（原污水）在平板上划线。常用的方法有如下一环菌液（原污水）在平板上划线。常用的方法有如下一环菌液（原污水）在平板上划线。常用的方法有如下一环菌液（原污水）在平板上划线。常用的方法有如下三种：三种：三种：三种：划线完毕后划线完毕后划线完毕后划线完毕后盖上皿盖，倒置盖上皿盖，倒置盖上皿盖，倒置盖上皿盖，倒置于于于于3737恒温箱中恒温箱中恒温箱中恒温箱中培养培养培养培养4848小时后观小时后观小时后观小时后观察结果。察结果。察结果。察结果。第6页/共10页 2.2.稀释平板分离法稀释平板分离法稀释平板分离法稀释平板分离法 (1)1)取样取样取样取样 (2)(2)稀释水样稀释水样稀释水样稀释水样 以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管以无菌操作按十倍稀释法用无菌吸量管和无菌水将和无菌水将和无菌水将和无菌水将1010-3-3倍的水样稀释至倍的水样稀释至倍的水样稀释至倍的水样稀释至1010-4-4、1010-5-5、1010-6-6倍。倍。倍。倍。(3)(3)平板制作平板制作平板制作平板制作 将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓将三套无菌培养皿编号，将上述三种浓度的水样各吸度的水样各吸度的水样各吸度的水样各吸0.5ml 0.5ml 于相应的培养皿中。加热融化培养基，于相应的培养皿中。加热融化培养基，于相应的培养皿中。加热融化培养基，于相应的培养皿中。加热融化培养基，待其冷至约待其冷至约待其冷至约待其冷至约4545时以无菌操作倾注时以无菌操作倾注时以无菌操作倾注时以无菌操作倾注1015ml 1015ml 入培入培入培入培 养皿中，养皿中，养皿中，养皿中，马上将培养皿平马上将培养皿平马上将培养皿平马上将培养皿平 放桌上放桌上放桌上放桌上 轻轻转轻轻转轻轻转轻轻转 动使之混合均匀，动使之混合均匀，动使之混合均匀，动使之混合均匀，冷却后冷却后冷却后冷却后 成平板。成平板。成平板。成平板。倒置，于倒置，于倒置，于倒置，于 3737培培培培 养养养养4848小时后观察小时后观察小时后观察小时后观察 结果。结果。结果。结果。10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6第7页/共10页（二）其他一些接种的操作技术（二）其他一些接种的操作技术1斜面接种技术斜面接种技术 2液体接种液体接种 3由液体培养基接种到液体培养基由液体培养基接种到液体培养基 4穿刺接种穿刺接种 三操作方法及步骤三操作方法及步骤第8页/共10页1)实验名称，学生姓名，学号，班号和实验日实验名称，学生姓名，学号，班号和实验日期期2)实验目的和要求实验目的和要求3)实验仪器，设备和材料实验仪器，设备和材料4)实验原理实验原理5)实验步骤实验步骤6)实验原始记录实验原始记录7)实验数据计算结果实验数据计算结果8)实验结果分析，讨论实验指导书中提出的思实验结果分析，讨论实验指导书中提出的思考题，写心得体会考题，写心得体会四、实验报告要求四、实验报告要求第9页/共10页五五.思考题思考题1 1 分离活性污泥为什么要稀释水样？你考虑怎分离活性污泥为什么要稀释水样？你考虑怎分离活性污泥为什么要稀释水样？你考虑怎分离活性污泥为什么要稀释水样？你考虑怎样来进行生物膜法生物膜的纯种分离和培养样来进行生物膜法生物膜的纯种分离和培养样来进行生物膜法生物膜的纯种分离和培养样来进行生物膜法生物膜的纯种分离和培养？2 2 用一根无菌吸管取几种浓度的水样时，应从用一根无菌吸管取几种浓度的水样时，应从用一根无菌吸管取几种浓度的水样时，应从用一根无菌吸管取几种浓度的水样时，应从哪一个浓度开始？为什么？哪一个浓度开始？为什么？哪一个浓度开始？为什么？哪一个浓度开始？为什么？第10页/共10页